高表达的Wnt分泌蛋白1促进肺癌化疗耐受

目的探讨Wnt分泌蛋白(WISP)1在肺癌中的表达量及作用。方法生物信息学分析WISP1在肺癌及癌旁组织中的表达量,qRTPCR检测肺癌组织及癌旁组织中WISP1 mRNA的表达。在肺癌细胞中干预WISP1的表达,检测处理后细胞化疗敏感性的变化。结果生物信息学分析免疫组化数据库联合qRT-PCR结果发现,WISP1 mRNA在肺癌中的表达量显著高于癌旁组织,且WISP1在肺癌化疗耐受组的表达量显著高于化疗敏感组。在肺癌细胞中敲低WISP1对化疗药物奥沙利铂的敏感性增加,反之亦然。结论 WISP1在肺癌中高表达且促进肺癌化疗耐受。     

细胞衰老与2型糖尿病胰岛B细胞功能障碍的研究进展

细胞衰老指有复制能力的细胞在应激诱导后发生永久性细胞周期阻滞,是人体衰老的重要病理机制。T2DM是一种增龄性疾病,好发于老年人群。细胞衰老与T2DM的发生关系密切：一方面,细胞衰老导致胰岛素抵抗和胰岛B细胞功能障碍;另一方面,糖脂毒性及炎症微环境等又会促进胰岛B细胞衰老和功能障碍。靶向细胞衰老的治疗可降低糖尿病发生风险,在糖尿病及其并发症的防治中具有重要意义。     

DNA损伤诱导胃癌细胞端粒酶活性和TRF2表达增高

目的:检测在化疗药引起胃癌细胞DNA损伤过程中端粒酶、TRF1和TRF2的表达.方法:用不同浓度足叶乙甙处理胃癌细胞SGC7901和MKN28,分别在3,6,12,24和36h进行检测.采用实时定量TRAP分析检测端粒酶活性;用实时RT-PCR检测hTERTmRNA表达;用Westernblot和实时RT-PCR检测TRF1和TRF2表达.结果:两种细胞端粒酶活性及TRF2mRNA表达均在药物处理的早期明显增高(P<0.05),且显示明显的药物浓度依赖性(P<0.05);TRF1表达稍增高,但无统计学意义(P>0.05).hTERTmRNA表达无明显改变(P>0.05).TRF2表达在蛋白和mRNA水平均增高(P<0.05).结论:端粒酶和TRF2参与化疗药引起的胃癌细胞DNA损伤反应.     

一组端粒相关蛋白分子的克隆

目的:进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制,筛选新的端粒相关蛋白分子.方法:基于酵母双杂交技术原理,采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体,筛选cDNA文库,β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆,对阳性克隆质粒测序并在GenBank进行cDNA序列同源性比较.结果: AH109、Y187酵母菌基因表型稳定,无His渗漏表达.成功构建端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,其表达的融合蛋白对AH109酵母细胞生长无毒性且不具有激活自身报告基因(LacZ)的作用.从cDNA文库中筛选到Ade 、Leu 、Trp 和His 阳性克隆28个,β-半乳糖苷酶菌落影印滤膜分析筛选到Ade 、His 和LacZ 阳性克隆12个,其中有5个文库质粒具有自身激活报告基因的作用,予以弃除.7个阳性克隆质粒测序发现有2个为重复序列,cDNA序列同源性比较最终获得6个已收录人cDNA序列,他们分别为T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.结论:获取新的端粒相关蛋白可了解端粒酶全酶的结构及其在肿瘤、细胞永生化的生物学功能及分子机制,为肿瘤、衰老的发生及防治奠定重要的理论基础.     

人端粒保护蛋白1的结构与功能

人类端粒DNA由富含G的短片段重复序列(TTAGGG)串联组成,包括双链和3’端突出的单链两部分,不能编码蛋白质〔1-2〕。通常认为端粒酶是调控端粒DNA长度最重要的因素,端粒酶活性的降低将导致端粒长度的下降,细胞分裂停滞。端粒酶活性通常由其催化亚单位(端粒酶逆转录酶)所决定〔3-4〕,但奇怪的是,端粒双链DNA结合蛋白TRF1与TRF2,也能调控端粒酶活性,但它们并无直接联系。最近的研究显示人端粒保护蛋白1     

细胞衰老在慢性胆汁淤积性肝病中作用的研究进展

原发性胆汁性胆管炎和原发性硬化性胆管炎是以慢性炎症、胆道损害和肝纤维化为特征的慢性胆汁淤积性肝病,但目前尚无有效的方法延缓疾病进展和根治疾病。近年来,越来越多的证据表明慢性胆汁淤积性肝病的发生、发展与衰老胆管细胞数量的增加有关,以胆管细胞为病变靶点的细胞衰老及衰老相关表型具有潜在破坏性,可招募免疫细胞导致持续的慢性炎症、免疫反应和纤维化改变。本文结合现有研究结果,阐述细胞衰老及衰老相关分泌表型在慢性胆汁淤积性肝病中的潜在分子机制,探讨抗衰老治疗策略的潜在价值,不仅有利于加深对慢性胆汁淤积性肝病发病机制的了解,同时也为疾病治疗提供新的思路。     

