过量氟对大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的检测骨桥蛋白(OPN)mRNA和蛋白在氟处理大鼠肾组织中的表达差异和蛋白定位,并探讨OPN与氟中毒肾损害的关系。方法经饮水投氟喂养Wistar大鼠48只,用免疫组织化学法进行骨桥蛋白的组织学检测。提取各组大鼠肾组织mRNA,采用RT-PCR法检测骨桥蛋白mRNA的表达变化。结果免疫组织化学结果表明,骨桥蛋白主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞质中,常食和偏食对照组大鼠肾组织OPN蛋白只是散在表达,而常食和偏食加氟组的OPN蛋白表达较相应对照组明显增强(与常食对照组比较,q=18．4,P< 0．05;与偏食对照组比较,q=12．0,P<0．01)。2个投氟组的OPN mRNA表达水平均较相对应的对照组增加,但差异无统计学意义。结论过量氟可促进大鼠。肾组织OPN表达,且随着投氟量的增加,OPN伴随着肾损伤加重而表达增强,提示OPN与氟中毒肾损伤程度密切相关,很可能作为一种氟中毒肾损害的预测标志。     

内皮素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的观察内皮素1对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响。方法用含10％小牛血清DMEM培养基体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，随机分为对照组、不同浓度（10^-5、10^-6、10^-7和10^-8mol／L）及时间（6h、12h、24h和48h）干预组，应用逆转录聚合酶链反应及Westem blot技术结合吸光度扫描分析。观察内皮素1对血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响。结果不同浓度内皮素1均明显刺激血管平滑肌细胞骨桥蛋白mRNA和蛋白的表达，但无剂量依赖性促进作用；除6h干预组与对照组相比差异无显著性外，其他各不同时间干预组（12h、24h和48h）均明显刺激血管平滑肌细胞骨桥蛋白mRNA和蛋白的表达，且具有时间依赖性。结论内皮素1能促进血管平滑肌细胞骨桥蛋白的表达。     

Irbesartan对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白的调节

目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂Irbesartan对糖尿病(DM)大鼠肾组织骨桥蛋白(OPN)表达及炎症细胞浸润的影响.方法 建立STZ诱导的SD大鼠DM模型,将成模大鼠随机分成模型组、Irbesartan组,同时设正常对照组.各组大鼠采用相应的干预措施处理12 w.常规方法检测各组大鼠肾指数、血糖、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER);HE染色观察大鼠肾脏病理形态变化;免疫组化法检测肾小管OPN、CD68表达;Western印迹检测OPN在肾皮质的表达.结果 模型组大鼠血糖、UAER、BUN、Scr、肾指数显著增高;肾组织OPN、CD68表达明显增多,光镜下肾小管结构异常改变明显,Irbesartan组上述指标明显低于模型组(P<0.01),肾脏超微结构明显改善,但未达到正常对照组水平.结论 Irbesartan可减少DM大鼠肾组织中OPN含量,下调CD68的表达,对肾脏有一定保护作用.     

干扰素对大鼠平滑肌细胞内骨桥蛋白表达的影响

目的　研究干扰素 (IFN)对培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞内骨桥蛋白表达的影响。方法　大鼠平滑肌细胞被随机分为对照组 ,IFN γ不同浓度 (50 ,50 0 ,1 0 0 0 ,2 0 0 0U ml)及时间 (2 4h ,48h)干预组 ,用RT PCR及Western blotting技术结合光密度扫描分析 ,观察IFN对培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞内骨桥蛋白表达的影响。结果　IFN γ (1 0 0 0U ml)明显刺激平滑肌细胞内骨桥蛋白的表达 ,2 4h干预组RT PCR骨桥蛋白与 β 肌动蛋白mRNA比值 (1 0 34± 0 0 2 9)和 48h干预组比值(1 0 64± 0 0 1 5)分别较对照组提高了 2 4 49% ,2 8 0 3 % ;Western blotting分析 2 4h干预组骨桥蛋白量(1 4 6 65± 5 1 9)较对照组提高 71 1 8% ;48h后 (1 50 49± 1 2 87)较对照组提高 75 66 %。结论　说明IFN γ能在基因水平上刺激大鼠平滑肌细胞内骨桥蛋白的表达     

