RNA干扰TRAF4表达下调Notch1信号通路增强肺癌替莫唑胺化疗敏感性

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF) 4表达对肺癌替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测SPC-A-1、A549、H322、H1299肺癌细胞相对于人胚肺成纤维细胞MRC5中TRAF4的表达量;TRAF4的siRNA转染和替莫唑胺处理A549细胞,细胞被分为空白对照组、阴性对照组、TRAF4-siRNA组、替莫唑胺组和TRAF4-siRNA+替莫唑胺组,细胞培养48 h,RT-PCR及Western印迹检测各组A549细胞TRAF4的表达; CCK8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力(OD值)及凋亡率; Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch神经同源蛋白(Notch) 1前体信号中Notch1和下游重要靶基因发状分裂相关增强子(Hes) 1的蛋白表达。结果 TRAF4在4个肺癌细胞中的表达水平均显著高于其在MRC5细胞中的表达(P<0. 05); TRAF4-siRNA转染A549细胞后,TRAF4的表达显著低于空白对照组(P<0. 05); TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组细胞凋亡率及Caspase-3和Bax的表达均显著高于空白对照组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于空白对照组,TRAF4-siRNA+替莫唑胺组凋亡率及Caspase-3和Bax的表达显著高于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组(P<0. 05)。结论抑制肺癌细胞TRAF4表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞活力及诱导细胞凋亡,并可增强替莫唑胺化疗敏感性。     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

补体应答基因32基因对心肌梗死心肌细胞凋亡及免疫机制的影响

目的探讨补体应答基因(RGC)32基因对心肌梗死心肌细胞凋亡及免疫机制的影响。方法建立心肌梗死模型,Western印迹检测心肌组织中RGC32的蛋白表达;从大鼠乳鼠获得原代心肌细胞,分为正常对照组、阴性对照组(转染不具有干扰作用的siRNA并进行缺血缺氧处理)、缺血缺氧组、缺血缺氧+RGC32-siRNA组(转染干扰RGC32表达的siRNA并进行缺血缺氧处理),细胞培养48 h后,通过Western印迹检测各组细胞中RGC32、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;TUNEL法检测各组细胞凋亡率;RT-PCR检测各组细胞炎症因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果心肌梗死心肌组织中RGC32的蛋白表达显著高于正常心肌组织(P0.05);阴性对照组和缺血缺氧组RGC32、Caspase3、Bax、Notch1、Hes1、IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),缺血缺氧组RGC32、Caspase3、Bax、IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡率均显著高于正常对照组和缺血缺氧+RGC32-siRNA组,Notch1和Hes1表达均显著低于正常对照组和缺血缺氧+RGC32-siRNA组(P0.05)。结论 RGC32基因在心肌梗死心肌组织表达升高,抑制心肌细胞RGC32基因表达可降低细胞凋亡,提高免疫及激活Notch1通路。     

FABP3基因对心肌细胞凋亡的影响

目的脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组、FABP3沉默组、FABP3沉默+空质粒组及FABP3沉默+过表达人FABP3组,转染72 h后Western印迹检测各组细胞中FABP3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western印迹检测Cleaved caspase3、Bcl-2蛋白表达。结果空白对照组与阴性对照组及FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组之间FABP3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组FABP3的蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组,FABP3沉默+过表达人FABP3组FABP3的蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01);FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白对照组与阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组FABP3(P<0.01);沉默+过表达人FABP3组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组,Bcl-2蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01)。结论沉默FABP3的表达可促进H9C2心肌细胞凋亡,过表达则抑制细胞凋亡,其机制与调节Cleaved caspase3及Bcl-2蛋白表达有关。     

沉默转化生长因子β1表达与抑制肾小管上皮细胞(HK-2)Notch信号通路的相关性研究

目的探讨沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达与抑制肾小管上皮(HK-2)细胞Notch信号通路的相关性。方法检测TGF-β1在DN的表达;TGF-β1小干扰RNA(TGF-β1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染HK-2,空脂质体转染细胞为对照,检测各组TGF-β1;将HK-2分为低糖、高糖、siRNA-NC+高糖和TGF-β1-siRNA组+高糖组,检测细胞存活,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达。结果 TGF-β1在DN表达高于正常肾组织(P0.05);TGF-β1-siRNA组TGF-β1表达低于对照组(P0.05);高糖组细胞存活低于低糖组,凋亡率、Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1高于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与高糖组相当(P0.05);TGF-β1-siRNA+高糖组细胞存活高于高糖组,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1低于高糖组(P0.05)。加入GSI细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与沉默TGF-β1一致。结论 TGF-β1在DN高表达,高糖能抑制HK-2的存活,促进凋亡,沉默TGF-β1能减弱这种效果,可能与Notch信号通路调控有关。     

