基于TGF-β1/Smads信号通路中医药抗纤维化研究进展

组织器官纤维化是多种细胞因子、多条信号通路共同作用的产物,转化生长因子β1(TGF-β1)几乎参与了纤维化发生进展的全过程,是当前最强促纤维化细胞因子之一.TGF-β1主要通过TGF-β1/Smads信号通路发挥促纤维化作用,近年来关于该信号通路的研究成果不断增多.中医药因其成分复杂、靶点多样、不良反应少等优势被广泛应...     

疏肝健脾活血方对肝星状细胞增殖的影响

目的:采用细胞培养的方法,体外观察疏肝健脾活血方药物血清对转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)诱导的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)增殖作用的影响。方法:将40只大鼠随机分成正常大鼠血清组,疏肝健脾活血方低剂量组,疏肝健脾活血方中剂量组,疏肝健脾活血方高剂量组。以疏肝健脾活血方给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。采用TGFβ1诱导HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,以不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清作用于体外培养的HSC-T6,分别作用24 h、48 h后,采用CCK-8法检测不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清对HSC-T6增殖的影响。结果:疏肝健脾活血方药物血清作用于TGFβ1诱导的HSC-T6,细胞增殖受到明显抑制。各组作用48 h后,空白对照组OD值为(0.617±0.061),疏肝健脾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组OD值分别为(0.446±0.091)、0.417±0.103)、(0.376±0.065),疏肝健脾活血方各剂量组与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。正常大鼠含药血清组OD值为(0.506±0.015),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:疏肝健脾活血方药物血清对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化作用增殖有抑制作用。     

大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用及对TGF-β1/Smads信号通路的影响[*]

目的 观察大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用,探究其作用与TGF-β1/Smads信号通路的关系。方法 将SD雄性大鼠随机分为3组,采用单侧输尿管结扎术（UUO）建立肾间质纤维化模型,造模后24h予大蒜素组大鼠大蒜素60mg/(kg?d)灌胃,予假手术组和模型组等量生理盐水灌胃。造模后第15日检测3组大鼠的血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）及24h尿蛋白（U-TP）,并处死大鼠,留取肾组织,包埋切片后行Masson染色,观察肾组织的病理结构,运用免疫组化法检测大鼠肾组织中TGF-β1及α-SMA的表达,Western Blot法测定肾组织中p-Smad2和p-Smad3的表达。结果 与模型组相比,大蒜素组大鼠的体质量显著增高［（298.52±14.82）g比（275.53±23.92）g,P<0.05］,肾脏指数显著下降［（0.53±0.15）%比（0.84±0.25）%,P<0.01］,肾脏组织病变程度有所改善,SCr、BUN及U-TP均显著低于模型组［SCr：（48.54±5.03）μmol/L比（55.10±7.50）μmol/L,BUN：（5.56±0.43）mmol/L比（6.25±0.51）mmol/L,U-TP：（1009.87±105.02）mg/L比（1300.57±229.65）mg/L ,P<0.05］,肾组织中TGF-β1、α-SMA、p-Smad2和p-Smad3蛋白的表达均有下调［TGF-β1：（0.227±0.011）比（0.282±0.020）,α-SMA：（0.326±0.009）比（0.471±0.012）,p-Smad2：（0.195±0.011）比（0.279±0.016）,p-Smad3：（0.220±0.020）比（0.699±0.076）,P<0.01］。结论 大蒜素能够通过调节TGF-β1/Smads信号通路,从而改善大鼠的肾间质纤维化程度,对肾功能起到一定的保护作用。     

金氏补肾活血方对卵巢储备功能减退大鼠TGF-β1/Smads信号通路及性激素的影响

目的 观察金氏补肾活血方对卵巢储备功能减退模型大鼠的性激素、卵巢组织形态的作用及其调节转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的可能机制。方法 将50只SD雌性大鼠随机分为5组:空白组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组均给予环磷酰胺75 mg/kg腹腔注射,复制卵巢储备功能减退(DOR)大鼠模型。经灌胃治疗后,阴道涂片观察大鼠动情周期变化、酶联免疫法(ELISA)检测血清性激素、苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织形态、荧光定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测大鼠卵巢转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、Smad7的基因表达。结果 与空白组比较,膜型组大鼠的动情周期丧失规律性,血清雌二醇(E₂)、抗缪勒管激素(AMH)水平显著降低(P<0.01),促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平显著升高(P<0.01),卵巢指数、子宫指数明显降低(P<0.05),卵泡发育出现闭锁,卵巢中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达量均减少(P<0.01),Sma...     

