miRNA-21调控胃癌细胞增殖及侵袭的机制

目的探讨靶向沉默miRNA-21表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响和机制。方法将人胃癌SGC-7901细胞分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA miRNA-21基因的沉默组,按照Invitrogen公司的脂质体Lipofectamine~(TM)2000方法进行转染,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达。结果转染siRNA miRNA-21后能显著降低miRNA-21的表达(P<0.01);与正常对照组及转染阴性组比较,沉默组细胞存活率、细胞侵袭数显著降低,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论靶向沉默miRNA-21表达能显著降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

槲寄生多糖调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景胃癌(gastric cancer, GC)是严重危害人体健康的恶性肿瘤,其发病率和死亡率分别占世界恶性肿瘤的第5位和第3位.中医药治疗能够减轻患者病痛,改善术后复发,槲寄生多糖(viscum coloratum polysaccharide,VCP)是槲寄生抗肿瘤的主要活性成分之一,能够抑制癌细胞增殖并诱导凋亡.目的观察VCP对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在作用机制.方法以不同浓度(20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL)VCP干预SGC-7901人GC细胞48h,MTT法检测细胞活力.以100μg/mLVCP干预SGC-7901细胞, Western blot、Transwell小室分别检测细胞中周期蛋白依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent proteinkinases4,CDK4)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)和核转录因子κB p65蛋白表达及细胞迁移和侵袭能力变化.结果不同浓度VCP均可抑制SGC-7901细胞活力(P0.05),呈浓度依赖性. Western blot和Transwell实验结果表明:与对照组相比, 100μg/mLVCP处理的SGC-7901细胞中CDK4、MMP-2、MMP-9、核转录因子-κB(nuclearfactorkappabeta,NF-κB)p65蛋白表达下调(P 0.05),同时视野内迁移和侵袭细胞数明显减少(P 0.05).结论 VCP对SGC-7901人GC细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其机制可能与NF-κB信号通路及CDK4、MMP-2和MMP-9蛋白有关.     

槲皮素对胃癌细胞增殖的影响及机制探讨

目的观察槲皮素对胃癌细胞增殖的影响,并探讨可能的作用机制。方法采用不同浓度的槲皮素处理胃癌SGC7901细胞,以四氮唑盐（MTT）比色试验观察胃癌细胞增殖情况,以TRAP-ELISA方法检测胃癌细胞端粒酶活性,分别采用琼脂糖凝胶电泳法和TUNEL法检测胃癌细胞凋亡情况。结果槲皮素处理后胃癌SGC7901细胞增殖率及细胞端粒酶活性明显降低、细胞凋亡率增加,且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。结论槲皮素可抑制胃癌细胞增殖,可能机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。     

SCH66336对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的探讨法尼基转移酶抑制剂（FTIs）SCH66336对胃癌SGC-7901与MGC-803细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期胃癌SGC-7901与MGC-803细胞,分为实验组和对照组,实验组加入SCH66336使终浓度分别为0.1、0.3、1.0、3.0μM,对照组加入含等体积DMSO的培养基,每组设3个复孔。MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期与细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中核糖体蛋白S6的磷酸化（S235/236）、细胞周期素D1（cyclin D1）与活化的Caspase-3表达情况。结果与对照组比较,SCH66336作用后SGC-7901与MGC-803细胞抑制率及凋亡率明显升高,呈G0/G1细胞周期阻滞,cyclin D1与S6磷酸化表达明显降低、活化的Caspase-3表达升高（P〈0.05）,且呈时间及剂量依赖性。结论 SCH66336对SGC-7901与MGC-803胃癌细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能为抑制S6的活化、下调cyclin D1表达、激活Caspase-3依赖的凋亡通路。     

miR-199对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系（HCoEpiC细胞）、结直肠癌细胞系（LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞）,用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达。将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组（miR-199mimics+TFR1组）,分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内;另取部分未转染细胞作为空白对照组。实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达,MTT实验检测细胞增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测TFR1蛋白表达,生物学软件TargetScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因。结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系（P均<0.05）,且SW620细胞中miR-199相对表达量最低,故选SW620细胞为实验...     

