GRP78在肝癌细胞抵抗棕榈酸诱导凋亡中的作用

目的探讨内质网应激(ER stress)信号调控对棕榈酸(PA)诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法培养人肝癌细胞SMMC-7721,在采用ER stress抑制剂4-苯丁酸(PBA)和过表达葡萄糖调节蛋白(GRP)78的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析ER stress以及GRP78对PA诱导肝癌细胞凋亡的影响。结果 PA诱导肝癌细胞发生ER stress,PBA抑制ER stress并减弱了PA诱导的肝癌细胞凋亡(P0.05)。PA和ER stress诱导剂衣霉素(Tun)对ER stress分子标志的诱导水平差异显著(P0.05),其中PA诱导的GRP78远低于Tun的诱导作用。过表达GRP78明显抑制了PA诱导的肝癌细胞凋亡(P0.05)。结论 GRP78的诱导表达不足在PA介导的肝癌细胞凋亡中起重要作用。     

葡萄糖转运蛋白在丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的观察丁酸钠对结肠肿瘤细胞HT-29葡萄糖转运蛋白(GLUT1～GLUT5)表达的影响以及丁酸钠和不同浓度葡萄糖对bax和bcl-x/l表达的影响,探讨丁酸钠诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法2005年4月至12月在武汉大学人民医院应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GLUT1～GLUT5mRNA的表达情况。免疫细胞化学法检测bax和bcl-x/l的表达。原位切口末端标记法(Tunel)检测细胞凋亡。结果丁酸钠明显抑制GLUT1和bcl-x/l表达并诱导肿瘤细胞凋亡,但对GLUT2、GLUT3、GLUT5和bax表达影响不大,GLUT4则未被检测出。丁酸钠干预条件下,葡萄糖浓度增加可以明显增加bcl-x/l的表达并降低丁酸钠诱导的细胞凋亡。无丁酸钠干预条件下,葡萄糖浓度变化对细胞凋亡影响很小。结论在HT-29细胞中,丁酸钠能明显降低GLUT1的表达。降低GLUT1的表达与丁酸钠诱导细胞凋亡作用密切相关。     

葡萄糖调节蛋白78在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用*

葡萄糖调节蛋白78（GRP78）作为一个重要的内质网分子伴侣,在蛋白质的折叠、转运和内质网应激反应过程中发挥重要作用。GRP78还存在于肿瘤细胞、内皮细胞和单核细胞的表面,可作为病毒进入宿主细胞的受体。内质网应激是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个重要的发病机制。对GRP78功能的深入挖掘,将为探索NAFLD的防御机制提供新思路。     

信号分子在Genistein诱导人肝癌细胞凋亡中的作用

目的通过检测三羟异黄酮诱导肝癌细胞凋亡过程中信号分子的表达，以期探讨其诱导凋亡的分子机制。方法应用体外细胞培养技术，三羟异黄酮处理后行HE染色；采用免疫细胞化学和RT—PCR分别检测癌细胞凋亡过程中信号分子的表达情况。结果（1）三羟异黄酮作用后可见凋亡细胞，随着浓度的增加，凋亡率逐渐升高；（2）survivin蛋白的表达下调，caspase-3的蛋白表达上调；（3）survivin基因的表达逐渐降低，而caspase-3在基因水平的表达有逐渐增加趋势，但无统计学差异（P〉0．05）。结论三羟异黄酮能诱导人肝癌细胞的凋亡；在此凋亡过程中，信号分子survivin在基因与蛋白水平呈现一致性的表达降低，caspase-3在蛋白水平明显上调，但其基因表达无明显变化。推测其作用靶点可能是在转录后水平。     

过表达葡萄糖调节蛋白78人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231的构建

目的 构建过表达内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78, GRP78)的人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231,为探讨GRP78在乳腺癌发生发展中的作用机制提供基础。方法 采用分子克隆技术构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒,采用PCR法扩增质粒,后使用EcoRⅠ、NotⅠ限制性内切酶切割质粒,对酶切产物进行测序鉴定,成功构建pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。取对数生长期293FT细胞系（克隆分离株）,在培养皿中加入pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro混合液,培养48 h收集含GRP78慢病毒颗粒的上清液,保存备用。另取对数生长期人乳腺癌细胞系HS578T及MDA-MB-231,置于含GRP78慢病毒颗粒上清液的培养基中培养,培养48 h时在培养基中加入1∶500稀释嘌呤霉素,筛选GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系。加入嘌呤霉素培养48 h采用Western Blotting法检测HS578T、MDA-MB-...     

棕榈酸对肝癌HepG2细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨棕榈酸对肝癌HepG2细胞自噬和凋亡的影响。方法采用含浓度为800txmol／L棕榈酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞24h,向HepG2细胞转染绿色荧光蛋白（GFP）-LC3质粒,通过观察LC3II绿色荧光斑点确定自噬发生情况。利用BafAl抑制自噬后,采用M30免疫荧光检测细胞凋亡情况。结果棕榈酸刺激24h明显增加自噬及凋亡细胞数量。阻断自噬,棕榈酸刺激引起的HepG2细胞凋亡水平明显增加。结论棕榈酸可刺激自噬发生,该自噬对肝癌HepG2细胞有一定的保护作用。     

ERp46在棕榈酸诱导的内质网应激中的保护作用

探讨新发现的内质网蛋白ERp46对棕榈酸诱导的βTC6细胞“内质网应激-凋亡”通路的可能调控作用,为治疗2型糖尿病提供新思路.结果显示ERp46对内质网应激的三条通路均有抑制作用,进而减少βTC6细胞的凋亡率,对细胞起保护作用(P＜0.01).     

二十碳五烯酸抑制棕榈酸诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及机制

目的 探讨二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid,EPA)对棕榈酸（palimitate,PAL）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 以PAL诱导的乳鼠心肌细胞为模型,分为对照组、PAL组、EPA+PAL组、EPA+PAL+Compound C组;采用MTT法检测细胞存活率,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测乳鼠心肌细胞cleaved caspase 3、动力相关蛋白(Dynamin-related protein,Drp)1表达水平和腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）的磷酸化水平。结果 不同浓度PAL刺激细胞24 h,与对照组相比,400 μmol/L PAL诱导后细胞活性显著降低,凋亡率明显增加（P<0.05）,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3活性上调(P<0.05),同时AMPK磷酸化水平降低(P<0.05),Drp1表达增加(P<0.05)。但50 μmol/L EPA处理却通过激活AMPK磷酸化,抑制Drp1的表达,进而逆转PAL诱导的细胞凋亡（P<0.05）。AMPK阻断剂Compound C则通过抑制AMPK,激活Drp1活性,增加凋亡相关蛋白cleaved caspase 3的活性,从而削弱了EPA抵抗PAL诱导的细胞凋亡（P<0.05）。结论 EPA可通过激活AMPK,减少Drp1表达水平,从而抑制PAL诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,这些结果为深入认识EPA的心肌保护作用提供了新的实验依据。     

中药诱导肝癌细胞凋亡的研究进展

如何诱导肿瘤细胞凋亡,以阻止肿瘤的无限生长一直是近年来肿瘤研究领域里的热点.研究表明,中药及其提取物对诱导肝癌细胞凋亡具有确切的作用,已引起学术界的普遍关注.本文将通过对近年来有关文献的回顾与复习,就中药及其提取物诱导肝癌细胞凋亡的相关研究进展作一综述.     

Ghrelin对棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨Ghrelin能否抑制棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡。方法大鼠主动脉内皮细胞分别在含0.3 mmol/L棕榈酸的脂性培养基中孵育24 h,培养基中加或不加Ghrelin,应用MTT法检测细胞活性,Ho-echst 33258及流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性,Western Blot检测Bcl-2和Bax表达。结果棕榈酸降低细胞活性,使细胞凋亡增加至30.03%,与对照组(5.01%)相比差异有统计学意义(P<0.01),棕榈酸增加Caspase-3活性,使Bcl-2/Bax比率下降。Ghrelin能够浓度依赖性增加细胞活性,10 nmol/L是最低有效浓度,100 nmol/L时作用最显著。Ghrelin能抑制棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡,使凋亡率降至10.03%(P<0.05)。同时Ghrelin降低Caspase-3活性并增加Bcl-2/Bax比率。结论 Ghrelin可以抑制棕榈酸诱导的血管内皮细胞凋亡,可能在棕榈酸诱导的内皮细胞损伤中发挥保护作用。     

内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用.方法 采用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型,分别于4、8、12、16周随机处死动物,留取血清和肝组织,同时设置正常对照组.检测大鼠血清总同型半胱氨酸(tHcy)浓度,比色法测定大鼠肝组织胱硫醚β合成酶(CBS)活性,逆转录-聚合酶联反应和免疫组织化学法分别检测肝组织葡萄糖调节蛋白78 (GRP-78)、需钙蛋白酶2 (calpain-2)和caspase-12前体蛋白(procaspase-12)的mRNA和蛋白质表达情况;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肝细胞凋亡情况.组间数据比较用完全随机设计的方差分析(SNK法或Tamhane' s法),相关性分析用Pearson直线相关分析法.结果 模型组大鼠16周末出现肝细胞弥漫小泡性脂肪变性、窦周纤维化,汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成.正常对照组及造模4、8、12、16周时,大鼠血清tHcy浓度分别为(5.10±0.56)μmol/L、(6.95±0.17)μ mol/L、(8.36±0.17)μmol/L、(9.45±0.28)μmol/L和(9.85±0.12) μmol/L,肝组织匀浆CBS浓度分别为(613.92±17.09) U/g、(573.53±24.96) U/g、(503.42±44.67) U/g、(438.02±14.67) U/g和(390.45±31.17) U/g,随着造模时间的延长,tHcy浓度逐渐升高(F=338.60,P＜0.01),CBS活性逐渐降低(F=91.90,P＜0.01),且二者呈负相关关系(r=-0.632,P＜0.01).随着造模时间的延长,GRP-78、calpain-2和caspase-12的mRNA相对表达量逐渐升高(F值分别为216.19、128.91和95.印,P值均＜0.01),且GRP-78 mRNA的表达与tHcy浓度呈正相关(r=0.617,P＜0.01); GRP-78和calpain-2的蛋白质表达量逐渐增多,procaspace-12的蛋白质表达量逐渐减少.正常对照组及造模4、8、12、16周的大鼠肝细胞凋亡指数分别为2.17％+1.06％、29.59％±2.62％、加.91％+4.70％、57.39％±6.13％和65.71％±9.78％,呈上升趋势(F=188.30,P＜0.01).结论肝细胞凋亡可能与CBS活性降低导致高同型半胱氨酸血症,从而诱发内质网应激,进而激活calpain-2和caspase-12的信号转导通路有关,这可能为酒精性肝病发病的重要机制之一.     

噪声应激对大鼠心肌葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响与高血压及心肌重构的关系

目的 研究内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在噪声应激环境高血压大鼠模型心肌中的表达,并探讨GRP78和CHOP变化与高血压及其心肌重构的关系.方法 将成年雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠40只随机分为两组:噪声组(采用噪声环境建立高血压模型)和...     

五倍子酸诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的 探讨五倍子酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT法检测五倍子酸对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,瑞士-吉姆萨染色观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率.结果 五倍子酸能抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性.五倍子酸可诱导SMMC-7721细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义.结论 五倍子酸可抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导其凋亡.     

XAF1基因在肝癌细胞凋亡中的诱导作用

背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）与凋亡抑制和肿瘤细胞耐药现象密切相关。目的：研究XIAP相关因子1（XAF1）基因抑制人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2增殖和诱导凋亡的作用。方法：以腺病毒Ad5／F35为载体,构建重组腺病毒Ad5／F35-XAF1、对照空病毒Ad5／F35-Null和报告病毒Ad5／F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别以相同感染复数（MOI）感染人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2,并设立空白组作为对照。作用48h后,以荧光显微镜检测Ad5／F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以MTT法检测细胞活力;以Annexin V—FITC／PI双染法和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率。结果：Ad5／F35-EGFP感染48h后,几乎所有Bel-7404和HepG2细胞均表达EGFP。Ad5／F35-XAF1感染48h后,两种肝癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达均明显增高．细胞活力呈剂量依赖性地降低,细胞凋亡率显著增加。结论：重组腺病毒Ad5／F35-XAF1在人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2中的感染效率高,XAF1在不同的肝癌细胞株中恢复表达后,能显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

内脂素在MIN6胰岛β细胞的表达及葡萄糖和棕榈酸对其表达的影响

大鼠和小鼠胰岛细胞和MIN6细胞均有内脂素表达.胰岛细胞内脂素的表达受葡萄糖(5.5和33.3 mmol/L)和棕榈酸(0.5 mmol/L)的影响(1.0±0.11、1.32±0.18、1.33±0.15、1.72±0.27,与5.5mmol/L葡萄糖组相比,均P<0.05),提示内脂素可能参与胰岛细胞的胰岛素释放的调控.     

内脂素在MIN6胰岛β细胞的表达及葡萄糖和棕榈酸对其表达的影响

Visfatin was expressed in rat anti mouse islets,as well as in MIN6 cells. The visfatin expression was affected by various concentrations of environmental glucose (5.5 and 33.3 mmoL/L) and palmitate(0.5 mmol/L). As compared with low-level glucose medium (5.5 mmol/L, 1.0±0.11) , visfatin expression increased in media with high glucose and palmitate (1.32 ±0. 18, 1. 33±0. 15,1.72±0.27, all P<0. 05). The result suggests that visfatin seems to be involved in the regulation of insulin secretion.     

内脂素在MIN6胰岛β细胞的表达及葡萄糖和棕榈酸对其表达的影响

Visfatin was expressed in rat anti mouse islets,as well as in MIN6 cells. The visfatin expression was affected by various concentrations of environmental glucose (5.5 and 33.3 mmoL/L) and palmitate(0.5 mmol/L). As compared with low-level glucose medium (5.5 mmol/L, 1.0±0.11) , visfatin expression increased in media with high glucose and palmitate (1.32 ±0. 18, 1. 33±0. 15,1.72±0.27, all P<0. 05). The result suggests that visfatin seems to be involved in the regulation of insulin secretion.     

内脂素在MIN6胰岛β细胞的表达及葡萄糖和棕榈酸对其表达的影响

Visfatin was expressed in rat anti mouse islets,as well as in MIN6 cells. The visfatin expression was affected by various concentrations of environmental glucose (5.5 and 33.3 mmoL/L) and palmitate(0.5 mmol/L). As compared with low-level glucose medium (5.5 mmol/L, 1.0±0.11) , visfatin expression increased in media with high glucose and palmitate (1.32 ±0. 18, 1. 33±0. 15,1.72±0.27, all P<0. 05). The result suggests that visfatin seems to be involved in the regulation of insulin secretion.     

内脂素在MIN6胰岛β细胞的表达及葡萄糖和棕榈酸对其表达的影响

Visfatin was expressed in rat anti mouse islets,as well as in MIN6 cells. The visfatin expression was affected by various concentrations of environmental glucose (5.5 and 33.3 mmoL/L) and palmitate(0.5 mmol/L). As compared with low-level glucose medium (5.5 mmol/L, 1.0±0.11) , visfatin expression increased in media with high glucose and palmitate (1.32 ±0. 18, 1. 33±0. 15,1.72±0.27, all P<0. 05). The result suggests that visfatin seems to be involved in the regulation of insulin secretion.     

内脂素在MIN6胰岛β细胞的表达及葡萄糖和棕榈酸对其表达的影响

Visfatin was expressed in rat anti mouse islets,as well as in MIN6 cells. The visfatin expression was affected by various concentrations of environmental glucose (5.5 and 33.3 mmoL/L) and palmitate(0.5 mmol/L). As compared with low-level glucose medium (5.5 mmol/L, 1.0±0.11) , visfatin expression increased in media with high glucose and palmitate (1.32 ±0. 18, 1. 33±0. 15,1.72±0.27, all P<0. 05). The result suggests that visfatin seems to be involved in the regulation of insulin secretion.