红景天甙对大鼠肝组织TGF-β1/Smads信号通路的作用

目的:结扎肝动脉(Hepatic artery ligation,HAL)建立急性大鼠肝损伤模型,探讨药物红景天甙对大鼠肝损伤时TGF-β1、Smad2/3、P-Smad2/3、及c-ski表达的影响.方法:66只Wistar大鼠随机分为对照组、肝动脉结扎组和红景天甙干预组,结扎分为1、2、4、6、8h5个时间段,红景...     

基于TGF-β1/Smads信号通路的miRNA在心肌纤维化的研究进展

心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是多种心血管疾病终末阶段的主要病理表现,转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smads（drosophila mothers against decapentaplegic）信号通路的异常激活广泛参与纤维化疾病的发生,是导致心肌纤维化的关键通路;微小RNA(microRNA,miRNA）是一类内源性小分子非编码RNA,具备调控功能,主要在转录后水平调控基因的表达。现有研究已表明,miRNA是影响TGF-β1/Smads信号转导的重要调节因子,深入阐明TGF-β1/Smads信号通路相关的miRNA在心肌纤维化中的调控机制,可以为预防、诊断及治疗心肌纤维化提供新的研究思路。     

肝纤维化TGF-β1/smad信号通路中医药研究进展

肝纤维化主要病理改变为细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）过度沉积,降解相对不足。活化的肝星状细胞（Hepatic stell atecell,HSC）是ECM的主要来源,也是肝纤维化发生的关键环节。     

中药肝心宁对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的：研究中药肝心宁对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-β1及Smad-3表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法：采用四氯化碳皮下注射并饲以高脂低蛋白饲料和30%酒精诱导大鼠肝纤维化模型,68只雄性SD大鼠随机分成5组：正常组（11只）、模型组（15只）、阳性对照组（14只）、肝心宁高剂量组（14只）和肝心宁低剂量组（14只）,6周末处死所有动物,行HE染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TGF-β1 mRNA、Smad-3mRNA的表达水平。结果：与正常对照组相比,模型组TGF-β1 mRNA、Smad-3 mRNA表达明显增强。经肝心宁治疗后大鼠肝脏TGF-β1表达比模型组减弱,肝心宁同时下调Smad3的表达。另外,肝心宁组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：肝心宁可下调TGF-β1 mRNA、Smad-3 mRNA蛋白的表达,从而抑制或减轻肝纤维化的形成。     

宫腔粘连内膜纤维化进展与TGF-β1/Smads信号通路的相关性研究*

目的 通过对宫腔粘连（IUA）患者子宫内膜病理切片进行回顾性分析,明确IUA内膜纤维化进展与TGF-β1/Smads信号通路的相关性。方法 随机调取2018年1月至2019年5在云南中医药大学第一附属医院(云南省中医医院)妇科就诊的IUA患者子宫内膜内膜组织病理切片30例（轻、中、重各10例）;非粘连子宫内膜病理切片10例,为同期因宫内膜增厚行宫腔镜刮宫术,且内膜组织病检证实为子宫内膜单纯性增生10例。采用HE染色进行腺体计数,Masson染色评估胶原纤维面积明确IUA纤维化程度;免疫组化法检测与TGF-β1/Smads信号通路相关的TGF-β1、Smad2、 Smad3、Smad7表达水平,证实TGF-β1/Smads信号通路与IUA发生发展的相关性。结果 HE染色显示,IUA组较非IUA组腺体明显减少,差异显著（P<0.001）,且与粘连程度呈负相关。Masson染色显示,IUA组较非IUA组胶原纤维面积广泛,差异显著（P<0.001）,且与粘连程度呈正相关。IHC检测结果显示,IUA组TGF-β1、Smad3、Smad2表达明显上调,Smad7表达明显下调,差异显著（P<0.01）,且其中TGF-β1、Smad3与粘连程度呈正相关,Smad7与粘连程度呈负相关,而Smad2与粘连程度无明显相关（P>0.05）。结论 子宫内膜纤维化进展参与了IUA的发生、发展,且子宫内膜组织TGF-β1/Smads信号通路激活可能参与了这一过程。调节TGF-β1/Smads信号通路相关分子表达可作为防治IUA内膜纤维化进展的靶点之一。     

