miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

lncRNA LINC00958靶向调控miR-597-5p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00958影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用与机制。方法 定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00958和miR-597-5p在乳腺癌组织中的表达。MDA-MB-231细胞转染si-LINC00958或miR-597-5p或共转染si-LINC00958和anti-miR-597-5p。qRT-PCR检测LINC00958和miR-597-5p表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测MDA-MB-231细胞增殖,Transwell检测细胞迁移、侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告实验分析LINC00958与miR-597-5p的靶向关系。结果 与癌旁组织比较,41例乳腺癌组织中LINC00958表达显著上调,miR-597-5p表达显著下调(P<0.05)。抑制LINC00958表达显著降低MDA-MB-231细胞增殖、Ki-67表达水平、迁移、侵...     

miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

vimentin在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究波形蛋白(vimentin)在人三阴性乳腺癌中的表达及意义。方法采用免疫组化和Westernblot检测122例三阴性人乳腺癌组织中vimentin表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系;Westernblot分析三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231与非三阴性乳腺癌细胞系MCF-7中vimentin的表达;Transwell侵袭试验检测细胞的侵袭能力。结果在122例三阴性人乳腺癌组织中vimentin表达明显高于对应的癌旁组织(P<0.05),同时vimentin的表达与其病理分化程度存在明显的相关性(P<0.05)。vimentin在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中呈高表达,而在非三阴性的MCF-7细胞中表达较低。结论三阴性乳腺癌细胞中vimentin表达增高,vimentin的表达可能与三阴性乳腺癌的侵袭和迁移有关。     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。     

沉默E盒锌指结合蛋白1对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究沉默E盒锌指结合蛋白(ZEB)1对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-231作为研究对象,用慢病毒LV-ZEB1-siRNA和LV-siRNA control感染细胞,荧光定量PCR和Western印迹检测细胞ZEB1表达水平。MTT法测定乳腺癌细胞增殖能力,流式细胞术分别检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞周期蛋白p27、细胞周期素(cyclin)E和凋亡蛋白激活型Caspase-3(酶切Caspase-3)蛋白水平,提取细胞线粒体和胞质蛋白,Western印迹方法检测细胞色素(Cytochrome)C蛋白表达情况。结果慢病毒LV-ZEB1-siRNA下调乳腺癌细胞中ZEB1 mRNA和蛋白水平,LV-siRNA control对乳腺癌细胞中ZEB1 mRNA和蛋白水平无影响。沉默ZEB1后的乳腺癌细胞增殖能力降低,细胞G0/G1期比例升高,S期比例降低,细胞中p27蛋白水平升高,cyclin E蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,细胞中酶切Caspase-3蛋白水平升高,细胞线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低,胞质中Cytochrome C蛋白水平升高,与未经感染的细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论沉默ZEB1具有抑制乳腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡的作用。     

过表达miR-769-5p对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响和机制

目的 探讨乳腺癌细胞中miR-769-5p的表达变化及其过表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力、迁移能力的影响及机制.方法 通过qRT-PCR法检测乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3、HCC1806和正常乳腺上皮细胞HBL-100中miR-769-5p的表达.通过脂质体转染技术对HCC1806转...     

全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 本研究探讨全硫代反义寡核苷酸( PS-ASODN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响.方法 本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸(PS-SODN)组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(EUSA)、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 终浓度为1、3及5 μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P＜0.01),并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性.1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.01).结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB -231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现.     

血清糖皮质激素调节蛋白激酶3过表达对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨血清糖皮质激素调节蛋白激酶3(SGK3)基因过表达对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法构建pEGFP-N1-SGK3重组质粒,用载体质粒pEGFP-N1和重组质粒pEGFP-N1-SGK3转染乳腺癌MCF7细胞;MTT法观察转染细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测凋亡相关基因表达。结果利用pEGFP-N1-SGK3质粒转染乳腺癌MCF7细胞,建立表达SGK3蛋白的细胞系;通过细胞增殖实验发现,SGK3的过表达可促进MCF7细胞增殖;流式细胞术分析显示,外源性SGK3可抑制MCF7细胞凋亡的发生,并影响凋亡相关基因bad、bcl-xl的表达。结论 SGK3的过表达可抑制乳腺癌MCF7细胞凋亡。     

