长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

橙皮素通过Wnt/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨橙皮素对体外培养的人肝癌细胞MHCC97H增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,以及其作用机制。方法:用不同浓度的橙皮素处理MHCC97H细胞,采用细胞计数(CCK-8)实验检测橙皮素对细胞存活的影响,筛选合适的药物浓度,实验分为Con组(对照组)、HPT组(2.50μmol/L HPT)和HPT+LiCl组(2.50μmol/L HPT和10 mmol/L Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl),CCK-8和集落形成实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验分析细胞侵袭和迁移能力,采用Western blot分析相关蛋白表达情况。结果:在一定范围内随着橙皮素浓度的升高,对MHCC97H细胞存活率的抑制作用随之增加,计算得出橙皮素对MHCC97H细胞的半数抑制浓度(IC50)为4.77μmol/L,选择接近1/2 IC50浓度2.50μmol/L为后续实验加药浓度。橙皮素能够明显抑制MHCC97H细胞集落形成能力,促进细胞凋亡,阻碍细胞侵袭和迁移能力,上调剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3和-9的表...     

褪黑素通过激活典型Wnt/β-catenin信号通路促进许旺细胞迁移

背景:褪黑素主要是由松果体分泌的一种神经内分泌激素,能够促进许旺细胞增殖并促进周围神经损伤后再生。目的:探究褪黑素对许旺细胞迁移活性的影响及其相关分子机制。方法:体外培养大鼠许旺细胞RSC96细胞株并鉴定;CCK-8检测褪黑素对许旺细胞增殖活性的影响;采用Transwell细胞迁移小室,观察0,100 nmol/L,1μmol/L,10μmol/L褪黑素作用20 h对许旺细胞迁移活性的影响;采用qRT-PCR和Western-blot检测褪黑素受体1,2在许旺细胞上的表达情况;通过Transwell细胞迁移实验,观察褪黑素受体拮抗剂luzindole或典型Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1对褪黑素促进许旺细胞迁移活性的影响。Western-blot检测褪黑素对许旺细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性的调控作用。结果与结论:①贴壁培养的RSC96细胞具有许旺细胞的典型形态,细胞呈纺锤状或三角形,细胞两极伸出细长的突起;许旺细胞标志物S-100免疫荧光染色阳性;②相较于空白对照组,1,10μmol/L褪黑素能够显著促进许旺细胞迁移,对其产生化学性吸引作用,其中1μmol/L褪黑素作用最显著;③许旺细胞主要表达褪黑素受体1;Transwell细胞迁移实验表明,和单纯褪黑素处理组比较,luzindole和褪黑素共同干预组迁移的细胞数无显著性改变,而IWR-1和褪黑素共同干预组许旺细胞迁移的细胞数显著低于单纯褪黑素处理组(P<0.05);④qRT-PCR和Western-blot结果表明,相较于空白对照组,褪黑素组许旺细胞中P-Lrp6,LEF-1和细胞核β-catenin蛋白表达水平显著上调(P<0.05);⑤单纯褪黑素组和IWR-1+褪黑素组许旺细胞中LEF-1和核β-catenin蛋白表达量均显著高于空白对照组和单纯IWR-1组(P<0.05),表明褪黑素在一定程度上拮抗IWR-1对Wnt/β-catenin信号通路活性的抑制作用;⑥上述数据证实,褪黑素能够通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进许旺细胞迁移。     

下调LRH1 对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法：采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组（Ctrl）、阴性对照（NC）-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果：与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-...     

山柰酚通过Wnt/β-catenin信号通路抑制HBx-HepG2细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨山柰酚对HBx-HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并研究其潜在分子作用机制。方法:利用实时荧光定量PCR检测相关基因的表达水平,利用蛋白印迹实验检测相关蛋白的水平,流式细胞术检测细胞的凋亡率,MTT实验和平板集落形成实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭和转移。结果:山柰酚(10~200μmol/L)能够剂量和时间依赖性地抑制HBx-HepG2细胞的增殖。山柰酚(100μmol/L)能显著抑制HBx-HepG2细胞的集落形成数量、细胞侵袭能力以及细胞愈合率,诱导HBx-HepG2细胞凋亡,引起cleaved caspase-3、cleaved caspase-9及Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,降低β-catenin、c-Myc和cyclin D1 mRNA及蛋白的表达水平。山柰酚(100μmol/L)同时能够降低p-GSK-3β蛋白水平以及细胞质和细胞核中的β-catenin蛋白水平,对GSK-3β蛋白水平没有影响。Li Cl处理能够反转山柰酚(100μmol/L)对HBx-HepG2细胞的增殖、侵袭以及迁移抑制作用。结论:山柰酚对HBx-HepG2细胞的增殖、侵袭及转移有显著的抑制作用,这种抑制作用很有可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的。     

山荷叶素通过阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢上皮癌细胞侵袭和迁移

目的 探讨山荷叶素(DP)在卵巢上皮癌中的作用及潜在调控机制.方法 采用CCK-8法检测卵巢上皮癌细胞增殖活性、TranswellTM实验检测其侵袭和迁移、划痕实验检测细胞迁移.Western blot法检测其对Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路及凋亡相关蛋白,构建异种移植瘤模型,观察其体内抗肿瘤作用,最终建立...     