健脾疏肝法、活血化瘀法对肝纤维化小鼠肝组织TIMP-1及血清纤维化指标的影响

目的：观察健脾疏肝法、活血化瘀法分别对肝纤维化小鼠肝组织TIMP-1及血清纤维化指标的影响。方法：选雄性Wistar小鼠75只,随机分为正常对照组、模型对照组、健脾疏肝组、活血化瘀组、秋水仙碱组各15只,除正常对照组外,各组采用40%CCL4橄榄油腹腔注射诱导小鼠肝纤维化。空白对照组15只,腹腔注射0.9%生理盐水0.5 mL,给药方法及时间同上。造模后第5周,各组给予不同药物干预（10mL/kg）,正常对照组和模型对照组给予0.9%生理盐水10 mL/kg体重灌胃;健脾疏肝组予健脾疏肝方;活血化瘀组予复方鳖甲软肝片;秋水仙碱组给予秋水仙碱。8周后处死动物取肝组织,检测肝脏组织中的TIMP-1、血清纤维化指标。结果：活血化瘀组、健脾疏肝组、秋水仙碱组小鼠血清纤维化指标明显低于模型对照组（P〈0.05）,其中健脾疏肝组优于其他两组。并且活血化瘀组、健脾疏肝组、秋水仙碱组大鼠肝组织中TIMP-1均低于模型对照组（P〈0.05）,其中健脾疏肝组优于其他两组。结论：疏肝健脾法能够有效的治疗肝纤维化,其机制可能与抑制肝脏组织中的TIMP-1的表达有关。     

酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1／Smads信号分子表达的变化

目的观察TGF-1／Smads信号分子在酒精性肝纤维化大鼠肝组织中的变化,探讨酒精性肝纤维化的发病机制。方法50只SD大鼠,随机分成模型组和对照组各25只。模型组用56度白酒灌胃（15m1．kg-1·d-1）致肝纤维化,对照组以等量生理盐水代替灌胃。6个月后全部处死取肝待检。采用HE染色观察肝纤维化程度,免疫组化法观察肝组织中TGF-β1蛋白的表达水平,RT-PCR法观察肝组织中TGF—β1和SmadsmRNA的表达水平。结果6个月酒精灌胃能成功制作大鼠酒精性肝纤维化模型。和对照组相比较,模型组肝组织中TGF—p1蛋白表达水平显著升高（P〈0．01）,TGF-β1,smad3,samd4mRNA表达水平显著升高（均P〈0．01）,而smad7mRNA水平显著降低（P〈0．05）。结论TGF-βl／Smads信号通路参与酒精性肝纤维化的形成过程,其中Smad7起着对肝纤维化负调控的作用。     

丹参酮ⅡA对胆道闭锁肝纤维化大鼠SMAD4 SMAD7及I型胶原蛋白的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA通过调控SMAD4、SMAD7蛋白延缓胆道闭锁肝纤维化的机制。方法 30只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、吡非尼酮组（300 mg/kg）和丹参酮ⅡA组（20 mg/kg）,每组6只。除正常组和假手术组外,其余各组鼠采用胆总管注射无水乙醇的方法复制胆道闭锁肝纤维化模型,造模后第1天,吡非尼酮组和丹参酮ⅡA组鼠给予相应药物灌胃,假手术组和模型组鼠给予等体积生理盐水（10 mL/kg）灌胃。给药20 d后,采用戊巴比妥钠过量麻醉动物留取标本,比较各组间大鼠血液生化指标及肝脏组织病理学改变;检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平;Western blot检测肝组织SMAD4、SMAD7的表达以及肝组织中collagen I的表达。结果 与正常组相比,模型组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素升高（P<0.05）,肝组织呈明显的纤维化改变,肝组织SMAD4、collagen I蛋白表达水平升高,SMAD7表达降低（P<0.05）;丹参酮ⅡA治疗后,SMAD4、collagen I表达水平下降,SMAD7表达升高（P<0....     

TGF-β_1/Smads信号转导通路在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

TGF-β1/Smads通路对呼吸系统疾病有重要影响,可引发一系列与气道重塑相关的病理反应。慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生、发展与气道重塑密切相关,成纤维细胞增生、杯状细胞增生、胶原与氨基聚糖沉积、黏液腺增生及肥大均与COPD的气道重塑相关,TGF-β1参与并调节了这些病理过程。Smad2、Smad3、Smad4也参与了COPD的气道重塑过程。目前国内关于TGF-β1/Smads与COPD相关性的实验研究较少,尚未见临床观察。TGF-β1/Smads信号转导通路在COPD发生、发展中的作用还有待进一步阐明,中医药在COPD临床与实验研究中显示良好作用及应用前景,但目前研究主要还集中在单一因子或单一作用环节,对TGF-β1/Smads等其他信号转导通路作用的研究尚少。     