Yap1相关的化疗耐药机制研究进展

随着化疗的推进,部分患者逐渐出现耐药现象,从而导致治疗中止或失败,因此逆转耐药已经成为肿瘤临床治疗中亟待解决的问题。Yes相关蛋白1(Yap1)在肿瘤发生、发展中发挥关键作用,下调Yap1表达能提高耐药后肿瘤的药物敏感性,减少或延缓耐药事件发生。Yap1主要通过增强肿瘤干细胞表型、促进上皮-间充质转化、抑制自噬、调节肿瘤微环境及基因表达来促进耐药的发生;通过Yap1抑制剂、自噬激活剂及其他相关因子调控剂联合应用能够在临床中延缓患者生存期,同时也可将Yap1作为预后、治疗监测指标辅助临床决策。     

Wnt诱导分泌蛋白-1与器官纤维化

Wnt信号通路参与调节机体发育诸多过程,Wnt信号通路异常激活可以导致肿瘤、纤维增生等疾病过程的发生。Wnt诱导分泌蛋白-1(WISP-1)是Wnt信号通路活化后的下游靶基因之一,最近研究表明WISP-1与肺、心脏、肝等脏器纤维化相关,此文就WISP-1与器官纤维化的研究进展作一综述。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1与疾病关系的新进展

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein 1,IGFBPrP1)属于IGFBP超家族中的一员,是一种分泌蛋白,在细胞增殖、黏附、衰老、凋亡等进程中起重要作用,与恶性肿瘤、肝纤维化等多种疾病关系密切。     

干扰素联用药物对胃癌细胞的抑制作用

目的研究不同剂量、不同的用药顺序等配伍方式，探讨干扰素与化疗药物体外联合应用，对人胃癌细胞株的抑制作用．方法以人胃癌细胞株ＦＧＣ８５作为靶细胞，用肿瘤细胞集落形成法进行药敏实验．分析了干扰素α２ｂ（ＩＦＮα２ｂ）与氟脲嘧啶、顺铂联合应用时，不同的配伍方式对人胃癌细胞株增殖的抑制作用．实验分组为：①化疗药物；②ＩＦＮα２ｂ；③化疗药物和ＩＦＮα２ｂ同时作用；④化疗药物继以ＩＦＮα２ｂ；⑤ＩＦＮα２ｂ继以化疗药物．结果ＩＦＮα２ｂ与氟脲嘧啶或顺铂联合应用对ＦＧＣ８５细胞增殖的抑制作用明显强于各单独应用，各组抑制率之间均有显著差异（Ｐ＜００１）；ＩＦＮα２ｂ降低氟脲嘧啶、顺铂的ＩＣ５０，并且有显著差异（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）；加药顺序不同，抑制效果亦不同，以化疗药物继以ＩＦＮα２ｂ组最佳，ＩＦＮα２ｂ继以药物组最差，二者间有显著差异（Ｐ＜００１）．结论ＩＦＮα２ｂ与氟脲嘧啶、顺铂联合应用，可提高药物的抑瘤作用．     

化疗药物致心脏毒性的可能机制及干预措施

化疗是肿瘤治疗的重要手段,但化疗药物在提高恶性肿瘤患者生存率的同时也具有心脏毒性.对于化疗药物所致心脏毒性的机制、监测、治疗等方面研究已有很大进展.目前已探明的主要机制有诱导心肌细胞凋亡、产生活性氧、改变线粒体功能、诱导基质重构等.干预化疗所致心血管毒性的药物,也基本通过改变以上机制起作用.     

Stable transfection of extrinsic Smac gene enhances apoptosis-inducing effects of chemotherapeutic drugs on gastric cancer cells

