大兴安岭林区蜱和鼠中莱姆病螺旋体感染及其基因分型研究

目的 了解内蒙古大兴安岭林区蜱和鼠中伯氏疏螺旋体的感染及基因分型情况。方法 应用巢式PCR扩增蜱和鼠中伯氏疏螺旋体5S-23SrRNA间隔区片段，对阳性产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析和单链构象多态性（SSCP）分析，RFLP分析显示特殊带型的样本测序分析。结果 检测全沟硬蜱1336只，293只阳性，阳性率为21．93％；森林革蜱144只，6只阳性，阳性率为4．17％；嗜群血蜱144只，未发现有伯氏疏螺旋体感染。检测鼠9种145只，感染伯氏疏螺旋体的4种5只，感染率为3．45％；其中检测8只棕背鼠平，2只阳性。RFLP分析及序列分析显示蜱中有B．garinii20047亚型、B．gariniiNT29亚型、B．afzelii基因型以及不同基因型或亚型伯氏疏螺旋体的混合感染；鼠感染的伯氏疏螺旋体包括B．garinii20047亚型和B．gariniiNT29亚型。SSCP分析结果显示带型多于36种。结论 大兴安岭林区蜱及鼠中均存在伯氏疏螺旋体的感染，其中全沟硬蜱的感染率较高；B．garinii型为主要基因型，且该地区伯氏疏螺旋体存在遗传多态性。单只蜱中存在同时感染不同基因型伯氏疏螺旋体的情况，人和宿主动物是否存在不同基因型伯氏疏螺旋体混合感染尚待进一步研究。全沟硬蜱和棕背鼾分别是该林区伯氏疏螺旋体的主要媒介和主要储存宿主。     

青海省部分地区媒介及宿主动物体内携带伯氏疏螺旋体及基因型别的研究

目的 了解青海省部分地区蜱及野鼠体内莱姆病螺旋体感染及其基因分型情况。方法 采用布旗法采集蜱标本,采用夹夜法捕捉野鼠。经种类鉴定后,提取病原体DNA,应用巢式PCR扩增鼠中莱姆病螺旋体5S-23S rRNA间隔区片段,对阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果 检测3个区县3个蜱种共计618只蜱标本,其中共有3个蜱种97只标本检测阳性,总阳性率为15.69%。不同蜱种阳性率存在差别(χ~2=9.68,P0.01),其中以青海血蜱阳性率为最高,达到21.66%(47/217)。检测2个鼠种121只野鼠,其中12只检测阳性,总阳性率为9.91%,不同鼠种阳性率存在差别(χ~2=4.64,P0.05),以黄胸鼠的阳性率为最高,达到17.39%(8/46)。基因分型分析结果显示蜱及野鼠标本中莱姆病螺旋体为B.garinii及B.afzelii基因型,其中B.garinii基因型占76.47%。结论 青海省部分地区媒介及宿主动物体内存在莱姆病螺旋体,并至少有B.garinii及B.afzelii两种基因型。     

伯氏疏螺旋体分型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种检测伯氏疏螺旋体的分型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种致病基因型伽氏疏螺旋体B.garinii、阿氏疏螺旋体B.afzelii、狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi sensu stricto检出并分型。方法针对3种基因型菌株的外膜蛋白osp C基因,在保守序列设计通用引物并分别设计型特异Taqman探针,3条探针分别标记FAM、Texas Red和CY5荧光报告基团,建立和优化多重实时荧光定量PCR反应体系,检测其敏感性和特异性。结果建立的多重荧光定量PCR的最低检测值为B.garinii 40copies/μl、B.afzelii 5.17copies/μl和B.burgdorferi sensu stricto 37.8copies/μl,通过检测立克次体、土拉弗朗西斯菌无交叉反应,检测100只游离蜱与常规PCR结合测序结果分型一致,说明本方法有较好的灵敏性和特异性。结论该方法能快速检测伯氏疏螺旋体并同时分型,为莱姆病的诊断提供新方法。     

