慢病毒载体过表达Klotho基因对骨髓间充质干细胞在慢性心衰大鼠心肌中存活率的影响

目的 探讨以重组慢病毒为载体转染Klotho基因（抗衰老基因）对SD大鼠心肌中骨髓间充质干细胞（bone marrow Mesenchymal stem cells,BMSCs）存活率及其可能的机制。方法 全骨髓贴壁培养法体外培养SD大鼠BMSCs;以重组慢病毒为载体将KLotho基因转染至大鼠BMSCs,用RT-PCR鉴定BMSCs中Klotho基因mRNA的表达;腹腔连续注射异丙肾上腺素建立SD大鼠心衰模型;并随机分为3组,即EGFP-Klotho-BMSCs组（慢性心衰SD大鼠尾静脉注射Klotho基因修饰的BMSCs）,EGFP-BMSCs组（慢性心衰SD大鼠尾静脉注射空载慢病毒转染的BMSCs）,生理盐水组（慢性心衰SD大鼠尾静脉注射与等容积的生理盐水）。细胞移植治疗4周后,在荧光显微镜下观察各组大鼠心肌组织绿色荧光蛋白的表达情况,RT-PCR检测各组大鼠心肌组织中Klotho基因的表达。结果 ①全骨髓贴壁法成功培养及传代BMSCs;②以重组慢病毒为载体成功将Klotho基因转染到BMSCs,荧光显微镜下第4天的细胞转染效率达70%~80%以上;③RT-PCR结果表明与EGFP-BMSCs组比较,EGFP-Klotho-BMSCs组的BMSCs中Klotho基因表达明显增多（P<0.05）;④干细胞移植4周后,EGFP-Klotho-BMSCs组和EGFP-BMSCs组大鼠心肌组织中仍可见EGFP绿色荧光表达,且EGFP-Klotho-BMSCs组心肌组织中绿色荧光表达数量较EGFP-BMSCs组显著增多。结论 转染Klotho基因可有效提高BMSCs在SD大鼠心肌中的存活率,其可能的机制为Klotho基因具有抗细胞凋亡及改变心肌内环境的作用。     

骨髓基质细胞对大鼠缺血性脑梗死神经功能的影响

目的 通过观察骨髓基质细胞(BMSCs)移植治疗大鼠缺血性脑梗死对神经功能的影响,探讨BMSCs 治疗脑梗死的效果及机理,为临床治疗提供理论依据.方法 取45只Wistar大鼠,随机分为3组,分别为空白对照组、盐水对照组及治疗组.改良的Longa栓线法制作大鼠局灶性大脑中动脉缺血(MCAO)模型,1 h后再灌注.免疫细胞化学方法鉴定BMSCs.缺血24 h后治疗组(n=15)尾静脉注射预先标记BrdU的3×106骨髓基质细胞,盐水对照组(n=15)尾静脉注射1 ml生理盐水,空白对照组(n=15)不注射.缺血后3、7及14 d采用神经损伤评分(NSS)观察大鼠神经功能改善情况.结果 神经功能评分:空白对照组与盐水对照组各时间点均无显著差异(P＞0.05),治疗组与盐水对照组、空白对照组在栓塞后第7、14天神经功能评分有显著性差异(P＜0.05).结论 大鼠局灶性脑梗死后静脉移植BMSCs,神经功能评分减低,可促进大鼠神经功能恢复.     

铁梭葡胺标记对骨髓干细胞向神经样细胞分化影响的实验研究

目的探讨铁梭葡胺(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其向神经样细胞分化的影响。方法在大鼠BMSCs培养液中分别加入10×稀释的SHU555A纳米颗粒10、20、40、80 μl,使铁的终浓度分别为14 μg/ml(14μg/ml标记组)、28 μg/ml(28 μg/ml标记组)、56 μg/ml(56 μg/ml标记组)和112 μg/ml(112 μg/ml标记组);另取无铁培养液的BMSCs作为对照组。各组BMSCs经DMSO+丁羟茴醚诱导6 h后,分别采用RT PCR和Western blot法检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的mRNA表达和nestin表达。结果与对照组比较,不同浓度标记组nestin、NSE和GFAP的mRNA均呈高表达,但差异无统计学意义(P0.05)。各组nestin表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 14～112μg/ml的SHU555A标记浓度对大鼠BMSCs向神经样细胞分化无明显影响。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的影响

