miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力

目的研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性。过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P0.01)。结论miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

miR-125b 靶向Sema4C 调控STAT3 信号通路影响非霍奇金淋巴瘤的侵袭迁移

目的:研究miR-125b 靶向Sema4C 调控STAT3 信号通路影响非霍奇金淋巴瘤的侵袭迁移。方法:运用QT-PCR 法检测miR-125b 在非霍奇金淋巴瘤组织和细胞株中的表达;运用免疫组化法检测Sema4C 在正常淋巴组织和非霍奇金淋巴瘤组织中的表达;用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b 对Sema4C 转录活性的影响;用Transwell 小室侵袭实验和划痕实验检测miR-125b 的表达对NK-92 细胞侵袭能力的影响;用Western blot 法检测过表达miR-125b 后NK-92 细胞Sema4C 的表达变化;Western blot 法检测沉默Sema4C 后NK-92 细胞STAT3 信号通路的蛋白表达水平变化。结果:与正常淋巴组织比较,miR-125b 在非霍奇金淋巴瘤组织中表达明显降低[(0.48±0.05)% vs (1.59±0.38)%,P<0.05],Sema4C 在非霍奇金淋巴瘤中表达较高[(1.36依0.25)% vs (0.34±0.08)%,P<0.05];过表达miR-125b 后,NK-92 细胞的侵袭和转移能力明显降低 [(326.25±7.75)% vs (58.75±5.76)%],Sema4C 的表达水平下调[(84.26±6.94)% vs (15.61±4.68)%,P<0.05]。沉默Sema4C 后,NK-92 细胞JAK 和STAT3 蛋白表达下调[(85.26±6.94)% vs (12.61±4.32)%,P<0.05];双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b 可以直接调控Sema4C 的转录活性。结论:在非霍奇金淋巴瘤组织和细胞株中,miR-125b 可靶向Sema4C 的表达,从而调控非霍奇金淋巴瘤细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-107 靶向NID2 通过Notch 信号通路调控肺癌细胞的增殖侵袭

目的:miR-107 靶向NID2 调控Notch 信号通路影响肺癌的侵袭和增殖。方法:免疫组化检测NID2 在肺癌组织和正常肺组织中的表达;PCR 检测miR-107 在肺癌组织中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107 对NID2 转录活性的影响;肿瘤细胞成球实验检测miR-107 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的迁移能力的影响;Western blot 检测过表达miR-107 后Notch 信号通路的蛋白表达水平。结果:和正常肺组织比较,NID2 在肺癌组织中表达较高;miR-107 在肺癌组织中表达明显降低;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-107 可以直接调控NID2 的转录活性;过表达miR-107 后,肺癌细胞A549 的增殖、侵袭和迁移能力明显降低;过表达miR-107 后,Notch1、hes-1、presenilin1 蛋白表达下调。结论:miR-107靶向NID2 的表达,通过Notch 通路调控肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论 miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-34a通过Snail诱导肺癌EMT及促进其转移的分子机制北大核心CSCD

目的:探讨miR-34a在肺癌组织中的表达情况以及miR-34a在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:q PCR检测肺癌和正常肺组织中miR-34a的表达情况;使用miR-34a-mimic和miR-34a-inhibitor过表达和沉默miR-34a,q PCR检测沉默和过表达效果;Western blot检测沉默和过表达miR-34a后Snail蛋白的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-34a与Snail的相互作用;Transwell侵袭实验检测miR-34a的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-34a的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western blot检测E-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白的表达情况。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-34a表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-34a表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-34a-mimic和miR-34a-inhibitor可以有效抑制和过表达miR-34a的表达;miR-34a能与Snail的3'UTR特异性结合;miR-34a可以调控肺癌H1650细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-34a上调E-Cadherin,同时下调Vimentin和Twist蛋白的表达,沉默miR-34a则相反。结论:miR-34a在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期分级以及淋巴结转移与否密切相关,同时miR-34a可以通过上皮间质转化调节肺癌细胞侵袭和迁移能力。     

