miR-365对乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的研究miR-365在人乳头状甲状腺癌株TPC-1细胞中的表达和生物学作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-365在正常人甲状腺上皮细胞NTHY-ORI 3-1和乳头状甲状腺癌TPC-1细胞中的表达。把TPC-1细胞分为3组,即空白组、对照组和miR-365过表达组,空白组不作处理,将Control-mimics和miR-365 mimic分别转染至对照组和miR-365过表达组。另将TPC-1细胞分为3组,即空白组、对照组和miR-365抑制剂组,空白组不作处理,将Control-抑制剂(inhibitors)和miR-365 inhibitor分别转染至对照组和miR-365抑制剂组。分别采用CCK8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力。结果 miR-365在TPC-1细胞中表达水平明显低于NTHY-ORI 3-1细胞(P0.01)。与空白组和对照组相比,TPC-1细胞的增殖率可明显被miR-365 mimic降低(P0.01),而TPC-1细胞的增殖率可明显被miR-365 inhibitor增加(P0.01)。TPC-1细胞在miR-365 mimic转染后的24 h迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。然而,TPC-1细胞转染miR-365 inhibitor后,迁移和侵袭能力明显提高(P0.01)。结论在乳头状甲状腺癌细胞中miR-365表达下调,TPC-1细胞体外增殖、迁移和侵袭能力通过体外过表达可明显被抑制。     

微小RNA-101对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA-101(miR-101)对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法取对数生长期PANC1细胞分为5组, 除对照组外, 分别为转染miRNA模拟体的阴性对照(mimic-NC)组、转染miRNA-101模拟体(miR-101 mimic)组、转染miRNA抑制剂的阴性对照(inhibitor-NC)组、转染miRNA-101抑制剂(miR-101 inhibitor)组。采用qRT-PCR检测miR-101相对表达水平, MTT法检测细胞增殖率, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, Transwell实验检测细胞侵袭能力, qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 mRNA蛋白的相对表达水平, 双荧光素酶报告基因法检测miR-101与IL-6的靶向关系。结果转染48 h后, 对照组、mimic-NC组、miR-101 mimic组、inhibitor-NC组、miR-101 inhibitor组PANC1细胞miR101表达水平分别为1.98±0.12、2.01±0.18、6.73±0.23、2...     

miR-151a-3p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的探讨miR-151a-3p在胰腺癌细胞中的表达及miR-151a-3p表达对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-151a-3p在三种胰腺癌细胞系的表达情况;利用脂质体转染技术将miR-151a-3p mimic和mimic NC转染至胰腺癌BxPC-3细胞中,qRT-PCR检测转染后miR-151a-3p在BxPC-3细胞中的表达水平;CCK-8法检测转染后BxPC-3细胞的增殖能力;Transwell实验检测转染后BxPC-3细胞的迁移及侵袭能力;流式细胞术检测转染BxPC-3细胞的凋亡能力。结果 qRT-PCR结果显示,3种胰腺癌细胞系中miR-151a-3p表达水平均显著升高(P0.01),其中,BxPC-3细胞中miR-151a-3p表达水平最高;转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞中miR-151a-3p表达水平显著高于mimic NC和空白组(P0.001);CCK-8实验结果显示,转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞增殖能力显著高于mimic NC和空白对照组(P0.01);Transwell实验结果显示,转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞迁移及侵袭能力显著高于mimic NC和空白对照组(P0.01);流式细胞术结果显示,转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞凋亡率显著低于mimic NC和空白对照组(P0.001)。结论 miR-151a-3p在胰腺癌细胞中高表达,过表达miR-151a-3p促进胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡。     

miR-145-5p通过靶向PAK4促进非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性

目的 研究miR-145-5p通过靶向p21活化激酶(PAK)4对非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性的作用及机制。方法 RT-qPCR检测miR-145-5p mRNA和PAK4 mRNA的表达,利用Lipofectamine2000将miR-NC(miR-NC组)、miR-145-5p mimic(miR-145-5p mimic组)、miR-145-5p inhibitor(miR-145-5p inhibitor组)、pc-PAK4质粒分别或联合转染进入A549/GR细胞,未转染的A549/GR细胞为对照组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告检测靶向关系,Western印迹检测PAK4蛋白相对表达水平。在裸鼠左腋下皮下注射转染过的A549/GR细胞,分为空白组、miR-145-5p mimic组、pc-PAK4组、miR-145-5p mimic+pc-PAK4组。每隔一天给每只小鼠口服吉非替尼(100 mg/kg)。第24天颈椎脱位法处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,电子天平称重,RT-PCR检测小RNA和靶基因表达,TUNEL染色检测凋亡。结果 与正...     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A549细胞)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-200组(转染miR-200-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-PD-L1组(转染si-PD-L1)、miR-200+pEGFP组(转染miR-200-mimic+pEGFP)及miR-200+pEGFP-PD-L1组(转染miR-200-mimic+pEGFP-PD-L1)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-200表达水平;MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞PD-L1表达水平;荧光素酶实验验证miR-200与PD-L1的靶向关系。结果与HLF-1相比,A549细胞胞miR-200表达水平降低,PD-L1基因、蛋白表达升高(P0.05)。48和72 h时,miR-200组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、miR-NC组(P0.05)。48和72 h时,si-PD-L1组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、si-NC组(P0.05)。miR-200+pcDNA-PD-L1组细胞48、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量高于miR-200+pcDNA组、miR-200组(P0.05)。与对照组相比,A549细胞PD-L1野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P0.05),PD-L1突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P0.05)。结论 miR-200可负性调控PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-126靶向抑制A549细胞迁移和侵袭能力的研究

