Ang-（1—7）对AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞MMP-9表达的影响

目的 探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)人单核/巨噬细胞(THP-1) 基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其机制.方法 佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后分为8组:对照组、Ang-(1-7)组、AngⅡ组、Ang-(1-7)+AngⅡ组、A-799+Ang-(1-7)+AngⅡ组,其中Ang-(1-7) +AngⅡ组根据Ang-(1-7)的浓度又分为10-8mol/L Ang-(1-7)+AngⅡ组、10-7 mol/L Ang-(1-7)+AngⅡ组、10-6 mol/L Ang-(1-7)+AngⅡ组、10-5 mol/L Ang-(1-7)+ AngⅡ组.用半定量RT-PCR检测细胞MMP-9 mRNA表达的情况.结果 AngⅡ干预后较对照组MMP-9mRNA显著增加(P<0.05);而Ang-(1-7)呈浓度依赖性减弱AngⅡ诱导的MMP-9 mRNA表达(P<0.05);加入A-799后抑制作用明显减低(P<0.05).结论 Ang-(1-7)浓度依赖性地抑制AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞MMP-9 mRNA表达,可能通过其特异性受体Mas来发挥作用.     

血管紧张素(1-7)与血管紧张素Ⅱ对THP-1巨噬细胞高密度脂蛋白受体表达的影响

目的观察血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]及AngⅡ对THP-1巨噬细胞高密度脂蛋白受体I(SR-BI)表达的影响。方法将THP-1巨噬细胞根据AngⅡ和Ang(1-7)对SR-B1表达的影响分别分为:空白对照组及不同浓度AngⅡ组(10～10~4 nmol/L组);空白对照组及不同浓度Ang(1-7)组(10～10~4 nmol/L组);空白对照组、AngⅡ10~2nmol/L组、AngⅡ10~2 nmol/L+Ang(1-7)组(10~2～10~4 nmol/L组)、AngⅡ+Ang(1-7)+A-779组。运用RT-PCR和Western blot法检测各组SR-BI mRNA及SR-BI蛋白表达的变化。结果与空白对照组比较,AngⅡ10～10~4nmol/L组SR-BI mRNA及蛋白表达明显下调,呈浓度依赖性(P<0.05);而Ang(1-7)10～10~4 nmol/L组SR-BImRNA及蛋白表达明显上调,呈浓度依赖性(P<0.05);与空白对照组和AngⅡ组比较,AngⅡ10~2 nmol/L+Ang(1-7)组(10~2～10~4 nmol/L组)SR-BI表达明显上调,呈浓度依赖性(P<0.05)。与空白对照组比较,AngⅡ+Ang(1-7)10~2 nmol/L+A-779组SR-BI mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 Ang(1-7)通过其特异性MAS受体浓度依赖性地拮抗AngⅡ抑制SR-BI的表达,促进胆固醇外流,提高了胆固醇逆转运的效率。     

正五聚蛋白3对血管紧张素Ⅱ刺激后血管内皮细胞凋亡及血管活性物质分泌的影响

目的探讨正五聚蛋白(PTX)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激后的血管内皮细胞(HUVECs)凋亡及血管活性物质分泌的影响。方法以10~(-7) mol/L AngⅡ刺激体外培养的HUVECs 0、12、24和48 h后,Western印迹检测HUVECs中PTX3蛋白的表达。利用Lipofectamine2000将PTX3 siRNA转染至HUVECs,Western印迹检测其转染效果。将HUVECs随机分为空白组(未做任何处理)、AngⅡ组(10~(-7)mol/L AngⅡ刺激)、AngⅡ+siNC组(转染阴性对照序列后,给予10~(-7) mol/L AngⅡ刺激)和AngⅡ+siPTX3组(转染PTX3 siRNA后,给予10~(-7)mol/L AngⅡ刺激),噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中血管活性物质内皮素(ET)-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达。结果随着AngⅡ刺激时间的延长,PTX3蛋白表达水平显著升高。转染PTX3 siRNA后成功下调了AngⅡ引起的PTX3表达。AngⅡ刺激可引起HUVECs增殖减弱,凋亡增强,ET-1和iNOS mRNA表达升高;下调PTX3表达能够减弱AngⅡ引起的HUVECs损伤,促进HUVECs增殖,抑制凋亡,并下调ET-1和iNOS mRNA表达。结论 PTX3在AngⅡ刺激后HUVECs中表达升高,下调其表达可抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡及血管活性物质的分泌。     