骨桥蛋白的研究进展

本文对骨桥蛋白的蛋白质结构特点及生理功能、其基因结构特点与其表达的调控，以及它与骨代谢、与细胞信号转导及与肿瘤的关系进行了简要综述。     

自噬在肾脏结石大鼠发病中的作用机制

目的探讨自噬在肾脏结石发病中的作用机制。方法建立腺嘌呤摄入过量引发的肾结石小鼠模型,通过对小鼠血液、尿液、肾脏组织样本收集,运用分子生物学方法检测小鼠血液中肌苷酸含量、小鼠体重、肾比重、一昼夜尿液量、小鼠尿液中微量蛋白含量及肾脏组织自噬基因mRNA和自噬相关蛋白的表达情况,并运用生物统计学进行数统计。结果腺嘌呤模型小鼠体重下降,肾比重和一昼夜排尿量比对照组较高,酶联免疫吸附(ELISA)结果显示腺嘌呤模型小鼠血液中肌苷酸的含量,尿液中微量蛋白的含量与对照组相比升高,同时PCR及蛋白免疫印迹结果证明自噬相关mRNA和蛋白表达量的变化,自噬抑制剂处理小鼠后,肾结石症状稍有缓解,自噬相关mRNA和蛋白表达量的也发生调整。结论证明2,8二羟基腺嘌呤结石的积累可以引起肾组织自噬发生,导致肾结石相关症状。     

一氧化氮对大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的:观察一氧化氮(NO)对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,随机分为对照组,不同浓度NO供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP,0.5,1,2,5mmol)干预组,应用RT-PCR及Western blot技术结合光密度扫描分析,观察SNAP对VSMC的OPN表达的影响。结果:不同浓度SNAP均明显抑制VSMC的OPN mRNA和蛋白的表达,且具有剂量依赖性抑制作用。结论:NO能抑制VSMC的OPN表达。     

安立生坦对低氧性肺动脉高压大鼠右心室心肌骨桥蛋白表达的影响

目的 研究安立生坦（ambrisentan）对低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）大鼠右心室心肌骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）表达的影响。方法 将40只SD大鼠随机分成正常组、模型组、安慰剂组、安立生坦组,每组各10只。正常组于自然环境中饲养4周,其他3组置于低压低氧舱内（8 h/d）,共饲养4周。从低氧第3周起进舱前,每天给予安慰剂组生理盐水（2 ml）灌胃,给予安立生坦组安立生坦（5 mg/kg）灌胃,共2周。4周后以RT-PCR及Western blot法检测右心室心肌OPN的表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠的mPAP、RVSP、RV/(LV+S)、RW/BW、和右心室CVF均显著升高,OPN表达水平显著升高（P<0.05）;与模型组和安慰剂组比较,安立生坦组的上述指标和OPN的表达水平显著降低（P<0.05）;与正常组相比,安立生坦组各项指标及OPN表达水平无明显统计学差异。结论 安立生坦在降低肺动脉压力的同时可显著降低右心室心肌O PN的表达。     

烟酸对实验性动脉粥样硬化兔主动脉骨桥蛋白表达的影响

目的 探讨烟酸对动脉粥样硬化兔主动脉壁骨桥蛋白表达的影响.方法 16只雄性新西兰大白兔给予高脂饮食8周后,随机分为高脂血症组与烟酸组:高脂血症组(n=8)继续饲以高脂饲料6周;烟酸组(n=8)在高脂饮食基础上给予烟酸[200 mg/(kg·d)]6周.另选8只兔给予普通饮食14周作为正常对照组.14周末处死动物进行主动脉病理学检测,采用免疫组织化学染色检测兔主动脉壁骨桥蛋白的表达水平,采用实时定量PCR检测各组兔主动脉壁骨桥蛋白mRNA的表达.结果 与正常对照组相比,高脂血症组主动脉内膜厚度和斑块面积显著增加,骨桥蛋白和mRNA表达显著增加(P＜0.01).烟酸组主动脉内膜和斑块面积显著缩小,骨桥蛋白和mRNA表达显著减少(均P＜0.01).相关性分析显示:骨桥蛋白表达量与动脉粥样硬化斑块面积(r=0.821,P＜0.01)及内膜厚度(r =0.818,P＜0.01)均呈正相关;骨桥蛋白mRNA表达量与动脉粥样硬化斑块面积(r=0.888,P＜0.01)及内膜厚度(r =0.874,P＜0.01)也均呈正相关.结论 烟酸抗动脉粥样硬化作用除与其降脂作用有关外,还可能与其降低骨桥蛋白和mRNA水平有关.     

