miR-325-3p靶向CLDN1调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移

目的 探讨微小核糖核酸-325-3p(miR-325-3p)靶向紧密连接蛋白1(CLDN1)调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移的作用。方法 将对数生长期的人肝癌细胞株SMMC-7721分为四组：阴性对照组、上调组、下调组和正常组。荧光显微镜观察各组细胞转染效率;细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖活性;侵袭小室(Transwell)实验检测各组细胞侵袭和迁移活性;实时-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-325-3p、CLDN1、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测各组CLDN1、ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2蛋白表达及p-ERK1/2水平;双荧光素酶报告基因检测验证miR-325-3p对CLDN1的作用。结果 阴性对照组、上调组和下调组细胞转染效率分别为(91.38±16.21)%、(92.17±15.93)%...     

Twist对膀胱癌细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的探讨Twist对膀胱癌细胞迁移、侵袭及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响。方法用qRT-PCR和Western印迹法分别检测膀胱癌5637、T24、BIU-87细胞和正常膀胱SVHUC-1细胞中Twist mRNA和蛋白水平,筛选表达水平最高的T24细胞,在T24细胞中转染shRNA Twist、shRNA对照命名为sh-Twist组和sh-NC组,并以不做处理的T24细胞为Con组,用qRT-PCR和Western印迹法测定各组细胞中Twist mRNA和蛋白水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,Western印迹测定各组细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)和侵袭迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9表达水平。结果与正常膀胱SVHUC-1细胞比较,Twist在膀胱癌细胞中转录和表达水平均明显升高(P0.05)。sh-Twist组Twist mRNA和蛋白水平均明显低于Con组(P0.05),sh-NC组Twist mRNA和蛋白水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。sh-Twist组细胞迁移数目、侵袭数目及MMP-2、MMP-9蛋白水平均明显低于Con组(P0.05),sh-NC组细胞迁移数目、侵袭数目及MMP-2、MMP-9蛋白水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。sh-Twist组E-cadherin蛋白水平与Con组相比明显升高(P0.05),Vimentin蛋白水平与Con组相比明显下降(P0.05),而sh-NC组Vimentin、E-cadherin水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论 Twist敲低能够降低膀胱癌细胞侵袭和迁移能力,抑制膀胱癌细胞EMT。     

SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮—间质转化的影响研究

目的探讨LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法体外培养非小细胞肺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验,根据转染慢病毒分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒)、sh-LMO4组(转染sh-LMO4慢病毒)、Snail组(转染Snail慢病毒)和Snail+sh-LMO4组(转染Snail慢病毒和sh-LMO4慢病毒)。采用实时定量RT-PCR检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量,采用Western Bloting法检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4蛋白相对表达量及4组N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白相对表达量,采用Transwell实验检测4组细胞侵袭个数,采用细胞划痕实验检测4组细胞迁移距离。结果 sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量和LMO4蛋白相对表达量均低于sh-NC组(P0.05)。Snail组侵袭细胞个数多于sh-NC组,sh-LMO4组侵袭细胞个数少于sh-NC组,Snail+sh-LMO4组侵袭细胞个数少于Snail组、多于sh-LMO4组(P0.05)。培养24 h后Snail组细胞迁移距离长于sh-NC组,sh-LMO4组细胞迁移距离短于sh-NC组,而Snail+sh-LMO4组细胞迁移距离短于Snail组、长于sh-LMO4组(P0.05)。Snail组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-NC组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-NC组(P0.05);sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于sh-NC组,E-cadherin蛋白相对表达量高于sh-NC组(P0.05);Snail+sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于Snail组,E-cadherin蛋白相对表达量高于Snail组(P0.05);Snail+sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-LMO4组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-LMO4组(P0.05)。结论 LMO4基因沉默可逆转Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞EMT。     

WWOX对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力的影响

目的研究含WW域的氧化还原酶(WW Domain-containing Oxidoreductase,WWOX)对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力影响。方法胆囊癌细胞株GBC转染过表达WWOX的真核表达载体(pc DNA3. 1-WWOX)和对照载体(pc DNA3. 1),同时以不做转染的细胞为Control,qRT-PCR检测WWOX水平,Western blotting检测WWOX、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)水平,CCK8检测细胞增殖活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 pc DNA3. 1细胞中WWOX、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin水平和细胞增殖、迁移、侵袭能力与Control相比,差异无统计学意义(P 0. 05)。pc DNA3. 1-WWOX中WWOX水平明显升高,其细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平下降,E-cadherin水平升高,与Control相比差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 WWOX抑制胆囊癌细胞侵袭和迁移,下调细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平,提高细胞中E-cadherin表达。     

