microRNA-433在胃癌组织中的表达下降及对胃癌细胞系生长的影响

目的:探讨胃癌组织中microRNA-433表达差异以及其可能下调的机制,及在低表达microRNA-433胃癌细胞系中提升其表达的量对细胞生长的影响.方法:取胃癌组织及其正常癌旁组织43例,实时定量检测两者表达差异,并结合病例分析.使用1、5、10mol/L5-Aza-CdR干预胃癌SGC-7901细胞,检测每组microRNA-433的表达变化.转染microRNA-433mimics进入SGC-7901细胞,用流式细胞术检测细胞增殖凋亡情况.结果:胃癌组织相对其正常癌旁组织,microRNA-433表达量明显减低,差异有明显统计学意义(P<0.05),microRNA-433表达与性别、分化、年龄无明显关系(P>0.05),同肿瘤分期有统计学意义(P<0.05).胃癌细胞系SGC-7901中microRNA-433的表达相对于正常胃黏膜上皮细胞GES-1明显减低.SGC-7901细胞通过甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR以浓度1、5、10mol/L处理5d之后,分别检测microRNA-433的表达,相对未处理组,其表达均有上升并且呈现出剂量依赖性.将microRNA-433mimics转染至SGC-7901中提高其表达,通过流式细胞术检测发现,相比未处理组,提高表达后肿瘤细胞凋亡率上升,具有统计学意义(P<0.05).结论:microRNA-433在胃癌组织中表达减低,并且同肿瘤分期有关.使用5-Aza-CdR作用SGC-7901肿瘤细胞系后,microRNA-433的表达明显上升.其表达下调的机制可能是由于前端启动子区域高甲基化造成,转染提升肿瘤细胞中microRNA-433的表达,可以促进肿瘤细胞的凋亡.microRNA-433具有潜在的抑癌作用.     

Abl相互作用蛋白1过表达对胃癌细胞系AGS体外凋亡及迁移的影响

目的 研究Abl相互作用蛋白1(ABI1)过表达对人胃癌细胞系AGS体外凋亡及迁移的影响,初步探讨ABI1在胃癌发生发展中可能的作用机制.方法 首先应用脂质体转染方法分别将基因重组表达载体鼠干细胞病毒(MSCV)-绿色荧光蛋白(GFP)-ABI1质粒和对照载体MSCV-GFP质粒导入胃癌细胞系AGS,用嘌呤霉素筛选获得稳定表达MSCV-GFP-ABI1和MSCV-GFP的细胞系;其后应用流式细胞仪及Transwell小室检测ABI1过表达对AGS细胞体外凋亡及迁移能力的影响.结果 流式细胞仪检测显示,AGS细胞凋亡率与ABI1过表达后AGS细胞凋亡率无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05);Transwell小室检测显示,AGS细胞迁移能力与ABI1过表达后AGS细胞迁移能力比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ABI1过表达抑制胃癌细胞系AGS的体外迁移能力,提示影响胃癌细胞的迁移可能是ABI1在胃癌发生发展中发挥作用的重要途径之一.     

RFWD3在胃癌AGS细胞中的表达及其对凋亡的影响

[目的]探讨外源性基因环指和WD重复结构域相关蛋白3(RFWD3)对胃癌凋亡的影响。[方法]TCGA数据库选出目的基因,实验分shCtrl组(对照组)和shRFWD3组,RT-PCR检测该基因在胃癌细胞株中的表达,构建慢病毒载体,慢病毒感染胃癌细胞,WB检测RFWD3被敲减后蛋白的表达,流式细胞仪检查凋亡率,然后检测caspase3/7蛋白的活性,观察细胞凋亡的情况。[结果]通过TCGA数据库及统计分析,筛选出目的基因RFWD3,RT-PCR检测该基因在胃癌AGS细胞中表达较高与其他3种胃癌细胞(MGC-803、BGC-823、SGC-7901)相比P<0.05,慢病毒感染胃癌AGS细胞后感染率80%,WB检测RFWD3被敲减后蛋白的表达下降,流式细胞仪检测shRFWD3组发生凋亡的AGS细胞显著增加,通过检测caspase3/7蛋白,显示shRFWD3组caspase3/7蛋白活性显著升高(P<0.05)。[结论]干扰目的基因RFWD3促进胃癌AGS细胞的凋亡,为胃癌的科学研究与临床治疗提供可能的机制研究。     

