TMEM158在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的分析跨膜蛋白158（Transmembrane protein 158, TMEM158）在乳腺癌组织中的表达,探讨其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法分析TCGA数据库中下载的1094例乳腺癌组织和120例癌旁组织的mRNA表达谱数据;Western 印迹验证乳腺癌患者癌组织及其对应癌旁组织中TMEM158蛋白表达差异;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞系中TMEM158表达水平。通过小干扰RNA技术转染乳腺癌SUM1315细胞,Transwell及细胞划痕实验观察沉默TMEM158后对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响,同时Western 印迹和qRT-PCR实验分析干扰TMEM158对EMT（epithelial-mesenchymal transition）相关标志物E-Cadherin、Vimentin、Snail、N-Cadherin表达量的影响。结果分析TCGA数据库中下载的1094例乳腺癌组织和120例癌旁组织的mRNA表达谱数据显示,TMEM158在乳腺癌组织中的表达水平（6.65 ± 1.76）高于癌旁组织（5.81 ± 1.22）,差异有统计学意义（P<0.05）;分析120对乳腺癌及其对应的癌旁组织,结果表明,TMEM158在乳腺癌组织中表达（6.50 ± 1.76）高于对应的癌旁组织（5.81 ± 1.22）,差异有统计学意义（P<0.05）。Western 印迹检测4对人乳腺癌及对应的癌旁组织标本中TMEM158蛋白的表达差异显示,与癌旁乳腺组织比较,乳腺癌组织TMEM158表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。qRT-PCR分析乳腺癌细胞水平TMEM158表达差异显示,相对于正常乳腺导管细胞（MCF-10A）,乳腺癌细胞中TMEM158表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）,qRT-PCR结果显示,与正常乳腺导管细胞（MCF-10A）相比,人乳腺癌细胞株TMEM158表达量升高,差异有统计学意义（均P< 0.05）。Transwell实验结果表明,与对照组细胞（SUM1315-SiNC）相比,干扰TMEM158（SUM1315-SiTMEM158）细胞的迁移和侵袭能力降低[（346 ± 59）比(196 ± 33), P< 0.05;（202 ± 68）比（99 ± 21）, P< 0.05）]。细胞划痕实验结果显示,沉默TMEM158后细胞迁移能力降低[（54.68 ± 10.85）比（25.54 ± 7.64）, P< 0.05]。Western 印迹和qRT-PCR结果证明,沉默TMEM158后E-Cadherin表达量增加,而Vimentin、Snail、N-Cadherin表达量下降,差异有统计学意义。结论TMEM158在乳腺癌组织与细胞系中高表达,可通过调控EMT相关蛋白的表达干扰TMEM158,从而抑制乳腺癌细胞迁移侵袭。     

TAGLN基因过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究TAGLN基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 对MDA-MB-231细胞采用慢病毒表达系统构建TAGLN基因稳定过表达细胞株,将MDA-MB-231细胞正常培养设为空白对照组,空载体慢病毒包装感染MDA-MB-231细胞后获得的稳定转染细胞株设为空载体对照组.Real time PCR和Western blot检测TAGLN mRNA和蛋白表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测TAGLN基因过表达后基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化.结果 MDA-MB-231细胞感染TAGLN基因过表达慢病毒载体后,细胞中TAGLN mRNA表达和蛋白表达升高(均P＜0.01),成功构建TAGLN基因过表达稳定细胞株(231-TAGLN).231-TAGLN细胞的体外迁移能力和侵袭能力下降,与空载体对照组和空白对照组细胞比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.01),同时伴有MMP-2和MMP-9表达水平降低(均P＜0.01).结论 TAGLN基因过表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,MMP-2和MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.     

