Six1基因siRNA联合雷公藤内酯醇对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制

目的探讨Six1基因siRNA联合雷公藤内酯醇(TRL)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制。方法参照脂质体Lipofectamine Tm2000转染说明将si-Six1瞬时转染生长至对数期的人骨肉瘤MG63细胞,50 ng/ml·ml TRL处理细胞,随机分为NC组(转染合成的非特异性的siRNA)、si-Six1组(干扰Six1表达的特异性的siRNA)、TRL醇组(50 ng/ml的TRL处理细胞)和si-Six1+TRL组(在转染si-Six1的基础上加入TRL),Western blotting检测Six1、p-JAK2、pSTAT3、cyclin D1、Bax、MMP-2的蛋白表达;CCK8检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果转染si-Six1的MG63细胞Six1的蛋白表达显著低于NC组(P0.05);与NC组比较,si-Six1组和TRL组细胞活力均明显降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,p-JAK2、p-STAT3、cyclin D1和MMP-2的蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05),而联合使用si-Six1组和TRL对细胞活力、凋亡率、侵袭能力及JAK2/STAT3信号的影响强于单独用si-Six1或TRL。结论抑制Six1表达及TRL均能有效的抑制骨肉瘤细胞活力及侵袭能力,诱导细胞凋亡,两者联合作用更强,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路有关。     

RNA干扰FLOT2基因表达下调NF-κB信号对胃癌细胞凋亡诱导作用研究

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响。方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达。BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体Lipofectamine~(TM)2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β和Bax的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P0.05)。转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P0.05)。与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

小干扰RNA SOX5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(SOX5)的小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞BGC823增殖及凋亡的影响。[方法]通过qRT-PCR和Western-blot分别检测胃癌细胞系(SGC7901,BGC823,AGS,HGC27)及正常胃上皮细胞GES-1中SOX5 mRNA和蛋白的表达情况;取对数生长周期的胃癌细胞BGC823,通过Lipofiectamine2000将设计合成的SOX5的特异性siRNA以及NC转染BGC823细胞,作为siSOX5组和NC组,不做任何处理的细胞作为空白对照组。qRT-PCR检测各组细胞中SOX5 mRNA的表达情况;Western-blot检测各组SOX5及CyclinD1、P21、Bax、Bcl-2蛋白的表达;MTT检测转染12 h、24 h、48 h、72 h后,各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞的凋亡情况。[结果]与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC7901,BGC823,AGS,HGC27中SOX5 mRNA和蛋白表达升高(P0.05);转染siSOX5后,siSOX5组SOX5 mRNA及蛋白表达降低(P0.05);MTT结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞增殖受到抑制,且CyclinD1蛋白表达水平显著下降,p21蛋白表达显著升高(P0.05);流式细胞检测结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞凋亡率升高,且Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P0.05)。[结论]干扰SOX5能够降低胃癌BGC823细胞中SOX5的表达,抑制BGC823细胞的增殖并促进凋亡。     

沉默Bmi-1基因表达对胃癌细胞BGC823衰老和转移的作用

目的:研究靶向Bmi-1 siRNA对胃癌BGC823细胞衰老和转移的作用.方法:设计Bmi-1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人胃癌BGC823细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白表达的变化.SA-β-Gal染色检测和细胞体外侵袭实验检测分析对细胞衰老和侵袭、转移的影响.结果:靶向Bmi-1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确:RT-PCR和Western blot检测显示,Bmi-1基因的表达水平明显降低,其中以1 104-1 122 nt(GGAGGAGGTGAATGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最佳,Bmi-1mRNA和蛋白表达几乎完全抑制.转染siRNA组的衰老细胞百分率显著升高、穿透Matrigel的细胞数显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.01).结论:抑制胃癌BGC823细胞Bmi-1基因表达,可以增加细胞的衰老和降低细胞侵袭、转移的能力.     

Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响。方法甲状腺癌BCPAP细胞转染Six1小干扰RNA(Six1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),采用细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭,Western印迹检测Six1、神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达。结果转染siRNA control后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比无变化。转染Six1 siRNA后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比明显降低,而E-cadherin蛋白水平明显升高。结论敲低Six1可能通过影响E-cadherin、N-cadherin表达抑制甲状腺癌细胞侵袭迁移。     

LOXL2基因沉默对人胃癌细胞株BGC823增殖的影响及其机制

目的观察赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)基因沉默后人胃癌细胞株BGC823增殖情况变化,并探讨其相关机制。方法培养并收集人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1,采用real-time PCR检测LOXL2 mRNA,Western blotting法检测LOXL2蛋白。将BGC823细胞分为实验组、阴性组、对照组,其中实验组、阴性组分别转染LOXL2 siRNA、NS siRNA,对照组仅加入Lipofectamine2000试剂。继续培养48 h后,采用MTT实验观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术观察细胞周期分布,采用real-time PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA,采用Western blotting法检测PCNA、Cyclin D1蛋白。结果 BGC823细胞中LOXL2 mRNA及蛋白相对表达量均高于GES-1细胞(P均<0.05)。与对照组相比,实验组、阴性组细胞增殖抑制率分别为48.32%±3.91%、8.86%±2.98%。实验组G0/G1期细胞百分比高于阴性组与对照组,S期细胞百分比低于阴性组与对照组(P均<0.05)。实验组细胞中PCNA、Cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达量均低于阴性组和对照组(P均<0.05)。结论 LOXL2基因沉默后,BGC823细胞增殖受到抑制,其机制可能与下调PCNA、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达有关。     

胃癌细胞对细小病毒H-1敏感性差异的实验研究

目的 探讨不同胃癌细胞株对细小病毒细胞毒作用的敏感性差异及可能的机制。方法共选用HGC27(未分化)、BGC823(未分化)、MKN45(低分化)、AGS(低分化)、SGC7901(中分化)和MKN28(高分化)等6株不同分化状态的胃癌细胞株，用流式细胞仪分析其各自的细胞周期，H-1病毒感染后采用MTT方法检测不同胃癌细胞株对其细胞毒作用的敏感性差异，用RT-PCR来检测H-1病毒中的非结构蛋白基因(NS-1)在6株不同胃癌细胞中的表达。结果 HGC27、BGC823、MKN45、AGS、SGC7901和MKN28等不同分化状态细胞株中，S期细胞的比率分别为24．72％，30．15％，27．10％，29．03％，31．82％和33．73％。其中HGC27细胞对H-1病毒的细胞毒作用敏感；SGC7901细胞其次；MKN45、AGS细胞对H-1病毒的细胞毒作用中等敏感；MKN28细胞对H-1病毒的细胞毒作用不敏感；而BGC823则对H-1病毒的细胞毒作用抵抗。病毒NS-1的mRNA在HGC27、BGC823、MKN45和SGC7901等细胞中的表达水平较高，而在AGS和MKN28中的表达水平却较低。结论 H-1病毒的细胞毒作用在不同的胃癌细胞株中的差异显著。总体上，与高分化细胞株MKN28细胞相比，分化差的细胞对细小病毒H-1的细胞毒作用敏感性增加。其机制至少部分与分化差细胞中病毒NS-1蛋白的产生和积聚能力增高相关。未分化的BGC823细胞对H-1病毒的细胞毒作用抵抗，进一步证实并非所有的肿瘤细胞都对细小病毒的溶胞性作用敏感。     

Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响。方法通过Western印迹检测Notch1在人正常肾小管上皮细胞HK-2,人肾癌细胞786-O,Caki-1,769-P,GRC-1及ACHN中的表达;siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,Western印迹及RT-PCR检测转染情况,MTT法及Hoechst染色检测细胞活力及凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,Western印迹检测Bax,Bcl-2,基质金属蛋白酶(MMP)2,MMP9蛋白表达。结果 HK-2细胞中Notch1蛋白表达量显著低于5株肾癌细胞786-O,769-P,GRC-1,Caki-1及ACHN,且在Caki-1中Notch1表达量最高,因此作为后续实验的细胞株。siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,与siRNA NC组比较,siRNA Notch1组Notch1蛋白及mRNA表达量下调,细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞侵袭数目减少,Bax表达量上调,Bcl-2、MMP2及MMP9表达量下调(P<0.01)。结论 Notch1低表达能显著抑制肾癌细胞Caki-1的恶性生物学行为,可能与调控细胞凋亡蛋白及下调MMPs表达有关。     