目的研究microRNA-126（miR-126）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响。方法利用脂质体介导法将十勾建的miR126过表达质粒转染至NSCI．C细胞株A549细胞（A549／miR-126组）,并设空质粒转染组（A549／MOCK组）和空白对照组（A549组）。利用RT-PCR技术检测3组细胞中EGFI。7（miR126的靶标）的表达水平,采川细胞划痕实验观察细胞迁移能力差异,采用Transwell小室法分析3组细胞侵袭能力的差异。结果RT—PCR检测A549／miR-126组、A549／MOCK组和A549组细胞中EGFI。7mRNA分别为2．32±0．088、1．43±0．026和1．00±0．000,差异有统计学意义（P〈0．01）;细胞划痕实验显示A549／miR—126组、A549jM（）CK组和A549组细胞平均迁移距离分别为3．0μm、2．65μm和0．5μm,平均抑制率分别为0、11．25％和83．75％,差异有统计学意义（P〈O．05）;Transwell小室实验显示,A549／miR126组24hr侵袭细胞数为（28．6±2．322）个,36h侵袭细胞数为（29．2±3．7683）个,A549／M（）CK组24h为（49．8±3．7014）个,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-126可上调EGFL7mRNA的表达,并可能通过表达产物EGFI。7蛋白抑制A549细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-425对胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨miR-425对人胶质细胞瘤U87细胞迁移与侵袭能力的影响。方法利用Lipo2000转染试剂体外瞬时转染人胶质细胞瘤U87,将细胞分为实验组(转染miR-425 mimics)、抑制组(转染miR-425 inhibitors)、空白组(无转染)。Real-time PCR检测细胞中miR-425表达;划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测细胞的迁移以及侵袭能力,Western印迹检测基质金属蛋白(MMP)2、MMP9的表达水平。结果与空白组相比,miR-425 mimics组miR-425表达明显上调,约为空白组的8倍,细胞侵袭与迁移能力下降,MMP2、MMP9表达下降,miR-425 inhibitors组miR-425表达明显下调,约为空白组的0.14倍,细胞侵袭与迁移能力显著增强,MMP2、MMP9表达增强。结论 miR-425的表达水平与胶质瘤U87细胞的迁移与侵袭能力密切相关。     

miR-526b-3p调控TROAP基因介导Wnt信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究miR-526b-3p调控滋养素相关蛋白(TROAP)基因介导Wnt信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖与侵袭迁移的影响。方法 测定人肺泡上皮细胞及NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299中miR-526b-3p及TROAP、Wnt基因的表达水平。将体外培养的A549细胞随机分为对照组、miR-526b-3p mimic组、miR-526b-3p mimic阴性对照组、miR-526b-3p mimic+TROAP过表达组、miR-526b-3p mimic+Wnt过表达组，分组转染后，测定各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、细胞增殖相关基因(Cyclin D1)、凋亡相关基因(Bax、Caspase-3)、上皮间质转化相关基因(E-cadherin、Vimentin)、TROAP基因、Wnt基因及miR-526b-3p表达、细胞Cyclin D1、Bax、Caspase-3、E-cadherin、Vimentin、TROAP及Wnt蛋白表达、miR-526b-3p对TROAP的靶向调控作用。结果 与对照组相比，miR-526b-3p mimic组细胞呈...     

重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞，分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组，分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液，干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力（以细胞增殖活力表示），细胞划痕实验检测细胞迁移能力（以细胞迁移率表示），Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力（以侵袭细胞数表示），Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达，实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞，分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组，miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC，并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液，阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液，干预24 h，参照上法检测...     

