灰树花多糖联合顺铂诱导HeLa细胞凋亡

目的探讨灰树花多糖(PGF)联合顺铂(DDP)诱导He La细胞凋亡及其可能的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝比危法(MTT)检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测survivin和caspase-3 m RNA的表达。结果 MTT法显示,联合用药抑制率均高于单药组(P<0.05)。PGF0.05 mg/L与DDP 1 mg/L联合作用24 h时,Q>1.15;RT-PCR显示,联合用药组与两单药组比较survivin m RNA表达下调,caspase-3 m RNA表达上调。结论联合用药对He La细胞的抑制率较单独用药组有明显提高。联合用药24 h时点,二者有协同作用。联合用药诱导He La细胞凋亡可能与凋亡基因survivin表达下调和caspase-3基因表达上调有关。     

RNA干扰SBF2对人口腔癌细胞株SCC15增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨RNA干扰SET结合因子2(SBF2)表达对人口腔癌细胞株SCC15增殖、凋亡及侵袭的影响。方法根据SBF2的mRNA序列及siRNA设计原则,设计并合成3条靶向SBF2基因的siRNA(SBF2-siRNA1、SBF2-siRNA2、SBF2-siRNA3),以阳离子脂质体Lipofectamine 2000为载体转染取对数生长期SCC15细胞,同时设转染不针对任何基因的随机序列(siRNA-NC)。转染48 h后采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SBF2干扰效率,分别于转染24、48、72 h采用WST-1法评价讨RNA干扰SBF2对SCC15细胞增殖的影响,分别于转染24、48 h后采用Annexin VFITC/PI双标流式细胞术和Transwell小室法检测SCC15细胞的凋亡率及穿膜细胞数以评价RNA干扰SBF2对凋亡和侵袭能力的影响。结果与仅行转染试剂Lipofectamine 2000处理的对照组相比,SBF2-siRNA1、SBF2-siRNA2和SBF2-siRNA3组SCC15细胞中SBF2 mRNA水平均降低(P<0.05),且干扰率由高至低依次为SBF2-siRNA2>SBF2-siRNA3>SBF2-siRNA1,故选取干扰效率最高的SBF2-siRNA2用于后续实验。与对照组和siRNA-NC组相比,SBF2-siRNA组的增殖抑制率和凋亡率均升高,而穿膜细胞数降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);对照组和siRNA-NC组以上指标的无统计学差异(P>0.05)。结论 RNA靶向干扰SBF2表达可抑制人口腔癌细胞增殖及侵袭能力并诱导其凋亡。     

过表达miR-136调控E2F1对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用及其机制

目的探讨过表达miR-136对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用及其机制。方法利用RT-qPCR检测miR-136和E2F1在宫颈癌He La细胞中的表达,以脂质体转染miR-136 mimics至He La细胞,噻唑蓝(MTT)法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞中B细胞淋巴病/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和E2F1蛋白表达。结果与正常上皮293T细胞相比,miR-136在宫颈癌He La细胞中表达显著降低,E2F1表达显著升高(P<0. 01);转染miR-136 mimics 48 h后,与对照组相比,miR-136 control组中miR-136的相对表达量、细胞增殖率、细胞凋亡率、Bcl-2、Bax和E2F1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0. 05);而miR-136 mimics组中miR-136的相对表达量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达量显著升高,细胞增殖率、Bcl-2、和E2F1蛋白表达量显著降低(P<0. 01)。转染siRNA-E2F1 48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与上调miR-136表达结果一致。结论 miR-136在宫颈癌细胞中呈现低表达,上调其表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与E2F1有关。     

c-IAP1在食管鳞癌中的表达及其对化疗敏感性的影响

目的:探讨食管鳞癌细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)表达与化疗敏感性的相关性.方法:食管鳞癌组织芯片免疫组织化学染色,分析食管鳞癌组织及其配对癌旁食管上皮中c-IAP1的表达和定位及其与肿瘤,临床分级的关系.免疫印迹分析食管癌细胞C-IAP1和Smac表达,用RNA干扰技术敲降Smac表达,MTT法检测细胞对化疗药物敏...     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

