高效液相色谱法测定不同产地土茯苓药材中落新妇苷的含量

目的：建立高效液相法测定土茯苓药材中落新妇苷含量的方法。方法：采用Luna-C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相：甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.2）;检测波长：290nm;流速：1.0ml/min。结果：落新妇苷在0.196～1.960μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均回收率为98.34%,RSD=1.80%（n=6）。结论：本方法简便、准确、重现性好,可用于土茯苓药材中落新妇苷的质量控制。     

落新妇苷对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞凋亡及炎症反应的影响

目的 落新妇苷是广泛存在于多种植物中的二氢黄酮醇苷,黄酮类化合物的有效成分,具有抗炎、抗氧化、抗病毒等多种药理活性.文章主要探讨落新妇苷对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞凋亡、炎症反应的影响及分子机制.方法 人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)随机分为对照组、oxLDL组、oxLDL+落新妇苷低、中、高剂量组、oxL...     

硫化氢对顺铂诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预研究

目的 探讨硫化氢H2S 对顺铂（DDP）诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预作用。方法 研究分为阴性对照组、DDP 组、DDP+ 硫氢化钠NaHS 组。DDP 组：DDP 浓度为0、1、2、5、10、20 和40 mg/L ;DDP+NaHS 组：NaHS 浓度分别为0、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0 和2.0 mmol/L,加DDP（20 mg/L）共同作用。噻唑蓝（MTT）实验：DDP 组、DDP+NaHS 组与人近端肾小管上皮细胞株（HK-2 细胞）共同培养,24 h 后测光密度（OD）值。NaHS（0.5 和1.0 mmol/L）加DDP（20 mg/L）与HK-2 细胞共同培养24 h。4,6- 联脒-2- 苯基吲哚（DAPI）,Annexin V-FITC/PI 染色通过显微镜观察各组细胞的形态学改变。Annexin V-FITC/PI 流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 MTT 实验：0、1、2、5、10 和20 mg/L DDP 浓度的OD 值分别为（0.270±0.064）、（0.229±0.022）、（0.198±0.024）、（0.189±0.069）、（0.188±0.030） 和（0.165±0.012）,OD 值随DDP 浓度上升逐渐下降, 在20 mg/L 低于阴性对照组（P <0.05）。20 mg/L DDP 加浓度分别为0.2、0.4、0.5、0.8 和1.0 mmol/L NaHS的OD 值分别为（0.173±0.051）、（0.186±0.023）、（0.259±0.050）、（0.263±0.033） 和（0.268±0.098）, 以上与浓度为20 mg/L DDP 的OD 值（0.153±0.017）比较,差异有统计学意义（P <0.05）。DAPI、Annexin VFITC/PI 染色荧光显微镜显示,对照组HK-2 细胞平均凋亡细胞数为（4.230±1.015）,20 mg/L DDP 影响下为（35.020±6.079）,两者差异有统计学意义（P <0.05）,DDP 组高于阴性对照组。DDP+NaHS 组在0.5 和1.0 mmol/L 的平均凋亡细胞分别为（22.550±2.912） 和（9.780±2.063）,差异有统计学意义（P <0.05）,DDP+NaHS 组低于DDP 组。Annexin V-FITC/PI 流式细胞术检测,阴性对照组HK-2 细胞凋亡率（5.167±0.612）%,在20 mg/L DDP 影响下,为（31.598±1.014）%,细胞凋亡率增加（P <0.05）。合用NaHS 凋亡减少,在0.5 和1.0 mmol/L 的凋亡率为（18.375±2.239）% 和（11.636±1.233）%,差异有统计学意义（P <0.05）,DDP+NaHS 组低于DDP 组。结论 NaHS 对DDP 导致的近端肾小管上皮细胞的凋亡有保护作用。     