环指蛋白Efp对人肝细胞增殖及侵袭力的作用机制

目的研究环指蛋白Efp对人肝细胞株Bel7404增殖及侵袭力的作用机制。方法采用siRNA技术沉默Efp在人肝细胞株Bel7404的表达,沉默后48 h采用蛋白印迹法检测细胞株中Efp、细胞周期蛋白CyclinE和细胞周期依赖性激酶CDK2的蛋白表达。采用MTT法检测细胞的增殖能力,采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果转染siRNA后,Bel7404细胞株中siRNA组中,Efp蛋白含量为0.32±0.05,明显低于对照组的1.00±0.00(P0.05);而siRNA组的细胞增殖标志蛋白CyclinE的蛋白含量为0.47±0.04,明显低于对照组的1.00±0.00(P0.05);同时siRNA组中CDK2的蛋白含量为0.27±0.12,明显低于对照组的1.00±0.00(P0.05);MTT检测显示在Bel7404细胞株在沉默24 h、48 h和72 h室的细胞增殖率分别为0.087±0.010、0.107±0.013和0.120±0.010,各自明显低于对照组的0.112±0.012、0.134±0.011和0.163±0.010(P0.05); Transwell检测显示细胞株中siRNA组的细胞侵袭率为0.3384±0.0492,明显低于对照组的侵袭率0.7057±0.0836(P0.05)。结论环指蛋白Efp基因沉默可以通过抑制细胞周期蛋白CyclinE和CDK4进而改善人肝癌细胞株Bel7404的增殖及侵袭能力。     

槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGG-823生长的影响

目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，荧光显微镜了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901和BGC-823细胞增殖的作用明显，呈浓度和时问依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为14．12μm(SGC-7901)和28．13μm(BGC-823)。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10～20μm／L的槲皮素处理，SGC-7901细胞周期阻滞于G0／G1期，BGC-823细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡，是有效的抗癌药。     

硫酸软骨素对Lewis肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 观察硫酸软骨素（CS）对Lewis肺癌细胞（LLC）增殖及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法 常规方法培养LLC,并给予含不同剂量CS的培养液培养LLC.采用MTT法检测CS对LLC增殖的影响,流式细胞术PI染色法检测CS对LLC细胞周期的影响,Transwell侵袭实验检测CS对LLC侵袭能力的影响.结果 与对照组比较,CS组A值随CS浓度增加而降低（P均＜0.05）;与对照组比较,9、30 mg/mL CS组S期升高（P均＜0.05）;与对照组比较,9、30 mg/mL CS组LLC穿膜细胞数降低（P均＜0.05）.结论 CS对Lewis小鼠肺癌细胞具有抑制增殖和侵袭的作用,其机制可能与抑制细胞分裂周期有关.     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

WWOX对胆囊癌细胞迁移、侵袭的调控作用及机制

目的 探讨含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胆囊癌细胞迁移、侵袭的调控作用及机制.方法 培养胆囊癌细胞(GBC-SD),WWOX过表达的慢病毒质粒和包装质粒共转染293T细胞获得慢病毒颗粒.将GBC-SD细胞随机分为三组,分别加入等量的WWOX过表达的慢病毒(WWOX组)、阴性对照慢病毒(NEG组)、完全培养液(GBC...     

miR-191靶向调控SATB1对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-191(miR-191)靶向调控特异AT序列结合蛋白1(SATB1)对肝癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 体外传代培养人肝癌细胞系HepG2、人肝正常细胞系L02(以下分别称HepG2、L02细胞).采用RT-PCR技术检测两种细胞miR-191、SATB1 mRNA表达,采用Western blot...     

槲皮素对食管癌Eca109细胞迁移侵袭及血管生成的影响

目的研究槲皮素(Que)对人食管癌Eca109细胞迁移侵袭及血管生成的影响。方法分别用5μg/mL、10μg/mL Que处理Eca109细胞,通过平板克隆形成实验、创伤愈合实验及Transwell实验观察其克隆形成能力以及迁移和侵袭能力的改变。制备Eca109肿瘤条件培养基,诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730迁移及成管,观察Que对其的影响。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定Que对Eca109细胞的血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达的影响。结果 10μg/mL Que可显著抑制Eca109细胞的单细胞克隆形成能力(P0.05),而5μg/mL Que则不影响Eca109细胞的单细胞克隆形成能力(P0.05)。10μg/mL Que可抑制Eca109细胞的迁移和侵袭(P0.05),5μg/mL Que仅抑制Eca109细胞的侵袭(P0.05),但并不明显影响其迁移(P0.05)。5μg/mL、10μg/mL Que均可抑制Eca109肿瘤条件培养基诱导的CRL-1730细胞迁移和管腔形成(P均0.05),且10μg/mL Que的效果更明显。10μg/mL Que可明显降低VEGF-A、MMP2和MMP9的表达(P均0.05),5μg/mL Que仅降低MMP2的表达(P0.05)。结论 Que可以抑制Eca109细胞的迁移、侵袭及血管新生,并呈剂量依赖性。     

长链非编码RNA-UCA1通过靶向miR-873调控胃癌细胞增殖、侵袭迁移的分子机制

目的 探讨UCA1对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制.方法 将胃癌细胞SGC-7901分为si-con组、si-UCA1组、miR-con组、miR-873组、si-UCA1+anti-miR-con组和si-UCA1+anti-miR-873组;运用qRT-PCR检测胃癌细胞SGC-7901和胃黏膜上...     

幽门螺杆菌对胃上皮细胞及胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)对正常胃上皮细胞、胃癌细胞的形态、增殖、细胞周期以及细胞凋亡的影响.方法 倒置显微镜下观察经Hp作用24小时、48小时后,人胃上皮细胞GES-1、人胃腺癌细胞株SGC-7901、人低分化胃腺癌细胞株MGC-803、人胃癌细胞株BGC-823的形态学变化,并应用噻唑蓝比色法(MTT)检测Hp对上述细胞增殖活性的影响.采用流式细胞仪检测4类细胞增殖周期及细胞凋亡情况,Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达以及增殖周期相关蛋白P53、P21及E2F-1表达情况.结果 4种细胞与Hp共同培育后细胞正常形态发生改变,且随着细菌数目增加,细胞形态失常更加明显.MTT细胞增殖活性检测显示4种细胞株经Hp处理后,细胞增殖活性受到不同程度抑制.流式细胞术(FCM)检测4种细胞株呈不同比例的S期细胞增多,G1期细胞减少现象.Western-blot检测显示经Hp细菌处理后4种细胞株凋亡蛋白及增殖蛋白呈不同程度变化.结论 Hp对正常胃上皮细胞及不同类型的胃癌细胞在细胞增殖和细胞凋亡上存在不同程度的影响.     

miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA(miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pc DNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3’UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P0.05), Gab2的表达水平显著升高(P 0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P 0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.     

安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制

目的 探究安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法 体外培养人胃癌AGS细胞,取第3代对数生长期AGS细胞,分为对照组(不做干预)、实验组(2μmol/L安罗替尼组、4μmol/L安罗替尼组、8μmol/L安罗替尼组)和抑制剂组[4μmol/L安罗替尼+10μmol/L转化生长因子-β₁(TGF-β₁)/Smads信号通路抑制剂LY2109761],干预24 h。为避免细胞死亡太多干扰实验,抑制剂组选取4μmol/L安罗替尼作为最适浓度加入10μmol/L TGF-β₁/Smads通路抑制剂LY2109761进行后续实验。用CCK-8法、倒置显微镜、Transwell小室及Western blotting法对细胞活力、细胞形态、迁移、侵袭能力及上皮间质转化(EMT)、TGF-β₁/Smads信号通路相关蛋白表达进行检测。结果 与对照组相比,4、8μmol/L安罗替尼组细胞活力降低(P均<0.05)。实验组人胃癌AGS细胞生长受到抑制,迁移、侵袭能力及TGF-β₁、...