siRNA干扰LOX基因对乳腺癌细胞株侵袭性影响的研究

目的检测赖氨酰氧化酶（LOX）基因在低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达差异,并探讨LOX基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 RT-PCR扩增MCF-7和MDA-MB-231LOX基因,采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-RCR技术相对定量两种细胞的LOX基因表达。瞬转MDA-MB-231,并于转染后24、48、72 h行体外运动试验侵袭实验,观察干扰LOX基因表达后对MDA-MB-231侵袭的影响。结果 MDA-MB-231较MCF-7高表达LOX基因（P〈0.05）。MDA-MB-231细胞中LOX mRNA在转染48 h表达下降明显。干扰LOX表达后,体外运动实验结果显示RNA i组中MDA-MB-231细胞穿过微孔滤膜到达下室面的细胞数少于未转染组和阴性对照组（P均〈0.05）。结论 MDA-MB-231细胞高表达LOX基因,干扰其LOX基因表达后细胞的侵袭运动能力明显减弱。     

反义寡核苷酸vMO调控Bcl-x剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨靶向纠正Bcl-x基因异常剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移等生物学行为的影响。方法人乳腺癌MDA-MB-231细胞和正常NIH3T3细胞均设转染组和空白对照组。实验组采用靶向Bcl-x基因的特异性Vivo-Morpholino Antisense Oligomer(vMO)进行转染,空白对照组常规培养。采用qRT-PCR和Western Blot分别检测各组Bcl-x剪接体Bcl-xL和Bcl-xS mRNA和蛋白表达水平,通过流式细胞仪(FCM)、平板克隆形成试验、Transwell侵袭试验及划痕试验检测vMO对MDA-MB-231和NIH3T3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移的影响。结果VMO能稳定高效转染细胞,荧光阳性率达99.17%,并能持续稳定存在7天以上;VMO能在胞内有效调节Bcl-x的剪接模式,MDA-MB-231细胞中Bcl-xL mRNA和蛋白较对照组显著降低,而Bcl-xS mRNA和蛋白较对照组显著升高(P0.05);平板克隆形成试验和FCM结果显示,vMO转染前后,NIH3T3细胞克隆形成率分别为43%和35%,凋亡率分别为0.27%和0.53%,差异均无统计学意义;vMO转染MDA-MB-231细胞前后,穿膜细胞数分别为(67±1)和(47±1)个,发生迁移的细胞数分别为(106±2)和(78±1)个,差异具有统计学意义(P0.05);划痕试验显示,转染组MDA-MB-231细胞划痕愈合能力较对照组减弱(P0.05),平均迁移距离分别为(218±21)mm和(389±12)mm。结论 vMO靶向结合Bcl-x pre-mRNA促使Bcl-xL向Bcl-xS转化,在抑制乳腺癌细胞侵袭及转移方面具有重要作用。     

白藜芦醇对人乳腺癌骨高转移细胞株MDA-MB-231BO生长抑制和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇（Res）对人乳腺癌骨高转移细胞株MDA-MB-231BO生长抑制和凋亡的影响,探讨其在抑制乳腺癌骨转移中的应用价值。方法将0、12.5、50、100、200μmo/L的Res分别与MDA-MB-231BO细胞作用24、48、72 h;用CCK-8法检测MDA-MB-231BO细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态。结果随Res浓度的增加及作用时间的延长,MDA-MB-231BO细胞的生长抑制率逐渐升高,S期细胞逐渐增多。Res浓度为200μmol/L、作用48 h,MDA-MB-231BO生长抑制率为82.17%±5.37%、早期凋亡率为4.48%±1.23%、晚期凋亡率为9.48%±2.30%,荧光显微镜下观察用药组随着Res浓度的增加,凋亡细胞逐渐增多。结论Res能抑制人乳腺癌骨高转移细胞株MDA-MB-231BO细胞增殖,使MDA-MB-231BO细胞阻滞于S期,并可诱导该细胞凋亡。     