DKK1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力影响的研究

  目的  探讨Dikkopf 1（DKK1）对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。  方法  采用免疫组织化学方法检测DKK1在乳腺癌组织中的表达,并通过免疫荧光对DKK1在细胞中的定位进行分析;DKK1过表达的真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA231,应用Western blot检测转染后乳腺癌细胞MDA231中DKK1蛋白表达水平。划痕实验检测转染后MDA231细胞的迁移能力,Transwell实验检测MDA231细胞侵袭能力的改变。  结果  免疫组织化学检测到乳腺癌组织原发病灶及转移病灶DKK1表达明显高于对应的癌旁组织（P < 0.05）。DKK1表达的阳性率在有淋巴结转移组织中明显比无淋巴结转移组织中低。免疫荧光结果显示DKK1主要呈细颗粒状散在分布于细胞质中。Western blot检测表明DKK1过表达明显。过表达DKK1的MDA231细胞迁移和侵袭能力明显比阴性对照组和空白组低。  结论  DKK1的表达与乳腺癌细胞迁移和侵袭能力呈负相关。      

过表达ADAM17对乳腺癌细胞侵袭能力影响

目的 通过调高MCF-7人乳腺癌细胞ADAM17的表达,探讨其对乳腺癌细胞侵袭力的影响.方法 MCF-7细胞成功转染慢病毒载体(LV8N-ADAM17)后,实验分为转染组、无义序列组、空白对照组,通过荧光显微镜观察转染效果.采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法分别检测各组MCF-7细胞ADAM17、EGFRmRNA和A...     

肿瘤相关巨噬细胞对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的观察肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响,并初步探索其机制。方法选取人单核细胞系THP-1,体外经佛波酯(PMA)、人白细胞介素-4(IL-4)诱导获得TAMs细胞模型;通过流式细胞术(FCM)检测TAMs表面标记分子CD206表达水平;MCF-7细胞与TAMs共培养后,光学倒置显微镜观察细胞形态;利用Transwell小室分别检测MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;蛋白印记法(Western blotting)检测E-钙黏蛋白(Ecadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)及波形纤维蛋白(Vimentin)的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清中转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果与TAMs共培养后的MCF-7细胞伪足增多,细胞排列更松散。通过FCM检测到TAMs表面标记物CD206显著表达。Transwell实验结果显示,与TAMs共培养后的MCF-7细胞迁移能力增...     

上皮细胞膜蛋白2在甲状腺乳头状癌中的表达及其对细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探究上皮细胞膜蛋白2（EMP2）在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其对细胞侵袭迁移能力的影响。方法:收集我院2013年6月至2016年12月收治的120例行手术治疗的PTC患者肿瘤组织及相应癌旁组织,另收集16例PTC转移灶组织,荧光定量PCR（qPCR）及免疫组织化学（IHC）技术分别检测不同组织中EMP2 mRNA及蛋白表达情况。体外采用慢病毒转染针对EMP2的小干扰RNA载体,干扰人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1中EMP2的表达作为实验组细胞,转染空白对照载体作为对照组细胞,Western Blot检测两组细胞EMP2蛋白、上皮间充质转化（EMT）分子表达的差异,包括E-钙黏蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞侵袭迁移能力的差异。结果:EMP2 mRNA在PTC组织中表达显著高于癌旁组织,且转移灶组织表达显著高于非转移灶组织,差异存在统计学意义（P＜0.05）。EMP2蛋白在PTC组织中表达阳性率显著高于癌旁组织,且转移灶组织阳性率显著高于非转移灶组织,差异存在统计学意义（P＜0.05）。实验组细胞EMP2及Vimentin蛋白表达水平相比对照组细胞显著下调,差异存在统计学意义（P＜0.05）;而实验组细胞E-cadherin蛋白表达水平相比对照组细胞显著上调,差异存在统计学意义（P＜0.05）。实验组穿透基质胶细胞数显著少于对照组细胞,差异存在统计学意义（P＜0.01）;实验组穿过小室孔的细胞数显著少于对照组细胞,差异存在统计学意义（P＜0.01）。结论:EMP2在PTC组织中高表达,且在转移灶中相比非转移灶表达上调,干扰PTC细胞EMP2表达后其侵袭迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT进程有关。     