幽门螺杆菌对AGS细胞DNA错配修复基因表达的影响

目的体外观察幽门螺杆菌对AGS细胞DNA错配修复（mismatch repair，MMR）基因蛋白和mRNA表达的影响，以确定不同疾病来源幽门螺杆菌对MMR基因表达的影响是否存在差异。方法AGS细胞分别与5株分离自胃癌和5株分离自胃炎患者的幽门螺杆菌共培养。逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Western印迹法检测hMSH2和hMLH1基因mRNA和蛋白表达，同时以肠道致病性大肠杆菌作为细菌对照。结果胃炎菌株和大肠杆菌基本不影响hMLH1和hMSH2基因mRNA和蛋白表达，而所有胃癌菌株都能下调hMLH1和hMSH2基因mRNA和蛋白表达。结论胃癌菌株与胃炎菌株对胃癌细胞MMR的影响存在差异，提示部分幽门螺杆菌菌株可能通过损害细胞MMR功能促进胃黏膜上皮细胞内DNA突变累积，增加幽门螺杆菌长期感染时胃癌发生的危险性。     

幽门螺杆菌对AGS细胞蛋白激酶C同工酶表达的影响

目的研究PKC同工酶在H.pylori感染引起胃癌发生中起作用。方法将幽门螺杆菌和人胃上皮腺癌细胞系AGS细胞共培养（细菌∶细胞=200∶1）,在幽门螺杆菌攻击AGS细胞后的0h、0.5h、1h、4h、6h、12h、24h时间点分别提取AGS细胞的总RNA,同时提取相对应时间点平行培养的未受幽门螺杆菌攻击的AGS细胞的总RNA作为对照组,以Beta-actin为内参照,应用Taq-Man实时荧光定量RT-PCR技术研究这些样品的PKC同工酶的mRNA变化情况。结果与对照组相比,PKCε、PKCγ、PKCι、PKCζ、PKCα mRNA水平呈现增高趋势;PKCθ mRNA水平呈现持续下降趋势;PKCδ mRNA水平与对照组呈现一致表达趋势。结论H.pylori可能通过上调具有肿瘤增殖活性的PKCα、ε、γ、ι、ζ,下调了具有凋亡活性的PKCθ,参与H.pylori引起胃癌的发生过程。H.pylori对PKCδ mRNA水平没有影响。     

microRNA-214-3P在胃癌中的表达及其对胃癌细胞恶性表型的影响

[目的]研究microRNA-214-3P(miR-214)在胃癌组织中的相对表达及其与临床病理特征的关系以及对胃癌细胞GC9811、胃癌腹膜高转移潜能细胞系GC9811-P恶性表型的影响。[方法]通过qRT-PCR验证miR-214在胃癌组织及胃癌细胞系中的相对表达量,分析胃癌患者的性别、年龄、分化程度、淋巴结转移及TNM分期之间的关系;通过CCK-8方法检测细胞增殖活力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪实验检测细胞的凋亡能力。[结果]在25对胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中,miR-214的相对表达量分别为2.39±0.64、0.99±0.30,P<0.05;GC9811-P细胞中miR-214的相对表达量明显高于GC9811细胞,P<0.01;miR-214的表达水平与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),与胃癌患者的年龄、性别及分化程度无关(P>0.05);转染慢病毒LV-miR-214 inhibitor或LV-empty lentiviral vector于GC9811-P细胞后,转染组LV-miR-214 IH的表达较对照组或空白...     