脂筏结构蛋白1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的诱导

目的探讨脂筏结构蛋白(FLOT)1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的影响及机制。方法 Western印迹法检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A及MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞FLOT1的蛋白表达。将设计合成的针对FLOT1的特异性siRNA序列(si-FLOT1组)及阴性对照siRNA序列(NC组)转染至MDA-MB-231细胞,仅仅加入脂质体的为空白对照组,AG490作为信号转导与转录因子(STAT)3信号通路抑制剂,转染48 h, Western印迹法检测FLOT1、磷酸化蛋白酪氨酸激酶(p-JAK)2、p-STAT3、细胞增殖核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 FLOT1在MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞中的蛋白表达均显著高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(P0.05)。与空白对照组比较,si-FLOT1组FLOT1表达受到抑制(P0.05);与NC组比较,si-FLOT1组细胞凋亡率显著升高(P0.05),p-JAK2、p-STAT3、PCNA和Bcl-2的蛋白表达显著下调(P0.05)。与si-FLOT1组比较,si-FLOT+AG490组细胞凋亡率显著升高(P0.05)。结论 FLOT1在乳腺癌细胞中呈高表达,通过RNA干扰抑制其表达可诱导癌细胞凋亡,机制与下调STAT3信号通路有关。     

NEDD9表达下调对结肠癌生物学行为的影响

背景:NEDD9在细胞迁移、趋化、凋亡、细胞周期中发挥重要作用,NEDD9 siRNA可有效降低基因表达,并从不同水平上促进细胞凋亡、阻断肿瘤细胞迁移和侵袭。目的:探讨NEDD9在结肠癌组织中的表达以及siRNA干扰NEDD9表达对结肠癌Caco-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:收集2017年1月—2018年1月漯河市郾城区人民医院确诊的结肠癌组织和相应癌旁组织。常规培养结肠癌Caco-2细胞,采用LipofectamineTM2000转染细胞,并将细胞分为对照组、阴性对照组和siRNA干扰组。采用qRT-PCR法检测结肠癌组织和细胞中NEDD9 mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测NEDD9、MMP-9、Bcl-2、Bax、TIMP1蛋白表达。结果:结肠癌组织NEDD9 mRNA表达显著高于癌旁组织(P 0. 05)。与对照组相比,siRNA干扰组NEDD9 mRNA表达明显降低(P 0. 05),细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制(P 0. 05),细胞凋亡增强(P 0. 05),NEDD9、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P 0. 05),Bax、TIMP1蛋白表达显著增加(P 0. 05)。结论:NEDD9基因可通过凋亡相关基因Bcl-2和Bax以及侵袭相关基因MMP-9和TIMP1来调控结肠癌Caco-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。     

siRNA沉默CXCR4基因对胃癌生物学行为的影响

背景:CXCR4在肿瘤细胞中广泛表达,参与肿瘤侵袭和转移。RNA干扰技术可有效降低或关闭基因的表达,从不同水平阻断肿瘤侵袭和转移。目的:研究胃癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白表达及其与临床病理特征的关系,并探讨siRNA沉默CXCR4表达对胃癌生物学行为的影响。方法:选取86例胃癌及其癌旁正常黏膜组织,应用RTPCR和蛋白质印迹法分别检测CXCR4 mRNA和蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建CXCR4干扰RNA质粒载体,并转染胃癌MKN45细胞。应用MTT法、Transwell法、流式细胞术分别评估胃癌细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡能力。结果:胃癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05),且其表达与TNM分期、肿瘤分化、淋巴结转移相关(P 0. 05)。与阴性对照组相比,siRNA转染组转染24、48、72 h后MKN45细胞增殖力均显著降低(P 0. 05),迁移率和侵袭率均显著降低(P 0. 05),细胞凋亡率显著升高(P 0. 05)。结论:CXCR4在胃癌发展过程中具有重要作用;以siRNA沉默CXCR4基因后,可显著抑制MKN45细胞增殖,抑制体外细胞迁移和侵袭,促进细胞凋亡,从而为胃癌的治疗提供新策略。     