肺癌组织中miRNA-34a表达对肺癌细胞系A549增殖和迁移的影响

目的探讨肺癌组织中微小RNA(miR)-34a的表达情况及其对肺癌细胞系A549增殖和迁移的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在肺癌组织和肺癌细胞系A549中的表达情况。克隆形成实验检测miR-34a对肺癌细胞系A549增殖能力的影响;划痕实验检测miR-34a对肺癌细胞系A549迁移能力的影响。Target Scans软件预测miR-34a可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因。Western印迹方法检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果 miR-34a在肺癌组织和肺癌细胞系A549中的表达较正常组织显著降低(P0.01)。转染miR-34a可显著抑制A549细胞的增殖和迁移能力(P0.01),而转染miR-34a抑制剂可增加A549细胞的增殖和迁移能力(P0.01)。Target Scans软件预测miR-34a可能的靶基因为B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制A549细胞中Bcl-2的表达(P0.01),而转染miR-34a抑制剂可增加A549细胞中Bcl-2的表达(P0.01)。结论 miR-34a可通过调节Bcl-2的表达而发挥肺癌抑制作用。     

微小RNA对内皮细胞炎性反应过程中血管内皮细胞黏附分子1表达的影响

目的研究微小RNA(miRNA,miR-126)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达,探讨miR-126对内皮细胞炎性反应过程中VCAM-1表达的影响。方法 HUVEC培养后分6组,空白对照组,模型组,miR-126mimic组,miR-126inhibitor组,A组和B组,后4组用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-126mimic、miR-126inhibitor及miRNA mimics control、miRNA inhibitor control 24h后,加脂多糖1μg/ml刺激,在8h时,用实时荧光定量PCR检测miR-126、VCAM-1 mRNA表达;Western blot法测VCAM-1蛋白表达,并进行比较。结果模型组miR-126mRNA较空白对照组降低,为(0.056±0.004)倍(P0.01),而VCAM-1mRNA较空白对照组升高(12.50±2.55)倍(P0.01),VCAM-1蛋白表达明显升高(P0.01)。miR-126mimic组miR-126mRNA相对表达较A组升高(51.18±2.30)倍(P0.01),VCAM-1mRNA相对表达为A组(0.81±0.04)倍(P0.01),VCAM-1蛋白表达较A组明显降低(P0.01);miR-126inhibitor组miR-126mRNA表达较B组降低(0.032±0.011)倍(P0.01),VCAM-1mRNA水平较B组高(1.42±0.10)倍(P0.05),VCAM-1蛋白表达较B组明显升高(P0.05)。结论过表达miR-126在8h时下调VCAM-1的表达,提示miR-126可能通过抑制VCAM-1的表达,参与抑制脂多糖诱导的HUVEC的炎性反应。     

miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨microRNA(miR)-126在人结肠癌细胞中的表达以及对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法通过实时定量RT-PCR检测结肠癌患者的结肠癌组织以及癌旁组织中miR-126的表达情况。通过慢病毒转染构建miR-126稳定过表达细胞系,并进一步通过体外实验研究miR-126对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,miR-126在结肠癌细胞中表达率(55%)显著低于癌旁组织的87.5%(P0.05);miR-126的表达与患者是否发生转移及结肠癌临床Dukes分期显著相关(P0.05)。利用慢病毒转染构建的miR-126过表达SW480细胞系进行体外实验显示miR-126可以抑制SW480细胞的增殖,转染组与空白对照组12 h、24 h、48 h吸光度值差异均有统计学意义(P0.05);miR-126可以抑制结肠癌细胞迁移和侵袭的能力。Transwell实验中,转染组与空白对照组细胞迁移数差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miR-126可明显抑制结肠癌细胞的发生发展,影响结肠癌细胞的生物学行为。     

miR-125a对肺癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的研究

目的探讨miR-125a在肺癌细胞增殖凋亡侵袭中的作用。方法以肺癌细胞A549、NCL-H661、NCL-H460、SPC-A-1和支气管上皮细胞HBE为研究对象,提取细胞RNA,反转录合成miR-125a的cDNA,RT-PCR检测细胞中miR-125a的表达水平。转染miR-125a inhibitor、inhibitor control、miR-125a mimics、mimics control到细胞A549中,MTT法检测细胞增殖情况,原位末端标记法检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞侵袭力。结果 miR-125a表达水平按照由大到小的顺序依次为:HBE、SPC-A-1、NCL-H460、NCL-H661、A549细胞,肺癌细胞中miR-125a表达水平均低于支气管上皮细胞HBE。miR-125a inhibitor组比inhibitor control组抑制率低(P0.01);miR-125a mimics组比mimics control组抑制率高(P0.01)。miR-125a inhibitor组比inhibitor control组凋亡率低(P0.05),miR-125a mimics组比mimics control组凋亡率高(P0.01)。miR-125a inhibitor组侵袭力比inhibitor control侵袭力强(P0.01);miR-125a mimics组侵袭力比mimics control侵袭力低(P0.01)。结论 miR-125a在肺癌细胞A549、NCL-H661、NCL-H460、SPC-A-1中低表达,miR-125a可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低细胞侵袭力。     