AIM: To explore the feasibility of enhancing apoptosis-inducing effects of chemotherapeutic drugs on human gastric cancer cells by stable transfection of extrinsic Smac gene. METHODS: After Smac gene was transferred into gastric cancer cell line MKN-45, subclone cells were obtained by persistent G_(418) selection. Cellular Smac gene expression was determined by RT-PCR and Western blotting. After treatment with mitomycin (MMC) as an apoptotic inducer, in vitro cell growth activities were investigated by trypan blue-staining method and MTT colorimetry. Cell apoptosis and its rates were determined by electronic microscopy, annexin V-FTTC and propidium iodide staining flow cytometry. Cellular caspase-3 protein expression and its activities were assayed by Western blotting and colorimetry. RESULTS: When compared with MKN-45 cells, the selected subclone cell line MKN-45/Smac had significantly higher Smac mRNA (3.12±0.21 vs 0.82±0.14, t=7.52, P＜0.01) and protein levels (4.02±0.24 vs0.98±0.11, t=8.32, P＜0.01). After treatment with 10 μg/mL MMC for 6-24 h, growth inhibition rate of MKN-45/Smac (15.8±1.2-54.8±2.9%) was significantly higher than that of MKN-45 (5.8±0.4-24.0±1.5%, t=6.42, P＜0.01). Partial MKN-45/Smac cancer cells presented characteristic morphological changes of apoptosis under the electronic microscope with an apoptosis rate of 36.4±2.1%, which was significantly higher than that of MKN-45 (15.2±0.8%, t=9.25, P＜0.01). Compared with MKN-45, caspase-3 expression levels in MKN-45/Smac were improved significantly (3.39±0.42 vs0.96±0.14, t=8.63, P＜0.01), while its activities were 3.25 times as many as those of MKN-45 (0.364±0.010 vs0.112±0.007, t=6.34, P＜0.01). CONCLUSION: Stable transfection of extrinsic Smac gene and its over-expression in gastric cancer cell line can significantly enhance cellular caspase-3 expression and activities, ameliorate apoptosis-inducing effects of mitomycin C on cancer cells, which is a novel strategy to improve chemotherapeutic effects on gastric cancer.     

天花粉蛋白诱导的胃癌细胞凋亡与bcl-2表达下降有关

目的 在体外实验中,探索天花粉蛋白诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与ｂｃｌ－２之间的关系。方法 以细胞形态学和ＴＵＮＥＬ染色法,定性、定量地研究天花粉蛋白与胃癌细胞凋亡的关系;通过免疫组化法和Ｎｏｒｔｈｅｎ Ｂｌｏｔ杂交法检测凋亡相关基因ｂｃｌ－２的表达。结果 天花粉蛋白在体外能诱导人胃癌细胞发生凋亡。下调ｂｃｌ－２的表达。结论 诱导胃癌细胞凋亡是天花粉蛋白抗胃癌作用的机制之一,天花粉蛋白可能经下调调亡相关基因ｂｃｌ－２的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。     

YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制

目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。     

羟基喜树碱诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)诱导胃癌细胞的凋亡作用,探讨其治疗胃癌的作用机制.方法 应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究HCPT对胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、MKN-28的细胞毒和诱导凋亡的作用.结果 HCPT具有很强的细胞毒作用,对三株不同分化程度胃癌细胞的SGC-7901(中分化)、MKN-45(低分化)、MKN-28(6高分化)的IC50为0.008～0.012mg/ml.HCPT作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片断化,凋亡小体形成等.流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰".流式细胞仪计数显示,HCPT诱导胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、MKN-28的凋亡率分别为21.88%、12.35%、30.26%.HCPT诱导胃癌细胞的凋亡率与胃癌的分化程度有关.TDT染色法显示,细胞凋亡指数在12.35%～30.26%之间.HCPT的作用表现为细胞周期特异性,HCPT主要作用于细胞周期的S期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于S期.结论 HCPT对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,诱导凋亡是其主要作用机制之一.     

Twist-1表达促进胃癌细胞淋巴结转移的可能机制

目的 检测胃癌组织及转移淋巴结基因谱的表达变化,筛选表达差异基因,并探讨其在胃癌转移中的可能机制.方法 利用U133plus 2.0基因芯片技术检测胃癌组织和转移淋巴结组织上皮细胞的基因表达谱变化,筛选出差异基因Twist-1,Western blot法检测过表达与敲除Twist-1细胞上皮-间质转化相关蛋白( E-Cadherin、Vimentin)的表达变化.结果 与胃癌组织比较,Twist-1在淋巴转移组织中表达明显升高分别为(2.07±0.71比12.12±3.21).阴性对照、空载体对照和Twist-1表达细胞增殖吸光度分别为0.84±0.16、0.74±0.06和0.71±0.07,细胞凋亡率分别为(2.05±0.08)％、(4.31±0.07)％和(3.95±0.09)％,表达Twist-1与细胞增殖及凋亡无明显相关.但细胞迁移能力增高.结论 Twist-1基因的改变可能与胃癌转移相关,并可能通过皮-间质转化方式实现.     

fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应

目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.     

Transduction of Fas gene or Bcl-2 antisense RNA sensitizes cultured drug resistant gastric cancer cells to chemotherapeutic drugs

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｕｍｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｂｕｔｉｔｏｆｔｅｎｄｏｅｓｎｏｔｗｏｒｋｄｕｅｔｏｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＭＤＲ）．Ｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉ...