胸腺肽α1对重症肺炎患者Th17／Treg平衡的影响及其分子机制研究

目的：既往研究显示Th17／Treg的免疫失衡,参与了哮喘和COPD等疾病的发展,但其在重症肺炎中的作用目前并不清楚。胸腺肽α1免疫治疗能够提高重症肺炎患者的治疗效果和临床预后,但具体作用机制有待阐明。本研究旨在进一步研究胸腺肽α1免疫治疗对重症肺炎患者Th17／Treg平衡的影响及其分子机制。方法2012年9月～2014年9月我科收治的重症肺炎患者200例,将其随机分为治疗组100例和对照组100例,对照组给予抗炎,支持常规治疗,治疗组在常规治疗基础上联合使用胸腺肽α1免疫治疗。比较两组患者的临床疗效、分析两组患者在治疗前后外周血Th17和Treg的比例、以及相应细胞因子IL－17、 IL－10和特异性转录因子RORγt、 FoxP3的表达水平,并进一步研究Notch信号分子（ Notch1、 Hes1和Hey1）的表达水平。结果治疗组的治疗效率明显高于对照组。治疗前,两组患者Th17和Treg细胞的比例以及相应细胞因子、转录因子和Notch信号分子的表达水平无显著性差异,治疗后,两组患者Th17细胞比例、细胞因子IL－17和转录因子RORγt的表达水平均较治疗前明显降低,且治疗组明显低于对照组,其差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。而Treg细胞比例、细胞因子IL－10和转录因子FoxP3的表达水平均较治疗前明显升高,且治疗组高于对照组,其差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。 Notch信号分子分析显示两组Notch1, Hes1和Hey1的表达水平均较治疗前明显降低,且治疗组明显低于对照组,其差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。结论胸腺肽α1治疗可能通过Notch信号通路调节Th17和Treg细胞分化和细胞因子分泌,减轻重症肺炎患者体内炎性反应,改善细胞免疫失衡状态,从而提高临床治疗效果。     

氧化低密度脂蛋白及维生素E对人脐静脉内皮细胞分泌细胞因子的影响

目的:探讨OX-LDL和VitE对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的影响。方法:以体外培养的HUVEC为模型,将OX-LDL与HUVEC孵育及HUVEC经VitE处理后再与OX-LDL孵育,应用ELISA试剂盒分别检测IL-6、IL-8和TNF-α水平。结果:内皮细胞加入OX-LDL干预后,IL-6、IL-8在6-12h开始高于对照组,24-36h达峰值,72h时仍较对照组高。TNF-α的释放在2-6h开始高于对照组,12h达峰值,36h明显下降,但仍较对照组高。并且OX-LDL在50、100、200μg/L时能呈剂量依赖性刺激内皮细胞产生IL-6、IL-8和TNF-α。VitE在50、100、200mg/L时能呈浓度依赖方式抑制OX-LDL引起的IL-6、IL-8、TNF-α产生,48h后OX-LDL+VitE组与OX-LDL组,内皮细胞分泌IL-6、IL-8和TNF-α水平无明显差异。结论:OX-LDL可促进血管内皮细胞产生炎性细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α,而VitE在短时间内对上述效应有明显抑制作用。     

Th17相关性细胞因子在新生小鼠MCMV肝炎中的表达及意义

目的:探讨新生小鼠MCMV肝炎治疗前后外周血及肝脏中Th17相关性细胞因子白细胞介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)的表达变化及其意义.方法:腹腔接种MCMV建立MCMV肝炎模型(MCMV组),对照组腹腔注射等量的无菌生理盐水,更昔洛韦治疗组在接种病毒后当日每天腹腔注射更昔洛韦60 mg/(kg.d),连用2周.分别用全自动生化分析仪、ELISA方法和RT-PCR检测血清谷丙转氨酶(ALT)、外周血中IL-17、IL-23水平和肝组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达,同时分析它们与ALT的相关性.结果:病毒组小鼠血清IL-17、IL-23在感染后3、7和14天的水平均明显高于正常对照组相应时点(P＜O.01)的水平,更昔洛韦治疗后7和14天IL-17、IL-23的水平均明显低于病毒组相应时点(P＜0.01)的水平;肝组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达在感染后3、7和14天的水平均明显高于正常对照组相应时点(P＜0.01)的水平,更昔洛韦治疗后7和14天肝组织IL-17mRNA、IL-23 mRNA的表达均明显低于病毒组相应时点的水平.IL-17、IL-23与AL水平呈正相关(r值为0.691～0.803,P＜0.05).结论:MCMV肝炎新生小鼠IL-17、IL-23呈现高表达,提示IL-17、IL-23可能参与了新生小鼠MCMV肝炎的发病.     