miR-34a 通过Snail 诱导肺癌EMT 及促进其转移的分子机制

目的:探讨miR-34a 在肺癌组织中的表达情况以及miR-34a 在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:qPCR 检测肺癌和正常肺组织中miR-34a 的表达情况;使用miR-34a-mimic 和miR-34a-inhibitor 过表达和沉默miR-34a,qPCR 检测沉默和过表达效果;Western blot 检测沉默和过表达miR-34a 后Snail 蛋白的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-34a 与Snail 的相互作用;Transwell 侵袭实验检测miR-34a 的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-34a 的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western blot 检测E-Cadherin、Vimentin 和Twist 蛋白的表达情况。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-34a 表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-34a 表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-34a-mimic miR-34a-inhibitor 可以有效抑制和过表达miR-34a 的表达;miR-34a 能与Snail 的3忆UTR 特异性结合;miR-34a 可以调控肺癌H1650 细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-34a 上调E-Cadherin,同时下调Vimentin 和Twist 蛋白的表达,沉默miR-34a 则相反。结论:miR-34a 在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期分级以及淋巴结转移与否密切相关,同时miR-34a 可以通过上皮间质转化调节肺癌细胞侵袭和迁移能力。     

miR-34a 调控MSR1 蛋白对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-34a 通过MSR1 对前列腺细胞迁移和侵袭的影响。方法:Western blot 检测前列腺癌PC3 细胞中MSR1 表达情况;qPCR 检测前列腺癌PC3 细胞中miR-34a 的表达情况,使用双荧光素酶实验检测miR-34a 和MSR1 之间的相关性;Transwell 侵袭实验检测miR-34a 和MSR1 对前列腺癌细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验检测miR-34a 和MSR1 对前列腺癌细胞迁移能力的影响。结果:Western blot 检测前列腺癌PC3 细胞中MSR1 的表达水平相对较高;qPCR 检测前列腺癌PC3 细胞中miR-34a 的表达水平相对较低;双荧光素酶检测miR-34a 和MSR1 之间有直接的结合位点,miR-34a 可以调控MSR1 的表达水平,划痕愈合试验和Transwell 侵袭试验检测过表达miR-34a 后前列腺癌PC3 细胞的迁移和侵袭能力受到相应的抑制,过表达MSR1 后可以逆转miR-34a 对前列腺癌PC3 细胞的迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-34a 可以通过MSR1 蛋白来调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭行为。     

miR-181b靶向NDRG2对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响

目的研究miR-181b靶向NDRG2对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-181b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测NDRG2在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-181b对NDRG2转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-181b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-181b后SGC-7901细胞NDRG2的表达变化。结果与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181b的表达明显升高,NDRG2蛋白表达水平明显降低(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-181b可以直接调控NDRG2的转录活性。过表达miR-181b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显升高,NDRG2的表达水平下调(P0.01)。结论 miR-181b可靶向NDRG2的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

miR-143 调控PAN3 蛋白的表达对B 细胞淋巴瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨miR-143 调控PAN3 蛋白的表达对B 细胞淋巴瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法:运用qPCR 实验检测miR-143 在正常骨髓组织和淋巴瘤血液组织中的表达情况;检测在不同种类的细胞株中miR-143 的表达水平;qPCR 检测miR-143 对PAN3 的表达水平的影响;双荧光素酶实验检测miR-143 和PAN3 之间的相互关系;划痕实验和Transwell 侵袭实验检测miR-143 表达对B 细胞淋巴瘤E6-1 细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:和正常骨髓组织相比,miR-143 在B 细胞淋巴瘤中表达明显下调;选取miR-143 表达水平较低的E6-1 细胞株;双荧光素酶实验表明miR-143 可以下调PAN3 的表达水平,直接影响PAN3 的表达活性;过表达miR-143 后,E6-1 细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,抑制E6-1 细胞的侵袭转移能力。结论:miR-143 可以通过调控PAN3 的表达,从而调节B 细胞淋巴瘤细胞的迁移和侵袭行为。     

miR-34c-3p inhibits cell proliferation,migration and invasion of hepatocellular carcinoma by targeting MARCKS