RUNX3通过Wnt/β-catenin通路抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的探讨人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)对乳腺癌细胞的抑癌作用,分析其对Wnt/β-catenin通路的调控机制。方法在乳腺癌细胞中RUNX3过表达或敲减后,通过CCK-8实验评估细胞增殖能力;通过划痕、Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;通过免疫共沉淀和Western blot法检测RUNX3对Wnt/β-catenin通路的调控作用。结果与对照组相比,过表达RUNX3后的乳腺细胞增殖能力、细胞迁移和侵袭能力均明显降低,敲减RUNX3后上述指标显著增高。在乳腺癌细胞中,RUNX3能够与β-catenin结合抑制Wnt/β-catenin通路下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的表达。结论 RUNX3能够在体外通过抑制Wnt/β-catenin通路而抑制乳腺癌细胞活性,并揭示了RUNX3抑制乳腺癌的新机制,提示其可能成为Wnt通路相关乳腺癌的潜在靶点。     

PRRX2通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞活力和迁移

目的:研究配对相关同源框2(paired-related homeobox 2,PRRX2)基因对胃癌细胞活力和迁移能力的影响,并分析其调控Wnt/β-catenin信号通路的机制。方法:通过生物信息学分析在线数据库中胃癌和正常胃组织的PRRX2表达水平及PRRX2在胃癌组织中的表达与胃癌患者总生存率的相关性;将PRRX2小干扰RNA(si RNA)和过表达质粒分别转染到胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,敲低和过表达PRRX2基因;MTT法和Transwell实验检测胃癌细胞的活力和迁移能力;Western blot和TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活化情况;免疫共沉淀实验检测PRRX2与β-catenin蛋白的相互作用。结果:敲低PRRX2能够减弱胃癌细胞MGC-803的活力和迁移能力(P0.05)。过表达PRRX2能够增强胃癌细胞SGC-7901的活力和迁移能力(P0.05),增加β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白的表达水平(P0.05),增强TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因活性(P0.05)。PRRX2与β-catenin蛋白存在相互作用。结论:PRRX2可促进胃癌细胞的活力和迁移,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

LRP8介导Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究LRP8在宫颈癌组织中的表达与临床病理特征及预后的相关性,并探讨LRP8对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法 免疫组化检测LRP8在宫颈癌及癌旁组织中表达情况;根据免疫组化结果将30例宫颈癌组织分为LRP8低表达组和LRP8高表达组,分析LRP8表达与宫颈癌患者年龄、病理学TNM分期、临床分期和组织学分级间相关性;通过GEPIA在线数据库分析LRP8表达与宫颈癌患者总生存期相关性;将LRP8敲减或过表达质粒转染宫颈癌细胞,Western blot检测细胞LRP8表达,CCK-8检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞β-catenin表达。结果 LRP8在宫颈癌组织中表达上调。LRP8高表达与宫颈癌患者较高的病理学T分期、病理学N分期和临床分期及较低的总生存期相关,与患者年龄、病理学M分期和组织学分级无关。敲减LRP8降低宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力及β-catenin蛋白表达水平;反之,过表达LRP8增加宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力及β-catenin蛋白表达水平。结论 LRP8在宫颈癌组织中高表达,其高表达...     

Wnt/β-catenin通路在动脉粥样硬化发生发展中的作用

Atherosclerosis is a multifactorial process associated with endothelial cell injury and dysfunction, inflammation, oxidative stress, cell proliferation, angiogenesis and so on, all of which play a crucial role in atherosclerosis. Wnt/β-catenin signaling pathway is highly conservative in the development of body, abnormal activation of which is related to types of diseases including cancer. Accumulating studies have shown that Wnt/β-catenin signaling pathway is involved in inflammation, oxidative stress and so on. This article would make a review about the role of Wnt/β-catenin signaling pathway in atherosclerosis based on the pathogenic mechanisms underlying atherosclerosis as mentioned above.     