miR-202通过靶向EGFR抑制A549细胞的增殖和侵袭

目的探索miR-202对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法实验分为5组,包括miR-NC组,shNC组,miR-202组,shEGFR组和miR-202+EGFR组。五组细胞分别转染miR-NC,sh-NC,miR-202 mimics,shEGFR和miR202+pcDNA3.1-EGFR。采用双荧光酶报告基因法验证miR-202对EGFR的靶向性。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法用于检测A549细胞中mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测细胞周期。细胞克隆形成和Transwell法用于检测细胞的增殖和侵袭能力。结果双荧光素酶报告基因实验证实miR-202与EGFR的3’-UTR片段结合。miR-202组的miR-202的表达显著高于miR-NC组(P0.05)。转染miR-202 mimics或shEGFR可以显著下调EGFR的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),而转染pcDNA3.1-EGFR可以上调因转染miR-202 mimics而下调的EGFR mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。过表达miR-202或者敲低EGFR可以使A549的细胞周期停滞在G0/G1期(P0.05),同时抑制A549细胞的增殖和侵袭能力(P0.05)。通过转染pcDNA3.1-EGFR可以逆转过表达miR-202对A549细胞增殖和侵袭的抑制(P0.05)。过表达miR-202通过靶向EGFR显著下调p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT和p-ERK1/2/ERK1/2等蛋白表达的比值(P0.05)。结论 miR-202靶向EGFR抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路,影响A549细胞的增殖和侵袭,可能成为非小细胞肺癌临床治疗的新靶点。     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

miR-196a对非小细胞肺癌A549增殖及上皮间质转化的影响

目的探讨microRNA-196a(mi R-196a)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖及上皮间质转化(EMT)的影响。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人NSCLC细胞系A549与正常支气管上皮细胞系HBE中miR-196a的表达水平。根据实验将A549细胞分为对照组、空转染组、mi R-196a抑制(转染inhibitor)组和mi R-196a过表达(转染mimics)组。采用qRT-PCR检测转染24、48、72、96 h各组的转染效果,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测各组转染24、48、72、96 h的增殖能力,Western印迹法检测各组转染48 h后的上皮表型标志物〔角蛋白(CK)18和钙黏蛋白(E-cadherin)〕和间充质表型标志物〔α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)〕的蛋白水平,采用流式细胞仪和酶联免疫吸附法(ELISA)测量各组转染24、48、72、96 h的A549细胞α-SMA阳性率和细胞上清液中FN水平。结果 A549细胞的mi R-196a水平高于HBE细胞(P0.05),且转染mi R-196a inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高A549细胞的miR-196a水平(P0.05);与对照组相比,mi R-196a抑制组转染24、48、72、96 h的增殖率及α-SMA阳性率和上清液FN水平均降低,转染48 h的CK18和E-cadherin的蛋白水平升高,α-SMA和FN的蛋白水平降低;而mi R-196a过表达组以上指标的变化趋势与mi R-196a抑制组相反,与其余3组均有统计学差异(P0.05)。结论 A549细胞中mi R-196a呈高表达,抑制mi R-196a表达可抑制A549细胞增殖和EMT,而升高mi R-196a表达可促进A549细胞增殖和EMT。     

miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的 观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法 收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞（P均<0.05）。TargetSc...     

下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌H322细胞侵袭迁移并诱导凋亡

目的探讨miR-20a对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响和机制。方法 Realtime PCR方法分别检测miR-20a在正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中的表达变化。在肺癌H322细胞中转染miR-20a inhibitor,四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western印迹检测ZNF259、C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、C-Caspase-9、MMP-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测ZNF259可能为miR-20a的靶基因,利用双荧光素酶活性系统鉴定靶向关系。在肺癌细胞中共转染miR-20a inhibitor、ZNF259 siRNA,同样使用上述方法测定细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化,评估ZNF259 siRNA对下调miR-20a调控肺癌细胞的影响。结果肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中miR-20a的表达水平明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B,且H322细胞中miR-20a的表达水平最高。miR-20a inhibitor能够下调肺癌细胞中miR-20a的表达水平,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,促进细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达,减少细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶活性鉴定结果显示,ZNF259为miR-20a的靶基因,且下调miR-20a提高肺癌细胞中ZNF259蛋白表达水平。ZNF259 siRNA可以逆转下调miR-20a后的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡变化。结论下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。