NIRF基因通过PI3K/Akt信号通路诱导人肺癌细胞凋亡

目的探究NIRF基因对人肺癌细胞凋亡的影响以及机制研究。方法使用重组质粒siRNANIRF(siRNA-NIRF组)和空载体(siRNA-NC组)转染人肺癌细胞A549,以未转染细胞为对照(Control组),免疫印迹试验(Western blot)检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测转染细胞增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞凋亡状况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白的表达量。结果转染重组质粒siRNA-NIRF后,细胞中NIRF蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,siRNA-NIRF组细胞的存活率显著降低(P0.05),凋亡率显著增高(P0.05),siRNA-NC组无明显差异(P0.05);与对照组相比,siRNA-NIRF组和siRNA-NC细胞中Akt、PI3K蛋白的含量无明显变化(P0.05),但siRNA-NIRF组细胞中p-Akt和p-PI3K的含量显著低于对照组(P0.05)。结论干扰NIRF基因可抑制肺癌细胞A549增殖,促进其凋亡,其作用机制是影响PI3K/Akt信号通路的关键因子的表达量。     

下调S100A8表达对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制

目的 探讨下调S100钙结合蛋白A8(S100A8)表达对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 体外传代培养人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3。取传3代、对数生长期、生长状态良好的SKOV3细胞,随机分为对照组、空转组、S100A8组,对照组不予转染,空转组转染NC-siRNA,S100A8组转染S100A8-siRNA,采用RT-PCR技术验证转染效率。收集各组转染后细胞,分别于继续培养24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;继续培养24 h,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用RT-PCR技术检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)mRNA表达,采用Western blotting法检测PI3K、Akt蛋白表达。结果 S100A8组S100A8 mRNA相对表达量显著低于对照组和空转组（P均<0.05）,而对照组与空转组比较差异无统计学意义（P>0.05）。S100A8组继续培养24、48、72 h细胞增殖活性均显著低于对照组和空转组同期（P均<0.05）,而对...     

miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、ROS水平及PI3K/AKT信号通路的影响研究

目的:探索miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、活性氧簇(ROS)水平及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法:将H9C2心肌细胞分为对照组、NC组、H_2O_2组、miR-182mimics组和miR-182inhibitor组,各组细胞均培养24h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-182的mRNA表达;CCK8法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS含量;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67和细胞增殖核抗原(PCNA),凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:与对照组比较,H_2O_2组细胞miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9的表达均显著升高(均P0.05);与H_2O_2组比较,miR-182mimics组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著升高,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著降低(均P0.05),miR-182inhibitor组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著升高(均P0.05)。结论:H_2O_2刺激可降低H9C2心肌细胞miR-182基因表达,过表达miR-182可促进细胞增殖,降低细胞凋亡,激活PI3K/AKT信号通路,其中对细胞增殖凋亡的影响方式是降低ROS含量,上调ki67和PCNA表达,下调Caspase-3和Caspase-9表达;抑制miR-182表达的结果则相反。     

微小RNA-206促进神经细胞凋亡参与阿尔茨海默病的机制研究

目的探究微小RNA-206(miR-206)通过调节脑源性神经营养因子(BDNF)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路,促进神经元凋亡参与阿尔茨海默病(AD)的机制。方法将大鼠海马神经细胞分为对照组、AD组、miR-206抑制剂组(抑制剂组)、抑制剂+siBDNF组和siBDNF组(n=3),除对照组外,其他4组建立AD模型,抑制剂组和抑制剂+siBDNF组通过转染miR-206抑制剂质粒以抑制miR-206,抑制剂+siBDNF组和siBDNF组转染BDNF质粒沉默BDNF。在转染48 h后,检测miR-206、BDNF mRNA和蛋白表达水平。结果 AD组miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5及Ser404/tau-5水平明显高于对照组和抑制剂组,BDNF mRNA和蛋白表达、细胞活力、磷酸化PI3K/PI3K及磷酸化Akt/Akt表达明显明显低于对照组和抑制剂组(P0.05)。siBDNF组细胞活力、BDNF mRNA和蛋白表达、磷酸化PI3K/PI3K、磷酸化Akt/Akt表达明显低于AD组,miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5、Ser404/tau-5蛋白表达明显高于AD组(P0.05)。抑制剂+siBDNF组miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5和Ser404/tau-5蛋白水平明显高于抑制剂组[(1.79±0.18)vs(1.20±0.14),(14.37±1.72)%vs(6.84±0.48)%,(1.40±0.15)vs(0.89±0.09),(2.45±0.26)vs(1.12±0.12),P0.05],细胞活力、BDNF mRNA和蛋白表达、磷酸化PI3K/PI3K和磷酸化Akt/Akt表达明显明显低于抑制剂组(P0.05)。结论下调miR-206表达,会通过促进BNDF的水平激活PI3K/Akt通路,并提高AD模型细胞活力,抑制凋亡,这可能是治疗AD的新思路。     

