siRNA抑制PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨siRNA抑制人垂体瘤转化基因PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 LoVo细胞分为3组:正常细胞对照组、Lipo2000+ pGenesil-2.1 HK组(HK阴性对照组)、Lipo2000+ pGenesil-2.1-PTTG siRNA组.应用Western印迹法检测转染48 h后各组细胞PTTG蛋白表达,MTT法检测转染24、48和72 h后各组细胞增殖情况,流式细胞术检测转染48 h后各组LoVo细胞凋亡和细胞周期情况.结果 pGenesil-2.1-PTTG siRNA质粒转染LoVo细胞后PTTG蛋白表达明显低于正常和HK阴性对照组.MTT比色分析法显示,pGenesil-2.1-PTTGsiRNA质粒转染LoVo细胞后,在24、48和72 h细胞增殖能力均显著低于正常对照组和阴性对照HK组(均P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,转染pGenesil-2.1 PTTG siRNA质粒后LoVo细胞Go/G1期细胞百分率均高于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01),而S期细胞百分率均低于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01);Annexin V-PI双染结果显示,转染pGenesil-2.1 PTTG siRNA质粒后LoVo细胞凋亡百分率高于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01).结论 pGenesil-2.1-PTTG siRNA质粒可明显抑制LoVo细胞PTTG蛋白表达,并进而抑制LoVo细胞增殖,促进其凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期.     

原儿茶酸、白杨素对非酒精性脂肪肝细胞模型的抗氧化作用

目的:探讨原儿茶酸、白杨素对非酒精性脂肪肝细胞模型的抗氧化应激作用。方法:人肝细胞L02,随机分为对照组、模型组、原儿茶酸组、白杨素组。除对照组外,其余3组细胞均以20%脂肪乳诱导非酒精性脂肪肝细胞模型。模型诱导成功后,原儿茶酸组添加1. 0μmol/L原儿茶酸,白杨素组添加20. 0μmol/L白杨素,培养24h。收集细胞上清液检测AST、ALT的含量;收集细胞裂解液检测MDA、GSH-Px、TG含量及SOD的活性。结果:(1)与对照组比较,模型组的AST、ALT、TG、MDA水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05); GSH-Px和SOD的含量明显下降,差异有统计学意义(P 0. 05)。(2)与模型组比较,原儿茶酸组及白杨素组的AST、ALT、TG、MDA水平明显下降,差异有统计学意义(P 0. 05); GSH-Px和SOD的含量明显升高,差异有统计学意义(P 0.05)。(3)与原儿茶酸组比较,白杨素组的AST、ALT、TG、MDA水平变化不明显,差异无统计学意义(P 0. 05); GSH-Px和SOD的含量变化不明显,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:原儿茶酸、白杨素可通过抗氧化应激达到保护非酒精性脂肪肝细胞的作用。     

高糖对神经干细胞凋亡的影响

目的探讨高糖环境是否可以诱导神经干细胞凋亡。方法从C57大鼠海马组织提取培养神经干细胞,分为3组:正常对照组、低糖组(5mmol/L)、高糖组(50mmol/L),不同浓度葡萄糖作用48h后,运用琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带、流式细胞术检测细胞凋亡。结果培养的神经干细胞具有形成神经球的能力,Nestin免疫荧光染色呈阳性反应,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。琼脂糖凝胶电泳显示高糖组提取的DNA出现特征性梯状条带,正常对照组和低糖组未出现。流式细胞术检测正常对照组细胞凋亡率(5.83±0.36)%,低糖组细胞凋亡率(6.25±0.52)%,两组比较差异无统计学意义(P0.05);高糖组细胞凋亡率(20.97±1.21)%,与正常对照组和低糖组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论高糖环境可以诱导神经干细胞凋亡。     

IGFBPrP1 siRNA诱导的大鼠肝星状细胞凋亡及其机制

目的研究IGFBPrP1 siRNA对大鼠肝星状细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）,分别设立：正常对照组,阴性对照组,IGFBPrP1 siRNA转染组。IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞,转染不同时间后,用CCK-8试剂盒检测肝星状细胞增殖的变化,AnnexinV/PI双标法流式细胞术检测肝星状细胞凋亡的变化,免疫细胞化学染色法检测P53及Bcl-2蛋白表达的变化。结果 （1）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞不同时间（24、48、72 h）后,转染组细胞增殖受到抑制且凋亡率明显增高,与正常对照组及阴性对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（2）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞48 h后,与正常对照组及阴性对照组相比,转染组P53蛋白的表达量显著增高（P〈0.01）;Bcl-2蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论 IGFBPrP1 siRNA能显著抑制大鼠肝星状细胞增殖且能促进其凋亡;上调P53的表达,下调Bcl-2的表达可能是IGFBPrP1 siRNA诱导大鼠肝星状细胞凋亡的途径之一;推测抑制IGFBPrP1的表达有可能成为治疗肝纤维化的新靶点。     