六盘山地区蜱中莱姆病螺旋体检测及分型

目的了解宁夏部分地区蜱中莱姆病螺旋体感染及基因型别情况。方法选择宁夏六盘山地区为调查点,采集当地蜱类,用巢式PCR法进行检测,阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,确定莱姆病螺旋体的基因型。结果共检测4个蜱种206只蜱,阳性37只,阳性率17.96%;其中以青海血蜱阳性率最高,达59.37%;RFLP分析表明,蜱中莱姆病螺旋体均为B.garinii基因型,但型内存在一定差别,其中有29份标本属B.garinii基因型Ⅰ群,有8份标本属B.garinii基因型Ⅱ群。结论证实在宁夏六盘山地区蜱中存在莱姆病螺旋体,并发现其属于B.garinii基因型。     

黑龙江省旅游区蜱伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染的动态调查

目的 了解黑龙江省旅游区蜱伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染的动态变化.方法 运用PCR方法检测2010年捕获蜱中两种病原感染状况并测序进行序列分析.结果 在威虎山和镜泊湖景区采集点捕获蜱标本共849只.两地优势蜱种分别为全沟硬蜱和嗜群血蜱,其中伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体感染率分别为26.15％、10.05％和0.00％、13.33％,提示全沟硬蜱复合感染.两地优势蜱种活动高峰分别出现在7月和6月上旬,蜱携带病原率因时间差异而不同.序列分析显示旅游区伯氏疏螺旋体有3种基因型,除B.garinii型、B.afzelii型外,首次在东北地区发现B.valaisiana-like group型.对斑点热群立克次体序列分析表明,所得两序列分别与Rickettsia sp.HL-93和Rickettsia sp.H820,其同源性为100％.结论 两旅游区蜱中存在伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染,且携带的基因类型存在多样性;动态调查显示蜱种、蜱密度的分布以及蜱携带病原状况因生境、时间和人群的不同而有差异.     

柯城区老年人群及室内鼠类伯氏疏螺旋体感染状况

目的了解柯城区老年人群及室内鼠类体内伯氏疏螺旋体感染情况,为预防莱姆病提供依据。方法选择柯城区万田乡和姜家山乡2个采样点,采用鼠笼法测定室内鼠密度,并对鼠种分类;采集鼠脾标本和60岁以上老年人血清标本,分别采用巢式PCR扩增、 ELISA法检测伯氏疏螺旋体。结果共布放鼠笼4 800个,有效鼠笼4 780个,捕获鼠120只,鼠密度为2.51%,优势鼠种为褐家鼠。120份鼠脾标本中,阳性48份,阳性率为40.00%,其中褐家鼠阳性率为45.71%,高于黄胸鼠的32.00%(P0.05);万田乡鼠标本阳性率为52.94%,高于姜家山乡的30.43%(P0.01)。588份老年人群血清标本中, Ig G阳性21份,阳性率为3.57%;其中男性阳性率为4.91%,高于女性的2.31%(P0.01);万田乡人群血清阳性率为4.04%,高于姜家山乡的3.09%(P0.01)。结论柯城区老年人群和室内鼠类中均发现有伯氏疏螺旋体感染的阳性指征,需进一步加强莱姆病传播的动物媒介和宿主的监控。     

中国内蒙古、新疆部分地区鼠类自然感染恙虫病东方体的调查

目的了解中国内蒙古、新疆自治区部分地区鼠类自然感染恙虫病东方体（Ot）的情况.方法采用鼠夹捕鼠,从鼠脾中提取DNA,应用巢式PCR（nPCR）检测Ot-Sta56基因;对部分阳性标本测序,用Clustal Ⅹ（5.0）和DNA Club软件对序列进行比较分析.结果内蒙古地区捕获各种鼠类共计90只,其中6只nPCR检测阳性,总阳性率为6.67%,不同鼠种间阳性率有差别,但无统计学意义（x^2=8.898,P=0.148）;新疆地区捕获各种鼠类共计20只,其中1只nPCR检测阳性,阳性率为5.00%.不同地区间阳性率比较虽略有差别,但无统计学意义（x^2=0.076,P=0.782）.内蒙古、新疆部分地区从农田中捕获的鼠类标本为9只,占8.18%,无阳性标本;从草原捕获的鼠类标本为101只,占91.82%,其中阳性标本为7只,草原鼠标本Ot感染率为6.93%.序列分析结果：N59（内蒙古莫氏田鼠）、N69（内蒙古黑线仓鼠）、X33（新疆普通仓鼠）3份标本nPCR产物碱基序列与Karp株相应DNA片段的碱基序列同源性最高,均为99%,应属于Karp型;N65（内蒙古黑线仓鼠）及N88标本（内蒙古黑线姬鼠）nPCR产物碱基序列与中国台湾Taitung-2株和TW461株相应DNA片段的碱基序列同源性最高,均为94%;N90（内蒙古黑线姬鼠）与日本Oishi株相应DNA片段的碱基序列同源性最高,为96%.系统发育分析表明,N59、N69、X33位于Karp株所在的分支,而N65、N88、N90与Taitung-2株、TW461株、Yonchon株、Sxh951株、Oishi株、Kanda株属同一支系.结论研究证实内蒙古、新疆部分地区鼠类存在Ot自然感染,其基因型较为复杂.这为进一步深入进行恙虫病疫源地的调查奠定了基础.     

巢式PCR和实时荧光定量PCR在莱姆病宿主动物监测中的应用评价

目的应用巢式PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测啮齿动物中伯氏疏螺旋体的带菌率,对2种方法在莱姆病宿主动物监测中的应用效果进行评价。方法2017年7-9月,在新疆维吾尔自治区(新疆)古尔图地区野外放置鼠夹,采集啮齿动物,并鉴别种类;采用巢式PCR和qRT-PCR 2种方法检测标本携带伯氏疏螺旋体情况,并对2种方法的检测结果进行统计学分析。对巢式PCR检测的阳性标本进行测序和序列比对分析,以初步确定伯氏疏螺旋体的基因型别。结果共检测啮齿动物标本134份,巢式PCR和qRT-PCR检测阳性率分别为13.43%和12.69%,差异无统计学意义(χ~2=0.000,P=1.000);阳性标本均为长尾黄鼠,总阳性率为20.15%,其中8份标本经2种方法检测结果均为阳性;10份巢式PCR检测为阳性的标本经qRT-PCR检测为阴性,9份qRT-PCR检测为阳性的标本经巢式PCR检测为阴性。采用q RT-PCR方法共检出伯氏疏螺旋体阳性17份,阳性样本Ct值为33.49~37.89。结论2种方法均可用于啮齿动物的伯氏疏螺旋体检测,同时使用2种方法可提高伯氏疏螺旋体的检出率。巢式PCR方法检测可以了解新疆古尔图地区啮齿动物感染伯氏疏螺旋体的基因型别;而qRT-PCR方法则可对标本中的细菌载量进行定量分析。     

2019年二连浩特口岸啮齿动物及其携带病原体调查

目的 了解二连浩特口岸地区鼠类及其携带病原体的情况,为口岸加强鼠类防控工作提供数据。方法 2019年5-6月,在二连浩特口岸采用单公顷24小时夹法和5米夹夜法捕鼠,对捕获的鼠类进行分类鉴定,并检测11种鼠传疾病的核酸。结果 2019年5-6月,在二连浩特口岸区域捕获鼠类140只,经鉴定分为2目5科7属8种,长爪沙鼠104只,占捕获鼠类的74.29%,为优势鼠种。工作区仅捕获小家鼠,占总捕获数的1.43%;野外捕获的以长爪沙鼠为优势种,占总捕获数的74.29%,夜行鼠占总捕获数的10.00%。检测的11种病原体中,巴尔通体阳性率40.54%、斑点热立克次体阳性率9.91%和无形体阳性率为6.31%。结论 二连浩特口岸鼠类密度较高,有增加鼠疫疫情传播的风险;各类啮齿动物存在不同病原体感染,应加强口岸疫情防控工作。     

