miR-626下调HepG2细胞载脂蛋白(a)的表达

目的筛选高效调控LPA基因表达的miRNA。方法用在线预测工具预测作用于LPA基因3'UTR的miRNA,RT-PCR和Western blot检测转染预测所得miRNA mimic后HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]mRNA和蛋白表达水平。实验分为对照组、miR-626 mimic组、miR-626 mimic+miR-626 inhibitor组和miR-626 inhibitor组共4组。使用荧光素酶报告系统进行miR-626靶标验证实验。结果可作用于LPA基因3'UTR的miRNA有9个。mimic转染组与对照组相比,Apo(a)的mRNA表达水平差异不显著,但miR-626能显著下调Apo(a)蛋白的表达。使用miR-626 inhibitor后,miR-626对Apo(a)蛋白的下调作用减弱。转染miR-626后细胞裂解液的荧光强度显著下降。结论miR-626能显著下调Apo(a)蛋白表达水平,其通过与LPA mRNA 3'UTR序列结合,抑制LPA mRNA翻译实现的。     

miR-20a对前列腺癌细胞的侵袭及其机制

目的探讨miR-20a在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞侵袭的作用机制。方法实时定量PCR检测前列腺癌和正常组织,以及正常前列腺细胞和4种癌细胞中miR-20a的表达。将miR-20a的抑制剂miR-20a ASO转染PC-3和DU145细胞,实时定量PCR验证抑制效果,然后检测细胞的增殖和侵袭。GFP报告载体实验和免疫印迹验证miR-20a的靶基因。细胞转染靶基因ABL2的siRNA后,免疫印迹验证沉默效果并检测其对细胞侵袭的影响。结果与对照组相比,miR-20a在前列腺癌组织和细胞中表达显著升高。miR-20a ASO组中miR-20a的水平降低,细胞增殖减慢,细胞穿过膜的数目明显减少。ABL2是miR-145的直接靶基因,受其负调控。敲降ABL2的表达后,细胞侵袭能力增强,并且可以挽救由miR-20a ASO引起的细胞侵袭能力的降低。结论抑制miR-20a在前列腺癌转移的分子治疗中具有潜在功能。     

TROP-2基因小干扰RNA转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的观察肿瘤相关钙信号转导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响。方法以TROP-2基因siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞后,分别用实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞TROP-2 mRNA和蛋白,用MTT法检测PC-3细胞吸光度值(以此判断细胞黏附力),以Tr-answell小室实验观察细胞的迁移、侵袭情况。结果与空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2 mRNA的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2蛋白的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组相比,TROP-2 siR-NA组细胞黏附力下降(P<0.01)并呈浓度、时间依赖性(P均<0.05);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2siRNA组细胞迁移、侵袭数明显减少(P均<0.01)并呈浓度依赖性(P均<0.01)。结论 TROP-2基因siRNA转染可抑制前列腺癌PC-3细胞黏附、迁移和侵袭。     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-365对乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的研究miR-365在人乳头状甲状腺癌株TPC-1细胞中的表达和生物学作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-365在正常人甲状腺上皮细胞NTHY-ORI 3-1和乳头状甲状腺癌TPC-1细胞中的表达。把TPC-1细胞分为3组,即空白组、对照组和miR-365过表达组,空白组不作处理,将Control-mimics和miR-365 mimic分别转染至对照组和miR-365过表达组。另将TPC-1细胞分为3组,即空白组、对照组和miR-365抑制剂组,空白组不作处理,将Control-抑制剂(inhibitors)和miR-365 inhibitor分别转染至对照组和miR-365抑制剂组。分别采用CCK8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力。结果 miR-365在TPC-1细胞中表达水平明显低于NTHY-ORI 3-1细胞(P0.01)。与空白组和对照组相比,TPC-1细胞的增殖率可明显被miR-365 mimic降低(P0.01),而TPC-1细胞的增殖率可明显被miR-365 inhibitor增加(P0.01)。TPC-1细胞在miR-365 mimic转染后的24 h迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。然而,TPC-1细胞转染miR-365 inhibitor后,迁移和侵袭能力明显提高(P0.01)。结论在乳头状甲状腺癌细胞中miR-365表达下调,TPC-1细胞体外增殖、迁移和侵袭能力通过体外过表达可明显被抑制。     