左卡尼汀对AMI大鼠心肌细胞以及对PI3K/Akt/Sirt1信号通路、PDGF、Profilin-1表达的影响

目的探究左卡尼汀对急性心肌梗死(AMI)大鼠PI3K/Akt/Sirt1信号通路以及血小板衍生因子(PDGF)、前纤维蛋白-1(Profilin-1)表达的影响。方法成年Wistar大鼠45只随机分为对照组(假手术组)、模型组和左卡尼汀组3组,AMI建模后药物干预2周。使用酶联免疫法检测血清中肌钙蛋白(cTnT)、肌酸激酶(CK-MB)、PDGF、Profilin-1水平。CCK-8法和流式细胞术检测大鼠心肌胞活力和凋亡率。使用Western blot和qRT-PCR检测PI3K/Akt/Sirt1信号通路蛋白水平和mRNA水平。结果模型组大鼠血清cTnT和CK-MB水平显著高于对照组(P0.05),左卡尼汀组大鼠血清cTnT和CK-MB水平显著低于模型组(P0.05)。模型组大鼠心肌细胞的细胞活力显著低于对照组而凋亡率显著高于对照组(P0.05),左卡尼汀组大鼠心肌细胞活力显著高于模型组而凋亡率显著低于模型组(P0.05)。模型组大鼠血清PDGF显著低于对照组而Profilin-1水平显著高于对照组(P0.05),左卡尼汀组大鼠血清PDGF显著高于模型组而Profilin-1水平显著低于模型组(P0.05)。模型组大鼠心肌组织PI3K、Akt、Sirt1蛋白和mRNA水平显著低于对照组(P0.05),左卡尼汀组大鼠心肌组织PI3K、Akt、Sirt1蛋白和mRNA水平显著高于模型组(P0.05)。结论左卡尼汀具有促进PDGF和PI3K/Akt/Sirt1表达的作用,促进心肌增殖并抑制细胞凋亡,同时可改善氧化应激状态使Profilin-1的水平下调。     

敲低长链非编码RNA LOXL1- AS1表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨敲低长链非编码RNA LOXL1-AS1表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测不同胃癌细胞株(AGS、BGC823、NCI-N87、MGC803和SGC7901)和正常胃黏膜细胞株GES-1中LOXL1-AS1表达情况;选取LOXL1-AS1表达水平最高的胃癌BGC823细胞系,建立LOXL1-AS1敲低模型,实验分为sh-LOXL1-AS1组和sh-NC组,分别转染LOXL1-AS1靶向shRNA和scramble shRNA,qRT-PCR法验证干扰效率,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt表达。结果 qRT-PCR结果显示,与正常胃黏膜细胞GES-1相比,胃癌细胞株中LOXL1-AS1表达水平均显著升高(P0.05)。与sh-NC组比较,sh-LOXL1-AS1组LOXL1-AS1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),细胞Bcl-2、p-PI3K和p-Akt表达显著降低,Bax表达显著升高(P0.05)。结论敲低LOXL1-AS1表达可抑制胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,继而调控凋亡相关蛋白表达,启动细胞凋亡程序有关。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

槲皮素对肾癌786-0细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的观察槲皮素对肾癌786-0细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的细胞,观察组加入不同浓度的槲皮素,对照组加入1‰的DMSO,每组设3个复孔。MTT法观察培养24、48、72 h时细胞的增殖活性,流式细胞仪检测培养48 h时的细胞凋亡率,Western blot法检测培养48 h时细胞内的磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及总Akt。结果槲皮素可明显抑制肾癌786-0细胞生长,并呈时间和剂量依赖性(P均<0.05);观察组细胞凋亡率与对照组相比明显增加(P均<0.05),且随剂量升高而增加;细胞内p-Akt表达水平,随槲皮素表达剂量增加而降低(P均<0.05)。结论槲皮素可显著抑制肾癌786-0细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/Akt通路活性有关。     