巢式PCR法检测鼠肝脾标本伯氏疏螺旋体

目的应用巢式PCR方法检测鼠肝脾组织中伯氏疏螺旋体外膜蛋白A（ospa）基因,了解淳安县鼠中伯氏疏螺旋体感染情况。方法于2012年8月收集淳安县102份鼠肝脾标本,采用巢式PCR法检测伯氏疏螺旋体ospA基因特异片段,统计标本阳性率。结果在38只黑线姬鼠中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因特异片段阳性标本3份,在13只黄毛鼠中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因特异片段阳性标本3份,鼠伯氏疏螺旋体总阳性率为5．88％（6／102）。结论淳安县鼠中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因片段,有引起蜱媒传染病莱姆病发生的潜在可能,应引起公共卫生部门的重视。     

吉林省莱姆病病原调查和基因分型研究

目的为进一步了解吉林省莱姆病的病原学,为莱姆病的预防和控制提供科学依据。方法采用布旗法捕获蜱;采用BSKⅡ培养基对蜱进行莱姆病螺旋体的分离培养,并对分离到的病原体进行单克隆抗体鉴定及5S~23SrRNA基因间隔区PCR-RFLP分析。结果2004年从吉林省11个地区捕蜱1308只,其中全沟硬蜱1250只,占95.6%;血蜱58只,占4.4%。从全沟硬蜱中分离到7株螺旋体,经单克隆抗体鉴定均为莱姆病螺旋体。5S~23S rRNA基因间隔区PCR-RFLP基因分型结果表明,6株菌为Borrelia garinii基因型,1株菌为Borrelia afzelii基因型。结论吉林省11个地区莱姆病的主要传播媒介为全沟硬蜱,至少存在2个致病基因型,即B.garinii和B.afzelii,以B.garinii基因型为主。因此应加强这些地区莱姆病的防控工作。     

长春龙嘉国际机场口岸鼠类监测及携带病原体情况调查

目的掌握长春龙嘉国际机场口岸鼠类本底情况及鼠类携带病原体的情况,为口岸传染病监测和媒介生物控制提供依据。方法 2014年5月—2015年4月采用夹夜法捕捉鼠类,采用聚合酶链式反应(PCR)检测汉坦病毒、鼠疫菌、伯氏疏螺旋体,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒法检测抗汉坦病毒Ig G抗体。结果共捕获鼠93只,经分类鉴定隶属于2目3科4属7种,年平均鼠密度0.86%,检测出汉坦病毒阳性鼠1只,平均带毒率为1.08%,抗汉坦病毒Ig G抗体阳性鼠12只,阳性率为12.90%,鼠疫菌、伯氏疏螺旋体未检出。结论本次调查显示,长春龙嘉机场口岸鼠密度未超过国家标准,但鼠类感染汉坦病毒率较高,因此,应加强防鼠灭鼠和鼠类肾综合征出血热监测,有效防止其在口岸地区的发生与流行。     

中蒙接壤二连浩特边境口岸地区鼠传疾病调查

目的 调查二连浩特口岸地区鼠传疾病病原体分布及人群抗体,预测鼠传疾病在当地的流行趋势。方法2019—2020年的5-9月,在内蒙古二连浩特口岸采用弓形夹法、夹夜法捕获啮齿类动物,每月连续监测5 d,用PCR法检13种病原体（鼠疫菌、土拉菌、布鲁菌、贝氏柯克斯体、钩端螺旋体、伯氏疏螺旋体、巴尔通体、无形体、立克次体、埃立克体、巴贝西原虫、博卡病毒、汉坦病毒）,用ELISA法检测出入境体检人员12种鼠传疾病的IgG抗体。结果 连续两年在二连浩特口岸共布鼠夹12 000夹次,捕获527只鼠形动物,计2目6科9属13种,优势种为子午沙鼠。在子午沙鼠、长爪沙鼠、黑线毛足鼠、达乌尔黄鼠、五趾跳鼠、羽尾跳鼠、黑线仓鼠、短尾仓鼠及刺猬中检出巴尔通体;在达乌尔黄鼠、长爪沙鼠、五趾跳鼠中检出无形体;在达乌尔黄鼠、长爪沙鼠、子午沙鼠、五趾跳鼠中检出斑疹伤寒立克次体。从91份人血清中检测到7种病原体抗体,包括布鲁菌、贝氏柯克斯体、钩端螺旋体、伯氏疏螺旋体、立克次体、斑疹伤寒立克次体和汉坦病毒。结论 中蒙二连浩特口岸地区鼠形动物种类丰富,鼠体携带病原体比率较高,存在立克次体、巴尔通体及无形体的自然感染,存在着人...     