搜风祛痰法中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核转录因子(NF-κB)mRNA及内皮素-1(ET-1)mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA,随机分为5组:正常对照组,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组,低浓度中药血清+AngⅡ组,中浓度中药血清+AngⅡ组,高浓度中药血清+AngⅡ组。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少NF-κB mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

依达拉奉对Aβ25-35诱导分化PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响.方法 实验对象分为3组:MCI-186保护组(MCI-186 20 μmol/L,Aβ25-35 30 μmol/L)、Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30 μmol/L)和正常对照组.采用MTT法测定细胞生存率;RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA表达变化,Western印迹法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.结果 Aβ25-35能增加NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,促进细胞凋亡;MCI-186能抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞凋亡.结论 MCI-186具有神经细胞保护作用,可能的机制与其抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白表达有关.     

葛根素对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖及蛋白激酶-α和核转录因子-κB表达的影响

目的:观察葛根素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及对蛋白激酶-α(PKC-α)和核转录因子(NF)-κB表达的影响,探讨其可能存在的抑制VSMC增殖的分子机制.方法:体外培养Wistar大鼠的VSMC,给予单纯1.5×10-3mol/L葛根素处理2 h(P组)、单纯10-8mol/L AngⅡ处理24 h(A组)和1.5×10-3mol/L葛根素预处理2 h后再加10-8mol/L AngⅡ处理24 h(P A组)刺激后,四氮唑盐法检测增殖情况,采用Western blot的方法检测PKC-α和NF-κB的表达.结果:对照组、P组、A组、P A组VSMC增殖的A值分别为0.178±0.017、0.198±0.028、0.373±0.017和0.286±0.024.与对照组比较,A组和P A组差异有统计学意义(均P＜0.05);A组和P A组VSMC中PKC-α、NF-κB的表达与对照组比较,均显著增高(均P＜0.05);P A组较A组均有明显下降(均P＜0.05).结论:一定浓度的葛根素可通过下调PKC-α和NF-κB的表达来抑制AngⅡ引起的VSMC的增殖.     

氨氯地平经核因子κB下调氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源生长因子B的表达

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)中血小板源生长因子B(PDGF-B)和核因子κB (NF-κB)表达的影响,通过氨氯地平对ox-LDL/NF-κB/PDGF-B的影响,进一步探讨氨氯地平相关的作用机制.方法 不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)预先处理细胞0.5h后加入50mg/L ox-LDL共同孵育24 h,RT-PCR和Western Blot检测细胞内PDGF-B的表达及NF-κB的蛋白表达；进一步通过NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的加入,RT-PCR和Western blot观察其对PDGF-B及NF-κB表达的影响.结果 随着氨氯地平处理浓度的增加,HUVEC-12中PDGF-B的mRNA和蛋白表达,以及NF-κB的蛋白表达均明显下调,NF-κB抑制剂PDTC既可降低NF-κB的蛋白表达,也可下调PDGF-B的表达,作用与10.0 μmol/L氨氯地平组的结果相近.结论 氨氯地平可通过NF-κB下调ox-LDL诱导的HUVEC-12中PDGF-B的表达.     