糖尿病溃疡中Wnt/β-catenin信号通路表达的变化

目的:观察糖尿病(DM)溃疡中Wnt/β-catenin信号通路表达的变化,探讨该信号通路在糖尿病难愈性溃疡中的作用。方法:雌性Wistar大鼠采用高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素液腹腔注射法制备糖尿病模型。分别取正常对照组与DM组制作溃疡模型。观察创面造模后第3天、第7天和第14天对照组及DM组创面愈合情况的变化,并采用HE染色法检测创面组织形态结构的变化,采用ELISA法和RT-PCR法检测创面组织中β-catenin、GSK-3β和Rspo-3蛋白及mRNA的变化。结果:DM组大鼠的创面愈合率明显低于对照组(P0.05),且与对照组相比,其创面组织中含有较少的炎性细胞、纤维母细胞及新生毛细血管。DM组大鼠创面组织中β-catenin和Rspo-3蛋白及mRNA的表达水平均低于对照组,GSK-3β蛋白及mRNA的表达水平均高于对照组(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin通路的下调有可能导致了糖尿病溃疡的难愈,而该通路的下调可能源自于Rspo-3蛋白表达的下降。     

Raptor通过Wnt3a/β-catenin信号通路对乳腺癌侵袭与转移的作用

目的探讨Raptor是否可以通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。方法采用免疫印迹法(Western blotting)检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231(MDA231)中Raptor蛋白的表达情况;采用小RNA(RNAi)干扰技术将质粒转染MDA231,将过表达质粒转染MCF-7;趋化运动实验检测乳腺癌细胞的运动能力;Transwell侵袭实验检测乳腺癌细胞的侵袭能力;Western blotting检测上皮细胞-间充质转化(EMT)标志物的表达情况;核质分离实验检测β-联蛋白(β-catenin)的转核情况。结果 Western blotting法检测结果显示,Raptor在低转移细胞系MCF-7中低表达,而在高转移细胞系MDA231中高表达。转染后,SiRaptor/MDA231细胞组中Raptor蛋白的表达明显下降,MCF-7/Raptor细胞组中Raptor蛋白的表达明显升高,表明转染成功。用Wnt3a刺激处理后,趋化运动和Transwell侵袭实验结果显示,SiRaptor/MDA231细胞组运动和侵袭能力明显降低,MCF-7/Raptor细胞组运动和侵袭能力明显增强。Western blotting法检测结果显示,用Wnt3a和抑制剂Dkk1不同处理后,SiRaptor/MDA231细胞组中上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)上调,波形蛋白(vimentin)下调,细胞核中β-catenin的表达降低,而MCF-7/Raptor细胞组中E-cadherin蛋白下调,vimentin蛋白上调,β-catenin蛋白的表达升高。结论 Raptor能通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进EMT的发生,进而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。     

胡桃醌通过调节Wnt/β-catenin/Snail通路抑制前列腺癌细胞上皮-间充质转化

目的:探讨胡桃醌对人前列腺癌细胞上皮-间充质转化的抑制作用及其机制。方法:培养人前列腺癌LNCaP细胞,实验设置对照组(无胡桃醌)、12. 5μmol/L胡桃醌组和25μmol/L胡桃醌组,后2组用胡桃醌作用LNCaP细胞24 h。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力; Western blot实验检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)和Snail的蛋白表达水平;使用LiC l和胡桃醌联合作用LNCaP细胞后,Western blot实验检测Snail和E-cadherin的蛋白表达。结果:Transwell实验结果表明,与对照组相比,胡桃醌作用LNCaP细胞后侵袭能力下降(P 0. 01)。Western blot的结果表明,胡桃醌作用LNCaP细胞后E-cadherin的蛋白表达升高,vimentin和Snail及细胞核中β-catenin蛋白的表达降低(P 0. 01)。与胡桃醌组比较,胡桃醌与LiC l联合作用LNCaP细胞后Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(P 0. 01)。结论:胡桃醌可能通过抑制Wnt/β-catenin/Snail信号通路而抑制LNCaP细胞上皮-间充质转化。     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

Pin1通过抑制Wnt/β-catenin信号参与CKD-MBD的发病

慢性肾脏病-矿物质和骨异常（CKD-MBD）是慢性肾脏病（CKD）常见并发症之一。近年研究表明骨代谢异常在CKD早期即已出现,是CKD-MBD发生发展的中心环节。而骨细胞特异性Wnt/β-catenin信号的异常是造成CKD骨代谢紊乱的重要机制。肽酰脯氨酰胺同分异构酶（Pin1）依赖的磷酸化丝/苏-脯氨基酸基序异构是调控Wnt/β-catenin信号通路的重要途径,Pin1的调节异常能够改变Wnt/β-catenin信号的作用,可能参与CKD MBD的进展。本文旨在探讨Pin1通过抑制Wnt/β-catenin信号参与CKD-MBD的发病。