小鼠PARP1基因RNAi表达载体对Lewis细胞株的影响

目的 观察PARP-1基因RNAi表达载体对Lewis肺癌细胞的抑制及凋亡情况.方法 以脂质体Lipofectimine? 2000介导,将PARP-1-1308的siRNA表达载体转染Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组.应用MTT法检测转染细胞抑制率、流式细胞术分析转染siRNA后细胞的凋亡,并应用RT-PCR检测转染细胞Parp1 mRNA表达水平.结果 siRNA转染组及2Gy照射组的吸光度值与空白对照组比较差异有显著意义;2Gy照射组+ siRNA组的吸光度值与2Gy照射组、siRNA组比较差异有显著意义.错义序列组与正常对照组比较无显著差异;2Gy照射组+错义序列组与2Gy照射组比较无显著差异.2Gy照射组+ siRNA组对Lewis肺癌细胞的抑制率最高.RT-PCR检测结果 显示转染细胞Parp1 mRNA表达水平降低.siRNA转染、2Gy照射可诱导Lewis肺癌细胞凋亡,与正常对照组比较差异显著(P＜0.05),并且siRNA转染可增加2Gy照射引起的Lewis肺癌细胞凋亡.结论 针对PARP-1的RNAi可以提高Lewis肺癌细胞的抑制率及放疗引起的肿瘤细胞的凋亡.     

五味子多糖对SHG-44细胞产生血管内皮生长因子和Caspase-8的影响

目的探讨五味子多糖(CPSC)作用于胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8产生的影响,并探讨其可能的机制。方法培养胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和CPSC 50、100、200 mg/L组,分别于培养24、48、72 h时观察各组细胞增殖活力,并利用酶联免疫吸附实验(ELISA)观察CPSC作用SHG-44细胞后,细胞分泌VEGF和Caspase-8蛋白情况。结果与对照组比较,作用48、72 h时,CPSC各浓度组SHG-44细胞的增殖活性均明显受抑制,与对照组比较统计学意义显著(P0. 05或P0. 01)。50、100、200 mg/L CPSC作用SHG-44细胞72 h后,SHG-44细胞分泌VEGF蛋白水平呈下降趋势,与对照组比较,各浓度CPSC组差异均有统计学意义(P0. 05或P0. 01); Caspase-8蛋白分泌水平亦升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0. 05或P0. 01)。结论 CPSC通过抑制SHG-44细胞分泌VEGF蛋白,促进其产生Caspase-8蛋白,进而抑制肿瘤细胞的生长。     

静脉溶栓对中老年急性脑梗死合并脑微出血的影响

目的探讨静脉溶栓对急性脑梗死合并脑微出血的临床效果。方法选取74例中老年急性脑梗死合并脑微出血患者为研究对象,分成两组,对照组(37例)给予抗血小板治疗,观察组(37例)。给予静脉溶栓治疗,观察治疗后两组疗效、并发症、改良RANKIN量表评分、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NHISS)评分变化情况。结果对照组治疗后治愈率、恶化率、总有效率与观察组比较差异均有统计学意义(P0. 05);两组治疗后2 h、24 h、7 d、14 d NHISS评分较治疗前均有显著下降(P0. 05),观察组治疗后2 h、24 h、7 d NHISS评分较对照组改善更加显著(P0. 05),两组治疗后14 d NHISS评分差异无统计学意义(P0. 05);对照组再灌注损伤、颅内出血、血管闭塞发生率与观察组比较差异均有统计学意义(P0. 05);两组改良RANKIN量表评分比较差异有统计学意义(P0. 05)。结论静脉溶栓对急性脑梗死合并脑微出血临床效果显著。     