白细胞介素-8基因在鼻息肉组织中的表达及对鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-8基因在鼻息肉组织中的表达及对鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响。方法 Western印迹检测IL-8在鼻息肉组织及下鼻甲组织中的表达;从鼻息肉组织中分离培养人鼻黏膜上皮细胞(HNEC),将IL-8小干扰RNA(IL-8-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,Western印迹检测转染效果;各组转染细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹检测酶切caspase3蛋白表达。结果 IL-8在鼻息肉组织中的表达显著高于下鼻甲组织(P<0.01);siRNA-NC组与对照组差异无统计学意义(P>0.05),IL-8-siRNA组显著低于对照组(P<0.01);siRNA-NC组细胞凋亡率及酶切caspase3蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),IL-8-siRNA组均显著高于对照组(P<0.01)。结论 IL-8在鼻息肉组织中高表达,沉默IL-8的表达能通过上调酶切caspase3蛋白表达促进HNEC凋亡。     

葛根素调控p38信号通路对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨葛根素调控p38信号通路对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响。方法葛根素处理大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组(细胞无特殊处理)、H_2O_2组(200μmol/L H_2O_2干预细胞)和葛根素+H_2O_2组(250μmol/L葛根素和200μmol/L H_2O_2干预细胞),SB203580作为p38信号通路抑制剂,各组细胞处理24 h,通过流式细胞仪检测各组凋亡率;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(酶切caspase3)、p53、p-p38的蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率显著升高,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著升高(P0.05);与H_2O_2组比较,葛根素+H_2O_2组凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P0.05);与葛根素+H_2O_2组比较,葛根素+H_2O_2+SB203580组细胞凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论葛根素可通过抑制p38信号通路及下调酶切caspase3和p53表达降低H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡。     

LATS2基因通过Wnt信号通路对H9C2心肌细胞保护的作用机制研究

目的探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对缺氧复氧(H/R)诱导的H9C2心肌细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法 LATS2 siRNA或LATS2过表达质粒转染H9C2心肌细胞,并分别转染阴性对照siRNA及空载体(vector),转染48 h后,通过Western blotting检测转染后的各组细胞中LATS2的蛋白表达;建立H/R模型,细胞分为正常对照组(Control组)、单纯缺氧复氧组(H/R组)、H/R+LATS2-siRNA组和H/R+pcDNA3.1-LATS2组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blotting检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果 siRNA组和PcDNA3.1组的LATS2蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05),而LATS2-siRNA组LATS2的蛋白表达显著低于Control组(P0.05),pcDNA3.1-LATS2组LATS2的蛋白表达显著高于Control组(P0.05);与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高(P0.05),与H/R组比较,H/R+LATS2-siRNA组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高,H/R+pcDNA3.1-LATS2组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论抑制LATS2基因表达可诱导心肌细胞凋亡及上调Wnt信号通路,而抑制LATS2基因表达反之。     

激活Notch1通路减轻高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的明确Notch1通路在高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其潜在机制。方法常规培养H9C2心肌细胞并将其分6组即对照组;H/R组;高温高湿组;高温高湿+H/R组;高温高湿+Jagged1(Notch1激动剂)+H/R组;高温高湿+溶剂+H/R组。TUNEL法检测细胞凋亡,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位,ATP检测试剂盒检测ATP含量,Western blot检测Notch1细胞内段(Notch1 intracellular domain,Notch1 ICD)、Hairy和分裂增强子(Hairy and enhancer of split,Hes1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein1 light chain 3,LC3)和p62的蛋白表达水平。结果与对照组相比,急性损伤H/R后,细胞凋亡增加(P0.05),线粒体膜电位降低(P0.05),ATP含量减少(P0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I(p62相应降低)表达升高(P0.05),而慢性损伤高温高湿后,细胞凋亡增加(P0.05),线粒体膜电位降低(P0.05),ATP含量减少(P0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I表达降低(p62相应升高)(P0.05);和H/R组或高温高湿组对比,高温高湿+H/R组中细胞凋亡进一步增加(P0.05),线粒体膜电位和ATP含量进一步降低(P0.05),Notch1ICD、Hes1、LC3-II/I表达进一步降低(p62进一步升高)(P0.05);和高温高湿+H/R组对比,加入Notch1激动剂Jagged1后,细胞凋亡减少(P0.05),线粒体膜电位和ATP含量增高(P0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I表达升高(p62相应降低)(P0.05)。结论激活Notch1通路通过促进自噬从而缓解高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine~(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。     

miRNA-21调控胃癌细胞增殖及侵袭的机制

目的探讨靶向沉默miRNA-21表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响和机制。方法将人胃癌SGC-7901细胞分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA miRNA-21基因的沉默组,按照Invitrogen公司的脂质体Lipofectamine~(TM)2000方法进行转染,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达。结果转染siRNA miRNA-21后能显著降低miRNA-21的表达(P<0.01);与正常对照组及转染阴性组比较,沉默组细胞存活率、细胞侵袭数显著降低,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论靶向沉默miRNA-21表达能显著降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

RNA干扰TAGLN2基因对TGF-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰TAGLN2基因对转化生长因子(TGF)-β1诱导心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 H9c2心肌细胞分为空白对照组、NC组、TGF-β1组和TGF-β1+si-TAGLN2组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM)2000说明,Western印迹检测TAGLN2、p53、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)3、B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子(NF)-κB p65和IκB-α的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平。结果转染si-TAGLN2的H9c2心肌细胞TAGLN2蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,TGF-β1组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著升高,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α蛋白表达均显著降低(P0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+si-TAGLN2组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著降低,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α的蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 TAGLN2基因表达抑制可降低由TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS水平、激活PI3K/AKT信号和抑制NF-κB信号有关。     

microRNA-1在急性心肌梗死大鼠中的表达以及对心肌细胞凋亡影响

目的研究microRNA-1(miR-1)在急性心肌梗死(AMI)大鼠中的表达及对心肌H9C2细胞凋亡的影响。方法将30只8～10周龄大鼠随机分为正常对照组、假手术组和模型组,每组10只。模型组采用开胸结扎冠状动脉(冠脉)的方法建立急性心肌梗死大鼠模型,假手术组大鼠仅开胸不结扎冠脉,正常对照组大鼠不做任何处理。通过缺氧、无血清培养构建缺血H9C2细胞模型,将H9C2细胞分为三组:对照组、阴性组和抑制组,对照组细胞不做任何处理,阴性组细胞转染NC,抑制组细胞转染miR-1 inhibitor。荧光定量PCR(qPCR)检测大鼠缺血心肌组织和H9C2细胞中miR-1的表达量,流式细胞术检测H9C2细胞凋亡率,免疫印迹试验(Western Blot)检测H9C2细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达量。结果正常对照组和假手术组大鼠心肌组织中miR-1表达量差异无统计学意义(P0.05);与正常对照组和假手术组大鼠相比,模型组鼠心肌组织中miR-1的表达量显著升高(P0.05);对照组和阴性组H9C2细胞中miR-1表达量、细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达水平差异均无统计学意义(P0.05);与对照组和阴性组相比,抑制组H9C2细胞中miR-1的表达量显著下调(P0.05),细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达水平水平显著降低(P0.05)。结论 miR-1在大鼠心肌梗死模型中的表达量增加,具有促进心肌细胞凋亡的作用。     

下调Jagged1表达对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨下调Jagged1表达对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法将培养的RPMI8226细胞随机分为对照组(不做转染)、siRNA control组(转染negative control)和siRNA Jagged1组(转染Jagged1-siRNA),以RT-PCR检测各组细胞中Jagged1 mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期分布和凋亡率;Western印迹检测细胞中Jagged1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和酶切半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,siRNA Jagged1组细胞中Jagged1 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、S期细胞比例、Cyclin D1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著降低,G0/G1期细胞比例、凋亡率和酶切caspase-3蛋白表达显著升高(P0.05);而siRNA control组细胞中各指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论下调Jagged1表达可抑制骨髓瘤RPMI8226细胞增殖,阻滞细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达及上调酶切caspase-3蛋白表达有关。     

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。     

脑缺血损伤中Notch信号通路活性的非配体依赖性改变及其作用

目的观察脑缺血损伤Notch信号转导通路的非配体依赖性活性变化及其对缺血损伤的影响。方法建立神经元样PC12细胞氧糖剥夺(OGD)模型模拟脑缺血损伤。OGD 12 h行Notch1-siRNA,实时PCR技术检测Notch1 mRNA表达,Western印迹技术检测Notch1、Notch1胞内段NICD蛋白表达,流式细胞仪检测Notch1-siRNA对缺血损伤细胞凋亡率。结果 OGD组Notch1 mRNA表达较正常对照组显著升高,OGD+Notch1-siRNA组较OGD组显著降低(P<0.05);OGD组Notch1及NICD蛋白表达较正常对照组均显著升高,OGD+Notch1-siRNA组较OGD组显著降低(P<0.05);OGD+Notch1-siRNA组细胞凋亡率较OGD组显著升高(P<0.05)。结论缺血性脑损伤可诱导非配体依赖性的Notch1信号转导通路活化,其可能在脑缺血特定时程发挥抗凋亡脑保护作用。     

p38MAPK信号通路介导右美托咪定对缺氧/复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定(Dex)是否通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的保护作用。方法培养大鼠心肌细胞H9c2,随机分为空白对照组、H/R组、Dex预处理(Dex+H/R)组、抑制剂SB203580(H/R+SB)组和Dex预处理+SB203580(Dex+H/R+SB)组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量,分光光度计检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western印迹检测细胞中磷酸化(p)-p38MAPK、细胞色素(Cyt)C和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白水平。结果与H/R组比,Dex预处理可提高H9c2细胞活力,降低细胞凋亡率,下调LDH和CK的漏出量,减少MDA含量,上调SOD和GSH-Px活性,抑制p-p38MAPK、CytC和酶切Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580可明显增强Dex对H/R心肌细胞损伤的保护作用。结论 Dex可能通过p38MAPK信号通路抑制细胞中的氧化应激,下调CytC和酶切Caspase-3蛋白的表达,抑制H9c2细胞凋亡对H/R心肌细胞损伤的保护作用。     

Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响。方法通过Western印迹检测Notch1在人正常肾小管上皮细胞HK-2,人肾癌细胞786-O,Caki-1,769-P,GRC-1及ACHN中的表达;siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,Western印迹及RT-PCR检测转染情况,MTT法及Hoechst染色检测细胞活力及凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,Western印迹检测Bax,Bcl-2,基质金属蛋白酶(MMP)2,MMP9蛋白表达。结果 HK-2细胞中Notch1蛋白表达量显著低于5株肾癌细胞786-O,769-P,GRC-1,Caki-1及ACHN,且在Caki-1中Notch1表达量最高,因此作为后续实验的细胞株。siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,与siRNA NC组比较,siRNA Notch1组Notch1蛋白及mRNA表达量下调,细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞侵袭数目减少,Bax表达量上调,Bcl-2、MMP2及MMP9表达量下调(P<0.01)。结论 Notch1低表达能显著抑制肾癌细胞Caki-1的恶性生物学行为,可能与调控细胞凋亡蛋白及下调MMPs表达有关。     

靶向抑制乳腺癌细胞GLS1基因表达对癌细胞凋亡的影响

目的探讨抑制乳腺癌细胞谷氨酰胺酶(GLS) 1基因表达对癌细胞凋亡的影响。方法参照Lipofectamine~(TM) 2000说明将合成的GLS1 siRNA及无干扰作用的siRNA转染MCF-7细胞,分别为GLS1-siRNA组和阴性对照组,并设置空白对照组,转染48 h后,Western印迹检测GLS1、凋亡相关蛋白survivin、p53及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路PI3K和磷酸化(p-AKT)的蛋白表达; 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测GLS1-siR-NA转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞仪检测GLS1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率。结果转染GLS1-siRNA的MCF-7细胞GLS1蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05);与空白对照组比较,GLS1-siRNA组细胞在转染24、48和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,survivin、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论抑制GLS1基因在乳腺癌中的表达可降低细胞活力,促进细胞凋亡及下调PI3K/AKT信号通路,其中诱导细胞凋亡的方式是下调survivin表达和上调p53表达。