落新妇苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨落新妇苷对大鼠肾脏缺血再灌注（ischemia reperfusion,IR）损伤的保护作用。 方法：将24只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组和落新妇苷组,每组8只。模型组和落新妇苷组大鼠用于制作肾脏IR模型。自术前3d开始,落新妇苷组大鼠腹腔注射12mg／mL落新妇苷30mg／kg,1次／d;模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水。于再灌注6h后检测各组大鼠血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）和肌酐（serum creatinine,SCr）水平,并观察肾组织形态学变化;半定量逆转录聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测肾组织内单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein—1,MCP-1）mRNA及蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）和白细胞介素18（interleukin—1β,IL-1β）含量。 结果：再灌注6h后与模型组相比,落新妇苷组大鼠BUN和SCr水平均显著降低（P〈0．01）,大鼠肾小球及肾小管上皮细胞损伤明显减轻,肾组织内MCP-1 mRNA（P〈0．05）和蛋白表达下降,血清IL-6和IL-1β含量下降（P〈0．01）。 结论：落新妇苷能够有效减轻肾脏IR损伤,其保护作用可能与抑制IR后趋化因子MCP-1及细胞因子IL-6和IL-1β的产生有关。     

白藜芦醇抑制顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的体外研究

目的 通过观察顺铂损伤小鼠肾小管上皮细胞后Bcl-2、Bax及caspase-3的表达以及白藜芦醇干预后其表达的变化,探讨白藜芦醇对顺铂肾小管上皮细胞损伤的保护机制。 方法 体外培养小鼠近曲小管上皮细胞(mProx)并分为4组:对照组(Con)、顺铂25μM组(CIS)、白藜芦醇+顺铂25μM组(RES+CIS),(100μmol白藜芦醇预处理3 h后加入25μM顺铂作用24 h)、白藜芦醇组(RES)。台盼蓝拒染方法测定细胞活力,Tunel法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax及caspase-3的表达变化。 结果 与对照组相比,顺铂组细胞活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05),Bax及caspase-3的蛋白表达增强(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与CP组比较,RES+CIS组细胞活力明显增加(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),Bax及caspase-3的表达下降(P<0.05),Bcl-2的表达上升(P<0.05)。 结论 白藜芦醇能有效提高小鼠近曲小管上皮细胞存活率,抑制细胞凋亡,其机制可能与其通过下调caspase-3、Bax及上调Bcl-2有关。      

黄芩苷联合顺铂体外诱导人肝癌细胞HepG2.0凋亡的实验研究

目的观察黄芩苷联合顺铂是否能诱导HepG2.0细胞凋亡及探讨其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂干预HepG2.0细胞。用CCK-8法检测细胞活性;光学显微镜观察HepG2.0细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测HepG2.0细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞凋亡的形态改变;各药物组细胞早期凋亡率显著升高;各药物组细胞Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、c-myc和Caspase-3表达升高。结论黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂均能诱导HepG2.0细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc蛋白的表达有关。     

落新妇甙对小鼠移植心肌细胞凋亡的抑制作用

目的观察落新妇甙（Astilbin）对小鼠心脏移植急性排除反应中心肌细胞凋亡的抑制作用。方法采用小鼠颈部心脏移植模型。共分3组：对照组供、受体均为C57小鼠；移植组供体为BALB／c小鼠，受体为C57小鼠；落新妇甙组在移植组基础上，心脏移植后每天以落新妇甙1mg／kg灌胃。分别于术后第1、3、5、7天各取4只移植心脏．原位末端标记（TUNEL）法染色检测心肌细胞凋亡，以心肌细胞凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的百分比作为心肌细胞凋亡指数（apoptosis index，AI）。结果移植组心肌细胞于术后第1天即已出现凋亡，第3天明显增加，第7天达到高峰。落新妇甙组各时间点心肌细胞凋亡指数明显小于对应的移植组（P〈0．01）。结论落新妇甙对心脏移植排斥反应中心肌细胞凋亡有显著抑制作用。     