miR-378c靶向AKT1调控骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-378c靶向AKT1对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹法检测正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中miR-378c和磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)1蛋白的表达。构建抑制miR-378c表达的HC-OA细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测p-AKT1、细胞周期素(Cyclin)D1、P21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-378c和AKT1的靶向关系。结果 miR-378c在骨关节炎软骨组织中呈高表达,而p-AKT1呈低表达。在抑制miR-378c表达的软骨细胞中,p-AKT1、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达明显上调,P21和Bax蛋白的表达明显下调,细胞的增殖活力增强,凋亡率降低。干扰AKT1的表达可逆转抑制miR-378c表达对HC-OA细胞增殖促进和凋亡抑制作用。结论 miR-378c可通过靶向下调AKT1表达抑制骨关节炎软骨细胞增殖,促进细胞凋亡。     

血管内皮生长因子-A siRNA对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的通过RNA干扰技术特异性地使人肝癌细胞株Hep G2中血管内皮生长因子(VEGF)-A表达下调,检测细胞凋亡率变化及pAkt、生成素、caspase-3表达。方法采用脂质体介导将针对靶基因VEGF-A的小片段RNA导入人Hep G2细胞内,用Western印迹和RT-PCR技术检测人Hep G2细胞内VEGF-A、p-Akt、生成素、caspase-3的表达,用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测细胞凋亡。结果细胞转染成功后,VEGF-A siRNA组VEGF-A mRNA表达量显著降低,较RNA干扰组下降80.88%(0.26±0.07 vs 1.36±0.05,P0.01),VEGF-A蛋白表达量显著降低,较RNA干扰组下降75.34%(0.18±0.02 vs 0.73±0.06,P0.01);细胞凋亡率增加,VEGF-A siRNA组较RNA干扰组增高21.96%(28.21%±1.75%vs 6.25%±0.82%,P0.01)。伴随p-Akt和生存素蛋白水平降低和caspase-3表达上调(P0.01)。结论通过RNA干扰技术特异性地使人肝癌细胞株Hep G2中VEGF-A表达下调,可以诱导Hep G2细胞发生凋亡,这可能是通过PI3K/p-Akt/生存素信号转导通路实现的。     

RNA干扰TRAF4表达下调Notch1信号通路增强肺癌替莫唑胺化疗敏感性

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF) 4表达对肺癌替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测SPC-A-1、A549、H322、H1299肺癌细胞相对于人胚肺成纤维细胞MRC5中TRAF4的表达量;TRAF4的siRNA转染和替莫唑胺处理A549细胞,细胞被分为空白对照组、阴性对照组、TRAF4-siRNA组、替莫唑胺组和TRAF4-siRNA+替莫唑胺组,细胞培养48 h,RT-PCR及Western印迹检测各组A549细胞TRAF4的表达; CCK8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力(OD值)及凋亡率; Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch神经同源蛋白(Notch) 1前体信号中Notch1和下游重要靶基因发状分裂相关增强子(Hes) 1的蛋白表达。结果 TRAF4在4个肺癌细胞中的表达水平均显著高于其在MRC5细胞中的表达(P<0. 05); TRAF4-siRNA转染A549细胞后,TRAF4的表达显著低于空白对照组(P<0. 05); TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组细胞凋亡率及Caspase-3和Bax的表达均显著高于空白对照组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于空白对照组,TRAF4-siRNA+替莫唑胺组凋亡率及Caspase-3和Bax的表达显著高于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组(P<0. 05)。结论抑制肺癌细胞TRAF4表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞活力及诱导细胞凋亡,并可增强替莫唑胺化疗敏感性。     