油酸型急性呼吸窘迫综合征血清及肺组织促炎症细胞因子变化及山莨菪碱干预的实验研究

目的:观察大鼠油酸型急性呼吸窘迫综合征(ARDS)不同时间血清及肺组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平变化以及山莨菪碱(654-2)对其影响。方法:经舌下静脉注射油酸复制大鼠ARDS模型,用酶联免疫吸附试验测定不同时间血清及肺组织匀浆上清液中IL-6、IL-8和TNF-α水平。结果:注射油酸4h组血清及肺组织中IL-6、IL-8和TNF-α水平明显高于对照组;注射油酸8h组上述细胞因子均明显低于4h组,但血清中IL-6、TNF-α和肺组织中IL-6仍高于对照组水平;注射油酸16h组血清IL-6、TNF-α水平明显低于8h组,但TNF-α水平仍高于对照组,肺组织中IL-6水平亦高于对照组。654-2干预组血清及肺组织中IL-6、TNF-α水平均明显低于未干预组。结论:IL-6、IL-8和TNF-α在大鼠油酸型ARDS炎症过程中可能起重要作用;654-2可能通过抑制IL-6、TNF-α过量分泌,减轻肺损伤,具有防治ARDS作用。     

二甲双胍对成纤维样滑膜细胞增殖及炎性细胞因子分泌的影响

目的:探讨二甲双胍对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及分泌炎性细胞因子的影响。方法:取我院行关节镜手术治疗的RA患者关节滑膜组织,采用改良组织块法培养原代FLS,用不同浓度二甲双胍(10、20、30μmol/L)干预FLS细胞,分别记为小剂量、中剂量、高剂量组,以常规养的FLS细胞为对照组。采用CCK-8法检测各组细胞处理24h、48h、72h后细胞增殖情况,采用ELISA检测各组细胞处理72h后上清液中促炎细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-6(IL-6)和抗炎细胞因子:白细胞介素-10(IL-10)水平,比较组间各指标水平的差异。结果:与对照组相比,72h后,中剂量组、高剂量组FLS增殖水平均降低(P<0.05);高剂量组上清液中TNF-α、IL-6、IL-17水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。结论:高剂量二甲双胍具有抑制FLS增殖和促炎细胞因子分泌、促进抗炎细胞因子分泌的作用,对治疗RA具有一定的应用价值。     

趋化性细胞因子及一氧化氮与呼吸道感染关系分析

目的:本研究旨在探讨趋化性细胞因子及一氧化氮水平变化与呼吸道感染的关系。方法:选取2012年8月至2013年8月期间我院呼吸内科收治的细菌性呼吸道感染患者40例作为观察组,同期健康研究对象30例作为观察组,比较观察组在入院时、入院后第3天、入院后第7天、出院时的细胞因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)及白细胞介素(IL-6、IL-17、IL-10)水平差异,并分别同对照组进行比较。结果:观察组患者在入院时、入院后第3天、入院后第7天、出院时的TNF-α、NO、IL-6、IL-17、IL-10水平比较差异均具有统计学意义(F=10.849,P<0.05),随着治疗时间的延长,患者呼吸道感染症状逐渐好转直至出院,可以发现上述各指标均随时间的延长而逐渐下降;观察组入院后第3天、入院后第7天、出院时的TNF-α、NO、IL-6、IL-17、IL-10水平分别与入院时比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过测定呼吸道感染患者的细胞因子水平及NO水平,可以判断患者的病情转归程度。     

罗格列酮对RAW 264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应及SOCS1和SOCS3表达的影响