顺铂诱导肾小管上皮细胞程序性死亡的机理

目的：探讨顺铂导致细胞凋亡的发生部位和诱导细胞凋亡的信号传导途径，为更好地预防铂类药物对肾脏的毒副作用奠定基础。方法：将含目的基因的Bcl-2(Bcl-acta、Bcl-cb5及Bcl-nt)的pcDNA3.1(+) /Hygromycin质粒及pEGFP-C3质粒，通过共转染方式导入肾小管上皮细胞（RPTC）。并将细胞分为对照组、Bcl-acta组、Bcl-cb5组及Bcl-nt组。细胞经顺铂处理后，应用显微共聚焦和免疫荧光及免疫印记技术，分析各种突变的Bcl-2基因对细胞Bax激活和线粒体细胞色素C释放的保护作用，并进行Hoechst33258染色观察细胞凋亡，综合分析顺铂诱导细胞凋亡的信号传导途径。结果：转染Bcl-cb5组细胞色素C释放百分率为35.74%，明显高于Bcl-nt组(18.7%)和Bcl-acta组(24.6%)，Bcl-cb5组细胞色素C释放的细胞数与Bcl-nt组及Bcl-acta组比较明显增多（P<0.05）。未经转染Bcl-2的细胞和经过转染Bcl-cb5的细胞均可见明显的Bax激活和细胞凋亡。而经Bcl-acta和Bcl-nt转染后再进行顺铂处理，24 h后比Bcl-cb5基因转染组和对照组的细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。结论：转染Bcl-acta和Bcl-nt基因组RPTC抵抗凋亡的能力明显高于转染Bcl-cb5基因组，转染Bcl-cb5基因能够使所表达的蛋白在内质网上定位，但不能发挥抗凋亡的作用。说明RPTC抵抗顺铂诱导的细胞凋亡的主要作用是通过线粒体途径而不是通过内质网起作用的。     

HPLC法测定土茯苓中3种活性成分的含量

目的 建立HPLC法同时测定土茯苓中花旗松素、落新妇苷及白藜芦醇的含量.方法 采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以甲醇-0.5％(体积分数)H3PO4(体积比34:66)为流动相,流速1 mL·rmin-1,柱温30℃,检测波长289、291、306 nm.结果 花旗松素、落新...     

不同产地土茯苓中总黄酮含量定量分析

目的：测定不同产地土茯苓中总黄酮的含量。方法：以落新妇苷为标准品、采用分光光度法测定分别源于安徽亳州、广西南宁、越南三产地的土茯苓中总黄酮的含量。结果：落新妇苷在13．18-30．59μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系（R^2=0．9996）。结论：方法灵敏度高、稳定性好,可以用于土茯苓药材中总黄酮的含量测定。     

土茯苓酚苷类成分研究

目的 研究土茯苓的化学成分。方法 用硅胶、大孔树脂、ODS柱色谱及HPLC方法进行分离纯化，根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果 得到6个化合物，分别为2，4，6-三羟基苯乙酮-2，4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、3，4，5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)、3，4，5-三甲氧基苯基-1-O-[β-D-呋喃芹糖基-(1→6)]-β-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)、3，4-二羟基苯乙醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)、8，8′-双二氢丁香苷元葡萄糖苷(8，8′bisdihydrosyringenin glucoside，V)、白藜芦醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅵ)。结论 化合物Ⅰ为首次从天然界中分得，其余化合物为首次从土茯苓中分得。     

土茯苓祛痰止咳作用药理实验研究

目的：研究土茯苓对浓氨气引起小鼠咳嗽次数与咳嗽潜伏期的影响,以及对小鼠腹腔注射酚红后引起气管酚红排泌量的影响。方法：将小鼠放入自制的诱咳仪内,注入浓氨气20s,观察记录小鼠的咳嗽潜伏期和3min内咳嗽次数;小鼠腹腔注射5％酚红溶液,测定30min后小鼠气管酚红的排泌量。结果：各组咳嗽潜伏期以及3min内咳嗽次数比较无显著性差异（P〉0．05）,土茯苓高剂量组（10g／kg）的吸光度高于空白对照组,差异有显著性（P〈0．05）。结论：单味土茯苓止咳作用尚不明显,但在高剂量时有明显祛痰作用。     