环状RNA ciRS-7在三阴性乳腺癌中的表达及其对细胞侵袭和迁移的影响

 目的 探讨环状RNA ciRS-7在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达及其对细胞侵袭和迁移的影响。方法 通过qRT-PCR法检测乳腺癌组织和细胞中ciRS-7的表达水平,分析其与乳腺癌患者临床病理指标之间的关系。用划痕实验和Transwell实验检测沉默ciRS-7后MDA-MB-231和BT-549细胞的迁移和侵袭能力的变化。利用动物实验在体内进行验证。结果 TNBC组织中ciRS-7的相对表达量为（6.52±0.38）,显著高于Luminal型（1.56±0.17）（P<0.001）和HER2过表达型乳腺癌组织（2.27±0.66）（P<0.001）以及癌旁正常组织（0.83±0.09）（P<0.001）。ciRS-7表达与分子分型、肿瘤浸润和淋巴结转移明显相关（均P<0.05）;而与患者年龄、肿瘤直径和病理分级无关（均P>0.05）。沉默ciRS-7后,MDA-MB-231和BT-549细胞的迁移和侵袭明显减弱（均P<0.05）。ciRS-7敲低组肺转移瘤数明显减少（P<0.05）。结论 ciRS-7在TNBC中高表达,并可能增强TNBC细胞的侵袭和迁移。     

Annexin a2表达对人乳腺癌细胞增殖迁移和侵袭能力的影响

目的：研究Annexin a2的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：采用小干扰RNA技术下调人乳腺癌细胞中Annexin a2的表达,并筛选单克隆细胞株,得到实验组克隆,阴性对照组命名为control。采用Western blot（WB）技术检测Annexin a2蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法研究其对MDA-MB-231细胞的存活、增殖能力的影响;采用划痕实验、侵袭实验观察其对细胞迁移和侵袭能力的影响; 免疫沉淀法检测与Annexin a2相互作用的蛋白分子。结果：WB检测发现siRNA干扰后MDA-MB-231细胞中Annexin a2的蛋白表达水平明显下降, MTT增殖实验显示Annexin a2下降组细胞克隆在72、96h的增殖能力明显低于亲本和control组细胞 （P均<0.05）, 同时细胞迁移和侵袭能力也显著下降, 差异具有统计学意义 （P<0.05）;免疫沉淀法证实Annexin a2与热休克蛋白27（HSP27）之间存在相互作用。结论：人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有较强的迁移和侵袭能力,Annexin a2蛋白水平下降可以明显抑制其增殖、迁移和侵袭能力,研究提示Annexin a2与HSP27的相互作用有可能在乳腺癌的发生、 浸润和转移中起调节作用。     

LINC01936在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭特性的影响

摘 要：［目的］ 研究LINC01936在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。［方法］ 从UCSC XENA数据库中获取LINC01936在1 099例乳腺癌组织和292例非配对癌旁组织及112例配对样本中的表达数据。用LINC01936-pcDNA3.1或pcDNA3.1质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞,获得过表达LINC01936的MCF-7细胞和对照 MCF-7细胞。使用cell counting kit-8(CCK-8) 细胞增殖实验测定LINC01936对MCF-7细胞增殖的影响。采用Transwell实验和细胞划痕实验测定细胞迁移和侵袭能力。通过细胞黏附实验检测黏附能力。荧光Hoechst33342染色法用于评价LINC01936对细胞凋亡的影响。Western blot和免疫荧光法用于检测NF-κB的蛋白水平。［结果］ 生物信息学分析表明,LINC01936在乳腺癌组织中低表达。CCK-8检测显示,LINC01936抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05）。Transwell实验及细胞划痕实验表明,转染LINC01936过表达质粒后,MCF-7细胞迁移和侵袭能力下降。细胞黏附实验表明,LINC01936减弱乳腺癌细胞的黏附能力（P<0.05）。荧光染色分析表明,LINC01936过表达促进MCF-7细胞的凋亡。Western blot和免疫荧光显示,LINC01936促进NF-κB的表达。［结论］ LINC01936可能通过促进NF-κB的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