目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的修复作用并对其可能的治疗机制进行探讨.方法:将健康雌性清洁级SD大鼠的股骨骨髓进行分离、培养、鉴定获得BMSCs;选取60只SD大鼠建立大鼠HIRI模型.动物模型建立后,将90只SD大鼠随机分为BMSCs移植组(n=30,予以尾静脉注射BMSC悬液1 mL,1.0×10~7/mL),HIRI组(n=30,予以尾静脉注射L-DMEM 1 mL),另设空白对照组(n=30,予以尾静脉注射生理盐水1 mL).分别于移植后的1、2、3 wk于各组随机选取5只大鼠取血检测丙氨酸转氨酶(alanine transanminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-18(interleukin-18,IL-18)水平;移植后2 wk对肝组织行HE染色,观察移植后肝组织的形态学变化;利用RT-PCR法及Western b l o t法检测肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及α-平滑肌蛋白(alphasooth muscle actin,α-SMA)在肝组织中的表达水平.结果:移植后1 wk,BMSCs移植组、HIRI组的血清ALT、AST、MDA、TNF-α和IL-18水平明显高于对照组,SOD活性明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05);移植后2、3 wk,BMSCs移植组ALT、AST、MDA、TNF-α和IL-18水平与HIRI组比较明显下调,SOD活性明显升高(均P0.05),但与对照组相比SOD活性仍偏低(P0.05).HE染色后发现,BMSCs移植组大鼠肝细胞变性、坏死及纤维化程度较HIRI组均有明显减轻(P0.05).RT-PCR法检测得知,与HIRI组比较,BMSCs移植组中HGF基因表达水平明显升高,而α-SMA的基因表达水平明显下降(均P0.05).Western blot法检测得知,与HIRI组比较,BMSCs移植组中HGF蛋白表达水平明显升高,而α-SMA的蛋白表达水平明显下降(均P0.05).结论:同种异体BMSCs移植能有效减轻大鼠HIRI,其机制可能是通过降低血清TNF-α、IL-18水平和调节肝脏中HGF及α-SMA的表达水平.     

移植骨髓间充质干细胞治疗胰腺炎的最佳途径

目的:探讨不同途径移植Pkh26标记的大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)治疗胰腺炎的最佳移植途径.方法:取3周龄健康SD♀小鼠的股骨及胫骨骨髓,进行分离纯化BMSCs.取体质量250-300 g♀SD大鼠160只,分模型组及治疗组,并在不同时间测大鼠的血清淀粉酶及血脂肪酶.将治疗组分为尾静脉组、胰腺局部注射组、肠系膜上静脉组,各实验组均移植红色荧光染料Pkh26标记的BMSCs.细胞移植术后12、24、48、72 h、1 wk测血清淀粉酶、血脂肪酶,3 wk观察Pkh26标记的BMSCs的定位及HE染色观察胰腺组织病理学变化.结果:细胞移植术后12、24、48、72 h、1 wk尾静脉注射组血清淀粉酶和血脂肪酶水平与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),肠系膜上静脉组、胰腺局部注射组与相应的模型组比较显著下降(P0.05),胰腺局部注射组与肠系膜上静脉组比较显著下降(P0.05),但是仍高于对照组.尾静脉组各时间点胰腺内可见极少量Pkh26标记的BMSCs,肠系膜上静脉组2 wk时胰腺内可见散在亮红色荧光的细胞,数量少,3 wk时数量稍多,胰腺局部注射组2 wk及3 wk胰腺内均可见较多红色荧光的细胞,对照组各时间点均未见Pkh26标记细胞.结论:BMSCs经尾静脉、肠系膜上静脉、胰腺局部注射移植于胰腺炎大鼠模型体内,明显改善了受损胰腺的功能,对胰腺炎损伤具有修复作用,胰腺局部注射移植途径优于其他移植途径.     

骨保护素基因修饰的骨髓间充质干细胞治疗大鼠骨质疏松

目的探究骨保护素(OPG)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗SD大鼠骨质疏松的可行性及疗效。方法提取并培养SD大鼠BMSCs,用携带OPG基因的慢病毒(LV-OPG-GFP)感染BMSCs,构建成OPG基因修饰的BMSCs,并将其通过尾静脉注射至去卵巢SD大鼠骨质疏松模型体内,其中A组,注射等量生理盐水;B组,BMSCs,1×10~6/kg;C组,注射LV-BMSCs,1×10~6/kg;D组,注射LV-OPG-GFP-BMSCs,1×10~6/kg。通过对SD大鼠的骨密度、血钙、血磷及血清中骨碱性磷酸酶(B-ALP)和Ⅰ型胶原C端肽(CTX-1)水平进行检测,统计并分析治疗效果及可行性。结果成功提取出SD大鼠BMSCs,细胞呈梭形,呈典型的鱼群样或漩涡样生长。LV-OPG-GFP感染BMSCs 72 h后,用倒置荧光显微镜观察发现,实验组OPG已成功转入BMSCs中并能稳定表达,细胞转染率可达80%以上,PCR后电泳显示,实验组OPG mRNA在(500～700)bp处出现明显的条带。模型构建术后3个月,模型组SD大鼠骨密度下降明显,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。LV-OPG-GFP-BMSCs尾静脉注射治疗后3个月,骨密度检测结果显示D组骨密度显著高于A、B、C组(P0.05),但与正常组相比,仍略显不足(P0.05);血清中钙、磷检测结果显示,D组及正常组血钙含量均显著低于A、B、C三组(P0.05),而磷含量均显著高于A、B、C三组(P0.05),而D组与正常组相比无明显差异(P0.05);血清中B-ALP、CTX-1检测结果显示,D组及正常组B-ALP、CTX-1水平均显著低于A、B、C三组(P0.05),D组B-ALP与正常组相比无明显差异(P0.05),而CTX-1水平比正常组稍高(P0.05)。结论通过尾静脉注射LV-OPG-GFP-BMSCs,以"全身给药"的方式,治疗SD大鼠骨质疏松,未出现明显的毒副作用,治疗效果良好,方法可行,可为临床骨质疏松的治疗提供一定实验依据。     

脐血内皮祖细胞治疗糖尿病大鼠下肢缺血的实验研究

目的研究脐血内皮祖细胞(EPC)治疗糖尿病下肢缺血的有效性及机制,为临床治疗糖尿病足病(DF)提供理论依据。方法取产妇足月产脐血分离单核细胞,培养7d,流式细胞仪鉴定细胞,并计数活细胞数。将Wistar雄性大鼠分成3组:(1)糖尿病大鼠射线照射后结扎双后肢股动脉,尾静脉注射血管EPC(DE组)。(2)糖尿病大鼠结扎双后肢股动脉,尾静脉注射缓冲液(DP组)。(3)正常大鼠射线照射后结扎双后肢,尾静脉注射EPC(NC组)。用绿色荧光(GFP)示踪EPC,Ⅷ因子免疫组化检测肌纤维间毛细血管数,RT-PCR检测双后肢肌肉血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平。结果 DE、NC组右后肢腓肠肌溃疡及缺血明显好转,有明显荧光,肌纤维间毛细血管数多,VEGF表达高,DP组好转不明显,无荧光,毛细血管数少,VEGF表达少,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论脐血EPC治疗糖尿病大鼠下肢缺血有效。     

骨髓间充质干细胞对老年大鼠髋部骨折后急性肺损伤的保护作用及机制

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对老年大鼠髋部骨折后急性肺损伤的保护作用及相关机制。方法将健康老年(10月龄)雄性SD大鼠45只随机分为正常组、模型组和治疗组,每组15只。模型组造模后尾静脉注射1 ml生理盐水,治疗组于造模后经尾静脉注射1 ml BMSCs(2.5×10~6/ml)。造模24 h后处死各组大鼠,进行肺组织病理评分,称重并计算肺组织干湿质量比(W/D);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)含量、肺及血清炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6]水平;Western印迹检测肺组织中Toll样受体(TLR)9、核因子(NF)-κB蛋白表达水平。结果模型组肺部病理学评分、肺组织W/D、肺组织MPO水平、肺及血清炎症因子(TNF-α、IL-6)、肺组织中TLR9、NF-κB蛋白表达水平均明显高于正常组(P0.01);而治疗组上述指标均较模型组明显下降(P0.01)。结论 BMSCs移植能够减轻老年髋部骨折大鼠肺损伤,其机制与降低肺组织中TLR9、NF-κB蛋白表达及全身、肺部炎症反应有关。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养与pEGFP/Ang-1转染方法的建立

目的探讨培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞株、表型鉴定及利用重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs细胞株的实验方法。方法采用贴壁筛选法和密度梯度离心法获取BMSCs,纯化大鼠BMSCs后,以重组质粒pEGFP/Ang-1转染,G 418筛挑阳性克隆,倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,检测Ang-1表达量的时间变化。结果采用贴壁筛选法和密度梯度离心法成功获取BMSCs细胞株,成功将血管生成素-1重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs,3 d可稳定表达Ang-1,7 d以后开始减弱。结论成功运用贴壁筛选法和密度梯度离心法分离培养的大鼠BMSCs,并重组质粒pEGFP/Ang-1转染大鼠BMSCs可有效表达。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠慢性阻塞性肺疾病

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的治疗作用。方法:健康雄性SD大鼠,随机分成3组,正常对照组、模型组和治疗组。通过烟熏法建立COPD模型后,大鼠尾静脉注射BMSCs进行生物治疗。应用细胞膜荧光染料PKH26标记的BMSCs回输大鼠体内,制作肺组织冰冻切片,在荧光显微镜下观察BMSCs是否定位于肺组织;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)和活性丙二醛(MDA)含量;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),计数细胞总数,并进行分类;制作肺组织病理切片,观察肺组织微细结构变化并定量测定肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)。结果:BMSCs能够归巢到COPD大鼠的肺组织并存活;BM-SCs治疗组与模型组相比,血清中SOD的活性明显增高、MDA含量显著降低(P<0.05);BALF中细胞总数明显减少,中性粒细胞总数及比例均减小(P<0.05);病理有明显的改善,MLI减小,MAN增大(P<0.05)。结论:BMSCs对COPD大鼠具有治疗作用。     

hRAMP1基因修饰BMSCs对心脏的保护作用及其机制

目的探讨人受体活性修饰蛋白(hRAMP)1基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)对心功能的影响及其机制。方法分离和培养兔BMSCs,流式检测细胞表面标记鉴定,建立兔心肌梗死再灌注模型,随机分为3组:Ad-EGFP-hRAMP1-BMSCs(hRAMP1-BMSCs组),Ad-EGFP-BMSCs(BMSCs组)和对照组,检测血管腔面CD31表达情况及血管内皮生长因子(VEGF)和核因子(NF)-κB表达水平,并比较超声心动图指标。结果骨髓细胞分离24 h后开始贴壁,后呈鱼群状、漩涡状排列生长,经传代后细胞逐渐呈长梭形,呈现成纤维细胞样外观。CD29阳性率95.79%,CD45阳性率12.49%和CD90阳性率98.58%。BMSCs移植后损伤侧血管腔面可见被EGFP标记呈绿色荧光的BMSCs,而对侧(未损伤血管)未检测到EGFP荧光信号。经TRITC标记的CD31在BMSCs表达处发出红色荧光,阳性转染组出现CD31和EGFP表达。细胞移植后28 d,BMSCs组及hRAMP1-BMSCs组VEGF表达显著高于对照组,NF-κB水平显著低于对照组(均P0.01);hRAMP1-BMSCs组VEGF表达显著高于BMSCs组,NF-κB水平显著低于BMSCs组(均P0.01)。hRAMP1-BMSCs组LVDd和LVDs均明显降低,LVFS和LVEF均明显增加(均P0.01)。结论 hRAMP1修饰BMSCs具有延缓及改善左室重构作用;其机制是通过hRAMP1修饰BMSCs可分化为血管内皮细胞,参与血管生成。     