SMAD2和SGK3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞信号传导分子SMAD2和血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(Serum and glucocorticoid-inducible protein kinase 3,SGK3)在非小细胞肺癌(Non small cell lungcancer,NSCLC)中的表达及临床意义。方法选取郑州市第六人民医院和安阳市肿瘤医院2010年6月至2013年6月收治的98例NSCLC患者作为研究对象,采用系统回顾性分析法分析所有患者的临床资料,根据其资料结果收集98例NSCLC患者其98份癌组织标本(研究组)及98份癌旁组织标本(对照组)作为研究对象,所有组织标本均行SMAD2与SGK3蛋白的检测,并分析二者的表达与NSCLC患者临床病理特征的关系。结果①NSCLC组织中SMAD2与SGK3蛋白阳性表达率分别为77. 55%和74. 49%,明显高于癌旁组织中SMAD2与SGK3蛋白阳性表达(17. 35%与15. 31%)(P 0. 05);②SMAD2蛋白表达与NSCLC患者性别、年龄、病理类型、肿瘤大小均无明显关系(P 0. 05); SMAD2蛋白表达与NSCLC患者肿瘤分化程度、淋巴结转移存在显著相关性(P 0. 05);③SGK3蛋白表达与NSCLC患者性别、年龄、病理类型、肿瘤大小均无明显关系(P 0. 05); SGK3蛋白表达与NSCLC患者肿瘤分化程度、淋巴结转移存在显著相关性(P 0. 05);④经单因素分析得出:低分化、淋巴结转移、SMAD2蛋白阳性表达、SGK3蛋白阳性表达患者生存时间均显著缩短(P 0. 05);⑤经多因素Cox分析得出:低分化、有淋巴结转移、SMAD2蛋白阳性、SGK3蛋白阳性均为影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P 0. 05)。结论 SMAD2与SGK3蛋白在NSCLC组织中表达显著高于癌旁组织,其表达水平与NSCLC患者分化程度、淋巴结转移均有显著相关,可能参与了NSCLC的发生、发展。     

番茄红素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及机制

采用MTT法和3H-TdR 掺入法观察番茄红素对体外培养雌激素受体阴性的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素作用后MDA-MB-231细胞增殖和DNA合成被抑制,具有剂量效应关系,随时间延长,抑制作用增强,最大抑制率达61.9%.番茄红素作用24 h后,细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,并诱导其凋亡.证实番茄红素可抑制MDA-MB-231细胞增殖;其机制除通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

慢病毒携带的短发夹RNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶基因表达的沉默作用

目的通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用。方法采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响。建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体。在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P<0.05)。HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞。在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达。在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长。结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用。     

沉默ATAD2增加乳腺癌细胞放疗敏感性

目的研究沉默三磷酸腺苷酶家族蛋白(ATAD)2对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-231作为探讨对象,在乳腺癌细胞中转染ATAD2 shRNA载体,以Realtime PCR和Western印迹检测细胞中ATAD2表达水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白(Annexin) V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中激活型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)4、p21蛋白表达水平,克隆形成实验检测放射敏感性。结果转染ATAD2 shRNA载体后的乳腺癌细胞中ATAD2表达水平降低。沉默ATAD2或放射处理后的乳腺癌细胞增殖能力降低,G0/G1期细胞比例增多,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、p21蛋白水平升高,CDK4蛋白水平降低。沉默ATAD2和放射共同处理后的乳腺癌细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、p21蛋白水平升高,CDK4蛋白水平降低,与沉默ATAD2或放射处理后的乳腺癌细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。沉默ATAD2后的乳腺癌细胞放射增敏比为1.396。结论沉默ATAD2协同放射诱导乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖并阻滞细胞周期,沉默ATAD2具有提高乳腺癌细胞放射敏感性的作用。     

紫檀芪对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响

目的探讨紫檀芪(PTE)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响。方法细胞分为正常对照组、PTE组(10、20、40、80μmol/L),各组细胞分别处理24、48、72 h。MTT法检测各组细胞存活率;黏附实验测定各组细胞黏附率;TUNEL法测定各组细胞凋亡率;Caspase-Glo3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况。结果MTT结果显示PTE对MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用(P<0.01),呈药物浓度时间依赖效应,其中80μmol/L处理72 h组抑制效果最明显。黏附实验(48 h)结果显示PTE可以减弱MDA-MB-231细胞黏附能力(P<0.01),并呈浓度依赖效应。TUNEL检测(48 h)结果显示PTE可以增加MDA-MB-231细胞的凋亡率(P<0.01)。Caspase3/7检测结果显示PTE可以使Caspase3/7活性升高(P<0.01)。结论 PTE可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡。