沉默HIF-1α表达逆转缺氧诱导肝癌免疫抑制的实验研究

目的:探讨缺氧诱导因子-1(HIF-1α)表达在缺氧诱导肝癌免疫抑制中的作用,以期阐明缺氧致肝癌免疫抑 制的分子机制。方法:构建缺氧C57BL/6 小鼠移植瘤模型,缺氧探针HypoxyprobeTM-1 标记缺氧组织,免疫组化检测缺氧组织 HIF-1α表达,qPCR 检测缺氧组织肿瘤免疫因子表达;慢病毒构建稳定敲减HIF-1α的Hepa1鄄6 小鼠肝癌细胞株,并移植于 C57BL/6 小鼠,6 周后检测移植瘤瘤重,Western blot 检测移植瘤HIF鄄1琢表达,流式细胞仪检测移植瘤中肿瘤浸润免疫细胞 CD4+CD25+ Foxp3+调节性T 细胞表达,qPCR 检测缺氧组织肿瘤免疫因子表达。结果:C57BL/6 小鼠缺氧移植瘤模型构建成 功,缺氧组织HIF鄄1琢高表达,肿瘤抑制因子IFN-γ、IL-12b 和CXCL10 低表达,肿瘤促进因子IL-10、IL-1β和IL-17 高表达;敲减 HIF-1α明显抑制了移植瘤生长,降低了CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T 细胞浸润,同时抑制了肿瘤促进因子IL-10、IL-1β和IL-17 表达,促进了肿瘤抑制因子IFN鄄酌、IL鄄12b 和CXCL10 表达。结论:缺氧可诱导肝癌组织HIF鄄1琢表达及免疫抑制,相反,沉默 HIF鄄1琢可抑制移植瘤生长并逆转肝癌免疫抑制,揭示了HIF-1α在缺氧致肝癌免疫抑制中的作用,可能为将来肝癌诊治提供 新思路。     

IκBα转基因小鼠肝脏免疫细胞亚群的初步分析

目的:分析IκBα转基因小鼠肝脏组织形态、免疫细胞分群、凋亡状态以及表型分子等。方法:HE 组织染色分析野生型小鼠和IκBα转基因小鼠肝脏组织形态变化;利用流式细胞术分析野生型小鼠和I资B琢转基因小鼠肝脏组织中NK、NKT、T 细胞比例和表型分子,进一步采用Annexin V 标记法检测小鼠肝脏免疫细胞的凋亡状态;定量PCR 法检测趋化因子和细胞因子的表达含量。结果:与野生型小鼠相比, IκBα-转基因鼠肝脏组织损伤严重; IκBα转基因小鼠肝脏NK、NKT、T 细胞比例均显著下降,NK 细胞凋亡的比例增加,并且NKp46 在IκBα转基因小鼠肝脏NK 细胞中表达降低。在此过程中,还观察到IκBα转基因小鼠肝脏细胞因子谱发生改变,IFN-γ、CCL2 等表达显著下降,而IL-2、IL-15 等并没有显著变化。结论: IκBα转基因小鼠肝脏组织形态、免疫细胞亚群比例、表型及细胞因子谱均发生改变。     

白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡及JAK1/STAT3信号通路蛋白的影响北大核心CSCD

目的:基于蛋白酪氨酸激酶1/信号转导因子3(JAK1/STAT3)信号通路探讨白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:动物实验分为对照组、模型组、实验组、抑制剂组,模型组、实验组、抑制剂组小鼠尾静脉注射印度墨水及灌胃麦角蛋白复制过敏性紫癜模型,实验组、抑制剂组小鼠每日灌胃0.1 g/kg白芍药总苷和AG490,连续处理4周。ELISA测定各组小鼠血清IL-10及IL-17含量;流式细胞术检测各组小鼠血清Treg、Th17变化;Western blot检测各组小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达。结果:与对照组相比,模型组、实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和IL-10含量明显下降,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显升高(均P<0.05);与模型组相比,实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和血清IL-10含量明显升高,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显降低(均P<0.05)。结论:白芍总苷可通过抑制JAK2/STAT3信号通路调控过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡。     

归肾丸对卵巢早衰小鼠细胞免疫的影响

目的:探讨归肾丸对卵巢早衰小鼠(POF)细胞免疫的影响。方法:以小鼠透明带3 为抗原,皮下多点注射免疫BALB/ c 雄性小鼠,建立卵巢早衰模型。60 只BALB/ c 小鼠随机分为空白对照组、模型组、泼尼松组、归肾丸高、中、低剂量组。连续给药28 d 后,测定各组小鼠的脾脏指数、胸腺指数、卵巢指数、T 淋巴细胞增殖能力、T 细胞亚群、NK 细胞、血清中IFN-γ和IL-2 的含量。结果:归肾丸可显著提高小鼠的脾脏指数,增强T 细胞的增殖能力,显著增加CD3+ T、CD4+ T、CD4+ T/CD8+ T 比值、NK 细胞百分比及IFN-γ、IL-2 的含量(P<0.05),显著降低CD8+ T 细胞百分比(P<0。05)。结论:归肾丸能够调节机体细胞免疫作用,提高卵巢早衰小鼠的免疫功能。     

美沙拉嗪对DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型Th1、Th17及Treg细胞亚群的影响

 目的:观察葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎（UC）模型中辅助性T细胞（Th1、Th17亚群）及调节性T细胞（Treg）细胞亚群的变化,探讨美沙拉嗪（MSLZ）治疗UC的免疫学机制。方法: 采用流式细胞分析术检测DSS诱导的小鼠UC模型结肠组织及外周血单个核细胞中白细胞介素17（IL-17）、γ-干扰素（IFN-γ）及核转录因子Foxp3的表达,并检测MSLZ预治疗对小鼠UC 模型Th1、Th17和Treg亚群的影响。结果: 在DSS诱导的小鼠UC模型中,其外周血单个核细胞（PBMC）中CD3+T细胞高表达IL-17、IFN-γ及Foxp3,肠黏膜单个核细胞（LPMC）中CD3+T细胞高表达IFN-γ和Foxp3,但IL-17的表达与对照组无差异。进一步发现UC模型小鼠LPMC中Th17、Th1和Treg均显著高于对照组,但PBMC中只有Treg高于对照组。MSLZ预治疗能显著下调UC 模型小鼠PBMC和LPMC中Th17、Th1和Treg细胞亚群。结论: DSS诱导的小鼠 UC模型中CD4+T细胞亚群Th1、Th17及Treg细胞显著升高,提示CD4+T细胞亚群在UC发病中起重要作用,美沙拉嗪可能通过调节Th1、Th17及Treg细胞亚群发挥抗炎及治疗UC作用。     

蛋白激酶C抑制剂对T细胞表达IL-2及IFN-γ的影响

目的:研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和棉酚对体外活化T细胞表达白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(INF-γ)的影响。方法:在莫能菌素(monensin)存在时,以佛波醇酯(PDB)+离子霉素(I)体外活化人外周血单个核细胞(PBMC),以流式细胞术胞内细胞因子检测法分析H7和棉酚对CD3⁺T细胞表达IL-2和IFN-γ水平的影响。结果:PDB+I处理PBMC4h后,表达IL-2和IFN-γ的CD3⁺T细胞百分率分别为16.64±2.04和25.81±3.53(x±s),而对照组二者的比率为1.06±0.22及3.12±0.77(P＜0.05)。棉酚(50μmol/L)可明显抑制IL-2及IFN-γ的表达,抑制后表达率分别为2.08±0.12及9.01±1.90。H7作用比棉酚强,50μmol/L的H7抑制后的IL-2及IFN-γ阳性T细胞比率分别为0.43±0.06和2.40±0.27。结论:PKC在CD3⁺T细胞表达IL-2及IFN-γ中发挥重要作用;PKC抑制剂H7及棉酚明显抑制IL-2及IFN-γ的表达,提示H7和棉酚可通过抑制PKC活性,对依赖于T细胞功能的特异性免疫应答有调节作用。     

沉默PARG基因增强局部对结肠癌的免疫应答

目的探讨沉默结肠癌PARG基因后对肿瘤局部免疫状态的影响。方法以PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞为实验组,未转染CT26细胞和空载体转染CT26细胞为对照组,分别将各组细胞在BALB/C小鼠脾包膜下接种形成肝转移模型;Western blot法检测脾脏移植瘤中PARG蛋白的表达;免疫荧光双标法检测脾脏中B220+DEC205+DC和CD11c+CD11b+DC,用激光共聚焦显微镜观察上述细胞;免疫荧光单标记法检测脾脏中CD4+T细胞及CD8+T细胞,用激光共聚焦显微镜观察上述细胞;ELISA法检测各组小鼠血清中IL-10和IL-12的表达。结果PARG基因沉默后,脾脏移植瘤中PARG蛋白的表达量明显较对照组降低(P<0.05);脾脏组织中B220+DEC205+DC较对照组显著减少;而CD11c+CD11b+DC较对照组明显增多(P<0.05);脾脏组织中的CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值较对照组明显升高(P<0.05);血清中IL-10的表达较对照组明显减少而IL-12的表达较对照组显著增多(P<0.05)。结论沉默结肠癌PARG基因可通过影响DC及T细胞的增殖分化,增强肿瘤局部的免疫反应。     

人外周血和扁桃体中Tfh细胞与其他Th细胞亚群之间的关系

目的比较观察人外周血和扁桃体Tfh细胞的表型以及与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。方法分离正常人PBMC及扁桃体单个核细胞,利用anti-CD3+anti-CD28或PMA+ionomycin刺激后,采用ELISA和流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生,分析Tfh与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。结果与PBMC中CD4+T细胞不同,扁桃体CD4+T细胞高表达CXCR5和CD45RO,低表达CCR7和CD62L;与PBMC中CD4+T细胞相比,扁桃体CD4+T细胞IL-21和IL-17产生水平较高,IFN-γ产生水平较低,IL-22水平无显著差异;外周血和扁桃体CD4+T细胞中均存在一定比例的IL-21+IL-17+双阳性、IL-21+IL-22+双阳性、IL-21+IFN-γ+双阳性细胞,IL-21单阳性细胞在扁桃体CD4+T细胞中所占比例明显高于外周血;外周血和扁桃体CD4+CXCR5+细胞除表达IL-21外,还表达IL-17、IL-22和IFN-γ。结论扁桃体中存在较多数量的Tfh细胞,大多数Tfh细胞是不同于Th1、Th17和Th22的细胞亚群。     

补肾健脾方干预PPD 诱导小鼠T 细胞耗竭的实验研究

目的:研究结核分枝杆菌抗原持续刺激致T 细胞功能耗竭的机制,探究补肾健脾方对T 细胞功能耗竭的治疗作用。方法:利用BCG 初免,结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)持续刺激C57BL/6 小鼠,模拟结核分枝杆菌抗原在病人体内持续存在所造成的慢性感染病理过程,构建T 细胞耗竭模型。在T 细胞耗竭模型基础上,给予补肾健脾方灌胃治疗。治疗3 周后检测不同实验组细胞免疫水平,包括利用流式细胞术检测脾脏CD4+和CD8+ T 细胞数目,以及细胞表面抑制性受体PD-1 的表达水平;利用ELISA 检测脾脏淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-酌的水平;利用CFU 菌落计数检测肺脏BCG 攻击后的抗感染免疫能力。结果:与抗原短暂刺激组相比,免疫耗竭未治疗组CD4+和CD8+ T 细胞数目显著下降(P<0.05),细胞表面PD-1 表达水平显著增高(P<0.01);脾淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-γ明显降低(P<0.01);小鼠经BCG 攻击后,抗感染保护效果显著下降(P<0.01)。经补肾健脾方治疗后,脾脏CD4+和CD8+ T 细胞数目得到明显恢复(P<0.05),CD4+ T 细胞PD-1 的表达得到显著降低(P<0.01);脾淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-酌的水平明显增高(P<0.05);小鼠抗感染的能力显著性增强(P<0.01)。结论:通过结核抗原PPD 持续刺激成功构建T 细胞耗竭模型;补肾健脾方能逆转抗原持续刺激导致的小鼠T 细胞功能耗竭,可为临床治疗肺结核T 细胞功能耗竭提供参考。     

DENV-2 感染的HUVECs 与CD4+ T 细胞相互作用对炎性细胞因子产生的影响

目的:研究原代人脐静脉内皮细胞(Primary human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)被登革域型病毒 (DENV鄄2)感染,与CD4+ T 细胞共培养后,对产生主要炎性细胞因子的相互影响。方法:密度梯度离心法提取浓缩白细胞中的 PBMC,免疫磁珠法阴性分选CD4+ T 细胞,流式检测细胞表面CD3,CD4 分子的表达和CD4+ T 细胞的纯度。HUVECs 经S1P1 特异性受体激动剂CYM-5442 预处理24 h,加入103 TCID50 的DENV-2 感染后,与CD4+ T 细胞共培养,Real鄄time RT-PCR 动态 检测DENV-2 感染HUVECs 后病毒NS1 基因及IL-6、IL-8 的mRNA 和CD4+ T 细胞内IL-4、IL-17、TNF-α、IFN-β的mRNA 相对 表达量;双抗体夹心ELISA 法检测培养上清IL-6、IL-8 的表达。结果:流式检测经免疫磁珠阴选的CD4+ T 细胞纯度为(98.02± 0.32)%。DENV-2 感染HUVECs 后病毒NS1 基因相对表达逐渐增加,在24 h(3.03±0.26,P<0.001)达到峰值后下降,而感染 DENV-2 后与CD4+ T 细胞共培养组的NS1 基因相对表达量低于感染组,且呈下降趋势。感染后IL-6 和IL-8 表达均有上调,与 CD4+ T 细胞共培养后,IL-6 和IL-8 在各时间点表达均明显升高(P<0.01)。CYM-5442 预处理的共培养感染组中,IL-6 在24 h (28.91±2.34,P<0.05)、36 h(19.36依0.1,P<0.05)和72 h(13.84±0.82,P<0.05)显著下降,IL-8 表达显著下降。与感染后的 HUVEC 共培养后CD4+ T 细胞的IL-4、IL-17、TNF-α、IFN-β的mRNA 表达均明显升高。结论:DENV-2 能感染原代HUVECs;与 CD4+ T 细胞共培养后NS1 的表达被抑制。CD4+ T 细胞不仅能增强被DENV-2 感染的HUVEC 的活化,同时也能被感染后的 HUVEC 活化。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.