健脾补肾、清肠化湿方联合BMSCs对溃疡性结肠炎模型大鼠肠屏障的修复作用

目的:观察健脾补肾、清肠化湿方联合骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜的修复作用.方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、BMSCs组、干预BMSCs组和联合组.TNBS法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,空白组、模型组大鼠尾静脉分别注射1 mL生理盐水,BMSCs组大鼠尾静脉注射BMSCs,干预BMSCs和联合组大鼠分别注射体外中药共培养的BMSCs,联合组再予中药13.6 g/kg灌胃10 d.分别于第5天和第10天每组各处死5只大鼠,留取标本.电子显微镜观察大鼠结肠组织杯状细胞数量,实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blot法分别检测大鼠结肠组织Muc2mRNA和蛋白的表达,Western blot法检测Muc2相关因子Math1和KLF-4蛋白的表达.结果:与模型组相比,各治疗组肠黏膜杯状细胞数量增多,各治疗组Muc2 mRNA水平升高,联合组优于干预BMSCs组和BMSCs组(P0.05).随着时间延长,治疗效果越明显.治疗第10天,与正常组相比,模型组Muc2、Math1和KLF-4蛋白表达量明显下降,经治疗后,各治疗组蛋白表达量均上高,联合组升高最明显.结论:静脉移植BMSCs的同时给予健脾补肾、清肠化湿方能提高黏蛋白Muc2表达水平,增多杯状细胞数量,修复肠屏障,联合灌胃持续给药效果更佳,其机制可能和提高Math1和KLF-4因子表达有关.     

苦参素联合骨髓间充质干细胞对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织修复作用的研究

[目的]研究苦参素联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织的修复作用。[方法]选择60只雄性健康BALA/c小鼠,将其随机分为正常组、模型组、BMSCs组和综合组,每组15只,用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导建立UC模型。从健康小鼠股骨内取BMSCs进行培养,获得BMSCs悬液。BMSCs组小鼠给予尾静脉注射0.5ml BMSCs细胞悬液(细胞浓度为1×106/ml)。综合组小鼠在BMSCs组的基础上,加用180mg/kg的苦参碱,溶于5ml生理盐水中,灌胃,连续1周。正常组和模型组小鼠给予尾静脉注射0.5ml生理盐水。检测小鼠血清肿瘤杀伤因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)含量;取小鼠结肠组织制作病理切片,镜下观察;用S-P法检测结肠内血管紧张素2(ANG-2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)——FLK-1的含量,用Western Bloting法检测Lgr5、EphrinB3和E-cadherin蛋白的含量。[结果]治疗后,BMSCs组和综合组小鼠结肠黏膜结构基本完整,腺体水肿情况好转,有少量的炎性细胞浸润,其中综合组好于BMSCs组。BMSCs组和综合组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量均低于模型组,并且综合组的各指标含量均低于BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组和综合组小鼠结肠内Lgr5、Ephrin-B3和E-cadherin蛋白含量均高于对照组,且综合组内各蛋白含量高于BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组和综合组结肠内ANG-2、HIF-1α、VEGF、FLK-1含量均低于模型组,并且综合组的各指标含量均低于BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]对UC小鼠采用苦参素联合BMSCs治疗,能更有效的改善UC病情,其机制可能是苦参碱促进BMSCs向肠干细胞的分化与增殖,并能够抗炎和修复肠黏膜屏障。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊神经急性损伤的疗效

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠脊神经急性损伤的疗效。方法取Wistar健康大鼠1只,采集骨髓,贴壁法分离BMSCs并进行培养和标记,培植细胞数约为5×104/μl的BMSCs培养液,供移植用。建立Wistar脊神经急性损伤大鼠模型40只,随机分为移植组和对照组,每组20只。损伤1 w后,将BMSCs缓慢注入移植组大鼠脊髓损伤中心,对照组注入生理盐水,观察和检测移植后两组大鼠的后肢功能康复效果以及神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白表达情况。结果损伤3⁸ w后移植组后肢功能康复效果明显优于对照组(P<0.05),8 w后移植组NGF和BDNF蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。结论 BMSCs同种异体移植可以显著提高脊神经急性损伤大鼠下肢运动功能的康复,可能与BMSCs移植对促进大鼠脊神经的再生与修复有关。     