MIF对NF-κB信号通路的调控作用以及对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究siRNA特异性降低肺癌细胞中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达量对A549细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法采用脂质体Lipofectamine2000将siRNA-MIF或siRNA-NC转入肺癌细胞中,实验分为3组:对照组、siRNA-NC组、siRNA-MIF组,噻唑蓝(MTT)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中MIF、p65、磷酸化p65(p-p65)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白的表达水平。结果 siRNA-MIF组细胞中MIF蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05)。与对照组相比,siRNA-MIF组细胞的增殖显著下降(P0.05),凋亡率显著增高(P0.05)。siRNA-MIF组细胞中p65蛋白的表达量与对照组差异不显著(P0.05),但p-p65(P0.05)、cyclin D1(P0.05)蛋白的含量显著降低。结论下调MIF的表达能有效抑制肺癌细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过调控NF-κB信号通路介导的下游靶基因的表达。     

红景天苷对肌萎缩侧索硬化症的保护机制

目的探讨红景天苷在肌萎缩侧索硬化症细胞模型中的保护作用及其机制。方法阳离子脂质体转染法,转染(NSC)-34细胞,构建肌萎缩侧索硬化症细胞模型;对NSC-34细胞进行随机分组:对照组、空载组、转染组和转染组+(30/60/120)μmol/L红景天苷处理组。通过检测丙二醛(MDA)水平,反映各组线粒体氧化水平。通过Western印迹检测分裂半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)3、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt的表达水平,来反映细胞凋亡和上调磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt情况。结果成功构建肌萎缩侧索硬化细胞模型,该细胞模型中细胞凋亡与活性氧水平显著增高(P0.05),红景天苷在120μmol/L时,可以明显抑制细胞凋亡(P0.05)和活性氧水平(P0.05),并上调p-Akt水平(P0.01)。结论红景天苷可以抑制细胞凋亡和氧化应激,可能通过PI3K/Akt信号通路保护肌萎缩侧索硬化中受损的神经元细胞。     

糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞凋亡与胰岛素样生长因子-1/磷脂酰肌醇-3激酶/丝苏氨酸激酶信号通路的动态变化及意义

目的观察细胞凋亡与胰岛素样生长因子-1/磷脂酰肌醇-3激酶/丝苏氨酸激酶(IGF-1/PI3K/Akt)通路在糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞中的变化,探讨其在糖尿病胃轻瘫发生过程中的意义。方法制备糖尿病大鼠模型,分为正常对照组(NC)组、模型2周(DM2W)组、模型4周(DM4W)组、模型6周(DM6W)组和模型8周(DM8W)组。通过观察模型大鼠胃内色素残留率和小肠传输率确定糖尿病胃轻瘫模型建立;流式细胞术检测各模型组胃平滑肌细胞凋亡率;Western blot检测各组胃平滑肌IGF-1、PI3K、p-Akt蛋白的表达。结果细胞凋亡率在DM2W、DM4W、DM6W和DM8W组逐步增高(P0.05或P0.01)。IGF-1、PI3K、p-AKT蛋白表达逐步降低(P0.05或P0.01)。结论细胞凋亡与IGF-1/PI3K/Akt通路的动态变化在糖尿病胃轻瘫发生中可能有重要作用。     