miR-30b对血管平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探究microRNA-30b(miR-30b)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移能力的影响。方法体外分离培养大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组(未进行转染)、miR-对照组(转染miR-NC,浓度为50 nmol/L)、miR-30b mimics组(转染miR-30b mimics,浓度为50 nmol/L)。采用实时荧光定量PCR实验检测miR-30b及钙黏附蛋白E-Cadherin的表达情况;采用划痕愈合实验检测VSMC的迁移率;采用Transwell实验检测VSMC的迁移能力;采用Western blot技术检测E-Cadherin蛋白的表达。结果①miR-30b mimics组与正常对照组和miR-对照组比较,miR-30b表达水平升高(P0.05)。②划痕愈合实验结果显示,与正常对照组和miR-对照组相比,miR-30b mimics组VSMC的划痕修复率明显降低(P0.05)。③Transwell实验可见,miR-30b mimics组VSMC的迁移能力较正常对照组和miR-对照组明显减弱(P0.05)。④miR-30b mimics组E-Cadherin mRNA和蛋白的表达较正常对照组和miR-对照组明显增强(P0.05)。结论 miR-30b上调E-Cadherin的表达,从而抑制大鼠VSMC的迁移。     

MicroRNA-29a对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究MicroRNA-29 a对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能机制.方法 通过MTT法和划痕法分别观察microRNA-29a对VSMCs活力和迁移能力的影响;通过Realtime-PCR和Western印迹检测分别观察micro-RNA-29 a对MMP-9、MMP-2和PCNA表达的影响.结果 与阴性对照组和空白对照组相比较,MicroRNA-29 a反义寡核苷酸组VSMC体外增殖能力和迁移能力明显被抑制(P＜0.05);Realtime-PCR和Western印迹检测发现与阴性对照组和空白对照组相比较,MicroRNA-29 a反义寡核苷酸组MMP-9、MMP-2和PCNA表达明显降低.结论 microRNA-29a可以影响VSMC增殖和迁移,其机制可能是通过调节MMP-9、MMP-2和PCNA的表达来得以实现的.     

不同疾病来源幽门螺杆菌菌株对人胃癌细胞系AGS基质金属蛋白酶表达影响的比较研究

背景：幽门螺杆菌（H.pylori）是胃癌的Ⅰ类致癌原，但H.pylori感染与胃癌发生的分子机制仍不明了。目的：在体外观察不同疾病来源的H.pylori菌株对人胃癌细胞系AGS基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响是否存在差异。方法：将AGS细胞分别与5株分离自胃癌和5株分离自轻度非萎缩性胃炎患者的H.pylori共培养，以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测MMP-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白的表达，以肠道致病性大肠杆菌作为细菌对照。结果：胃炎H.pylori菌株和大肠杆菌基本不影响AGS细胞MMP-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白的表达，而所有胃癌菌株均能上调MMP-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结论：分离自胃癌和胃炎患者的H.pylori菌株对AGS细胞MMP-2、MMP-7和MMP-9表达的影响有所不同，说明不同疾病来源的H.pylori菌株在促细胞恶变能力上存在差异。     

转染试剂及幽门螺杆菌对AGS细胞形态的影响

目的:探讨不同的转染试剂对AGS细胞形态的影响,观察这些转染试剂能否像幽门螺杆菌那样引起AGS细胞蜂鸟状改变．方法:用多聚阳离子转染试剂(多聚乙酰亚胺、梭华-Sofast)和改良的脂类转染试剂 (Effectene Transfection Reagent)分别转染AGS 细胞,观察细胞形态的变化．用幽门螺杆菌 26695菌株攻击AGS细胞,观察细胞形态的变化并与经转染试剂作用的细胞进行形态比较．结果:幽门螺杆菌攻击后4 h能引起AGS细胞发生蜂鸟状改变．两种多聚阳离子转染试剂也均能引起AGS细胞发生蜂鸟状改变,与幽门螺杆菌引起的细胞形态改变相似,大部分细胞拉长,并且不受是否转染DNA的影响．此种变化在转染4 h时便出现,与试剂剂量的增加呈正相关．当PEI的剂量为10 μL时,细胞出现凋亡,15μL时凋亡加重．改良的脂类转染试剂对 AGS细胞的形态未产生影响．结论:在研究引起AGS细胞形态改变的因素时,不宜选择多聚阳离子转染试剂;多聚阳离子引起的AGS细胞形态改变与幽门螺杆菌引起的AGS细胞形态改变之间是否存在关系值得进一步研究．     

血清31P—核磁共振波谱（NMRS）对胃癌诊断意义的研究

为探讨３１Ｐ－核磁共振波谱（ＮＭＲＳ）对胃癌诊断的可行性，采用ＶＸＲ－３００超导核磁共振仪测量人血清标本１１４例，其中胃癌５６例，健康对照５８例，分析比较了它们各自的三个主要谱峰ａ、ｂ和ｃ。结果发现，二组间谱峰的化学位移Ｓａ、Ｓｂ、Ｓｃ相差很小（０．５〉Ｐ〉０．２）。谱峰强度则有明显变化。计算谱峰ａ与谱峰ｂ和ｃ的总面积积分值之比（ａ／ｂｃ），胃癌组与对照组ａ／ｂｃ的均值分别为０．１８８±０．０５３     

不同疾病来源的幽门螺杆菌菌株对AGS细胞动力学的影响

体内外研究发现，幽门螺杆菌(H.pylori)感染可促进胃黏膜上皮细胞增殖或触发细胞凋亡，从而引起细胞动力学改变，而菌株的差异可导致不同的结果。目的：通过体外实验观察不同疾病来源的H.pylori菌株对人胃癌细胞株AGS的细胞活力、细胞凋亡和细胞周期的影响，以确定不同疾病来源H.pylori菌株的细胞毒性是否存在差异。方法：采用聚合酶链反应(PCR)鉴定分离自胃癌和胃炎患者的H.pylori菌株的毒力基因和相关亚型。将AGS细胞分别与H.pylori菌株共培养，采用四唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果：cagA、uacA、iceA和babA2基因和相关亚型在胃癌和胃炎H.pylori菌株中呈均匀分布。不同菌株抑制AGS细胞活力和促进细胞凋亡的能力虽有强弱差别，但胃癌菌株与胃炎菌株之间不存在整体上的差别。多数H.pylori菌株能抑制AGS细胞周期的G1/S期转换。结论：不同H．pytori菌株对共培养的AGS细胞动力学的影响存在差异，但胃癌菌株与胃炎菌株的细胞毒性无整体上的差别。     

血清31P－核磁共振波谱（NMRS）对胃癌诊断意义的研究

为探讨~３１Ｐ－核磁共振波谱（ＮＭＲＳ）对胃癌诊断的可行性，采用ＶＸＲ－３００超导核磁共振仪测量人血清标本１１４例，其中胃癌５６例，健康对照５８例，分析比较了它们各自的三个主要谱峰ａ、ｂ和ｃ。结果发现，二组间谱峰的化学位移Ｓａ、Ｓｂ、Ｓｃ相差很小（０．５＞Ｐ＞０．２），谱峰强度则有明显变化。计算谱峰ａ与谱峰ｂ和ｃ的总面积积分值之比（ａ／ｂｃ），胃癌组与对照组ａ／ｂｃ的均值分别为０．１８８±０．０５３和０．１１０±０．０３７（Ｐ＜０．００１）。本法诊断敏感性为８０．３６％，特异性为８１．０３％，可作为胃癌诊断的新的检查方法     

木犀草素对人胃癌HGC-27细胞迁移的影响及机制

目的 观察木犀草素对人胃癌细胞系HGC-27细胞迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法 用10、20、40 μmol/L木犀草素培养HGC -27细胞.用划痕实验、Transwell实验观察不同浓度木犀草素对同样条件培养下胃癌HGC-27细胞迁移能力的影响,并采用Westem blot方法检测金属基质蛋白酶-7(MMP-7)mRNA.结果 划痕实验中培养24h后,未经木犀草素处理的HGC-27细胞运动迁移基本完全覆盖了划痕区域,而经10、20、40 μmol/L 木犀草素处理的HGC-27细胞仅覆盖了96.2％、72.3％、55.6％的划痕区域.Transwell实验中经10、20、40 μmol/L木犀草素处理的HGC细胞穿膜数量占对照组细胞穿膜数量的百分比分别为97.6％、59.5％、20.0％.经10、20、40μmol/L木犀草素处理的HGC-27细胞内MMP-7蛋白的表达水平明显降低,并与木犀草素的浓度呈负相关.结论 木犀草素抑制了胃癌HGC-27细胞的迁移能力,其作用与抑制HGC-27细胞内的MMP-7蛋白表达水平有关.     