LncRNA FoxP4-AS1靶向miR-136-5p影响人乳腺癌细胞株SKBR-3侵袭与迁移能力

目的 探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)FoxP4-AS1靶向微小核糖核酸(miR)-136-5p对人乳腺癌细胞株SKBR-3侵袭与迁移能力的作用。方法 将处于对数生长期的人乳腺癌细胞株SKBR-3分为FoxP4-AS1下调组(转染si-FoxP4-AS1)、FoxP4-AS1上调组(转染pcDNA-FoxP4-AS1)、FoxP4-AS1对照组(转染FoxP4-AS1-NC)、miR-136-5p下调组(转染miR-136-5p inhibitor)、miR-136-5p上调组(转染miR-136-5p mimic)、miR对照组(转染miR-NC)和空白组(不转染)。Transwell测定细胞侵袭、迁移能力；实时逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FoxP4-AS1、miR-136-5p表达及迁移侵袭增强因子(MIEN)1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9信使核糖核酸(mRNA)表达；Western印迹检测MIEN1、E-cadherin、MMP-9蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验验证FoxP4-AS1靶向调控miR-136-5p。结果...     

miR-185通过靶向BRCA1抑制三阴乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的探讨miR-185是否通过靶向人类乳腺癌易感基因(BRCA)1抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭及其抗肿瘤机制。方法采用Target Scan软件预测miR-185靶基因、将野生型或突变型E2F6的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(E2F6-wt或E2F6-mut)并分别与miR-185模拟物(miR-185 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)、抗miR-185寡核苷酸序列(miR-185-LNA)及其无关对照寡核苷酸序列(control)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因E2F6、qRT-PCR检测转染后靶基因的mRNA表达水平、Western印迹检测转染后靶基因的蛋白表达水平。MTS和Transwell验证不同转染后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生长增殖活性和侵袭能力。结果在共转染miR-185mimics和E2F6-wt、scramble和E2F6-wt两组中,miR-185组荧光素酶活性强度降低了约41.3%(P<0.05)。转染miR-185后,E2F6的蛋白和mRNA水平均显著下调,BRCA1的蛋白和mRNA水平均显著上调(P<0.05)。在细胞增殖试验中,转染miR-185后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长速度显著低于scramble组(P<0.05);与vector组比,BRCA1组可显著抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长(P<0.05),且miR-185+BRCA1组比BRCA1组对细胞生长的抑制作用更加明显(P<0.05)。Transwell侵袭实验中,转染miR-185和BRCA1组在36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(100±6)和(100±9),而对照组即转染scramble和转染vector组穿膜细胞数分别为(210±13)和(180±14),即miR-185和BRCA1能明显抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-185通过靶向调控BRCA1表达而抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭。     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。     

MT1-MMP对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响

目的 观察膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响.方法 将稳定表达MT1-MMP基因转染至HepG2细胞中,应用RT-PCR、Ⅰ型胶原黏附和Matrigel侵袭小室实验,检测细胞MT1-MMP mRNA水平,体外黏附、侵袭和迁移能力的变化.结果 重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平明显高于空质粒组和对照组(P<0.01).MT1-MMP明显提高细胞Ⅰ型胶原黏附、迁移和Matrigel侵袭能力(P<0.01).结论 MT1-MMP过表达可促进HepG2细胞体外侵袭和转移,提示其可作为人肝癌抗侵袭治疗的分子靶点.     

miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的探讨miR-638是否可通过直接调控靶向性别决定区Y框蛋白(SOX)2抑制上皮-间质转化(EMT)相关通路从而抑制胃癌细胞的侵袭迁移。方法 qRT-PCR检测miR-638在100对胃癌组织及癌旁组织中的表达、检测miR-638在7株胃癌细胞系及1株正常胃黏膜细胞中的表达。Transwell和Wound Healing实验验证分别转染miR-638模拟物(miR-638 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)到胃癌细胞AGS中时对细胞的侵袭和迁移能力的影响。Target Scan软件预测miR-638的靶基因、将野生型或突变型SOX2的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(SOX2-wt或SOX2-mut)并分别与miR-638 mimics或scramble共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因为SOX2,qRT-PCR和Western印迹分别检测转染miR-638 mimics和scramble后SOX2的mRNA和蛋白表达的及EMT相关蛋白表达。结果 miR-638在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,同时miR-638在胃癌细胞系中的表达水平也显著低于正常胃黏膜细胞系。转染miR-638后,胃癌细胞AGS的侵袭和迁移能力显著低于scramble组(P<0.05)。在共转染miR-638或scramble和SOX2-wt的两组中,共转染miR-638和SOX2-wt组的荧光素酶活性强度降低了约43.1%(P<0.05)。转染miR-638后,SOX2的mRNA和蛋白表达水平均显著下调;EMT相关的上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadherin)的表达显著增加,而EMT相关的间质标志物神经钙联素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达则显著降低(P<0.05)。结论 miR-638可通过靶向调控SOX2而影响EMT,抑制胃癌细胞AGS的侵袭和迁移。