冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:用不同浓度的积雪草酸处理人肝癌SMMC-7721细胞;MTT法检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测积雪草酸对肝癌细胞迁移的影响;Western blot法检测积雪草酸对凋亡相关基因Bcl-2和Bax及上皮间质转化标志基因E-cadherin表达的影响。结果:与对照组比较,25、50、100μmol/L的积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用,差异均有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,50μmol/L的积雪草酸处理后,肝癌细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室法检测结果发现,TGF-β能显著促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。1、10μmol/L的积雪草酸处理能够显著抑制TGF-β诱导的肝癌细胞迁移。积雪草酸处理后,人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白水平显著上调。TGF-β处理24 h后,SMMC-7721细胞E-cadherin表达水平显著降低,而不同浓度的积雪草酸均能抑制TGF-β诱导的E-cadherin表达水平下调。结论:积雪草酸能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

大黄素对人肝癌HepG2细胞迁移侵袭能力及E-钙黏蛋白、Slug蛋白表达的影响

目的观察大黄素对人肝癌Hep G2细胞迁移侵袭能力及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Slug蛋白表达的影响,探讨其相关作用机制。方法体外培养Hep G2细胞,大黄素低、高剂量组分别加入10、20μmol/L大黄素,阴性对照组加入等体积RPMI-1640培养液,阳性对照组加入10μmol/L 5-氟尿嘧啶。分别采用细胞-基质黏附实验、划痕修复实验、Transwell小室体外侵袭实验观察Hep G2细胞黏附率、迁移、侵袭能力;Western blot检测E-cadherin和Slug蛋白表达。结果与阴性对照组比较,大黄素低、高剂量组显著抑制Hep G2细胞黏附率、迁移、侵袭能力,E-cadherin蛋白表达水平显著升高,Slug蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01),并呈浓度依赖性。结论大黄素能明显抑制Hep G2细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与增强E-cadherin及抑制Slug蛋白表达有关。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对人肝癌细胞HepG_2缝隙连接功能的影响

目的:观察冬凌草甲素对人肝癌细胞Hep G2缝隙连接功能(GJIC)的影响。方法:采用划痕标记染料示踪技术(Scrape-loading Dye Transfer Assay,SL/DT),观察不同浓度的冬凌草甲素处理人肝癌细胞Hep G2之后细胞间隙连接通讯功能。结果:空白对照组细胞的荧光染料主要出现在划痕旁1~2列细胞中(±),且划痕两边被染色的细胞较少;细胞经冬凌草甲素处理48h后,荧光染料不仅出现在划痕的附近细胞内,而且在划痕以外的3~4列细胞内也出现了荧光(++++),划痕两边被染色的细胞明显增多,出现了明显的细胞间染料传输现象,呈浓度依赖性。结论:冬凌草甲素能增强Hep G2细胞间缝隙连接功能,可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

重楼复方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究重楼复方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制作用,及其对细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:采用MTT法观察重楼复方对SMMC-7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR法检测凋亡相关基因生存素(Survivin)mRNA的表达。结果:重楼复方以剂量依赖方式抑制SMMC-7721的细胞增殖,其半数抑制浓度(48h)为(0.26±0.04)mg/mL。重楼复方0.2、0.4、0.8mg/mL作用于SMMC-7721细胞48h后,其早期凋亡率分别为4.8%、8.3%、21.6%,而对照组为1.8%,其诱导凋亡作用呈现剂量依赖性。重楼复方0.8mg/mL作用于SMMC-7721细胞24h后,细胞积聚在G0/G1期,同时S期细胞比例减少。重楼复方0.8mg/mL作用SMMC-7721细胞48h后,Survivin mRNA表达下调(P<0.05)。结论:重楼复方具有抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及诱导细胞凋亡作用,并能阻滞细胞于G0/G1期,下调Survivin mRNA的表达可能为其诱导细胞凋亡的主要机制之一。     

芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.方法 制备芪参清肝汤,体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为药物干预组及对照组,药物干预组分别加入0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/ml芪参清肝汤处理12h、24 h、48 h,对照组不加药.采用四甲基偶氮唑兰（MTT）比色法检测2组细胞抑制率,采用流式细胞术检测2组细胞凋亡率.结果 0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/m1芪参清肝汤对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用12h的OD值分别为0.89±0.05、0.85±0.05、0.80±0.06、0.78±0.02、0.69±0.07; 24 h的OD值分别为0.77±0.07、0.74±0.07、0.59±0.07、0.50±0.09、0.39±0.08; 48 h的OD值分别为0.78±0.05、0.61±0.08、0.44±0.10、0.39±0.08、0.34±0.07,并呈剂量、时间依赖性,与对照组（1.14±0.06、1.24±0.03、1.31±0.06）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）; 0.27、0.54 g/ml芪参清肝汤能明显诱导SMMC-7721细胞凋亡（11.19±2.23、15.69±2.51）,与对照组（1.41±0.22）比较有统计学意义（P＜0.05）,1.08 g/ml芪参清肝汤诱导肝癌细胞凋亡（41.83±7.11）,与对照组（1.41±0.22）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 芪参清肝汤能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,可能通过诱导肝癌细胞凋亡发挥其作用.     

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制

目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100μmol·L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

白术多糖调控钙离子以促进细胞迁移及E-钙黏蛋白表达的研究

目的观察白术多糖对大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)钙离子水平、细胞迁移和E-钙黏蛋白表达的影响,探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:流式细胞仪检测白术多糖对细胞游离钙离子水平([Ca~(2+)]cyt)的影响;划痕法复制细胞迁移模型,观察白术多糖对细胞迁移的影响;Western blot法和免疫荧光法检测白术多糖对细胞E-钙黏蛋白表达的影响。结果白术多糖(25,50,100 mg·L~(-1))可增加细胞[Ca~(2+)]cyt、促进细胞迁移、提高E-钙黏蛋白表达,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);可逆转多胺合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的[Ca~(2+)]cyt降低、细胞迁移抑制和E-钙黏蛋白表达减少,与DFMO组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论白术多糖可通过提高细胞钙离子水平以促进细胞迁移和E-钙黏蛋白表达,为探讨益气健脾中药白术修复胃肠黏膜损伤的作用机制提供参考。     

辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞侵袭能力及E-钙黏蛋白、Snail蛋白表达的影响

目的观察辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞侵袭能力及E-钙黏蛋白(E-cadherin)和Snail蛋白表达的影响,探讨其抗非小细胞肺癌的可能机制。方法体外培养NCI-H460细胞,以不同终浓度辣椒素进行处理,未加辣椒素为对照组。采用Hoechst33342核染色分析、Transwell小室细胞侵袭实验及Western blot检测,观察辣椒素对NCI-H460细胞凋亡、侵袭能力及E-cadherin、Snail蛋白表达变化的影响。结果与对照组比较,Hoechst33342核染色分析表明,辣椒素各浓度组可明显诱导NCI-H460细胞凋亡(P0.05);Transwell体外侵袭实验结果显示,辣椒素可显著抑制侵袭穿膜细胞数(P0.05);Western blot检测结果表明,辣椒素各浓度组E-cadherin表达水平明显升高、Snail表达水平明显降低(P0.05)。结论辣椒素能明显诱导NCI-H460细胞凋亡;降低Snail表达、刺激E-cadherin的表达从而抑制NCI-H460细胞侵袭能力,可能是其抗非小细胞肺癌的机制之一。     

复方苦参注射液对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与细胞周期的影响

目的：观察复方苦参注射液对人肝癌SMMC．7721细胞增殖与细胞周期的影响。方法：采用MTF法观察复方苦参注射液对SMMC．7721细胞增殖的影响;应用流式细胞术分析对SMMC-7721细胞周期的影响。结果：复方苦参注射液对SMMC-7721细胞有明显的抑制增殖的作用（P〈0．05）,该作用具有时间、剂量依赖性;流式细胞术分析显示,复方苦参注射液可使G0／G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,即细胞被阻滞于G0／G1期。结论：复方苦参注射液能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并且将细胞阻滞于G0／G1期。     

蜂王浆冻干粉对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响

目的观察蜂王浆冻干粉对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721,MTT比色法观察蜂王浆冻干粉水溶液及蜂王浆冻干粉含药血清对其增殖的影响。结果蜂王浆冻干粉水溶液能促进人肝癌细胞系SMMC-7721增殖,呈剂量依赖性。而蜂王浆冻干粉含药血清则能抑制该细胞的增殖,其抑制效应亦呈剂量依赖性。结论蜂王浆冻干粉的抗癌效应可能是其代谢产物或刺激机体产生的活性物质所致。     

赤芍总苷对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响及作用机制探讨

目的:探讨赤芍总苷对肝癌细胞SMMC-7721细胞迁移能力的影响及对血管内皮生长因子(VEGF),环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,随机分组,不加药物作用的为空白组,其他各组为赤芍总苷低、中、高剂量组,将不同质量浓度(200,400,600 mg·L-1)的赤芍总苷作用于细胞24 h后,采用MTT法检测赤芍总苷对细胞抑制作用,细胞划痕实验测定迁移能力,RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果:与空白组比较,赤芍总苷能够明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈现量效关系(P<0.01),并能够抑制细胞的迁移(P<0.01),RTPCR及Western blot结果显示,赤芍总苷作用细胞24 h后,可使COX-2 mRNA和VEGF蛋白的表达明显下降(P<0.01)。结论:赤芍总苷能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、迁移,其机制可能是通过下调COX-2,VEGF的表达来实现,从而为赤芍总苷治疗肝癌的发展及其临床应用提供理论和实验依据。     

冬凌草甲素对人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的影响及机制研究

目的研究冬凌草甲素对人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的抑制作用及其作用机制。方法采用细胞培养技术体外培养A375细胞,用不同浓度冬凌草甲素处理细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖率;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blotting法检测转录因子Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。结果冬凌草甲素对A375细胞48 h半数抑制浓度(IC50)为47.94μmol/L;与对照组比较,5、10、20μmol/L冬凌草甲素可明显降低A375细胞的体外迁移、侵袭及黏附能力(P0.05),且具有量效关系。冬凌草甲素作用于细胞后,E-cadherin蛋白表达水平明显上调(P0.05),Snail、N-cadherin、vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论冬凌草甲素具有体外抑制A375细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与调控上皮-间质转化(EMT)及MMPs有关。     

健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响

目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响。方法:以TGF-β1诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0%、5%、10%、15%、20%、30%含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力。结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10%含药血清,24 h 15%、20%、30%含药血清,48 h 15%含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P0.01),其中以48 h 15%含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果最明显。健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10%、15%、20%、30%浓度的含药血清都具有显著性差异(P0.01);而与空白血清组相比,15%、20%、30%浓度的含药血清均具有显著性差异(P0.01),其中以15%浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用最明显。结论:15%健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果最好。     

健脾化瘀方抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c-fos表达的研究

目的：从基因和蛋白水平探讨健脾化瘀方抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c—fos表达的影响。方法：分别采用RT—PCR和Westemblot方法检测不同浓度健脾化瘀方处理SMMC-7721细胞前后ERK、C—fosmRNA和蛋白水平的改变。结果：健脾化瘀方能抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK、c—fosmRNA和蛋白表达。结论：健脾化瘀方的作用机制之一可能是抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c—fos的基因表达。     

苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的 观察苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT通路的影响.方法 苦参碱和/或JAK-STAT途径特异性抑制剂AG490培养肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、 stat5 mRNA表达的影响,Western blotting法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达的影响.结果 苦参碱对肝癌细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性.苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平(P<0.05、0.01),降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量(P<0.05、0.01).AG490作用于SMMC-7721细胞后,star3、 stat5 mRNA和STAT3、STAT5蛋白的表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量与对照组比较显著降低(P>0.05、0.01).与AG490组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量显著降低(P<0.05),STAT3、STAT5蛋白表达量显著降低(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).与苦参碱组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量无显著差异(P>0.05),STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).结论 苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平,因而能降低STAT3、STAT5蛋白表达水平,抑制细胞JAK-STAT信号转导通路,从而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖.     

癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响

目的观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。     

中药砒霜上调E-钙黏蛋白抑制宫颈癌Hela 细胞生长、侵袭、迁移机制研究

目的：研究中药砒霜的主要成分三氧化二砷（As2O3） 抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移的机 制,观察As2O3对宫颈癌Hela细胞组蛋白脱乙酰基酶1（HDAC1）、E-钙黏蛋白表达的影响,以及联合HDAC1 抑制剂伏立诺他（SAHA） 的协同作用。方法：以宫颈癌Hela细胞作为载体,随机分为空白对照组、As2O3组、 SAHA组、As2O3+SAHA组4组,采用CCK-8法测定不同药物浓度对Hela细胞活性的抑制情况,并筛选后续实 验药物浓度;采用Transwell法、划痕法检测各组药物对Hela细胞侵袭、迁移能力的影响;采用实时荧光定量 聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹法检测HDAC1和E-钙黏蛋白的mRNA表达情况与蛋白表达情况。结果：随着 各组药物浓度增加,Hela细胞的活性逐渐降低。As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的Hela细胞活性均低于空 白对照组（P＜0.05）。As2O3 组、SAHA 组、As2O3+SAHA 组穿越Transwell小室膜的细胞数量均少于空白对照 组（P＜0.05）;As2O3+SAHA组的细胞数量少于As2O3组、SAHA组（P＜0.05）;As2O3组的细胞数量少于SAHA 组（P＜0.05）。As2O3 组、SAHA 组、As2O3+SAHA 组的Hela 细胞迁移百分比均低于空白对照组（P＜0.05）; As2O3+SAHA组的Hela细胞迁移百分比低于As2O3组、SAHA组（P＜0.05）;As2O3组的Hela细胞迁移百分比低于 SAHA组（P＜0.05）。As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平均低于空白对照组（P＜ 0.05）;As2O3组的HDAC1 mRNA表达水平高于SAHA组（P＜0.05）;As2O3+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平 低于As2O3组、SAHA组（P＜0.05）。As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平均高于 空白对照组（P＜0.05）;As2O3+SAHA 组的E-钙黏蛋白mRNA 表达水平高于As2O3 组、SAHA 组（P＜0.05）。 As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平均低于空白对照组（P＜0.05）;As2O3+SAHA组的 HDAC1蛋白表达水平低于As2O3组、SAHA组（P＜0.05）。As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋 白表达水平均高于空白对照组（P＜0.05）;As2O3+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平高于As2O3组、SAHA 组（P＜0.05）。结论：As2O3抑制Hela细胞的最佳浓度为8 μmol/L,联合SAHA时,最佳抑制浓度为4 μmol/L。 As2O3可能通过抑制HDAC1的表达,同时促进升高E-钙黏蛋白的表达,与SAHA发挥协同作用抑制Hela细胞生 长、侵袭、迁移。