 目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）配体罗格列酮是否能够调节泡沫细胞促炎/抗炎反应以及细胞因子信号抑制物1（SOCS1）和细胞因子信号抑制物3（SOCS3）的表达。方法:采用ELISA法测定泡沫细胞培养液中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-10的水平,并计算TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10的比值。采用RT-PCR及Western blotting技术分别观察RAW 264.7细胞源性泡沫细胞SOCS1和SOCS3 mRNA及蛋白的表达。结果:RAW 264.7细胞源性泡沫细胞组细胞培养液中TNF-α、IL-6和IL-10的水平以及TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10的比值均明显高于对照组（control）组。而罗格列酮加入泡沫细胞培养液24 h后,TNF-α、IL-6和IL-10的浓度以及TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10的比值均明显低于泡沫细胞组。Control组和泡沫细胞组只有少量SOCS1和SOCS3 mRNA及蛋白的表达,罗格列酮作用于泡沫细胞后SOCS1和SOCS3 mRNA及蛋白的表达均明显高于control组和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组。结论: 罗格列酮上调泡沫细胞SOCS1和SOCS3的表达,抑制泡沫细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-10,调节了泡沫细胞促炎/抗炎反应。     

支气管哮喘病人胸导管淋巴液与血清IL-6、IL-8、 IL-10、IL-12、TNF-α水平的对比研究

目的：探讨哮喘病人胸导管淋巴液和血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-12及TNF-α水平变化。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测31例行胸导管引流治疗的中、重度哮喘病人术后0 d、3 d、5 d淋巴液及0 d、5 d血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-12以及TNF-α水平。结果：哮喘病人胸导管引流淋巴液中IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平均高于正常对照组血清水平，而IL-12则明显低于正常血清水平；引流5 d淋巴液中IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α明显低于，IL-12则显著高于引流0 d时水平；同时哮喘病人血清IL-10、TNF-α含量低于，血清IL-12则高达正常对照组水平。结论：哮喘病人淋巴液中存在以IL-12产生受抑和炎性细胞因子产生亢进为特征的细胞因子失调，且淋巴液中CK变化与血清变化大致平行。     

血必净注射液对重症蝮蛇咬伤患者免疫功能的影响

目的 研究血必净注射液对重症蝮蛇咬伤患者对机体免疫调节功能的影响。方法 对2014年7月~2017年10月本院急诊科收治的重症蝮蛇咬伤患者46例,常规治疗组按照经典的毒蛇治疗法,观察组使用血必净注射液治疗;健康对照组选择为同期体检正常人。分析各组在治疗前、治疗第1天、第3天及第7天,检测其血清促炎介质IL-6和抗炎介质IL-10水平,代表性评估患者的免疫功能。结果 治疗前和治疗第1天,2个治疗组IL-6无明显区别,但均高于对照组,两治疗组于治疗第3天、第7天IL-6水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,但观察组较常规治疗组下降（P＜0,05）;各组IL-10水平在治疗前与治疗第1天,差异无统计学意义（P＞0.05）,但第3天、第7天,治疗组则高于健康对照组（P＜0.05）,两治疗组间,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 重症蝮蛇咬伤患者的免疫功能可出现紊乱,表现为早期促炎介质占优势,后期抗炎介质升高明显,血必净注射液可下调促炎介质（IL-6）水平,在一定程度上调节机体免疫功能。     

MODS患者血清多种细胞因子、C反应蛋白和D-二聚体水平的意义以及与预后的关系

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、C反应蛋白(CRP)和D-二聚体(D-dimer)在多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS)的变化特点以及对预后的影响。方法:应用ELISA方法检测27例MODS患者第1d、3d和第5d的血清TNF-α、IL-6和IL-10水平,同时检测CRP和D-dimer水平,并以15例正常健康成人体检者的水平作为正常对照。并比较8例死亡患者和19例治愈患者第1d的水平。结果:所有MODS患者自第1d血清TNF-α、IL-6、CRP和D-dimer均明显高于正常对照组(P<0.05),且随病情的发展水平逐渐升高,而IL-10的水平在第3d开始升高。死亡组第1d的水平高于治愈组,以IL-6和D-dimer较明显。结论:血清TNF-α、IL-6、IL-10、CRP和D-dimer的检测对MODS患者的诊断和预后判断有指导意义。