LRG1在乳腺癌组织中的表达及对MCF-7细胞侵袭和迁移的影响

目的:研究LRG1在乳腺癌组织中的表达及对MCF-7细胞侵袭和迁移的影响及相关分子机制。方法:免疫组化和免疫荧光染色分别观察乳腺癌组织中LRG1的分布、表达,并分析与临床病理因素的相关性;Transwell侵袭和细胞划痕实验检测LRG1抑制后对MCF-7细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot检测siRNA-LRG1片段对人乳腺癌MCF-7细胞中LRG1和p-p38 蛋白表达的影响,通过p38抑制剂SB202190进一步验证LRG1与p38/MAPK信号通路的关系。结果:LRG1主要分布于乳腺癌细胞质,癌组织中高表达的LRG1与患者年龄、组织学分级无关（P＞0.05）,而与TNM分期、淋巴结转移密切相关（P＜0.05）;Transwell侵袭和细胞划痕实验显示,下调LRG1表达后,MCF-7细胞侵袭和迁移能力明显减弱;与对照组相比,siRNA-LRG1片段能明显抑制MCF-7细胞中LRG1和 p-p38 蛋白表达（P＜0.05）,应用SB202190处理后,能够加强siRNA-LRG1对p-p38蛋白表达的抑制作用。结论:LRG1在乳腺癌中呈高表达并与肿瘤TNM分期和淋巴结转移密切相关;下调LRG1的表达可明显抑制MCF-7细胞侵袭和迁移能力,这可能通过抑制p38/MAPK信号通路来实现。     

阿司匹林对HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响

目的探讨阿司匹林对乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响。 方法先采用MTT法检测不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L)阿司匹林及DMSO(对照组)对SKBR3细胞生长抑制的影响。然后,将乳腺癌细胞SKBR3分为3组,即2.5 mmol/L阿司匹林组、10.0 mmol/L阿司匹林组和对照组(DMSO处理),采用Transwell实验、划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力,实验重复3次。Transwell实验和划痕实验结果数据比较,采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果MTT结果显示,随着阿司匹林浓度的增大,SKBR3细胞生长抑制明显增加,其半数抑制浓度(IC₅₀)为7.91 mmol/L。Transwell实验显示,对照组侵袭细胞染色570 nm吸光度值为2.232±0.054,2.5 mmol/L组为1.648±0.069,10.0 mmol/L组为0.372±0.019,3组间相比,细胞侵袭能力的差异有统计学意义(F＝338.1, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞侵袭能力明显受到抑制(P均<0.001)。划痕实验显示,24 h后对照组细胞迁移愈合率为(69.78±2.87)%,2.5 mmol/L阿司匹林组为(50.16±3.10)%,10.0 mmol/L阿司匹林组为(16.08±2.10)%,3组间相比,细胞迁移能力的差异也有统计学意义(F＝100.8, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞迁移能力均明显受到抑制(P均<0.050)。 结论阿司匹林能够抑制乳腺癌细胞SKBR3的侵袭和迁移能力。     

LRRK2在肾癌细胞中的表达及其对迁移能力的影响

目的探讨LRRK2蛋白在人肾癌细胞ACHN中的表达及其对迁移能力的影响。方法 Westernblot检测人肾小管上皮细胞(HK2)与人肾癌细胞ACHN中LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测HK2与ACHN细胞迁移能力;体外培养ACHN细胞,分别转染pcDNA-LRRK2及LRRK2-siRNA 24 h,收获细胞Western blot检测LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测ACHN细胞迁移能力的改变。结果 ACHN细胞LRRK2蛋白表达量及迁移能力显著高于HK2细胞(P<0.05);质粒转染方法能有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达上调(P<0.05),LRRK2蛋白表达上调可以使ACHN细胞迁移能力增强(P<0.05);脂质体转染方法能够有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达下调(P<0.05),LRRK2蛋白表达下调能够显著抑制ACHN细胞迁移能力(P<0.05)。结论 LRRK2蛋白表达水平可能与人肾癌细胞ACHN恶性程度及侵袭转移特性有关。     