中越边境口岸鼠类及其自然感染病原体调查

目的了解中越边境口岸鼠类分布及其自然感染病原体情况,为口岸病媒生物防治措施的制定提供科学依据。方法在中越边境东兴、宁明、凭祥等8个口岸,采用鼠笼法捕鼠。采用ELISA法和PCR对鼠类自然感染的汉坦病毒、钩端螺旋体、伯氏疏螺旋体、巴尔通体和鼠疫菌进行检测。结果共捕获到1 633只鼠类,隶属于3目4科7属14种,其中褐家鼠、黄毛鼠、黄胸鼠的比例分别为51.26%、8.51%和22.78%。ELISA法检测出汉坦病毒抗体阳性样本121份,阳性率7.41%;伯氏螺旋体抗体阳性样本95份,阳性率5.82%;钩端螺旋体抗体阳性样本25份,阳性率1.53%。检测到伯氏疏螺旋体核酸3份、钩端螺旋体核酸7份、巴尔通体核酸12份。结论应加强中越边境口岸鼠类的监测和控制,开展灭鼠工作降低啮齿动物的危害。     

莱姆病的临床特点及处置要点

莱姆病是由伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)引起的自然疫源性疾病,发病地区不断扩展蔓延,发病率逐年上升,其中,森苏疏螺旋体(B.burgdorferi sensu)、阿氏疏螺旋体(Borrelia afzelii)和加里尼疏螺旋体(Borrelia garinii)等三种基因分型的伯氏疏螺旋体与莱姆病发病密切相关。莱姆病螺旋体基因型的分布与地理环境、媒介生物、宿主动物密切相关,不同基因型引起的临床表现差异巨大。莱姆病临床表现可分为三个阶段：早期局灶期表现为蜱虫叮咬部位的游走性红斑,播散期可出现多发性红斑、螺旋体淋巴细胞瘤、神经系统莱姆病、心肌炎或关节炎,晚期发散期表现为慢性萎缩性关节炎和神经系统损伤症状。     

内蒙古四子王草原鼠类布鲁杆菌病自然疫源性调查研究报告

目的 在布鲁杆菌病的重病区,了解布鲁杆菌野生鼠类(自然疫源性)感染情况.方法 日间活动鼠的捕获采用一日弓形类捕鼠法,夜间活动鼠的捕获采用5米夹线法.对于捕获的鼠类进行布鲁氏菌分离培养鉴定.对捕获的活鼠,先采集2ml的血样,处理后对其进行布鲁杆菌分离培养鉴定.所采集的血液按照《WS269-2007布病检验标准》进行血清学检验.结果 对捕获的长爪沙鼠647只,五趾跳鼠20只,达乌尔黄鼠19只,子午沙鼠48只,大沙鼠144只,经布鲁杆菌分离培养鉴定,结果均为阴性.对捕获的活鼠进行RBPT和SAT血清学检验,大沙鼠86份,长爪沙鼠109份,子午沙鼠4份,达乌尔黄鼠8份,结果均为阴性.结论 四子王旗草原野生鼠类未发现布鲁杆菌感染和带菌现象.     

用聚合酶链方法对北京林区莱姆病疫源地及莱姆病病原体基因型的探索性研究

目的：进一步明确北京林区是否存在莱姆病的自然疫源地及其分布，方法基于莱姆病螺旋体外膜蛋白A基因建立半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reactio,PCR)方法，对从北京6个林区采集的蜱和鼠进行检测和基因分型，选择阳性标准本进行克隆和序列测定，与已知序进行同源性比较，间接免疫荧光法检测抗莱姆病螺旋体IgG抗体，从长角血蜱中分离莱姆病螺旋体。结果：从门头沟区东灵山采集的标本中检测到莱姆病螺旋体DNA片段，3只游离全沟硬蜱1只检测阳性，57只寄全沟硬蜱若蜱中1只检测阳性；119只野鼠中9只检测阳性，其中8只，B.garinii阳性，1只B.afzelii阳性。50份野鼠血清有5份莱姆病螺旋体IgG抗体阳性，采集采的160只长角血蜱（20只／组）。未分离到莱姆病螺旋体菌株。结论：北京门头沟区东灵山可能存在莱姆病的自然疫源地，包括两个基因型，全沟硬蜱可能是莱姆病的传播媒体，野鼠可能是贮存宿主。     