核因子-κB对血管紧张素Ⅱ诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响及在胆固醇流出中的作用。方法:THP-1源性泡沫细胞分别给予10-5mol/LAngⅡ(AngⅡ组)、10μmol/LNF-κB特异性抑制剂TPCK预孵(TPCK组)。采用夹心酶联免疫分析法检测泡沫细胞内NF-κB的活化程度。通过透射电镜和荧光分光光度计、酶化学法,检测泡沫细胞内胆固醇含量的变化。利用闪烁计数法测量泡沫细胞内胆固醇流出率。用逆转录-聚合酶链反应法和免疫印迹法半定量分析泡沫细胞ABCA1的表达。结果:TPCK组NF-κB活化核易位则无明显高峰,维持在较低的水平。TPCK组泡沫细胞内胆固醇含量较AngⅡ组降低24.1%(P<0.05),胆固醇流出率较AngⅡ组显著升高41.1%(P<0.05),ABCA1mR-NA和蛋白表达较AngⅡ组升高30%和19%(P<0.05)。结论:AngⅡ可经NF-κB介导下调THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达,致泡沫细胞内胆固醇流出减少,增加泡沫细胞内胆固醇含量,加速动脉粥样硬化。     

肾素血管紧张素拮抗剂对血管紧张素Ⅱ诱导的基质金属蛋白酶高表达的抑制作用

目的 研究血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-9 mRNA表达的干预作用.方法 体外原代培养雄性Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分为对照组、AngⅡ组、卡托普利组、氯沙坦组和卡托普利与氯沙坦联合应用组.收集各组培养终点细胞,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测所收集标本中MMP-1和MMP-9 mRNA的表达,观察不同浓度AngⅡ和作用时间对血管平滑肌细胞MMP-1、MMP-9 mRNA表达的影响及卡托普利、氯沙坦的干预作用.结果 MMP-1 mRNA表达随AngⅡ浓度增加及作用时间延长而增加(P＜0.05),AngⅡ浓度为10-6mol/L时最为显著(P＜0.01).一定浓度的卡托普利(5×10-6mol/L)和氯沙坦(5×10-6mmol/L)可抑制AngⅡ的作用(P＜0.05,P＜0.01);AngⅡ为10-7、10-6、10-5、10-4mol/L时,MMP-9 mRNA表达量分别为0.47±0.03、0.86±0.04、0.94±0.14和1.12±0.19,与对照组0.10±0.04比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).卡托普利和氯沙坦可抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞分泌的MMP-9 mRNA的促进表达作用,以卡托普利和氯沙坦联合应用时抑制作用最强;MMP-9 mRNA的表达随AngⅡ作用时间延长而增加;MMP-9 mRNA较MMP-1表达早.结论 AngⅡ可以诱导血管平滑肌细胞分泌的MMP-1和MMP-9 mRNA高表达,且存在剂量和时间依赖性.卡托普利、氯沙坦可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞MMP-1和MMP-9 mRNA高表达;卡托普利和氯沙坦联合应用时抑制作用最强;这种抑制作用与作用时间相关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of angiotensin converting enzyme inhibitor (ACEI) captopril and angiotensin Ⅱ receptor antagonist losartan on the mRNA expression of matrix metalloproteinase (MMP)-1 and MMP-9 in vascular smooth muscle cells induced by angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ ).Methods Male Wistar rats' thoracic aortic vascular smooth muscle cells were cultured in vitro.The cultured cells were divided in to control group,Ang Ⅱ group,captopril group,losartan group,and captopril plus losartan group.Cells in all groups were collected at the culture end-point.MMP-1 and MMP-9 mRNA expressions were detected by RT-PCR method in the collected specimens,and the effects of Ang Ⅱ on MMP-1 and MMP-9 mRNA expression and the intervention effects of captopril and losartan were observed in different Ang Ⅱ concentrations and different action times to vascular smooth muscle cells.Results ( 1 ) MMP-1 mRNA expression gradually increased along with the increments of Ang Ⅱ concentration and the action time (P＜0.05),and the most significant concentration was 10-6 mol/L (P＜0.01).(2)Captopril (5 × 10-6 mol/L) and losartan (5 × 10-6mol/L) inhibited the action of AngⅡ (P＜0.05,P＜0.01).MMP-9 mRNA expression was 0.47±0.03 ,0.86 ± 0.04,0.94±0.14 and 1.12±0.19 vs.0.10±0.04 (P＜0.05,P＜0.01) respectively when Ang Ⅱ concentration was 10-7 ,10-6 ,10-5 and 10-4 mol/L respectively.Captopril (5 × 10-6mol/L) and losartan (5 × 10-6 mol/I) significantly inhibited the MMP-9 mRNA expression which was stimulated by Ang Ⅱ (P＜0.05,P＜0.01),especially in captopril plus losartan group.The MMP-9 mRNA expression increased with the prolonging of stimulating time of Ang Ⅱ,MMP-9 mRNA expression was earlier than that of MMP-1.Conclusions AngⅡ increases the expression of MMP-1 and MMP-9 of vascular smooth muscle cells in a dose-and time-dependence manner.Captopril and losartan inhibit the MMP-1 and MMP-9 mRNA expression of vascular smooth muscle cells induced by Ang Ⅱ ,and the inhibition is the strongest when losartan was combined with captopril.The inhibitive effects is positively correlated to action time.     

血管紧张素1-7对雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞Toll样受体4/核因子-κB通路的影响

目的探讨血管紧张素1-7[Ang(1-7)]对雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞AR42J中Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB通路的影响。方法 AR42J细胞随机分为4组:对照组、模型组(10 nmol/L雨蛙素刺激)、Ang(1-7)组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L Ang(1-7)+10 nmol/L雨蛙素)及Ang(1-7)受体抑制剂A779组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L A779+10 nmol/L雨蛙素)。对照组为正常生长的AR42J细胞,模型组用10 nmol/L的雨蛙素刺激AR42J分别于15 min、30 min、2 h、6 h、12 h及24 h收集细胞,Ang(1-7)组为不同浓度Ang(1-7)作用30 min后再用雨蛙素刺激12 h收集细胞,A779组为不同浓度A779作用30 min后再用雨蛙素刺激12 h收集细胞。免疫荧光技术检测TLR4及NF-κB在AR42J中的表达部位,Western Blot技术检测各组细胞中TLR4及NF-κB的蛋白表达水平。计量资料组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 AR42J细胞中可见TLR4及NF-κB均于细胞胞浆中表达。与对照组相比,模型组TLR4随雨蛙素造模时间呈先增高后减少的动态变化:在造模后30 min、2 h及6 h显著升高,12 h显示降低,差异均有统计学意义(P值均0.05);NF-κB随雨蛙素造模时间呈现逐渐升高的动态变化:在造模后30 min、2 h、6 h、12 h及24 h显著升高,差异均有统计学意义(P值均0.05)。Ang(1-7)浓度为10-5mol/L时TLR4及NF-κB蛋白表达下降,与模型组比较差异均有统计学意义(0.570±0.046 vs 0.893±0.057,0.520±0.071 vs 0.750±0.057,P值均0.05)。A779浓度为10-5mol/L时TLR4及NF-κB蛋白表达升高,与模型组比较差异均有统计学意义(0.680±0.045 vs 0.563±0.088,0.617±0.071 vs 0.453±0.054,P值均0.05)。结论雨蛙素刺激的AR42J细胞中,Ang(1-7)能够下调TLR4,抑制NF-κB激活发挥作用。     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ抑制klotho基因表达的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)调控klotho基因表达的机制,探讨缬沙坦(valsartan)对其调控作用的影响。方法:将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)与干预药物共培养。(1)按AngⅡ浓度梯度0(对照组)、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L和时间梯度0(对照组)、3、6、12和24h分组培养,用RT-PCR检测klotho mRNA的表达水平。(2)按Valsartan浓度梯度0(对照组)、10-9、10-7、10-5和10-3mol/L分组培养,RT-PCR检测klothomRNA的表达。(3)设对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组、AngⅡ(10-7mol/L) Valsartan(10-5mol/L)组和Valsartan(10-5mol/L)组,用RT-PCR和免疫组化法检测klotho mRNA和蛋白表达。结果:(1)AngⅡ对klotho mRNA表达呈量效抑制关系,但在时效关系上,klotho在3h点被AngⅡ抑制(P<0.05),6~12h klotho mRNA表达量逐渐增加,而24h后klotho mRNA表达减少,呈明显抑制状态(P<0.05)。(2)不同浓度Valsartan对klotho mRNA的表达无显著影响,组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)AngⅡ可明显抑制klotho表达(P<0.05),给予Valsartan阻断AngⅡ作用后,klotho表达增高(P<0.05),而Valsartan本身对klotho表达无影响(P>0.05)。结论:AngⅡ对klotho基因的抑制作用呈浓度依赖性,Valsartan可拮抗AngⅡ对klotho基因的抑制作用,血管紧张素Ⅱ1型受体是AngⅡ调控klotho基因表达的关键环节。     

血管紧张素Ⅱ对培养血管内皮细胞核因子-κB激活及厄贝沙坦干预研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)核因子-κB(NF-κB)激活与其对肿瘤坏死因子-α(TNFα)、白介素-6(IL-6)表达的影响及血管紧张素1型受体(AT1R)拮抗剂厄贝沙坦(irbesartan，Irb)干预后的变化，以探讨AngⅡ／NF-κB在动脉粥样硬化(AS)致病机制中的作用和Irb可能的抗AS效应。方法体外培养HLIVEC，测定AngⅡ刺激下NF-κB亚单位p65的核易位阳性率、TNFα、IL-6的时间与浓度反应曲线；然后将分盘于24孔板的细胞随机分为5组(n=6)：正常培养对照组、AngⅡ刺激组，AngⅡ和3种不同浓度的Irb共孵育组；采用细胞ELISA、免疫细胞化学分析分别测定TNFα、IL-6的含量和NF-κBp65的核易位阳性率。结果AngⅡ(1nmol／L-5μmol／L)刺激HUVEC表达TNFα、IL-6呈时间与浓度依赖性，其表达高峰分别为12～24h、6～12h，NF-κBp65核易位阳性率亦呈时间浓度依赖性，高峰在1～4h。厄贝沙坦(0．01μmol／L、0．1μmol／L、1μmol／L)均能显降低TNFα和IL-6表达与NF-κBp65核易位阳性率。结论AngⅡ以浓度和时间依赖方式刺激HUVEC NF-κB激活与TNFα、IL-6表达，厄贝沙坦抑制HUVEC NF-κB激活与TNFκ、IL-6表达，提示AngⅡ／NF-κB信号途径在促进AS发病机制中起重要作用，拮抗AT1R或抑制NF-κB有可能减轻或抑制AS进展。     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景 分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道.目的 探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制.方法 将HUVEC随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α PDTC干预组(PDTC系核因子κB的特异性活性抑制剂),TNF-α NS398干预组(NS398是COX-2的特异性活性抑制剂).TNF-α 阿司匹林0 02 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林0 2 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林1 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林5 mol/L干预组,共8组,每组3例.分别用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平和蛋白表达.结果 1)4 μg/L TNF-α使HUVEC的分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达明显增加(P<0 01).2)阿司匹林浓度依赖性抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(P<0 01);阿司匹林浓度依赖性地抑制HUVEC的NF-κB p65 mRNA水平和蛋白表达(P<0 01).3)PDTC抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(均P<0 01).结论 阿司匹林通过NF-κB p65途径抑制TNF-α诱导的HUVEC 分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达,并可能借此发挥抗动脉粥样硬化作用.     

血管紧张素Ⅱ与分泌型卷曲相关蛋白5在心肌细胞肥大中相关性研究

目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白5(s FRP5)在心肌细胞肥大中的表达情况及其发挥的作用。方法:体外培养SD乳鼠心肌细胞,应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大。替米沙坦、PD123319分别阻滞血管紧张素1型受体(AT1R)、血管紧张素2型受体(AT2R)的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测sFRP5、脑利钠肽(BNP)及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的表达。结果:s FRP5能够在心肌细胞中表达。sFRP5 mRNA及蛋白水平、BNP蛋白水平的表达随AngⅡ干预时间的延长而增加,48 h达到最高值(P0.05)。与AngⅡ(10~(-6) mol/L)组相比,AngⅡ+替米沙坦(10μmol/L)组sFRP5 mRNA和蛋白水平显著降低(P0.05),AngⅡ+PD123319(10μmol/L)组sFRP5 mRNA和蛋白水平差异无统计学意义(P0.05);与AngⅡ(10~(-6) mo1/L)+sFRP5(0 ng/ml)组比较,AngⅡ(10~(-6) mo1/L)+sFRP5(10 ng/ml)组及AngⅡ(10~(-6) mo1/L)+sFRP5(100 ng/ml)组BNP蛋白及TNF-a的蛋白表达水平明显下降(P0.05)。结论:在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大过程中,主要通过血管紧张素Ⅱ型受体上调sFRP5的表达,且sFRP5在抑制心肌细胞肥大中发挥作用。     

阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的人血管内皮细胞炎性因子的影响

目的观察阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)单核细胞趋化因子(MCP-1)和NF-κB抑制因子IκB-α蛋白表达的影响。方法无菌取新生儿脐带,体外培养HUVECs,取3～5代细胞加入AngⅡ10~(-6)mol/L为实验组,不加培养液为对照组,分别培养2、4、6、10、12 h。另取HUVECs,分为培养组(仅加培养液)、AngⅡ组(加AngⅡ)、阻断剂组(加AngⅡ和NF-κB抑制剂)、药物组(加AngⅡ和阿托伐他汀),每组6例,培养12 h,采用硝酸还原酶法测定NO含量,蛋白印迹法检测MCP-1和IκB-α蛋白表达。结果实验组各时间点NO含量均低于对照组(P<0.01).而MCP-1蛋白表达则显著高于对照组(P<0.01),且呈时间依赖性。阻断剂组和药物组NO含量较AngⅡ组均明显升高(P<0.01),但仍低于培养组(P<0.01);MCP-1蛋白表达较AngⅡ组均减少,但高于培养组(P<0.01)。与AngⅡ组比较,阻断剂组和药物组IκB-α蛋白表达显著升高(P<0.01),但仍低于培养组。结论阿托伐他汀对AngⅡ诱导的内皮细胞损伤具有保护作用。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶表达的影响,初步探讨在高血压中,AngⅡ导致纤维化病变形成的作用机制。方法选择体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度AngⅡ作用24 h后,采用实时定量PCR和Western blot法,检测各组细胞弗林蛋白酶mRNA及蛋白的表达量;用荧光分析法检测各组弗林蛋白酶的活性。本实验共分为5组;对照组、AngⅡ10~(-7)mol/L组、AngⅡ10~(-6)mol/L组、AngⅡ10~(-5)mol/L组、AngⅡ10~(-4)mol/L组。结果与对照组比较,不同浓度AngⅡ组弗林蛋白酶mRNA表达量及活性均明显升高,AngⅡ10~(-5)mol/L组和AngⅡ10~(-4)mol/L组升高更明显,AngⅡ10~(-4)mol/L组达到最大值(P<0.05,P<0.01)。结论 AngⅡ能够促进大鼠VSMCs中弗林蛋白酶的表达,AngⅡ可能通过促进弗林蛋白酶的表达,使活性转化生长因子β产生增加从而促进纤维化病变的形成。     

N-乙酰半胱氨酸对血管紧张素Ⅱ致成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白表达的作用研究

目的:探讨不同浓度N-乙酰半胱氨酸(NAC)对血管紧张素Ⅱ致成纤维细胞(CFs)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法:分离培养1~3日龄SD大鼠乳鼠的CFs,分组加入不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及NAC进行干预。1组加入普通培养基(含10%FBS的DMEM培养液);2组在普通培养基中加入终浓度为2.5×10-7μmol/L的AngⅡ;3组在普通培养基中加入终浓度为5.0×10-7μmol/L的AngⅡ;4组在普通培养基中加入终浓度为5.0×10-7μmol/L的AngⅡ和5.0μmol/L的NAC;5组在普通培养基中加入终浓度为5.0×10-7μmol/L的AngⅡ和10.0μmol/L的NAC。采用免疫荧光法检测各组FN的蛋白表达水平;CCK8法检测各组CFs的增殖活性,RT-PCR检测各组FN的mRNA表达水平。结果:与1组相比,2组CFs增殖活性、FN mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P均0.01)。与1组及2组相比,3组CFs增殖活性、FN mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P均0.01)。在培养基中加入NAC进行干预,4组和5组与3组相比,CFs增殖活性、FN mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P均0.01);5组较4组CFs增殖活性、FN mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P均0.01)。结论 :NAC在抑制CFs增殖及减轻FN在心肌间质沉积的过程中发挥重要作用。     

四氢吡咯二硫代氨基甲酯对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注后趋化因子CXCL16表达的影响

目的:通过四氢吡咯二硫代氨基甲酯(PDTC)研究核因子-κB(NF-κB)对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注后趋化因子CXCL16表达的影响。方法:分为5组对人脐静脉内皮细胞进行培养,即对照组(正常培养基培养)、缺血再灌注组(模拟缺血培养液培养30min后换正常培养液再培养4h)、缺血再灌注+0.1mmol/L PDTC组、缺血再灌注+0.25mmol/L PDTC组和缺血再灌注+0.5mmol/L PDTC组。后3组均于模拟缺血再灌注培养前1h在培养液中添加相应浓度PDTC。观察各组NF-κB p65及CXCL16mRNA表达水平,通过ELISA检测CXCL16蛋白表达水平以及细胞存活情况。结果:缺血再灌注组显著刺激CXCL16的mRNA和蛋白表达水平(均P0.05)。0.1mmol/L、0.25mmol/L和0.5mmol/L PDTC均显著降低NF-κB mRNA和CXCL16mRNA(均P0.05)。0.5mmol/L PDTC显著降低上清培养液CXCL16蛋白表达水平(P0.05)。0.1mmol/L、0.25mmol/L和0.5mmol/L PDTC均促进细胞存活(均P0.05)。结论:PDTC抑制模拟缺血再灌注所诱导的CXCL16表达,有利于细胞生存。     

溶血磷脂酸上调THP-1细胞基质金属蛋白酶-9的表达及活性

目的 探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在溶血磷脂酶(LPA)致动脉粥样硬化中的作用及机制.方法 以不同浓度LPA(0～10 μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4 h,RT-PCR法测定MMP-9 mRNA表达,酶谱法检测MMP-9活性,Western印迹法检测核蛋白NF-κB p65表达变化.结果 随着LPA剂量的增加,MMP-9表达及活性,核蛋白NF-κB p65表达逐渐增强,在LPA 1 μmol/L时达到最高点,然后逐渐减弱,LPA以剂量依赖的方式激活NF-κB,在转录水平促进THP-1细胞MMP-9 mRNA表达,增强MMP-9活性.结论 LPA可能通过激活NF-κB,在转录水平促进THP-1细胞MMP-9 mRNA表达,并增强其活性,促进粥样硬化发生和发展.     

核因子-κB在重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病机制中的作用.方法66只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、SAP组、PDTC(二硫代氨基甲酸吡咯烷)预处理组三组.SAP模型采用5%的牛磺胆酸钠1 ml/kg胰胆管内逆行注射方法建立.PDTC预处理组在建立SAP模型前1 h腹腔内注射PDTC100ml/kg.后两组分别在3、6、12 h三个时相点将动物处死后(各10只),留取肺组织.应用SP免疫组化方法检测SAP肺组织NF-κB表达情况,运用RT-PCR的方法检测肺组织TNFα、IL-6、ICAM-1 mRNA的表达,并测定肺组织湿/干比值作为肺损伤的指标.结果SAP组肺组织湿/干比值除3 h与正常组相比无差异外,其余各组与正常对照组之间有显著性差异(P＜0.05),肺组织内可见NF-κB活化的中性粒细胞浸润,且肺组织TNFα、IL-6、ICAM-1mRNA表达增加.PDTC预处理组肺组织湿/干比值明显降低,NF-κB活化的中性粒细胞明显减少,TNFa、IL-6、ICAM-1 mRNA表达水平显著降低.结论SAP时存在肺损伤,肺组织NF-κB活化并通过促进TNFa、IL-6、ICAM-1 mRNA的表达而参与肺损伤.