沉默环状RNA hsa_circ_0001785表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:探究环状RNA（circRNA）hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和细胞中的表达变化及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR实验检测hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞（MDA-MB-231和SK-BP-3）中的相对表达水平；CCK-8和克隆形成实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞活性和克隆形成能力的影响；划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织，hsa_circ_0001785在MDA-MB-231和SK-BP-3细胞中的相对表达水平明显高于人乳腺上皮细胞MCF10A。在MDA-MB-231细胞沉默hsa_circ_0001785，MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力明显降低，迁移距离显著减少，侵袭能力也明显下降。而在MDA-MB-231细胞中上调表达hsa_circ_0001785，MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力显著升高，迁移距离明显升高，侵袭能力也明显升高。结论:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞（MDA-MB-231和SK-BP-3）中的表达水平明显升高；沉默hsa_circ_0001785显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力，而上调表达hsa_circ_0001785明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

β2肾上腺素能受体在乳腺癌细胞中的表达及对侵袭能力的影响

目的：探讨β2肾上腺素能受体（β2 adrenergic receptor，β2-AR）在人乳腺癌细胞株中的表达以及对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法：RT—PCR法检测10种乳腺癌细胞株及正常乳腺上皮细胞中β2-AR的表达；用脂质体转染法将卢2“尺基因转入乳腺癌细胞MDA—MB-435；用细胞侵袭实验（Transwell）检测亲本细胞及转染细胞的侵袭能力。结果：β2-AR在正常乳腺上皮细胞HBL-100及乳腺癌细胞BT-549、HCC1937、BCaP-37中表达；在乳腺癌细胞MDA—MB-435、MDA—MB-435HM、MCF-7、T47D中基本无表达；在乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA-MB-231HM、MDA—MB-468中高表达。细胞侵袭实验证实表达B2-AR蛋白的MDA—MB-231及稳定转染卢2-AR基因的细胞克隆MDA—MB-435β2-AR可由β2-AR受体激动剂去甲肾上腺素趋化而定向迁移及侵袭。结论：β2-AR在多种乳腺癌细胞株中表达；转染β2-AR可使乳腺癌细胞的侵袭能力增强。     

CD88在胃癌组织中的表达及其对细胞侵袭能力的影响

目的观察CD88在胃癌组织中的表达水平,探索CD88的表达水平对胃癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测CD88在癌及癌旁组织中mRNA和蛋白的表达水平。使用CD88特异性小干扰RNA(siRNA)转染人胃癌细胞株SGC7901,然后采用划痕及transwell方法检测细胞侵袭能力改变。结果在胃癌组织中,CD88 mRNA和蛋白表达水平明显比癌旁组织高,沉默CD88后,SGC7901的侵袭迁移能力明显减弱。结论 CD88在胃癌中表达增加,并可增强胃癌细胞的侵袭迁移能力,可为胃癌的靶向治疗研究提供新的靶点。     

热休克蛋白90α在人类肝癌细胞外的表达及其对侵袭、迁移能力的影响

目的探讨细胞外热休克蛋白90α（HSP90α参与肝癌细胞转移的可能分子机制。方法采用免疫印迹法检测HSP90α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达。选取高转移潜能MHCC97-H细胞,应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达,体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化,明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性的改变。免疫印迹和免疫共沉淀法检测细胞外辅助分子伴侣HSP70和MMP-2的表达及其与HSP90d的相互作用。利用RNA干扰技术下调细胞HSP70表达,观察细胞外HSP90仅与MMP-2相互作用及其细胞转移潜能的变化。结果HSP90d在不同转移潜能肝癌细胞内外均表达,且与肝癌细胞转移潜能呈正相关。MHCC97-H细胞经特异性HSP90抑制剂二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素-N-氧化物（DMAG—N—oxide）作用24h后,穿过上室基底膜的细胞数较未处理组和空白对照组明显下降（P〈0．01）,分别为（28．11±3．56）、（80．12±4．16）、（82．24±4．12）个。体外侵袭实验显示,穿过Matrigel人工基底膜的细胞数低于未处理组和空白对照组,分别为（36．54±4．12）、（95．12±3．48）、（101．11±3．36）个,差异有统计学意义（P=0．017）,并伴有细胞外MMP-2活性减低。HSP70和MMP-2均可在MHCC97-H细胞外表达,且能与HSP90α相互结合。小分子干扰RNA（siRNA）能有效抑制细胞HSP70表达,MHCC97-H细胞外HSP90d和MMP-2相互作用减弱,MMP-2活性下降,细胞侵袭、迁移能力受抑制。同时联合应用MMP-2抑制剂,具有协同抑制效应。结论细胞外HSP90饯可能通过与HSP70形成伴侣复合体介导MMP-2成熟活化,增强肝癌细胞侵袭、迁移运动,提示其可能是潜在的对肝癌转移实施防治的靶点。     

Cx43对乳腺癌细胞侵袭和迁移及细胞间隙通讯的影响

目的:探讨Cx43对乳腺癌侵袭、迁移以及细胞间隙通讯功能的影响。方法:用脂质体转染法将Cx43质粒、Cx43 siRNA及阴性对照转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。细胞黏附实验、Transwell试验检测细胞黏附、侵袭和迁移能力。分子生物学方法检测MMP-2、MMP-9、BRMS-1的表达。荧光染料传输实验检测不同Cx43表达的细胞间隙通讯的功能。结果:细胞黏附实验结果表明相较于野生型细胞,Cx43 siRNA组黏附能力（0.43±0.07）降低（t=20.801,P=0.002）,Cx43质粒组黏附能力（1.63±0.26）增高（t=5.917,P=0.027）。Transwell实验表明相较野生组,Cx43质粒组侵出小室的细胞数增加（侵袭:1.25±0.04,t=16.339,P=0.004;迁移:1.33±0.02,t=22.770,P=0.002）,而Cx43 siRNA组侵出小室的细胞数减少（迁移:0.84±0.04,t=11.139,P=0.008;侵袭:0.79±0.04,t=5.743,P=0.029）。分子生物学检测发现Cx43质粒组MMP-2、MMP-9表达增高,BRMS-1表达降低,而Cx43 siRNA组MMP-2、MMP-9表达降低,BRMS-1表达增高。染料传输实验证实相较野生组传输能力,Cx43质粒组传输作用增强;Cx43 siRNA组细胞间的传输作用减弱。结论:Cx43对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力存在正调控。这一调控能力可能通过GJIC实现。     

TPX2 shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的:研究Xklp2靶蛋白（TPX2）shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法:乳腺癌细胞MCF-7感染靶向TPX2基因shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒,设置为TPX2 shRNA组、shRNA-NC组,把不做慢病毒感染的细胞设为对照组（Control组）。Real time PCR和Western blot测定沉默效果,MTT测定细胞增殖活性,克隆形成实验测定细胞克隆形成能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot测定细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平。结果:TPX2 shRNA组TPX2 mRNA和蛋白水平均低于shRNA-NC组和Control组（P<0.05）。TPX2 shRNA组细胞增殖活性和细胞克隆形成能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,与shRNA-NC组和Control组比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:下调TPX2明显抑制乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移能力,并诱导乳腺癌细胞凋亡。     

干扰LOX表达对MDA-MB-231细胞侵袭迁移影响及其机制的探讨

目的:研究干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭迁移能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测LOX mRNA和侵袭转移相关因子MMP-2、MMP-9和HIF-1α的mRNA表达,蛋白质印迹法检测LOX蛋白表达,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁移能力。结果:转染LOX-RNAi-LV后,乳腺癌MDA-MB-231细胞LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,与空白组相比,抑制率分别为89.2%和82.97%。MMP-2(F=225.271,P=0.0000)、MMP-9(F=35.373,P=0.000 01)和低氧诱导因子HIF-1α(F=341.081,P=0.0000)的mRNA表达均明显降低。细胞侵袭迁移实验显示,干扰组穿过Transwell小室滤过膜的细胞数明显少于对照组(侵袭实验F=269.557,P=0.000 5;迁移实验F=164.321,P=0.000 3)。结论:转染LOX-RNAi-LV能有效地干扰LOX在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9和HIF-1α表达有关。