Recent studies have shown that microRNA-34c-3p (miR-34c-3p) is down-regulated in various types of cancers and involved in tumor growth, invasion and metastasis. However, the roles of miR-34c-3p in hepatocellular carcinoma (HCC) are poorly understood. In this study, the expression profile of miR-34c-3pin HCC tissues and cell lines were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The correlations of miR-34c-3p expression and clinicopathological characteristics were analyzed. The biological role of MiR-34c-3pin cell proliferation, migration and invasion was examined. In addition, the targets of miR-34c-3p were identified. The results showed that miR-34c-3p expression was significantly down-regulated in HCC tissues and cell lines; low expression level of miR-34c-3p was correlated with vascular invasion and advanced TNM stage. In vitro functional assays showed that overexpression of miR-34c-3pin HepG2 and Huh7 cells significantly reduced cell proliferation, migration and invasion. Furthermore, target analysis and luciferase assay identified myristoylated alanine-rich protein kinase c substrate (MARCKS) as a specific target of miR-34c-3p. Knockdown of MARCKS in HepG2 cells reduced cell migration and invasion, but not cell proliferation. Taken together, our findings implicate the potential application of miR-34c-3p as a tumor suppressor in cancer therapy.     

miR-135a inhibits airway inflammatory response in asthmatic mice via regulating JAK/STAT signaling pathway

The objective of this study was to investigate the inhibitory effect of miR-135a in regulating JAK/STAT signaling pathway on airway inflammation in asthmatic mice. An asthma model was established by sensitization and stimulation with ovalbumin (OVA), and the corresponding drug intervention was given from the day of stimulation by means of nasal drops. Airway hyperresponsiveness was tested. The content of miR-135a in the lung tissue of mice was detected by RT-PCR. The pathological changes of lung tissue were evaluated by HE staining. Tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-6, IL-5, and eotaxin in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and lung tissue were detected by ELISA and immunohistochemistry, respectively. The expression of JAK/STAT signaling pathway-related protein in lung tissue was detected by western blot. To further validate the effect of miR-135a overexpression on the JAK/STAT signaling pathway, pathway activators and inhibitors were added. Compared with the OVA group, the airway hyperresponsiveness of the mice was significantly decreased after treatment with the miR-135a agonist. The expression of miR-135a was significantly increased in the lung tissue and the pathological changes of the lung tissue were alleviated. The contents of TNF-α, IL-6, IL-5, and eotaxin in BALF and lung tissues were decreased. The expression of JAK/STAT signaling pathway-related proteins p-JAK3/JAK3, p-STAT1/STAT1, and p-STAT3/STAT3 were significantly reduced in lung tissue (P<0.05). Addition of JAK inhibitor AG490 reduced airway inflammation in asthmatic mice. miR-135a agonists inhibit airway inflammation in asthmatic mice by regulating the JAK/STAT signaling pathway.     

miR-454-3p靶向BPTF表达调控肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-454-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法采用RT-PCR技术检测miR-454-3p在肺癌组织以及肺癌细胞株中的表达,以表达量最低的肺癌细胞A549为后续分析对象,将miR-454-3p mimic转入A549细胞,RT-PCR验证miR-454-3p的过表达效率;采用CCK-8、迁移、侵袭等实验,观察转染组与对照组肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭情况;生物信息学预测BPTF是miR-454-3p的靶标,构建BPTF 3′UTR荧光素酶载体,通过双荧光素酶报告基因验证miR-454-3p和BPTF的靶向关系;应用Western blot法检测BPTF的表达及迁移、侵袭相关蛋白的变化。结果RT-PCR实验表明miR-454-3p在肺癌组织和细胞中表达下调,且在A549细胞中表达最低(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-454-3p的肺癌细胞A549增殖能力明显降低,迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。生物信息学软件分析BPTF为miR-454-3p的潜在靶基因,过表达miR-454-3p后BPTF的表达水平明显受到抑制。同时,迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下调,E-cadhern表达明显上调,而E-cadherin的负性调控N-cadherin表达下降。结论miR-454-3p可能通过靶向下调BPTF的表达,抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为肺癌的靶向治疗提供潜在靶标。     