安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制

目的 探究安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法 体外培养人胃癌AGS细胞,取第3代对数生长期AGS细胞,分为对照组(不做干预)、实验组(2μmol/L安罗替尼组、4μmol/L安罗替尼组、8μmol/L安罗替尼组)和抑制剂组[4μmol/L安罗替尼+10μmol/L转化生长因子-β₁(TGF-β₁)/Smads信号通路抑制剂LY2109761],干预24 h。为避免细胞死亡太多干扰实验,抑制剂组选取4μmol/L安罗替尼作为最适浓度加入10μmol/L TGF-β₁/Smads通路抑制剂LY2109761进行后续实验。用CCK-8法、倒置显微镜、Transwell小室及Western blotting法对细胞活力、细胞形态、迁移、侵袭能力及上皮间质转化(EMT)、TGF-β₁/Smads信号通路相关蛋白表达进行检测。结果 与对照组相比,4、8μmol/L安罗替尼组细胞活力降低(P均<0.05)。实验组人胃癌AGS细胞生长受到抑制,迁移、侵袭能力及TGF-β₁、...     

氯化两面针碱对人胃癌细胞增殖、迁移的抑制作用

目的探讨氯化两面针碱(NC)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移的作用及其机制。方法 MTT实验检测NC对SGC-7901细胞的增殖作用;Transwell小室实验检测NC对SGC-7901细胞迁移和侵袭的影响;Western印迹检测NC对人胃癌SGC-7901细胞中Bax,Bcl-2,PCNA,MMP2,MMP1和GAPDH表达的影响。结果 MTT实验表明NC抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);此外,NC显著抑制SGC-7901细胞中PCNA表达,呈剂量依赖性(P<0.05);Transwell小室实验表明NC显著抑制SGC7901细胞迁移和侵袭,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);Western印迹表明NC上调凋亡蛋白Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制MMP1以及MMP2的表达(均P<0.05)。结论 NC通过诱导细胞凋亡抑制SGC-7901细胞增殖,通过降解MMP1和MMP2从而抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移。     

慢病毒介导的ADAM8基因沉默对胃癌MKN45细胞EMT、侵袭和迁移的影响

目的 研究慢病毒介导的解整合素和金属蛋白酶(ADAM)8基因沉默对人胃癌MKN45细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用慢病毒转染技术沉默MKN45细胞中ADAM8基因,构建稳定沉默ADAM8的MKN45细胞株,转染空载作为阴性对照组(sh-NC组),转染ADAM8 shRNA为实验组(sh-AD...     

血清microRNA-497定量检测与胃癌侵袭转移及预后的关系

[目的]定量检测胃癌(gastric cancer, GC)患者血清microRNA;497(miR-497)表达量,探讨其与GC侵袭转移及预后的关系。[方法]以实时荧光定量RT-PCR检测70例GC患者(GC组)术前及术后、30例萎缩性胃炎患者(萎缩性胃炎组)及30例健康者(正常对照组)血清miR-497表达量,同时检测血清癌胚抗原(CEA);随访GC患者术后预后3年;分析术前血清miR-497表达量与GC临床病理特征及预后的关系。[结果]GC组术前血清miR-497表达量显著低于其术后及萎缩性胃炎组和正常对照组(P<0.01);GC组术前血清miR-497表达量与GC浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及是否远处转移呈负相关(均P<0.01),与肿瘤分化程度、大体形态及术前血清CEA含量无相关(P>0.05)。术前血清miR-497低表达组术后2、3年生存率显著低于高表达组(P<0.05)。Cox多因素分析显示术前血清miR-497表达量是影响GC术后预后的独立高危因素。[结论]血清miR-497低表达与GC侵袭转移、不良预后密切相关,可成为GC术前及预后评价指...