化瘀解毒方含药血清体外抑制A549肿瘤细胞作用及其机制

目的研究化瘀解毒方提取物抗人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。方法培养人肺癌A549细胞株,利用MTT法分析肿瘤细胞增殖抑制率,利用Transwell细胞培养系统检测细胞迁移、侵袭作用,采用实时荧光定量PCR法检测化瘀解毒方提取物对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶(PDK)1和蛋白激酶B(Akt)mRNA的表达,进一步采用免疫印迹检测PI3K/Akt信号通路中蛋白及其磷酸化水平。结果化瘀解毒方提取物呈浓度依赖性抑制体外人肺癌A549肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,与生理盐水组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。化瘀解毒方含药血清和阳性对照药环磷酰胺对PI3K,PDK1和Akt总蛋白水平无影响。然而,化瘀解毒方含药血清显著抑制A549细胞中Akt蛋白的磷酸化水平。结论化瘀解毒方含药血清抑制A549细胞增殖、黏附、迁移和侵袭与抑制Akt蛋白的磷酸化有关,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路有关。     

miR-132在动脉粥样硬化中的表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响

目的探讨miR-132在动脉粥样硬化表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响。方法 RT-PCR检测动脉粥样硬化中miR-132的表达;空转染组、阴性对照组和miR-132抑制剂组转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),转染48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-132 mRNA表达;后续实验分为正常培养组、缺氧组、缺氧+miR-132抑制剂组,各组细胞培养48 h后,CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)3、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果 miR-132在动脉硬化组中的表达显著高于对照组(P0.05);转染组miR-132 mRNA表达显著低于空转染组(P0.05);缺氧组和缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达均显著低于正常培养组(P0.05),细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于正常培养组(P0.05),缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达显著高于缺氧组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著低于缺氧组(P0.05)。结论 miR-132在动脉粥样硬化中高表达,抑制其表达可促进血管内皮细胞增殖及降低细胞的凋亡,其机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

体外心脏震波治疗通过PI3K/Akt信号传导通路对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究体外心脏震波治疗(ESWT)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞分成3组,即对照组、ESWT组和ESWT+LY294002组。CCK8比色法检测细胞增殖情况,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹方法(Westen blot)检测Bax、Bcl-2、p-Akt和Akt蛋白的表达水平。结果:ESWT能明显提高HUVECs的增殖能力(P0.001),抑制凋亡率(P0.001),减少HUVECs内Bax蛋白表达水平,增加Bcl-2和p-Akt蛋白表达水平(均P0.01),但这些作用可被PI3K特异性抑制剂LY294002削弱。结论:磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝/苏氨酸激酶(Akt)及其下游信号通路介导了ESWT促进HUVECs增殖及抑制凋亡作用。     

尼古丁通过下调Akt蛋白水平导致心肌细胞的凋亡

目的研究尼古丁对心肌细胞H9C2的影响及其机制。方法将培养的H9C2细胞分为4组即对照组、尼古丁组(10μmol/L)、对照+丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)过表达组、尼古丁(10μmol/L)+Akt过表达组。孵育48 h后用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性率;Caspase活性检测试剂盒检测凋亡率;Western blot法检测Akt蛋白表达水平。结果与对照组相比,尼古丁组细胞活性明显降低(P0.05),细胞凋亡显著升高(P0.01),Akt蛋白水平显著下调(P0.01)。Akt过表达可有效改善尼古丁引起的细胞活性的降低(P0.01)减少细胞凋亡。结论尼古丁通过下调Akt蛋白表达水平引起心肌细胞的凋亡。     

MicroRNA-21通过PTEN/Akt通路介导前列腺素E_2促进胃癌细胞的增殖

背景:已有研究证实前列腺素E_2(PGE_2)可促进肿瘤细胞的增殖,microRNA-21(miR-21)可抑制肿瘤细胞增殖,但信号通路尚不明确。目的:探讨miR-21介导PGE_2促进胃癌细胞增殖的潜在作用机制。方法:体外培养胃癌AGS细胞,分为对照组、PGE_2组、anti-miR-21组、PGE_2+anti-miR-21组,以WST-1比色法检测细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测miR-21 mRNA表达。以Akt特异性抑制剂哌立福辛干预AGS细胞,检测其对细胞增殖的影响,蛋白质印迹法检测PTEN/Akt蛋白表达。结果:与对照组相比,PGE_2组AGS细胞生存率显著升高(P0.05),凋亡率显著降低(P0.05),miR-21 mRNA表达显著升高(P0.05)。与PGE_2组相比,anti-miR-21组、PGE_2+anti-miR-21组细胞生存率显著降低(P0.05),凋亡率显著升高(P0.05),miR-21 mRNA表达显著降低(P0.05)。以哌立福辛干预后,AGS细胞生存率显著降低(P0.05),凋亡率显著升高(P0.05),PTEN蛋白表达明显上调,p-Akt蛋白表达明显下调。结论:miR-21通过PTEN/Akt通路介导了PGE_2促进胃癌细胞增殖的作用,可能成为防治胃癌的新靶点。     

上调miR-124表达诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨上调微小RNA(miR)-124表达对甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞和甲状腺乳头状癌SW579细胞中miR-124的表达差异;利用脂质体转染Has-miR-124mimics上调miR-124表达,并通过qRT-PCR检测其转染效果;流式细胞仪检测过表达miR-124对SW579细胞凋亡的影响;Western印迹检测过表达miR-124对SW579细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)蛋白、蛋白激酶B(AKT)蛋白、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。结果 miR-124在甲状腺癌SW579细胞中的表达明显低于正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞(P0.05)。转染Has-miR-124 mimics后,miR-124模拟组细胞中miR-124表达明显高于空白对照组(P0.05),阴性对照组和空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组细胞凋亡率显著升高(P0.05),而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。Western印迹检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组中PIK3CA、p-AKT和Bcl-2蛋白表达量均显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),而AKT蛋白的表达量变化不明显(P0.05);阴性对照组和空白对照组PIK3CA、AKT、p-AKT、Bcl-2及Bax蛋白表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论上调miR-124表达可诱导SW579细胞凋亡,其作用机制可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路活性,上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关。     

PI3K/Akt信号转导通路与甲状腺结节

近年来研究发现,磷脂酰肌醇3激酶(PDK)/蛋白激酶B(Akt)信号转导通路在细胞的增殖、分化、生存和凋亡过程中起重要调节作用.结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤、甲状腺癌及桥本甲状腺炎病变中存在着PI3K/Akt信号转导通路的过度激活.PI3K/Akt信号转导通路的活化使甲状腺细胞增殖指数和生长指数明显升高,刺激甲状腺滤泡持续生长,促进甲状腺结节的发生、发展.研究此通路中相关分子的表达,对探索甲状腺结节的病因、发病机制和防治策略具有重要意义.     

沉默转化生长因子β1表达与抑制肾小管上皮细胞(HK-2)Notch信号通路的相关性研究

目的探讨沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达与抑制肾小管上皮(HK-2)细胞Notch信号通路的相关性。方法检测TGF-β1在DN的表达;TGF-β1小干扰RNA(TGF-β1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染HK-2,空脂质体转染细胞为对照,检测各组TGF-β1;将HK-2分为低糖、高糖、siRNA-NC+高糖和TGF-β1-siRNA组+高糖组,检测细胞存活,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达。结果 TGF-β1在DN表达高于正常肾组织(P0.05);TGF-β1-siRNA组TGF-β1表达低于对照组(P0.05);高糖组细胞存活低于低糖组,凋亡率、Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1高于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与高糖组相当(P0.05);TGF-β1-siRNA+高糖组细胞存活高于高糖组,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1低于高糖组(P0.05)。加入GSI细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与沉默TGF-β1一致。结论 TGF-β1在DN高表达,高糖能抑制HK-2的存活,促进凋亡,沉默TGF-β1能减弱这种效果,可能与Notch信号通路调控有关。     

TPX2基因在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡的影响和机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡的影响和机制。方法 RT-PCR及Western blotting检测胃癌组织及癌旁组织中TPX2 mRNA和蛋白表达;将NC-siRNA、TPX2-siRNA1、TPX2-siRNA2、TPX2-siRNA3转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blotting检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;CCK8实验检测人胃癌SGC-7901细胞转染12、24、48 h后细胞增殖情况;细胞转染48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting检测PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果胃癌组织中TPX2 mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);NC-siRNA组TPX2蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);TPX2-siRNA1、TPX2-siRNA2、TPX2-siRNA3组的TPX2蛋白表达均显著低于对照组(P0.01),TPX2-siRNA3组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;NC-siRNA组在12、24、48 h后的细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),TPX2-siRNA组在12、24、48 h后的细胞存活率均显著低于对照组,且随着时间延长细胞存活率降低(P0.01);NC-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),TPX2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组(P0.01)。结论 TPX2在胃癌中高表达,沉默TPX2的表达能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖和促进细胞凋亡,其机制可能与PT3K/AKT信号通路的调控有关。