浙江省在鼠类中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因

目的了解浙江省磐安县鼠中感染伯氏疏螺旋体的情况,研究以外膜蛋白A(OspA)为靶基因的PCR方法在浙江省的应用。方法利用PCR方法,检测磐安县128份鼠肝、脾标本中ospA基因特异片段;对所检测到的阳性结果进行序列测定,并进行分析。结果从128份鼠肝、脾标本中检测发现4例ospA基因阳性片段,其中3份来自黄毛鼠,1份来自大林姬鼠;核酸序列基本一致,与伯氏疏螺旋体法雷斯疏螺旋体高度相似。结论利用ospA基因能从标本中检测到伯氏疏螺旋体;浙江省部分山区存在鼠感染伯氏疏螺旋体的情况,其中伯氏疏螺旋体法雷斯疏螺旋体占优势。     

中国六省蜱中莱姆病螺旋体分离与鉴定

目的 了解中国6省蜱中莱姆病螺旋体携带情况.方法 在6省各选取2个采样点捕蜱,采用病原分离培养和巢式PCR方法对蜱进行莱姆病螺旋体检测,通过基因测序确定分型.结果 6省共采集到2200余只蜱,约1000只蜱用于病原分离培养,从吉林省长白县全沟硬蜱标本中分离到13株螺旋体,从贵州省道真粒形硬蜱标本中分离到9株螺旋体.1255只蜱用于PCR检测,从6省的蜱标本中检测到莱姆病螺旋体特异片段,其中吉林省(长白县27.08%、通化县20.41%)、青海省(互助县25.06%、黄南县21.11%)和贵州省(道真县25.63%)蜱中莱姆病螺旋体阳性率较高,山西省(垣曲县4.72%、交城县3.64%)蜱中莱姆病螺旋体阳性率较低.通过序列同源性分析确定吉林、青海、甘肃和山西省蜱中莱姆病螺旋体基因型均为Borrelia garinii.贵州、湖南省的基因型均为Borrelia valaisiana.结论 6省蜱中均带有莱姆病螺旋体,且带菌率有差异;山西省蜱中存在Borrelia ganmi型莱姆病螺旋体,湖南省蜱中存在Borrelia valaisiana型莱姆病螺旋体.     

内蒙古西部口岸地区鼠类及其携带病原体调查

  目的   对内蒙古西部二连浩特口岸、策克口岸、鄂尔多斯口岸三个主要口岸地区开展流行病学调查, 调查该地区鼠的种类、分布状况以及携带的主要病原体, 为做好国门口岸地区疾病防控提供基础数据。   方法   确定调查地点并采用夹夜法进行捕鼠; 对监测区内所获得鼠分类鉴定并解剖取各种脏器, 针对鼠疫杆菌、巴贝西原虫、巴尔通体、斑点热群立克次体、无形体、伯氏疏螺旋体6种病原体进行特异性PCR检测; 用MAGA 5.0分析软件, 采用Bootstrap方法1 000次重复分析使可信性叠加, 基于目的基因序列构建Neighbor-joining树图。   结果   本次调查在三个口岸捕获长爪沙鼠、达乌尔黄鼠、子午沙鼠、五趾跳鼠、三趾跳鼠、小家鼠、灰仓鼠、小毛足鼠8种共178只; 有四种病原体包括巴尔通体、斑点热群立克次体、无形体、伯氏疏螺旋体检出阳性核酸片段, 阳性率分别为43.26%、6.18%、17.98%和3.37%;核苷酸序列分析发现该地区存在Candidatus Rickettsia tarasevichiae斑点热群立克次体和多种无形体。   结论   内蒙古西部口岸地区, 鼠种丰富, 鼠类携带病原体种类较多, 在今后的防控工作中要加强防范。