下调雄激素受体表达对不同类型老年宫颈癌患者癌细胞活性的影响

目的探讨下调雄激素受体(AR)表达对不同类型老年宫颈癌患者癌细胞凋亡情况的影响及其相关机制。方法以AR为靶点构建小干扰RNA(siRNA),慢病毒为载体转染人宫颈腺癌细胞系C33a、宫颈鳞癌细胞系Caski。荧光定量PCR和Western印迹分别检测AR mRNA和蛋白的表达情况,流式细胞术检测宫颈癌细胞的凋亡情况。RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中G蛋白耦联受体(Cpr)30 mRNA和蛋白表达情况。结果 AR干扰组人宫颈癌细胞株C33a、Caski AR mRNA及其蛋白的相对表达量较阴性对照组、空白对照组明显降低(P<0.05)。AR干扰组C33a、Caski凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增加(P<0.05)。AR干扰组内比较显示,C33a凋亡率明显大于Caski(P<0.05)。AR干扰组Cpr30 mRNA及其蛋白相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论经siRNA转染下调AR表达后宫颈腺癌和宫颈鳞癌细胞凋亡率均增加,以宫颈腺癌更为明显;下调AR表达可提升Cpr30表达水平,进而激活Cpr30/Tlr3信号通路,促进宫颈癌细胞凋亡。     

转录因子-21对宫颈癌细胞放疗敏感性及凋亡的影响

目的转录因子(TCF)-21对宫颈癌细胞放疗敏感性及凋亡的影响。方法 qRT-PCR和Western印迹检测宫颈癌组织及宫颈癌细胞中TCF-21 mRNA和蛋白水平,同时检测对应的癌旁组织和正常宫颈上皮细胞中TCF-21 mRNA和蛋白水平。筛选出表达水平最低的Si Ha细胞继续研究。Si Ha细胞转染pc DNA3.1空载体和TCF-21过表达载体(pc DNA3.1 TCF-21),qRT-PCR和Western印迹检测转染效果。以转染TCF-21过表达载体的Si Ha细胞为过表达组,以不处理的Si Ha细胞为对照组,经过8 Gy照射处理后为过表达+放疗组和对照+放疗组,流式细胞术检测各组凋亡情况,Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平。对照组和过表达组细胞经过0、2、4、6、8 Gy剂量照射处理后,细胞克隆实验检测细胞放疗敏感性。结果 TCF-21 mRNA和蛋白水平在宫颈癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.05)。TCF-21 mRNA和蛋白水平由大到小依次为:End1/E6E7、He La、Ca Ski、Si Ha,后续选用Si Ha细胞继续研究。TCF-21过表达载体能够成功促进Si Ha细胞中TCF-21 mRNA和蛋白表达。过表达组、过表达+放疗组、对照+放疗组细胞凋亡率、酶切Caspase-3水平均明显高于对照组,而p-Akt水平明显低于对照组(P0.05)。过表达+放疗组细胞凋亡率、酶切Caspase-3水平均明显高于对照+放疗组,而p-Akt水平明显低于对照+放疗组(P0.05)。结论 TCF-21促进宫颈癌细胞凋亡,增加宫颈癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Akt磷酸化水平有关。     

Bcl-2在RNAi-hTERT诱导HeLa细胞凋亡过程中的作用

目的探讨B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）在靶向端粒酶逆转录酶（hTERT）的RNA干扰诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法将常规培养的HeLa细胞分为6个组,A组不处理,B组转染试剂,c组转染空载体,D组转染阴性siRNA,E组转染siRNA．hTERT,F组同时转染pcDNA3．1-Bd-2和siRNA—hTERT。转染后48h,流式细胞术分析各组细胞凋亡率,Westernblot法检测各组hTERT、Bcl-2表达水平。结果与E组相比较,F组的Bcl-2的蛋白水平显著增高,细胞凋亡率显著降低（P〈0．01）。结论靶向hTERT的RNA干扰诱导HeLa细胞凋亡依赖于Bcl-2蛋白水平的下调。     

靶向抑制乳腺癌细胞GLS1基因表达对癌细胞凋亡的影响

目的探讨抑制乳腺癌细胞谷氨酰胺酶(GLS) 1基因表达对癌细胞凋亡的影响。方法参照Lipofectamine~(TM) 2000说明将合成的GLS1 siRNA及无干扰作用的siRNA转染MCF-7细胞,分别为GLS1-siRNA组和阴性对照组,并设置空白对照组,转染48 h后,Western印迹检测GLS1、凋亡相关蛋白survivin、p53及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路PI3K和磷酸化(p-AKT)的蛋白表达; 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测GLS1-siR-NA转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞仪检测GLS1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率。结果转染GLS1-siRNA的MCF-7细胞GLS1蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05);与空白对照组比较,GLS1-siRNA组细胞在转染24、48和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,survivin、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论抑制GLS1基因在乳腺癌中的表达可降低细胞活力,促进细胞凋亡及下调PI3K/AKT信号通路,其中诱导细胞凋亡的方式是下调survivin表达和上调p53表达。     