长链非编码CDKN2B 调控miR-19 对慢性髓细胞白血病的影响

目的:探讨长链非编码CDKN2B调控miR-19的表达影响慢性髓细胞白血病细胞的生物学行为的方式及其机制。方法:q PCR检测不同白血病细胞中CDKN2B的表达情况;双荧光素酶报告基因检测CDKN2B与miR-19的相互作用;MTT增殖实验和流式细胞检测CDKN2B对HL-60细胞增殖和凋亡的影响;划痕愈合实验检测沉默CDKN2B后白血病HL-60细胞迁移能力的变化;Transwell侵袭实验检测沉默CDKN2B后白血病HL-60细胞侵袭能力的变化;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默CDKN2B后miR-19对HL-60细胞迁移和侵袭能力的影响;鬼笔环肽染色检测沉默MEG3后细胞骨架微丝微管形态变化;Western blot检测沉默CDKN2B后PI3K/AKT信号通路蛋白的表达情况。结果:在HL-60细胞中CDKN2B表达水平最低;CDKN2B能与miR-19的3'UTR特异性结合;过表达CDKN2B可以抑制HL-60细胞增殖能力,促进其凋亡行为;沉默CDKN2B可以增强白血病HL-60细胞侵袭和迁移能力;过表达CDKN2B后细胞骨架表现为伪足减少,运动能力减弱;肌动蛋白表达水平下调;过表达CDKN2B后PI3K/AKT通路蛋白表达情况相应下调。结论:CDKN2B可以靶向调节miR-19调控白血病细胞生物学行为。     

miR-188-3p靶向YAP1抑制肝细胞癌的侵袭和迁移

目的 探究miR-188-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其抑制HCC细胞侵袭和迁移的分子机制.方法 利用RT-qPCR检测miR-188-3p在人HCC组织和细胞系中的表达情况,进一步分析miR-188-3p表达在HCC中的临床价值;利用Western印迹检测转染m...     

miR-495-3p / WIF1 / Wnt 信号通路轴调节视网膜母细胞瘤细胞 增殖、 迁移和侵袭

目的 分析 miR-495-3p / Wnt 抑制因子 (Wnt inhibitor factor 1, WIF1) / Wnt 信号通路轴调节视网 膜母细胞瘤 (retinoblastoma, RB) 细胞增殖、 迁移和侵袭。 方法 生物信息学分析 WIF1 的差异表达及与 临床不良表型之间的关系, 并预测 miRNA 靶标; 双荧光酶素报告实验验证。 构建稳定过表达 WIF1 的 RB 细胞 (Vector 组、 WIF1 组)。 构建稳定过表达 miR-495-3p 的 RB 细胞 (miR-NC 组、 miR-495-3p 组和 miR495-3p + WIF1 组)。 Western 印迹检测 WIF1 蛋白及 Wnt 通路相关蛋白表达, 并进行体外功能试验。 裸鼠移 植瘤实验分析移植瘤体积重量。 免疫组化分析 WIF1 在 RB 组织中水平。 结果 WIF1 低表达, 与迁移、 侵袭 有关, 为 miR-495-3p 靶标, 双荧光酶素报告实验证实 WIF1 是 miR-495-3p 作用靶点。 WIF1 过表达抑制细胞增 殖、 迁移和侵袭, 影响细胞周期, 诱导凋亡。 体内实验显示 WIF1 在 RB 组织中过表达, 其过表达抑制瘤体生 长。 过表达 WIF1 下调 β-catenin、 c-Myc 蛋白水平 (P< 0. 05)。 过表达 miR-495-3p 下调 WIF1 蛋白水平, 上调 β-catenin 和 c-Myc 蛋白水平, 促进细胞增殖迁移、 迁移和侵袭, 抑制细胞凋亡 (P< 0. 05), 增加 WIF1 表达 可逆转 miR-495-3p 的作用 (P< 0. 05)。 结论 miR-495-3p 靶向 WIF1 通过 Wnt 信号通路抑制 RB 细胞增殖、 迁移和侵袭, 并诱导凋亡。