瞿麦对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调控

目的研究中药瞿麦对人肾癌细胞786-0增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养人肾癌786-0细胞,用不同浓度的瞿麦处理后,运用MTT检测瞿麦对肾癌细胞增殖活性的影响,运用流式细胞术检测瞿麦对肾癌细胞凋亡率的影响,运用qRT-PCR检测瞿麦对肾癌细胞中凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响,运用Transwell侵袭实验检测瞿麦对肾癌细胞侵袭能力的影响,运用细胞划痕实验检测瞿麦对肾癌细胞迁移能力的影响,运用Western印迹检测瞿麦对肾癌细胞中上皮间质转化相关蛋白钙黏附蛋白E(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响。结果瞿麦能够抑制肾癌细胞增殖,诱导肾癌细胞发生凋亡,上调肾癌细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达;抑制肾癌细胞的侵袭能力;抑制肾癌细胞的迁移能力;有效降低肾癌细胞N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,上调E-cadherin水平,且均呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论瞿麦在体外能够抑制肾癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,有效抑制肾癌细胞体外侵袭和迁移能力;其作用可能与上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin水平相关。     

小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P 0.01),抑制率达86.440%,同时AFP siR NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P 0.01)。与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均0.01)。沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P 0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P 0.01)。结论沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关。     

FOXC2对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨叉头框(FOX) C2对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法结肠癌细胞SW620转染shRNA对照、FOXC2 shRNA,命名为shRNA-NC组和FOXC2 shRNA组,同时以不做转染的细胞为对照组,Real time-PCR和Western印迹检测FOXC2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western印迹检测FOXC2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和钙黏蛋白E(E-cadherin)水平。结果shRNA-NC组细胞FOXC2 mRNA及蛋白表达、增殖活性、克隆形成能力、迁移和侵袭能力及MMP-2、MMP-9和E-cadherin蛋白水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0. 05)。FOXC2 shRNA组与对照组比较细胞中FOXC2 mRNA及蛋白表达水平、细胞增殖活性、克隆形成能力、细胞侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9蛋白水平均显著下降,E-cadherin水平显著升高(均P<0. 05)。结论下调FOXC2抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能与调控MMP-2、MMP-9和E-cadherin水平有关。     

Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响。方法甲状腺癌BCPAP细胞转染Six1小干扰RNA(Six1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),采用细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭,Western印迹检测Six1、神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达。结果转染siRNA control后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比无变化。转染Six1 siRNA后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比明显降低,而E-cadherin蛋白水平明显升高。结论敲低Six1可能通过影响E-cadherin、N-cadherin表达抑制甲状腺癌细胞侵袭迁移。     

慢病毒介导SOX4表达下调对乳腺癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白(SOX)4表达下调对乳腺癌细胞生长及迁移能力影响。方法以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,用含有SOX4 siRNA的重组慢病毒和阴性对照慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western印迹方法检测细胞中SOX4表达变化。噻唑蓝(MTT)方法测定增殖变化,碘化丙啶(PI)单染法测定细胞周期分布变化,Transwell小室检测侵袭和迁移能力变化,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮性钙黏附素(E-cadherin)、MMP-2、p21蛋白表达水平。结果 SOX4 siRNA重组慢病毒感染可以抑制乳腺癌细胞中SOX4基因的表达和转录。敲减SOX4后的乳腺癌细胞的增殖能力显著降低,细胞G0/G1期比例显著升高,细胞侵袭和迁移能力显著下降,细胞中CyclinD1蛋白表达水平显著降低,p21蛋白表达水平显著升高,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达水平显著下降,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(均P0.05)。阴性对照慢病毒感染对MCF-7细胞中SOX4表达水平没有影响(均P0.05),并且对细胞增殖、周期分布、侵袭、迁移水平和细胞中CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平均没有影响。结论敲减SOX4可以抑制乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移,并将乳腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期。     

IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性

目的观察ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性。方法使用肝癌细胞系MHCC97-H、 MHCC97-L、HepG2及正常人肝细胞HL-7702为研究对象,分别采用RT-PCR、Western印迹方法检测ku80 mRNA及蛋白水平;体外划痕实验、Transwell侵袭实验观察4株细胞迁移、侵袭能力;免疫荧光检测ku80亚细胞定位;线性相关分析ku80及其mRNA与肝癌细胞系迁移、侵袭能力的相关性。结果 ku80 mRNA及蛋白在4株细胞系中均有表达,且在3株肝癌细胞中的表达明显高于正常肝细胞系HL-7702(均P0.05),其中MHCC97-H细胞表达水平最高(P0.01);体外划痕实验、Transwell侵袭实验显示3株肝癌细胞系的迁移、侵袭能力明显高于HL-7702细胞系(均PO.05),其中MHCC97-H的迁移侵袭能力最强(P0.01)。ku80蛋白定位于细胞核。线性相关性分析显示ku80蛋白及mRNA的表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。结论 ku80蛋白主要在细胞核表达,其表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。     

lncRNA MVIH在结直肠癌细胞中表达及干扰其表达对SW620细胞功能的影响

目的 探讨肝癌微血管浸润相关的lncRNA (lncRNA MVIH)在结直肠癌细胞中的表达及干扰其表达对SW620细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响。方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测lncRNA MVIH在人正常结直肠上皮细胞株FHC和人结直肠癌细胞株SW480、HT29、LOVO、SW620中的表达。将体外培养的SW620细胞分为对照组、阴性组和干扰组,采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell小室法分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测细胞中上皮间质转化相关的蛋白E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和N-cadherin的表达。结果 与FHC细胞相比,SW480、HT29、LOVO和SW620细胞中lncRNA MVIH表达水平显著升高(P<0.05),且SW620细胞最高。与对照组相比,干扰组细胞中lncRNA MVIH和Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,且细胞增殖能力显著减弱,克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细...     

槲皮素在衣霉素诱导的内质网应激介导肝癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨槲皮素(Quercetin,Que)在衣霉素(Tunicamycin,TM)诱导的内质网应激介导肝癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用。方法以衣霉素诱导肝癌细胞HepG2发生内质网应激,细胞分为四组:对照组、衣霉素组、槲皮素组、衣霉素+槲皮素组,采用噻唑蓝法检测细胞活力变化,划痕实验检测细胞迁移距离,PCR和Western blotting法分别检测葡萄糖调节蛋白(GRP78)和EMT因子Snail、E-cadherin及Vimentin的mRNA和蛋白质表达水平。结果槲皮素可显著抑制HepG2增殖;衣霉素组细胞的迁移距离明显大于另外三组(P0.01),槲皮素组小于对照组(P0.01);衣霉素组细胞的GRP78、Snail、Vimentin mRNA及蛋白表达水平显著高于另外三组(P0.05),而E-cadherin低于另外三组(P0.05),与对照组比,槲皮素组GRP78、Snail、Vimentin mRNA及蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin升高(P0.05)。结论槲皮素可抑制衣霉素诱导的内质网应激及其介导的EMT,从而抑制肝癌细胞增殖转移。     

HVEM基因干扰后非小细胞肺癌细胞的迁移、侵袭能力变化及其机制

目的 观察疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因干扰对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 通过Western blotting法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC`细胞系SKMES-1、H1299、H460、H226、H520中HVEM蛋白表达,筛选出HVEM蛋白表达升高最明显的H1299细胞进行后续实验。将H1299细胞分为si-NC组、si-HVEM-1组和si-HVEM-2组,分别用Lipofectamine 2000瞬时转染si-NC、siHVEM-1和si-HVEM-2干扰序列,转染48 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测HVEM、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,si-HVEM-1组和si-HVEM-2组迁移、侵袭细胞数及HVEM mRNA、蛋白相对表达量均减少,且si-HVEM-2...     

溪黄草黄酮对肝癌细胞增殖,迁移和侵袭的影响及相关机制

目的探讨溪黄草黄酮[Flavonoids from Rabdosia serra(Maxim.)Hara]对人肝癌细胞株Hep G2的增殖、迁移与侵袭能力的影响,并研究初步机制.方法 CCK-8法检测不同浓度溪黄草黄酮(0、1、5、10、20和40μmol/L)对Hep G2细胞活性的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测Notch-1,Cyclin D1,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平变化.结果 CCK-8法检测结果显示溪黄草黄酮呈浓度依赖性抑制Hep G2细胞的生长,当浓度到达20μmol/L时,抑制作用达到最大;经溪黄草黄酮干预后,Hep G2细胞迁移和侵袭能力显著下降,Notch-1,Cyclin D1,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平显著下降.结论溪黄草黄酮具有抑制肝癌细胞株Hep G2增殖、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与溪黄草黄酮抑制Notch-1-MMP-2/-9和Notch-1-Cyclin D1信号通路相关.     

敲低hnRNP H基因对子宫内膜癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨敲低核不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭转移的影响。方法将hnRNP H siRNA转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,利用实时定量PCR、Western印迹方法检测(对照组、阴性对照组、siRNA组),确定siRNA沉默效率(hnRNP H mRNA、蛋白表达)、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-钙黏着蛋白E-cadherin、神经型钙黏附蛋白N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7表达情况,划痕实验及Transwell检测细胞迁移能力的改变。结果对照组E-cadherin表达少,而转染组E-cadherin表达明显升高,有统计学差异(P<0.05);对照组N-cadherin、MMP-2及MMP-7表达显著高于转染组(P<0.05)。结论沉默hnRNP H基因能抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化,有效抑制子宫内膜癌细胞转移和侵袭。     

VEGF促进肝癌SMMC-7721细胞侵袭性的自分泌机制

目的:探讨促血管内皮生长因子(VEGF)对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭力以及对该细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,初步研究VEGF对肿瘤侵袭和转移的影响及可能的作用机制.方法:使用VEGF体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,通过细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,再分别使用30μg/L、10μg/LVEGF培养人肝癌SMMC-7721细胞,以正常培养人肝癌SMMC-7721细胞为空白对照组.使用半定量RT-PCR和Western blot法对3组细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果:细胞体外侵袭实验显示,外加VEGF培养后,细胞侵袭力明显增强(P0.01);MMP-9mRNA和蛋白的表达在外加VEGF组中要明显高于空白对照组(0.479±0.025,0.665±0.024vs 0.315±0.022;0.521±0.026,0.662±0.026vs 0.366±0.025,均P<0.01),且高浓度和低浓度组之间也有明显差别.结论:肝癌SMMC-7721细胞系中存在有自分泌机制,VEGF可通过自分泌机制上调肝癌细胞的MMP-9表达,进而促进肿瘤的浸润转移.