土茯苓大孔树脂不同洗脱部位的体外抗氧化活性研究

[目的]研究土茯苓不同大孔树脂洗脱部位的体外抗氧化活性.[方法]土茯苓60％乙醇提取物上HPD-300型大孔树脂,分别用0、30％、50％、70％、90％的乙醇进行洗脱,得到5个不同洗脱部位（FSGA、FSGB、FSGC、FSGD、FSGE）;采用紫外分光光度法测定各部位的总黄酮及总酚含量;采用清除1,1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）自由基、还原能力及总抗氧化活性三个体外化学试验,比较不同部位的抗氧化作用差异.[结果]土茯苓不同洗脱部位（FSGA、FSGB、FSGC、FSGD、FSGE）的总黄酮含量分别为0.60％、99.89％、97.94％、18.21％、16.40％,总酚含量分别为16.09％、47.31％、47.42％、42.79％、32.52％;其清除DPPH自由基能力、还原能力和总的抗氧化活性均随总黄酮和总酚浓度的增加而上升;土茯苓5个洗脱部位均有一定的抗氧化能力,对体外自由基有较好的清除作用.[结论]总酚类物质（总黄酮）可能是土茯芩抗氧化活性的药效物质基础之一.     

土茯苓内生芒果球座菌菌丝体的化学成分研究

目的 研究药用植物土茯苓内生芒果球座菌菌丝体的化学成分.方法 利用正相硅胶柱层析、C18反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析以及制备薄层层析等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质及光谱数据确定化合物的结构.结果 从土茯苓内生芒果球座菌菌丝体中分离并鉴定出7个化合物,分别为:脑苷脂D(1)、腺苷(2)、(...     

土茯苓中黄杞苷的提取工艺优化及其含量测定

目的 优化土茯苓中黄杞苷的提取方法,比较不同产地土茯苓中黄杞苷含量。方法 以黄杞苷含量作为考察指标,采用HPLC法测定其含量;以70%、80%、95%乙醇作为溶剂,采用回流提取、常温超声波辅助提取和常温渗漉提取三种方法进行提取。结果 越南产土茯苓的黄杞苷含量最高为0.0575%。以越南产的土茯苓为原料,最佳提取方法为70%乙醇作为提取溶剂,常温超声波辅助提取,黄杞苷含量为0.0684%。结论 越南产土茯苓的黄杞苷含量相对较高,所确定提取方法提取效率高、能耗低。     

土茯苓对肾性高血压大鼠血压的调节作用和机制

目的观察土茯苓对肾性高血压大鼠血压及血液内血管活性物质的调节作用。方法用两肾两夹法造大鼠高血压模型,将造模成功的大鼠按收缩压分层,分成模型对照组、高(土茯苓6 g/kg)、中(土茯苓3 g/kg)、低(土茯苓1.5 g/kg)剂量组和阳性组(卡托普利5 mg/kg);试验期间各组经口灌胃给予相应药物,每日1次,连续4周。每周测定血压1次,末次给药后,测定大鼠血液中ANP、NO、ET、CGRP和AngII水平。结果土茯苓显著降低了肾性高血压大鼠SBP、DBP和MBP(P<0.05,P<0.01),同时显著降低了ANP、ET的水平(P<0.05,P<0.01),升高了NO的水平(P<0.05)。结论土茯苓具有一定的降血压作用,其作用途径可能通过降低ANP、ET和升高NO的水平,而发挥血压调节的作用。     

菝葜鞣质抗肺癌活性研究

目的探讨菝葜鞣质抗肺癌活性及其作用机制,为菝葜临床用于治疗肿瘤疾患提供科学实验依据。方法采用细胞计数仪测定给药后肺癌细胞的死亡率、流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率、Westrn Blot检测Bcl-2、Bax及CyclinD2蛋白的表达水平。结果菝葜鞣质可升高肺癌细胞死亡率、诱导细胞凋亡并使其细胞周期阻滞在G0/G1期;随着给药浓度的增加,Bcl-2、CyclinD2表达水平下降,Bax的表达水平无明显变化。结论菝葜鞣质具有抗肺癌活性,其作用机制可能是通过下调Bcl-2及CyclinD2的表达促进A549细胞凋亡并使其细胞周期阻滞在G0/G1期。     

山姜属药用植物及生药学研究进展

山羊属植物具有重要的药用价值,不少传统中药及民间药物共原植均来自该属,近年来,国内外学都对山姜属传统中药及其它药用植物,从品种鉴定及以及活性成分的筛选等方面进行了深入的研究。