GFPT2在胃癌中的表达及作用的研究

目的通过检测胃癌和癌旁正常组织以及5种细胞株中谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶2(GFPT2)mRNA和蛋白的表达水平,探讨GFPT2表达与胃癌发生、转移的关系及意义。方法利用实时荧光定量PCR及Western blotting法检测GFPT2在33例患者配对的新鲜胃癌组织和癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5 cm)标本、5种细胞株GES、MGC803、MKN45、BGC823及AGS中的表达情况,并利用免疫组织化学技术检测GFPT2在82例患者配对的胃癌及癌旁正常组织石蜡标本中的表达情况。结果 GFPT2 mRNA和蛋白在81.82%(27例)胃癌中呈高表达,且其在伴有肝转移的胃癌组织中的表达水平明显高于不伴有肝转移者。正常胃黏膜上皮细胞株GES中GFPT2 mRNA的表达水平明显低于胃癌细胞株MGC803、MKN45、BGC823和AGS(P0.05);胃黏膜上皮细胞株GES中GFPT2蛋白表达水平低于胃癌细胞株MGC803、MKN45、BGC823(P0.05),但与胃癌细胞株AGS中GFPT2蛋白表达水平差异无统计学意义。高转移潜能细胞株MKN45和BGC823中GFPT2的表达水平明显高于低转移潜能细胞株AGS及MGC803(P0.05)。GFPT2表达水平与胃癌分化程度呈负相关,与远处转移呈正相关(P0.05)。结论 GFPT2在胃癌组织中的表达上调,且与其转移密切相关,推测GFPT2可能具有促进胃癌转移的作用。     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

慢病毒介导的SUMO1P3基因表达对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及EMT的影响

目的探讨小泛素样修饰物基因(SUMO)1P3基因siRNA慢病毒对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将人胃癌BGC-823细胞分为空白组、NC组(转染阴性对照慢病毒载体)和si-SUMO1P3组(转染SUMO1P3基因的siRNA慢病毒载体)。Western印迹检测SUMO1P3下调效果及EMT相关E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-SMA蛋白表达。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力及黏附能力;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果 si-SUMO1P3的组SUMO1P3蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)。si-SUMO1P3组BGC-823细胞24～72 h细胞活力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组在接种的30 min和60 min细胞黏附能力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组细胞侵袭能力、迁移能力均显著低于空白组,E-cadherin蛋白表达显著高于空白组,Vimentin和α-SMA蛋白显著表达低于空白组(P<0.05)。结论抑制SUMO1P3基因表达可能通过阻碍EMT降低胃癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。     

MiR-496调控LYN经AKT/mTOR信号通路对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR496在胃癌细胞中的表达,以及与LYN激酶在胃癌细胞中相互作用的关系,探讨miR496对胃癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-496在胃癌细胞株(BGC-823、SGC-790、AGS、MKN45和MKN28)和正常胃上皮细胞株GES-1中的表达。用miR-496质粒转染miR-496低表达AGS细胞,同时设置阴性对照组和空白对照组,qPCR检测转染效率。采用克隆形成试验检测细胞增殖,Transwell试验检测细胞的迁移和侵袭。使用生物信息学软件targetscan筛选miR-496的靶基因LYN,qPCR检测转染miR-496对LYNmRNA表达的影响,Western blot检测各组细胞中AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果与正常胃上皮细胞系GES-1相比,MiR-496在3种胃癌细胞系SGC-790、AGS和MKN45中下调,其中在AGS细胞中表达最低(P0.05)。过表达MiR-496后抑制了AGS细胞的增殖(P0.05),同时也抑制了AGS细胞的迁移和侵袭(P0.05)。生物信息学分析显示miR-496与LYN激酶(LYN)之间存在一个结合位点。MiR-496过表达可抑制AGS细胞中LYN的表达(P0.05),而LYN过表达阻断了MiR-496对肿瘤细胞生长的抑制,以及miR-496诱导的AKT/mTOR信号通路的抑制(P0.05)。结论 miR-496在胃癌细胞中低表达,其通过靶向胃癌细胞中LYN的表达和AKT/mTOR信号通路抑制胃癌细胞的增殖和迁移。     

miR-204在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-204在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系及其对胃癌细胞凋亡的影响。方法接受手术治疗的胃癌患者53例,收集手术切除的胃癌组织作为胃癌组标本,并收集其癌旁(3 cm)正常组织作为对照组标本,同时培养人胃癌细胞株(BGC823、SGC7901)和永生化胃上皮细胞株(GES-1)。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组标本、对照组标本、BGC823、SGC7901、GES-1细胞株中的miR-204表达,分析胃癌组组织miR-204相对表达量与临床病理参数的关系,对部分BGC823、SGC7901细胞株进行转染miR-204,对比转染miR-204组与未转染miR-204组的BGC823、SGC7901细胞株的细胞增殖和细胞凋亡情况。结果胃癌组标本中的miR-204相对表达量明显低于对照组标本中miR-204的相对表达量(P0.05)。BGC823细胞株和SGC7901细胞株中的miR-204相对表达量明显低于GES-1细胞株中的miR-204相对表达量(P0.05)。胃癌组组织标本中miR-204相对表达量与患者的年龄、性别无关(P0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(P0.05)。第3天的BGC823、SGC7901细胞株中,未转染组的吸光度高于转染miR-204组(P0.05),未转染组的细胞凋亡百分比显著低于转染miR-204组(P0.05)。结论 miR-204在胃癌组织以及胃癌细胞株中呈现低表达,且其表达与TNM分期、淋巴结转移以及分化程度有关,转染miR-204后能抑制胃癌细胞株的细胞增殖,并能促进其细胞凋亡。     

DEK基因在胃癌中的表达及调控Notch1信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨DEK基因的表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法 RT-PCR检测胃癌细胞中DEK mRNA的表达;DEK-siRNA、NC-siRNA转染人胃癌BGC-823细胞,不作任何处理的细胞作为对照组,转染48 h后,Western blotting检测DEK、MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖情况;Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果 DEK基因在人胃癌MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中的mRNA表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),DEK基因在胃癌BGC-823细胞的mRNA表达最高,选择作为后续研究对象;DEK-siRNA转染BGC-823细胞后DEK的蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及NC-siRNA组比较,DEK-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P0.01)。结论 RNA干扰(RNAi)抑制胃癌细胞中DEK基因的表达后可抑制细胞的增殖及侵袭能力,其机制与Notch1信号通路的调控有关。     

反义RNA对胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭性的抑制作用

目的:膜研究膜型-1基质金属蛋白酶(MT1- MMP)反义RNA对人胃癌细胞BGC823靶基因表达和侵袭特性的影响方法:利用基因重组技术构建人MT1-MMP反义RNA真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC823,应用RT-PCR、MTT、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察人胃癌细胞BGC823转染前后,MT1-MMP mRNA表达水平、细胞生长、明教酶A活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化.结果:成功构建了MT1-MMP反义RNA真核表达载体pasMMP14,将其转染胃癌细胞BGC823后,与阴性对照组相比,实验组MT1- MMP mRNA表达水平降低,抑制率为36%.转染48 h,明教酶A的活化受到了明显抑制.转染72 h,细胞增殖明显受抑(t=2.358,P<0.01 vs空白组:t=2.727 P<0.01 vs阴性组).实验组的穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(t=5.744,P<0.01;t=5.695,P<0.01).结论:反义RNA对人胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭能力具有明显的抑制作用,MT1-MMP基因可作为胃癌抗侵袭治疗的分子靶点.     

核糖体蛋白L5在胃癌中的表达及功能

目的:探讨核糖体蛋白L5(ribosomal protein L5,RPL5) 在胃癌细胞中的表达及对胃癌细胞生长的影响．方法:Western blot检测RPL5在胃癌细胞系中的表达, 构建RPL5特异性siRNA载体,转染细胞,Western blot进行鉴定,MTT方法和流式细胞术检测转染细胞的生长变化．结果:RPL5在胃癌细胞系AGS、MKN45、SGC7901、 MGC803中的表达均明显强于在GES-1和正常胃黏膜上皮中的表达．成功构建RPL5特异siRNA载体U6- RPL5A和U6-RPL5B,转染AGS细胞,进行稳定筛选,发现U6-RPL5A能显著抑制RPL5的表达,其相应的细胞系AGS-U6-RPL5A的生长速度减慢．细胞周期检测结果显示AGS-U6-RPL5A细胞中处于增殖期的细胞减少了约5％．结论:对RPL5功能的进一步深入研究可能会有助于胃癌的诊断和治疗．     

脂筏结构蛋白1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的诱导

目的探讨脂筏结构蛋白(FLOT)1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的影响及机制。方法 Western印迹法检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A及MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞FLOT1的蛋白表达。将设计合成的针对FLOT1的特异性siRNA序列(si-FLOT1组)及阴性对照siRNA序列(NC组)转染至MDA-MB-231细胞,仅仅加入脂质体的为空白对照组,AG490作为信号转导与转录因子(STAT)3信号通路抑制剂,转染48 h, Western印迹法检测FLOT1、磷酸化蛋白酪氨酸激酶(p-JAK)2、p-STAT3、细胞增殖核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 FLOT1在MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞中的蛋白表达均显著高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(P0.05)。与空白对照组比较,si-FLOT1组FLOT1表达受到抑制(P0.05);与NC组比较,si-FLOT1组细胞凋亡率显著升高(P0.05),p-JAK2、p-STAT3、PCNA和Bcl-2的蛋白表达显著下调(P0.05)。与si-FLOT1组比较,si-FLOT+AG490组细胞凋亡率显著升高(P0.05)。结论 FLOT1在乳腺癌细胞中呈高表达,通过RNA干扰抑制其表达可诱导癌细胞凋亡,机制与下调STAT3信号通路有关。     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

miR-133靶向JAK2抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-133对胃癌(gastric cancer, GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法运用qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-133、JAK2的mR NA表达;将miR-133组(转染miR-133 mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、miR-133 inhibitors组(转染miR-133 inhibitors)、inhibitors-NC组(转染inhibitors)、JAK2WT(载体psiCHECK2-JAK2-32 MUT(载体pUT和miR-133共转染)、miUTRWT和miR-133共转染)、JAKsiCHECK2-JAK2-3UTR MR-133+JAK2组(miR-133 mimics和JAK2共转染)、miR-133+Vector组(miR-133 mimics和pc-DNA 3。1共转染)均用脂质体法转染至AGS、MGC-803细胞;用Western blot检测细胞中JAK2的蛋白表达; MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果与人癌旁组织、人正常胃黏膜细胞GES-1相比, GC组织、GC细胞AGS、MGC-803中miR-133均低表达,JAK2均高表达;且过表达miR-133、沉默JAK2均可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭; JAK2为miR-133的靶点,且回补JAK2可逆转miR-133对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-133可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,其可能与靶向JAK2有关,将可为GC的临床诊断治疗提供新靶点。     

敲低长链非编码RNA LOXL1- AS1表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨敲低长链非编码RNA LOXL1-AS1表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测不同胃癌细胞株(AGS、BGC823、NCI-N87、MGC803和SGC7901)和正常胃黏膜细胞株GES-1中LOXL1-AS1表达情况;选取LOXL1-AS1表达水平最高的胃癌BGC823细胞系,建立LOXL1-AS1敲低模型,实验分为sh-LOXL1-AS1组和sh-NC组,分别转染LOXL1-AS1靶向shRNA和scramble shRNA,qRT-PCR法验证干扰效率,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt表达。结果 qRT-PCR结果显示,与正常胃黏膜细胞GES-1相比,胃癌细胞株中LOXL1-AS1表达水平均显著升高(P0.05)。与sh-NC组比较,sh-LOXL1-AS1组LOXL1-AS1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),细胞Bcl-2、p-PI3K和p-Akt表达显著降低,Bax表达显著升高(P0.05)。结论敲低LOXL1-AS1表达可抑制胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,继而调控凋亡相关蛋白表达,启动细胞凋亡程序有关。