抑制干扰素诱导蛋白16表达减少人主动脉外膜成纤维细胞凋亡

目的:研究干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达抑制后对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响。方法:应用IFI16基因小干扰RNA(siRNA)转染HAAFs使IFI16基因沉默(IFI16-siRNA组),以非特异性siRNA转染作为其转染阴性对照组(Con-siRNA组),未经处理的HAAFs作为未干预阴性对照组(Neg组)。应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,实时定量逆转录-聚合酶链反应(Realtime qRT-PCR)检测细胞中IFI16 mRNA表达变化,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测IFI16、抑癌因子(p53)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21~(WAF)(p21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)及Bcl-2蛋白表达。结果:IFI16-siRNA组与Con-siRNA组、Neg组相比,细胞凋亡率[(3.33±0.41)%vs(7.42±1.51)%(、6.49±1.10)%,P0.05]与G_0/G_1期细胞比例[(56.64±4.77)%vs(69.67±3.54)%、(68.29±4.14)%,P0.05]减少;而S期细胞比例[(25.23±5.19)%vs(13.76±2.07)%、(14.04±3.00)%,P0.05]增加;伴随着IFI16mRNA表达减少(P0.05),以及IFI16-siRNA组IFI16、p53、p21、Bax蛋白表达量减少(P0.05);同时Bcl-2蛋白表达量增加(P0.05)。结论:抑制IFI16表达可减少HAAFs细胞凋亡,促进细胞周期G_1/S转换,其机制部分与抑制p53/p21信号通路及调控Bax/Bcl-2表达有关。     

黏着斑激酶在鼻咽癌细胞系6-10B中的表达及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨黏着斑激酶(FAK)在鼻咽癌细胞6-10B中的表达及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的影响。方法鼻咽癌细胞6-10B培养后利用RNA干扰(RNAi)技术下调FAK在6-10B中的表达水平,通过RT-PCR、Real-time PCR、Western印迹检测其干扰效率,通过Western印迹检测干扰后凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平,通过Hoechst染色观察细胞凋亡形态。结果干扰后FAK在鼻咽癌细胞6-10B中表达量较低、下调明显(P0.05);鼻咽癌细胞系6-10B干扰FAK后,Bcl-2和Bax的表达量发生较明显改变(P0.05);Hoechst染色结果显示干扰后细胞出现明显的凋亡形态。结论干扰FAK后促进鼻咽癌细胞凋亡,提示可以通过下调FAK表达水平促进肿瘤细胞凋亡,为鼻咽癌的基因治疗提供新的思路。     

Notch-1信号通路对胰腺癌BxPC3细胞增殖和凋亡的调控

目的探讨Notch-1信号通路对胰腺癌BxPC3细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养胰腺癌BxPC3细胞,用小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）的方法抑制Notch-1的表达,Western印迹方法检测Notch-1、Bcl-2及Bcl-xL蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡。结果抑制Notch-1表达能明显抑制胰腺癌BxPC3细胞生长（P〈0．01）,显著下调Bcl-2和Bcl-xL水平,并使BxPC3细胞凋亡显著增多（P〈0．01）。结论Notch-1信号通路促进胰腺癌BxPC3细胞增殖,抑制胰腺癌细胞凋亡。     

靶向Akt1的小分子干扰RNA对人胃癌细胞系SGC7901生长抑制的体外研究

目的研究靶向Akt1小分子RNA对SGC7901胃癌细胞的增殖和侵袭的抑制作用。方法通过构建人Akt1特异性siRNA并转染SGC7901胃癌细胞,应用Western blot和realtime PCR检测了Akt1-siRNA的敲低效果;流式细胞术及Transwell试验等方法分析对增殖、侵袭、凋亡的影响。结果Akt1-siRNA可以下调Akt1的表达,并且下调Akt1后细胞的增殖活性明显受到抑制;细胞周期在G0/G1期有明显的阻滞(χ2=11.076,P=0.026);早期凋亡的细胞明显增多(F=89.386,P=0.00);肿瘤细胞的侵袭性生长受到了抑制(F=21.351,P=0.00)。结论靶向人Akt1的siRNA可以特异性的抑制Akt1的表达,进而抑制细胞的生长,siRNA可以成为胃癌靶向治疗的一种新的策略。     

miR-188-5p靶向Nek6对宫颈癌细胞的影响及机制

目的探究微小RNA-188-5p(miR-188-5p)对宫颈癌细胞增殖、侵袭、凋亡、迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对33例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR-188-5p的表达水平进行检测。常规培养宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体分别将miR-188-5p模拟物(mimics)及阴性对照转染至HeLa细胞。采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞存活率及克隆数目。流式细胞仪分析细胞凋亡;Transwell小室法分析侵袭与迁移;利用Targetscan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-188-5p对NIMA相关激酶(Nek)6的靶向性作用;构建Nek6小干扰RNA(si-Nek6),观察抑制Nek6的表达对细胞生物学行为的影响。结果宫颈癌组织、癌旁组织中miR-188-5p的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-188-5p mimics或转染si-Nek6可降低细胞增殖、克隆形成能力,减少迁移和侵袭细胞数,并增加细胞凋亡率;miR-188-5p与Nek6基因的3′UTR结合,抑制Nek6的蛋白表达(P<0.05);Nek6过表达可逆转miR-188-5p对HeLa细胞生物学行为的调控作用。结论miR-188-5p可能靶向下调Nek6抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。     

AnnexinA2-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及机制

目的观察siRNA靶向干扰膜联蛋白(Annexin)A2对甲状腺乳头状癌(PTC)K1细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨其可能的相关机制。方法首先利用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTC、甲状腺良性肿瘤和正常组织中AnnexinA2 mRNA的表达;采用Western印迹检测细胞中AnnexinA2蛋白的表达水平。实验分为:空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-AnnexinA2组;利用脂质体lipofectamine^TM 2000瞬时转染的方法沉默PTCK1细胞中AnnexinA2的表达,采用qRT-PCR和Western印迹验证K1细胞转染的干扰效果;采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法分别检测K1细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力的变化,进一步采用qRT-PCR和Western印迹分别检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和下游因子c-myc、细胞周期蛋白(cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达变化。结果小干扰RNA转染成功沉默了K1细胞中AnnexinA2基因的表达;转染成功后,与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-AnnexinA2组细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AnnexinA2组中细胞的迁移和侵袭能力显著受到抑制(均P<0.05);沉默AnnexinA2基因后明显抑制了β-catenin、c-myc、cyclinD1、MMP-2、MMP-9的表达水平(均P<0.05)。结论AnnexinA2基因的沉默抑制K1细胞的侵袭、转移能力,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的,从而为PTC分子生物治疗提供新的靶标。     

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。     

SNHG20对CIK细胞共培养的宫颈癌细胞Hela的杀伤作用

目的 探讨SNHG20是否通过靶向微小RNA(miR)-217影响细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对宫颈癌细胞Hela的杀伤作用。方法 应用流式细胞仪分析诱导的CIK细胞表型。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CIK细胞共培养前后Hela中lncRNA小核仁RNA宿主基因(SNHG)20表达。在Hela中转染si-SNHG20或转染pcDNA-SNHG20并与CIK细胞共培养。四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测Hela细胞活性，克隆形成实验测定Hela细胞克隆形成，流式细胞仪评估Hela细胞凋亡，Western印迹检测凋亡蛋白pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3表达。双荧光素酶报告实验检测SNHG20和miR-217的靶向关系。结果 CIK细胞诱导14 d时，CD3⁺CD56⁺比例达到最高。CIK细胞与Hela细胞共培养24、48、72 h降低SNHG20表达水平，差异有统计学意义(P<0.01)。CIK细胞与Hela细胞共培养或转染si-SNHG20降低Hela细胞24、48、72 h细胞活性、克隆...