抗骨桥蛋白抗体防治大鼠动脉粥样硬化的研究

目的探讨抗骨桥蛋白（OPN）抗体对大鼠动脉粥样硬化（AS）的防治作用及机制。方法建立大鼠AS模型。将实验大鼠随机分为模型组和预防组。预防组大鼠经尾静脉注射抗体。应用免疫浊度法测定血清C-反应蛋白（CRP）的含量。同时分别应用Western印迹及免疫组化染色检测OPN和平滑肌α-肌动蛋白（SM-α-actin）的表达变化。结果注射抗OPN抗体使OPN的表达量降低，而使SM-α-actin的表达量升高，并且可改善预防组大鼠血管病理组织学表现。随着实验天数的增加，两组大鼠血清CRP含量均急剧上升（P〈0．05）。在同一时间点，两组之间的血清CRP含量比较均无差异（P〉0．05）。结论抗OPN抗体作为抑制剂可缓解AS病变。     

骨桥蛋白在肺纤维化患者的表达及醋酸泼尼松对其影响

目的探讨肺纤维化患者血浆骨桥蛋白（osteopontin,OPN）水平及醋酸泼尼松对它的影响。方法肺纤维化患者（A组,n=12）12例经醋酸泼尼松治疗8周,收集治疗前后及健康对照组（B组,n=12）12例的血浆,用ELISA法测定血浆骨桥蛋白水平。结果A组治疗前后血浆OPN水平6826±13．15,56．19±11．33mmol／L,与健康对照组35．61±8．73相比,其差异具有统计学意义（P〈0．01）;A组患者血浆OPN水平治疗后显著降低P〈0．05）。结论肺纤维化患者血浆OPN水平明显高于健康对照组;醋酸泼尼松能降低肺纤维化患者血浆OPN水平。     

酒精性脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白表达的变化

目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白（OPN）表达的变化。方法采用高脂饮食联合乙醇灌胃制备大鼠脂肪肝模型。在第6周末分别取血和肝组织,常规检测血生化指标和采用Westernblot法检测大鼠肝组织骨桥蛋白表达的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平升高（P〈0．05）,HDL-C降低（P〈0．05）;油红O染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织OPN蛋白表达明显增强（P〈0．05）。结论骨桥蛋白表达增强在大鼠乙醇性脂肪肝的发病过程中起一定的作用。     

自噬在草酸钙肾结石形成中的作用及相关调控机制研究进展

草酸钙肾结石是常见的泌尿系统疾病,复发率高,防治困难。自噬是机体一种高度保守的细胞代谢机制,可通过溶酶体途径维持细胞稳态。研究表明,草酸钙诱导自噬通过影响细胞氧化损伤参与草酸钙肾结石的发生、发展。自噬在草酸钙肾结石形成过程中表现出保护性或破坏性的双重作用。适度自噬有助于减轻草酸盐诱导的肾小管上皮细胞损伤及晶体沉积,而自噬过度激活则可加重相应的损伤、促进草酸盐沉积。基于自噬相关信号通路、氧化应激、外泌体等途径调控自噬,有望成为防治草酸钙肾结石的新方法。然而目前相关研究多为基础研究,其临床转化仍需要进一步探索。     

骨桥蛋白表达与人主动脉瘤发生的相关性

目的:研究骨桥蛋白在人胸主动脉瘤(TAA)和腹主动脉瘤(AAA)中的表达及其意义.方法:收集TAA标本13例、AAA标本20例以及正常主动脉标本6例,用免疫组织化学法检测其中骨桥蛋白的表达;并对其中的TAA标本8例、AAA标本10例及正常主动脉标本6例用Western blot法检测其中骨桥蛋白的表达.结果:在免疫组化实验和Western blot实验中,骨桥蛋白在TAA组和AAA组中均呈现阳性表达,而在正常对照组中为阴性,TAA组和AAA组与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TAA组与AAA组之间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:骨桥蛋白与人TAA及AAA的发病之间存在着相关性.     

低压低氧对SD大鼠肺动脉压及肺组织骨桥蛋白表达的影响

目的观察不同时间低压低氧刺激下SD大鼠肺动脉压及肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的变化,探讨OPN在肺动脉高压发病机制中的作用。方法将30只SD大鼠随机分成5组:对照组(海拔2 260 m)、低压低氧(低压氧舱模拟5 000 m海拔)1天组、7天组、14天组、21天组,每组动物均测定平均肺动脉压(m PAP)和右心室肥厚指数[RV/(LV+S)];并分别采用RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中OPN m RNA的水平,Western blot技术检测各组大鼠肺组织中OPN蛋白表达水平。结果低压低氧1天、7天、14天、21天组动物m PAP均高于对照组(P0.05),1天、7天、14天组呈逐渐增高趋势、21天组m PAP下降,差异有显著性(P0.05);低压低氧7天组、14天组、21天组动物呈现随低氧时间延长RV/(LV+S)逐渐增高的趋势、均高于对照组和1天组(P0.05),但1天组、7天组和对照组间差异无显著性(P0.05);RT-PCR法和Western blot法结果显示低压低氧1天、7天、14天、21天组动物肺组织中OPNm RNA、OPN蛋白表达水平与对照组比较均增高(P0.05)。结论低压低氧刺激可使m PAP和RV/(LV+S)增高并促进大鼠肺组织OPN的表达增高,因此OPN可能参与高原性心脏病形成中肺动脉压的增高和右心室重塑。     

二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应调节作用观察

目的 观察二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应的调节作用。方法 将HK-2细胞随机分成对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组,其中对照组给予无血清DMEM培养基,草酸钙组加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液,二甲双胍组1加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液和1.20 mmol/L的二甲双胍晶体悬浮液,二甲双胍组2加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液和0.80 mmol/L的二甲双胍晶体悬浮液,PDTC组加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液和100 mmol/L的NF-κB特异性抑制剂PDTC晶体悬浮液。各组细胞继续培养6 h,采用比色法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）,采用Elisa法检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白,采用RT-PCR法检测细胞中NF-κB、MCP-1 mRNA。结果 对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组细胞上清液中MDA含量分别为（0.21±0.02）、（1.62±0.09）、（1.04±0.01）、（1.27±0.12）、（0.83±0.0...     

核糖核酸干扰下调骨桥蛋白表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨骨桥蛋白（OPN）下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响。方法参考相关文献，设计并合成OPN的小干扰RNA（siRNA），通过荧光标记测定2株细胞的转染效率。Western印迹法检测OPN蛋白下调情况。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNA对OPNmRNA的下调率及随时间的变化。流式细胞仪检测转染前、后细胞周期和凋亡变化。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法连续7d检测OPN干扰时肿瘤细胞增殖的变化，并采用混合模型进行统计分析。Transwell实验检测转染前、后细胞的运动侵袭能力并行t检验进行分析。结果2株细胞中OPN siRNA的转染效率均在90％以上。干扰后2株细胞中OPN蛋白表达均下调。SGC7901细胞在siRNA转染后72hOPN mRNA表达下降最低，达47％；MKN28细胞在siRNA转染后48hOPN mRNA表达下降最低，达40％。OPN被干扰后，SGC7901和MKN28细胞的增殖能力明显减弱（混合模型分析与未干扰组比较，P〈0．01）。OPN被干扰后MKN28和SGC7901细胞周期受到影响，其中SGC7901分裂期细胞比例由18．78％降至17．02％，MKN28分裂期细胞比例则由4．96％降至0．39％。2株细胞都未发现下调OPN后诱发细胞凋亡。OPN下调后2株肿瘤细胞的运动侵袭能力均下降，穿过人工基底膜的细胞数明显减少（SGC7901：t=5．172，P〈0．01；MKN28：t=11．365，P〈0．01）。结论siRNA能下调MKN28和SGC7901中OPN表达，OPN可能与MKN28和SGC7901细胞的增殖和运动侵袭相关。     

高血压对小鼠血管骨桥蛋白表达的影响

目的研究高血压早期血管损伤中基因表达变化。方法30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和血管紧张素II（angiotensinII,AngII）组,采用植入式胶囊渗透压泵分别灌注生理盐水和AngII1500ng/（kg·min）,于第7天取主动脉,提取RNA后进行基因芯片分析;采用鼠尾套法检测小鼠尾动脉血压、超声检测心脏结构及功能;实时定量PCR（Real-timePCR）检测骨桥蛋白（OPN）的表达;取其胸主动脉进行组织切片,免疫组织化学染色观察骨桥蛋白的表达。结果与对照组相比,AngII组在灌泵7天时血压升高]（105±7）vs．（148±14）mmH岛1mmHg=0．133kPa,P〈0．001];基因芯片结果显示骨桥蛋白基因表达明显升高（〉50倍）;real-timePCR验证骨桥蛋白表达升高3．9±0．9倍,P〈0．05;免疫组化显示主动脉OPN表达增加。结论AngII导致高血压情况下,血管组织OPN表达增高,可能参与高血压血管损伤的过程。     

血瘀型肝纤维化大鼠骨桥蛋白的动态变化特征

目的:探讨血瘀型肝纤维化形成过程中骨桥蛋白(OPN)表达的动态变化.方法:采用二甲基亚硝胺(DMN)、重酒石酸去甲肾上腺素(NE)及小牛血清白蛋白(BSA)复制血瘀型肝纤维化大鼠模型,分别于造模的第7、14、21、28天末处死动物,Western blot及RT-PCR法检测OPN的蛋白、基因表达变化特征.结果:正常肝组织不表达或微弱表达OPN,血瘀型肝纤维化形成过程中肝组织OPN蛋白及mRNA的表达较正常组明显上调,动态观察不同时间段各组OPN表达均高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.05),动态21天组较动态28天组OPN蛋白表达明显增强(P＜0.01),但动态21天组与动态28天组OPN mRNA表达相比虽明显上调,但无统计学意义.结论:OPN在血瘀型肝纤维化形成过程中起到重要作用.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ对培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响。方法大鼠外膜成纤维细胞被随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ不同浓度(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)和时间(6h、12h和24h)干预组及血管紧张素Ⅱ加AT1受体拮抗剂氯沙坦和/或AT2受体拮抗剂PD123319干预组,用RT-PCR及Western blotting技术结合光密度扫描分析,观察血管紧张素Ⅱ对培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响。结果血管紧张素Ⅱ10-6mol/L明显刺激外膜成纤维细胞骨桥蛋白的表达,6h、12h和24h桥蛋白较对照组分别升高65.43%、97.03%和105.11%(P<0.05);而24h阴性对照无明显变化。不同浓度的血管紧张素Ⅱ均可诱导骨桥蛋白表达,10-8、10-7、10-6和10-5mol/L管紧张素Ⅱ孵育后分别升高了70.46%、97.37%、123.10%和147.59%(P<0.01)。在血管紧张素Ⅱ刺激前1h分别加入氯沙坦(10-5mol/L)、PD123319(10mmol/L)、氯沙坦(10-5mol/L) PD123319(10mmol/L),共同孵育12h后,其抑制率分别为58.9%、0.92%和59.7%。Western blotting分析,12h不同剂量血管紧张素Ⅱ干预组(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)骨桥蛋白量较对照组分别提高了50.68%、63.03%和69.86%(P<0.05),氯沙坦明显抑制血管紧张素Ⅱ刺激的骨桥蛋白表达,抑制率达到61.7%(P<0.05),而PD123319作用后抑制作用不明显,抑制率仅为0.85%(P>0.05)。结论血管紧张素Ⅱ能在基因和蛋白水平上刺激大鼠外膜成纤维细胞骨桥蛋白的表达,此作用可能是通过AT1受体介导。