丁基苯酞抑制晚期糖基化终产物诱导的内皮细胞损伤及其机制

目的探讨丁基苯酞(NBP)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法常规培养原代人脐静脉内皮细胞,细胞采用200 mg/ml AGEs干预48 h,同浓度牛血清白蛋白(BSA)作为正常对照组。其中,AGEs干预组预先加入不同浓度NBP(0. 1、1. 0、10. 0、和100. 0μmol/L)共同孵育0. 5 h,0μmol/L NBP设为阳性对照组。MTT法检测各组细胞增殖率,Hoechst 33258检测细胞凋亡,流式细胞学检测细胞内活性氧自由基(ROS)生成量,蛋白印迹检测Bcl-2和Bax的表达,硝酸盐还原法检测一氧化氮(NO)含量,逆转录实时定量PCR检测e NOS和i NOS表达。结果 NBP组细胞增殖率逐渐升高,1. 0、10. 0和100. 0μmol/L NBP组细胞增殖率与阳性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05)。Hoechst 33258染色显示阳性对照组细胞质内含有大量浓染致密的颗粒块状荧光,NBP组则明显减少。NBP促进Bcl-2蛋白表达,其中10. 0和100. 0μmol/L NBP组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05); NBP抑制Bax蛋白表达,其中1. 0、10. 0和100. 0μmol/L NBP组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05)。NBP抑制了细胞内ROS生成,各NBP组ROS生成的荧光值与阳性对照组比较差异均有统计学意义(均P0. 05)。AGEs诱导后,阳性对照组细胞内NO合成明显减少,NBP干预后细胞内NO合成逐渐增加,1. 0、10. 0和100. 0μmol/L NBP组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05)。NBP促进e NOS m RNA表达,并抑制i NOS m RNA表达,其中10. 0和100. 0μmol/L NBP组与阳性对照组比较差异有统计学意义(均P0. 05)。结论 NBP能有效抑制AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞损伤。抑制氧化应激损伤和调节NOS表达可能是NBP保护内皮细胞的机制。     

干扰Sema4D基因表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响

目的探讨干扰Sema4D基因的表达对胰腺癌细胞生物学的影响。方法设计合成Sema4D-siRNA,转染到人胰腺癌细胞系中,将实验分为3组,转染siRNA组、阴性对照组(即转染非特异性对照组)﹑空白对照组(未经任何处理的胰腺癌细胞)。转染48 h后利用RT-q PCR检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化,转染72 h后利用Western-Blot的方法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell小室侵袭试验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变;采用流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析比较,进一步两两比较采用LSD-t检验法。结果转染Sema4D-siRNA 48 h后,转染siRNA组Sema4D mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,3组比较差异有统计学意义(F=421.990,P<0.001)。转染Sema4D-siRNA 72 h后,转染siRNA组Sema4D蛋白明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(F=27.074,P=0.002 3)。转染siRNA组48、72、96 h的细胞生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为15.314、62.255、223.493,P值分别为0.004、<0.001、<0.001)。转染siRNA组穿膜细胞个数明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(42.0±5.9 vs 60.0±6.1 vs 61.0±4.6,F=37.21,P=0.000 4]。转染siRNA组穿膜细胞凋亡率明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义[(16.57±0.31)%vs(9.50±0.45)%vs(9.90±0.61)%,F=26.75,P=0.007 4]。结论 siRNA能够下调Sema4D基因在胰腺细胞中的表达,可以抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力明显下降,凋亡率下降。     

硫化氢在外源性SB203580预处理人卵巢癌细胞增殖与凋亡中的作用

目的探讨硫氢化钠(Na HS,H2S供体)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对人卵巢癌细胞(SKOV3细胞株)增殖与凋亡的调控作用。方法体外培养人卵巢癌细胞,随机分为正常对照组、Na HS (0. 01 mol/L)组、SB203580(0. 1 mol/L)组、Na HS联合SB203580组,每组均经药物干预处理48 h后收集细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测,细胞周期分布与细胞凋亡率均采用流式细胞术检测。结果 (1)与正常对照组比较,Na HS组、SB203580组、Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率均显著升高,G1期细胞比例均明显增加,S期细胞均明显减少,且细胞凋亡率均明显增加,差异有统计学意义(均P0. 01)。(2)SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率、细胞周期各时相分布、细胞凋亡率均与Na HS组比较差异无统计学意义(P0. 05),而与Na HS组比较,Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率明显增加,G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少,且细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(均P0. 01)。(3)与SB203580组相比,Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率明显增加,G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少,且细胞凋亡率显著增高,差异有统计学意义(均P0. 01)。结论 H2S可能通过抑制p38MAPK信号通路抑制人卵巢癌细胞的增殖,促进人卵巢癌细胞凋亡,且H2S可协同SB203580调节人卵巢癌细胞的增殖与凋亡。     

慢性间歇性低氧对大鼠胰岛β细胞功能的影响及利拉鲁肽对胰岛β细胞的保护作用

目的观察慢性间歇性低氧对大鼠胰岛β细胞功能的影响,探讨胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽对胰岛β细胞的保护作用。方法 36只SD雄性大鼠随机分为常氧对照组12只,间歇性低氧组24只。造模第8周结束后,两组大鼠均进行胰岛β细胞原代提取,常氧对照组随机分为常氧组和高糖刺激组;间歇性低氧组随机分为模型组、利拉鲁肽(10、50、100 nmol/L)干预组。ELISA法检测各组大鼠胰岛β细胞上清中8-异前列腺素(8-ISO)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达水平;流式细胞仪检测各组胰岛β细胞凋亡率; Western-blot法检测胰岛β细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达。结果与正常对照组比较,模型组和高糖刺激组大鼠胰岛β细胞上清液中8-ISO水平升高,而GSH-Px在模型组及高糖刺激组低于正常对照组,差异有统计学意义(P 0. 05);同时,模型组及高糖刺激组胰岛β细胞凋亡率升高,Caspase-3在胰岛β细胞表达上调,差异有统计学意义(P 0. 05),但高糖刺激组较模型组差异更明显。与模型组比较,利拉鲁肽干预后胰岛β细胞上清液中8-ISO水平降低,而GSH-Px升高,差异有统计学意义(P 0. 05);药物干预后Caspase-3蛋白表达低于模型组,且高浓度组较中低浓度组变化更明显。结论间歇性低氧导致的氧化应激可能是睡眠呼吸暂停综合征胰岛功能损伤的重要机制,GLP-1类似物利拉鲁肽通过对氧化物质的调节,从而减轻胰岛β细胞凋亡,保护胰岛β细胞。     

针对caspase-3基因的RNA抑制对缺血再灌注神经细胞的保护作用

目的探讨针对caspase-3基因的RNA抑制对缺血再灌注(I/R)神经细胞凋亡的影响,为I/R神经细胞基因治疗的可行性提供依据。方法 NGF诱导PC12细胞为类神经细胞。细胞随机分为对照组、模型组、GFPsiRNA组;caspase-3siRNA组。于制作模型前24h进行转染。于造模后对caspase-3及细胞凋亡率等指标进行检测。结果 (1)凋亡率:模型组细胞(48.30±12.15)明显高于对照组(5.00±1.08),差异有显著性(P0.01);caspase-3siRNA组(7.04±2.00)明显低于模型组(P0.01)。(2)Caspase-3阳性率:模型组模型组的caspase-3阳性率〔(36.55±8.72)%〕明显高于对照组〔(10.25±2.50)%〕,差异有统计学意义(P0.01);caspase-3siRNA组caspase-3阳性率〔(12.25±3.25)%〕明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.01)。结论针对caspase-3的siRNA能有效地抑制细胞凋亡。对缺血再灌注神经细胞损伤有一定的保护作用。     

姜黄素对直肠癌CD133~+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响

目的探讨姜黄素对直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响。方法应用免疫磁珠分选器、阳性分离柱分选出直肠癌CD133+肿瘤干细胞,随机分成姜黄素组、姜黄素联合放疗组、放疗组,应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测24、48、72 h各组细胞生长抑制情况;膜联蛋白V-异硫氨基荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染色检测细胞凋亡率。结果姜黄素组随着时间变化肿瘤细胞抑制率变化不大(P0.05);放疗组和姜黄素联合放疗组24、48、72 h细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05);同期三组细胞生长抑制率均有统计学意义(P0.05),两两比较24 h细胞生长抑制率,姜黄素组与姜黄素联合放疗组和放疗组之间差异有统计学意义(P0.05),姜黄素联合放疗组与放疗组之间差异无统计学意义(P0.05);48、72 h抑制率两两之间差异均有统计学意义(P0.05);姜黄素组48 h与72 h之间细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),姜黄素联合放疗组和放疗组48 h与72 h之间细胞凋亡率之间差异具有统计学意义(P0.05)。同期内不同组细胞凋亡率之间的差异有统计学意义(P0.05),两两比较细胞凋亡率之间差异具有统计学意义(P0.05)。结论姜黄素可以增加直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性,抑制肿瘤细胞生长促进细胞凋亡。     

连续胸椎旁神经阻滞联合右美托咪定静脉镇痛在老年乳腺癌手术麻醉中的应用价值

目的探讨连续胸椎旁神经阻滞联合右美托咪定静脉镇痛在老年乳腺癌手术麻醉中的应用价值。方法选取2016-01～2017-12在该院就诊并接受外科手术治疗的老年乳腺癌患者96例,采用随机数字表法将其分为观察组(48例)和对照组(48例)。对照组采用局部浸润及静脉镇痛法麻醉,观察组采用超声引导下连续胸椎旁神经阻滞联合右美托咪定静脉镇痛法麻醉。比较两组术中一般指标、麻醉效果及术后恢复情况。结果两组年龄、体重、手术用时、术中出血量及补液量比较差异无统计学意义(P 0. 05),但观察组丙泊酚、瑞芬太尼用量显著少于对照组(P 0. 05);两组患者不同时点普通血流动力学CVP水平比较差异无统计学意义(P 0. 05),但T2、T3、T4时点时观察组MAP、HR水平显著低于对照组(P 0. 05);两组患者精确血流动力学指标比较差异均无统计学意义(P 0. 05);术后2 h、6 h、12 h时观察组静息VAS、活动VAS以及Ramsay镇静评分均显著优于对照组(P 0. 05)。术后观察组不良反应、并发症发生率显著低于对照组(P 0. 05)。结论老年乳腺癌外科手术麻醉应用连续胸椎旁神经阻滞联合右美托咪定静脉镇痛可提升术中麻醉效果,使患者术中血流动力学指标及循环系统保持稳定。     

PAK6基因对人乳腺癌放疗敏感性及细胞凋亡影响及机制

目的探讨P21激活的蛋白激酶(PAK)6基因对乳腺癌细胞放疗敏感性及细胞凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-468为研究对象,细胞转染PAK6小干扰RNA(PAK6 siRNA组)和阴性对照序列(siRNA对照组),qRT-PCR和Western印迹检测转染效果。流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放疗敏感性,Western印迹检测细胞中β-连环蛋白(catenin)、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3表达水平。结果 siRNA对照组PAK6mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率及细胞中β-catenin、c-myc、酶切Caspase-3蛋白水平与未转染组相比差异无统计学意义(P0.05)。PAK6 siRNA组PAK6 mRNA和蛋白水平均明显低于未转染组,细胞凋亡率及细胞中酶切Caspase-3蛋白水平明显高于未转染组,细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平明显低于未转染组(P0.01)。PAK6 siRNA组放疗敏感性较未转染组显著增加,增敏比为:1.896。结论干扰PAK6表达能够促进乳腺癌细胞凋亡,增加乳腺癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Wnt信号通路及酶切Caspase-3水平有关。     

小分子抑制剂VLT对乳腺癌细胞生长的影响

目的研究小分子抑制剂VLT对乳腺癌细胞生长的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测乳腺癌细胞在不同时间段(12、48、72 h)的细胞增殖活性;流式细胞仪检测乳腺癌细胞周期及细胞凋亡率的变化。结果小分子抑制剂VLT对乳腺癌细胞具有明显的抑制作用,并在48 h作用最为明显;VLT 2 000μg/ml组与正常对照组及VLT 1 000μg/ml组比较显著差异(P0.05);G_0/G_1期细胞显著升高,S期细胞数减少;细胞凋亡率明显增加,VLT 2 000μg/ml组分别与空白对照及VLT 1 000μg/ml组比较均差异显著(P0.05)。结论小分子抑制剂VLT可能通过细胞周期的改变,抑制肿瘤细胞增殖,发挥抗肿瘤生长作用。     

补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响

目的观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制。方法复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细胞迁移实验。显微镜下观察并计数迁移至小室膜下层的心脏干细胞数; RT-PCR法检测各组心脏成纤维细胞干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中迁移相关因子SCF、SDF-1的蛋白分泌量。结果对照组、模型组、补阳还五汤组心脏干细胞迁移数呈递增趋势,对照组与模型组比较差异有统计学意义(P0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(P0. 05); SCF、SDF-1 mRNA表达在对照组、模型组、补阳还五汤组之间存在下调后上调的变化趋势,模型组与对照组比较差异有统计学意义(均P0. 05),补阳还五汤与模型组比较差异有统计学意义(均P0. 05);三组SCF、SDF-1蛋白分泌变化趋势与RT-PCR结果一致,模型组与对照组比较SCF差异有统计学意义(P0. 05),SDF-1差异无统计学意义(P0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(均P0. 05)。结论补阳还五汤可促进缺氧预适应心脏成纤维细胞诱导的心脏干细胞迁移,其机制可能与上调心脏成纤维细胞迁移相关因子SCF、SDF-1的表达有关。     

针对caspase-3基因的RNA抑制对帕金森病细胞的抗凋亡作用

目的 探讨针对caspase-3基因的 RNA抑制对帕金森病细胞的抗凋亡作用.方法 NGF诱导PC12细胞为类神经细胞.细胞随机分为对照组、模型组、GFP siRNA组、caspase-3 siRNA组.对照组用完全培养液培养,其他3组细胞用6-羟基多巴胺制作帕金森病细胞模型.于制作模型前24 h进行转染.造模后对caspase-3及细胞凋亡率等指标进行检测.结果 (1)凋亡率:模型组细胞凋亡率[(65.36±10.10)%]明显高于对照组[(5.00±1.00)%],有显著性差异(P<0.01);caspase-3 siRNA组[(19.00±4.08)%]明显低于模型组(P<0.01).(2)caspase-3阳性率:模型组的caspase-3阳性率[(30.15±7.02)%]明显高于对照组[(8.20±2.45)%],差异有统计学意义(P<0.01);caspase-3 siRNA 组caspase-3阳性率[(12.00±2.90)%]明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 针对caspase-3的 siRNA能有效地抑制帕金森病细胞凋亡,对6-羟基多巴胺毒性作用下的神经细胞损伤有一定的保护作用.     

氟西汀对脑卒中后抑郁大鼠学习记忆能力和氧化应激反应的影响

目的探讨氟西汀对脑卒中后抑郁大鼠学习记忆能力和氧化应激反应的影响。方法 SPF级SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、阳性对照组、试验组,每组10只。正常组给予等剂量生理盐水灌胃,每天1次;模型组于造模成功后给予等剂量生理盐水灌胃,每天1次;阳性对照组给予盐酸文拉法辛胶囊10 mg/kg灌胃,每天1次;试验组给予大鼠盐酸氟西汀胶囊10 mg/kg,每天1次。采用开野试验检测大鼠自主活动次数,采用Morris水迷宫试验检测大鼠逃避潜伏期和空间探索时间,采用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果与正常组比较,模型组、阳性对照组和试验组大鼠自主活动次数明显降低(P0. 05);与模型组比较,阳性对照组和试验组大鼠自主活动次数明显增加(P0. 05);试验组大鼠自主活动次数明显多于阳性对照组(P0. 05),差异均有统计学意义。与正常组比较,模型组、阳性对照组和试验组大鼠逃避潜伏期明显延长(P0. 05);与模型组比较,阳性对照组和试验组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0. 05);试验组大鼠逃避潜伏期明显低于阳性对照组(P0. 05),差异均有统计学意义。与正常组比较,模型组、阳性对照组和试验组大鼠空间探索时间明显降低(P0. 05);与模型组比较,阳性对照组和试验组大鼠空间探索时间明显延长(P0. 05);试验组大鼠空间探索时间明显长于阳性对照组(P0. 05)。与正常组比较,模型组、阳性对照组和试验组海马组织内SOD水平明显降低,而MDA水平明显升高(P0. 05);与模型组比较,阳性对照组和试验组海马组织内SOD水平明显升高,而MDA水平对照下降(P0. 05);试验组海马组织内SOD水平明显高于阳性对照组,而MDA水平低于阳性对照组(P0. 05),差异均有统计学意义。结论氟西汀可改善脑卒中后抑郁大鼠学习记忆能力,认为其机制可能与降低脑内MDA水平和增加SOD水平相关。     

β-细辛醚对ox-LDL损伤ECV304细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

目的观察石菖蒲有效成分β-细辛醚对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）损伤的人血管脐静脉内皮细胞株（ECV304）凋亡和线粒体膜电位（MMP）的影响。方法将ECV304细胞分为正常对照组、模型组及β-细辛醚高、中、低剂量组，采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡百分率和MMP平均荧光强度。结果ox-LDL损伤模型组细胞凋亡率增高，MMP明显降低，与正常对照纽比较有统计学意义（P〈0．001）；8一细辛醚能不同程度降低细胞凋亡率、稳定MMP，与模型纽比较有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论β-细辛醚能有效抑制ox-LDL对ECV304细胞线粒体的损伤，稳定MMP，抑制细胞凋亡。