白细胞介素-6/信号转导及转录激活因子-3通路的活化在大鼠胆管上皮细胞增殖中的意义

目的 探讨脂多糖(LPS)是否通过白细胞介素-6(IL-6)/信号转导及转录激活因子(STAT3)通路,促进大鼠胆管上皮细胞(BEC)增殖.方法 大鼠随机分为3组,LPS组:尾静脉注射LPS 2.5 mg/kg;抗白细胞介素-6(抗IL-6)组:注射LPS后1 h,静脉注射抗IL-6单克隆抗体0.5 mg/kg及对照组.注射LPS后6、12、24,48、72 h,采用动态比浊法鲎试验测定血浆LPS浓度;酶联免疫吸附法或实时荧光定量RT-PCR法测定肝组织匀浆和BEC中IL-6的表达水平,Western blot检测BEC内STAT3的活化水平;免疫组织化学法检测各组BEC增殖情况.多组均数间的比较采用单因素方差分析.结果 血浆LPS水平在注射后6h,LPS组为(0.318±0.015)EU/ml,对照组为(0.011±0.002)EU/ml,F=523.7,P<0.01,差异有统计学意义.此后随观察时间的推移逐渐降低,LPS组48 h含量接近对照组水平.肝脏匀浆及BEC中IL-6表达在注射后6 h,分别为(358.5±22.1)ng/g和(0.62±0.04)m/g,与对照组相比明显上调.BEC内磷酸化-STAT3蛋白表达为0.72±0.07,细胞增殖率为4.8%±0.5%,亦明显高于对照组水平;抗IL-6组,上述效应明显受抑制.结论 LPS通过激活BEC内IL-6/STAT3信号通路,从而促进BEC增殖.     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9在肾病综合征高血脂症中的作用及洛伐他汀干预对其的影响

目的构建阿霉素肾病综合征大鼠模型,探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)在肾病综合征高血脂症中的作用,以及应用他汀类药物干预对它的影响。方法将雄性SD大鼠随机分成3组:正常对照组、肾病综合征对照组、肾病综合征治疗组(n=6)。大鼠一次性尾静脉注射阿霉素7mg/kg构建肾病综合征模型,正常对照组给予等量生理盐水尾静脉注射。造模2周后,肾病综合征治疗组使用洛伐他汀20mg/kg灌胃2周,肾病综合征对照组及正常对照组等量羧甲基纤维素钠(CMC)灌胃治疗。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组大鼠肝组织低密度脂蛋白受体(LDLR)及PCSK9的mRNA表达;Western blot法检测各组肝组织PCSK9蛋白表达,同时检测大鼠相关血生化指标。结果肾病综合征对照组大鼠血清白蛋白低于正常对照组,肾病综合征治疗组的白蛋白与肾病综合征对照组的差异无统计学意义。3组大鼠的血肌酐差异无统计学意义。正常对照组与肾病综合征治疗组的血清胆固醇、LDL-C水平低于肾病综合征对照组[(1.18±0.14)、(3.29±1.84)比(8.39±5.57)mmol/L;(0.30±0.25)、(0.63±0.54)比(1.34±0.70)mmol/L;均P0.05],但肾病综合征治疗组和正常对照组间差异无统计学意义。3组之间LDLR mRNA表达量差异无统计学意义;肾病综合征对照组、肾病综合征治疗组PCSK9的mRNA及蛋白表达量均高于正常对照组;同时肾病综合征治疗组PCSK9的mRNA及蛋白表达量也高于肾病综合征对照组,差异均有统计学意义。结论肾病综合征高血脂症中PCSK9表达上调,同时他汀药物治疗可以进一步上调其表达。     

同种异体骨髓间充质干细胞对急性坏死性胰腺炎大鼠腹腔巨噬细胞极化的影响

目的 探讨同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对ANP大鼠炎症反应及腹腔巨噬细胞极化状态的影响。方法 将30只Sprague Dawley雄性大鼠分为对照组,ANP组,低(0.5×10^6个细胞)、中(1×10^6个细胞)、高剂量(2×10^6个细胞)BMSCs治疗组。采用胰胆管逆行注入5%牛黄胆酸钠1 ml/kg的方法制备ANP模型。BMSCs在制膜后1 h内经大鼠尾静脉注入。取大鼠胰腺组织行病理检查,免疫组织化学法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)蛋白表达阳性的巨噬细胞。取外周血检测淀粉酶、TNF-α、IL-1β和髓过氧化物酶(MPO)水平。通过腹腔灌洗从灌洗液中获取巨噬细胞,应用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞TNF-α、iNOS mRNA表达,流式细胞技术检测M1(F4/80+CCR2+)型和M2(F4/80+CD163+)型巨噬细胞表达的动态变化。结果 各治疗组大鼠胰腺组织病理损伤较ANP组明显减轻。ANP组大鼠胰腺组织内出现较多的iNOS、Arg1阳性巨噬细胞,而对照组及各治疗组无或仅有少量阳性细胞。3个治疗组中,中剂量BMSCs治疗组的治疗效果显著高于其他2组,差异有统计学意义(P值均<0.05)。与ANP组大鼠比较,除血淀粉酶外,中剂量治疗组血TNF-α[(99.5±11.8)ng/L比(185.5±27.5)ng/L]、IL-1β[(24.1±3.7)ng/L比(128.5±66.1)ng/L]、MPO[(643.8±98.4)ng/L比(2131.9±261.4)ng/L]水平,腹腔巨噬细胞TNF-α(2.16±0.98比6.53±3.45)、iNOS(2.32±1.88比7.37±2.98)mRNA表达量,巨噬细胞M1型与M2型比值(1.53±0.10比2.02±0.31)均显著下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。ANP组和3个治疗组的上述所有指标均显著高于对照组,差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论 静脉注射同种异体BMSCs可抑制腹腔巨噬细胞向M1型极化,降低腹腔巨噬细胞M1型与M2型比值,减轻ANP大鼠的炎症反应。     

NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠海马区细胞凋亡及NMDAR1表达的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）对血管性痴呆（VaD）大鼠海马区细胞凋亡的影响。方法以NGF和（或）绿色荧光蛋白基因转染BMSCs;两血管法制备VaD模型。将大鼠随机分为假手术组、PBS组、BMSCs组及NCF修饰组。造模1周后,尾静脉注射NCF基因修饰的BMSCs;4周后行Morris水迷宫检测,观察其行为学改变;末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记法检测海马凋亡细胞,免疫组化法检测大鼠海马区神经细胞NGF、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1（NMDAR1）表达。结果与PBS组、BMSCs组比较,NGF修饰组逃避潜伏期明显缩短,海马区神经元凋亡率明显下降,NMDAR1表达明显降低（P〈0．05或〈0．01）。结论NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠的学习记忆能力有一定改善作用;对其海马细胞有一定保护作用;可降低VaD大鼠海马区NR1表达,提高NGF表达。     

骨髓间充质干细胞对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生与修复的作用

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）对大鼠减体积肝移植术后肝脏再生与修复的影响。方法采用生化、免疫组化等方法检测术后不同时间的血清和肝脏标本。（1）取同周龄Wistar大鼠骨髓体外培养BMSCs,标记CSFE荧光后制备悬液;（2）建立大鼠50%减体积肝移植模型（供体鼠为SD大鼠,受体鼠为Wistar大鼠）,分为实验组（取BMSCs悬液经门静脉植入）和对照组（取等量生理盐水经门静脉注射）,观察大鼠生存状态,测量肝再生的相关指标。结果 （1）成功分离培养BMSCs;（2）术后2h,大鼠均自由活动饮水;（3）实验组肝组织中存在大量BMSCs,术后第2、3 d实验组肝体比显著高于对照组。病理显示：实验组肝细胞损伤较对照组轻微。结论植入BMSCs后,可以促进大鼠减体积肝移植术后肝细胞增殖和修复。     

黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对大鼠脑缺血再灌注海马神经细胞凋亡及Livin、Caspase-9蛋白的影响

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白及神经细胞凋亡表达的影响.方法 实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、联合组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组不予处理.BMSCs组于造模后3 h移植BMSCs.联合组既移植BMSCs,又给予黄芪皂甙Ⅳ治疗.观察缺血72 h后,各组神经功能评分,PKH-26标记的移植BMSCs分布,采用Western blot和免疫组化方法检测大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白的表达,TUNEL方法检测细胞凋亡指数.结果 PKH-26标记的BMSCs在海马有表达.各组中联合组神经功能恢复最为明显(P<0.05).与模型组比较,联合组和BMSCs组均可上调Livin蛋白表达(P<0.05),下调Caspase-9蛋白表达(P<0.05),降低神经元细胞凋亡指教(P<0.05),以联合组作用更为显著(P<0.05).结论 黄芪皂甙Ⅳ联合BMsCs移植对脑缺血再灌注神经元细胞凋亡有协同抑制作用,其作用机制可能与黄芪皂甙Ⅳ促进BMSCs上调Livin蛋白表达,下调Caspase-9蛋白表达,抑制细胞凋亡有关.