低氧对大鼠肺组织结构的影响及其机制的探讨

目的观察间歇性常压低氧对SPF级SD大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、通道蛋白Smad4、Ⅰ型胶原、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肺组织结构的影响。方法将SD大鼠置于常氧或间歇性常压低氧(101kPa,10%O2,每天低氧8h)条件下,分别于3、7、14、21d每组处死5只大鼠,HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测肺组织TGF-β1、Ⅰ型胶原表达,RT-PCR检测TGF-β1、Ⅰ型胶原的mRNA表达量,Westernblot法检测Smad4通道蛋白的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α的表达。结果 HE染色提示低氧第3d低氧组大鼠肺组织即出现轻度水肿及炎症细胞浸润,且随低氧时间延长,炎症反应加重,肺泡间隔逐渐增厚;低氧组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4、Ⅰ型胶原蛋白表达量及TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA均较对照组高(P<0.01),随低氧时间延长,各因子表达量逐渐增高,且Smad4蛋白表达水平与TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.944,P<0.01);肺泡灌洗液中TNF-α表达量较对照组高(P<0.01)。结论低氧可能通过诱发肺组织水肿及炎症反应,上调TNF-α水平、激活TGF-β1/Smads通路从而增加Ⅰ型胶原合成,引发细胞外基质沉积,肺泡间隔增厚。     

前列地尔注射液对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治及机制

目的观察前列地尔注射液对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治作用,探讨其可能的作用机制。方法SD大鼠40只,随机分为4组：正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）、前列地尔治疗组（DM＋Alp组）、缬沙坦治疗组（DM＋Val组）。对照组给予普通饲料喂养;其余3组高脂高糖饲料喂养,连续喂养8周后一次性尾静脉注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）30mg／kg构建糖尿病大鼠模型,各组大鼠给予相应的药物干预措施。12周后检测心功能;计算心脏指数fH／B）及左心室质量指数（left ventrieular mass index, LVMI）;Masson染色光镜下观察心肌间质胶原纤维沉积情况,Proplus6．0图像分析系统测算心肌胶原容积分数（collagen volume fraction, CVF）;氯胺T法测定心肌组织羟脯氨酸含量,代表心肌胶原总含量;Elisa试剂盒测定血液中血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、转化生长因子-β1（transforming growth factor- β1, TGF- β1）的浓度;Western—blotting检测心肌组织信号通路相关蛋白TGF—β1、Smad2、p-Smad2、Smad7的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠心功能状态差,H／B、LYMI、CVF及心肌组织羟脯氨酸含量均明显升高（P〈0．01）,血液中AngⅡ、TGF-β1的浓度亦显著升高（P〈0．01）,心肌组织内TGF—β1、Smad2、p-Smad2的表达水平显著上调,Smad7的表达量则明显下降（P〈0．01）;前列地尔和缬沙坦治疗组上述指标均明显改善,两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论前列地尔注射液在一定程度上能够抑制糖尿病大鼠心肌纤维化的发生,机制可能与减弱心肌组织内TGF—β1／Smads信号转导通路的过度激活有关。     

红芪多糖对db／db小鼠糖尿病心肌病TGF-β1／Smads信号通路影响的实验研究

目的通过研究红芪多糖(HPS)对db/db小鼠糖尿病心肌病(DCM)心肌组织中TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨其对DCM小鼠心肌纤维化的影响。方法将60只6周龄雄性db/db小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量组,罗格列酮组和模型组;正常组为12只同周龄同背景的非转基因雄性db/m小鼠。连续灌胃干预8周。于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组小鼠体重、血糖;HE染色观察小鼠左心室心肌纤维病理形态学变化;Masson染色观察小鼠左心室心肌胶原纤维化程度;Western blot、RT-PCR法检测心肌组织TGF-β_1及Smad2、Smad3蛋白和mRNA的表达。结果经HPS治疗8周后,HPS高、中剂量组和罗格列酮组血糖较模型组下降明显(P0.05);HE染色可见模型组心肌细胞结构模糊,部分区域明显肿胀变形且细胞核消失;Masson染色可见亮绿色胶原纤维在模型组心肌细胞间及血管周围较正常组明显增多且呈堆积状分布;模型组TGF-β_1及Smad2、Smad3蛋白及mRNA的表达水平与HPS低剂量组无显著差异(P0.05),其余各治疗组较模型组明显降低(P0.05),其中HPS高剂量组和罗格列酮组改善更明显(P0.05)。结论 HPS可改善db/db小鼠DCM心肌纤维化的程度,延缓DCM病情进展,其作用机制可能与其抑制TGF-β_1/Smads信号通路有关。