大麻素受体在海马CA1区锥体神经元的功能表达

目的观察大麻素受体在孤立的海马CA1区锥体神经元的功能表达。方法将出生15~20d的Wistar大鼠取脑,急性分离出单个CA1区锥体神经元,用膜片钳技术记录神经元电活动,观察非选择性大麻素受体激动剂Win55212-2(5μmol/L)对神经元静息电位、动作电位、自发发放频率的影响。根据Win55212-2对膜电位的影响分为超极化组(n=7)和去极化组(n=6)。组织切片活性用MTT染色法检测。结果与给药前比较,超极化组神经元给药中动作电位频率和膜电压显著降低[0Hz vs(4.3±3.2)Hz,P0.05;(-57.0±4.6)mVvs(-54.1±3.8)mV,P0.01];与给药中比较,给药后动作电位频率及膜电压显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。与给药前比较,去极化组神经元给药中动作电位频率显著降低,膜电压显著升高(P0.01);与给药中比较,给药后动作电位频率显著升高,膜电压显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 CA1区锥体神经元可能存在大麻素受体功能表达且不限于大麻素受体1;激活大麻素受体可能通过不同的机制起到抑制CA1区锥体神经元的作用。     

D-半乳糖对大鼠海马氨基酸含量及海马CA1区突触结构参数的影响

目的　观察经 D-半乳糖长期处理的大鼠海马氨基酸含量及海马 CA1区突触结构参数的改变。方法　应用反相高效液相法对大鼠海马氨基酸含量进行分析 ,应用透射电镜结合图像分析对突触结构参数进行观察。结果　 (1 ) D-半乳糖可导致模型大鼠天冬氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸含量降低 ,谷氨酸含量升高 (P<0 .0 5) ;(2 )在突触结构参数中 ,经 D-半乳糖处理的大鼠突触间隙明显增宽、突触后致密物厚度变薄、突触活性区长度缩短 (P<0 .0 5) ,突触界面曲率三组间无差异。结论　 D-半乳糖可改变大鼠海马氨基酸含量 ,并可显著影响大鼠海马突触结构参数     

大鼠学习记忆时CA3区突触素免疫阳性产物的变化及突触出芽表达

目的探讨学习记忆的形成、遗忘与突触可塑性的关系。方法用水迷宫训练大鼠21d建立空间辨别性学习记忆模型，随即停止训练，应用免疫组化方法和图像分析技术，检测3、7、14d突触素在大鼠海马CA3区表达的变化。结果对照组大鼠海马CA3区突触素的表达弱，免疫反应产物呈点状颗粒，沿辐射层长轴分布，多形层也有散在分布。模型组大鼠突触素染色明显比对照组深，密集的小颗粒呈带状沿辐射层排列，底部可见一些大的阳性颗粒。随着停止训练的时间延长，突触素的表达逐渐减弱。结论空间学习记忆导致海马CA3区辐射层新突触的形成，而随着空间学习记忆的遗忘，又致新形成突触的消退或突起的出芽又逐渐消失。     

“补肾活血”针刺法对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响

目的 运用蛋白质组学技术观察“补肾活血”针刺法对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响及探讨其治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法 将5月龄SAMP8 20只随机分为针刺治疗组(n=10)和模型空白对照组(n=10),针刺治疗组予以“补肾活血”针刺法干预,取穴百会、肾腧、血海、膈腧;模型空白对照组未予特殊处理.干预4 w后,取各组小鼠海马组织,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分别分离治疗组和对照组SAMP8海马区组织总蛋白,经胶体考马斯亮蓝染色,利用ImageScanner图像扫描仪及ImageMaster双向凝胶电泳软件对图像进行扫描分析,得到差异蛋白质点,通过质谱分析得到相应肽质量指纹图谱,经蛋白质数据库查询,鉴定差异蛋白质点.结果 针刺治疗组与模型对照组存在13个差异点,初步鉴定了浮舰蛋白1(Flotillin-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑红蛋白(NGb)、α-烯醇酶(α-enolase)等9个差异蛋白质,其中6个表达上调,3个下调;这些蛋白的功能涉及Aβ代谢的调节、氧化应激的调节、神经炎症的调节以及细胞骨架的修复等方面.结论 “补肾活血”针刺法可调节SAMP8海马组织的多种蛋白质表达,提示其具有多靶点治疗的作用,可能通过调节Aβ的代谢、抗氧化应激、抑制神经反应、修复细胞骨架等途径来实现其治疗AD的作用.     

戊四氮点燃大鼠海马突触体素表达的变化

建立戊四氮点燃癫痫模型,用免疫组化方法检测海马突触体素(SYN)表达的变化,并用HPIAS-1000多媒体病理图文分析系统对其定量.结果点燃组海马CA3区苔藓纤维层,齿状回颗粒细胞层,齿状回分子层内带突触体素免疫反应产物光密度值与对照组相比显著增加(P<0.05).认为点燃组海马突触体素较正常表达增加,提示突触前终末囊泡数目增加,反应了轴突增生与突触形成.     

卡马西平对癫痫模型大鼠海马损伤作用及对Fascin-1、突触素表达的影响

目的研究卡马西平对癫痫模型大鼠海马损伤的作用及对肌成束蛋白(Fascin-1)、突触素(SYP)表达的影响。方法选择54只无特定病原体动物(SPF)级SD健康大鼠,选取40只建立癫痫模型,分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只,另设10只正常大鼠为正常组。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予卡马西平(质量浓度2 g/L)15 mg/kg、30 mg/kg、50 mg/kg进行治疗,采用脑电图机观察大鼠潜伏期、持续时间、波幅指标,统计发作次数、发作总时间,苏木精-伊红染色法(HE)染色处理,观察海马区细胞凋亡指数,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测Fascin-1、突触素、Bcl-2、Bax表达水平。结果模型组潜伏期及Fascin-1、Bcl-2表达水平低于正常组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,持续时间、波幅、海马区细胞凋亡指数及突触素、Bax表达水平高于正常组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。卡马西平各剂量组潜伏期高于模型组,持续时间、波幅、海马区细胞凋亡指数低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。中剂量组潜伏期、Fascin-1、Bcl-2表达水平高于低剂量组和高剂量组,持续时间、波幅、发作次数、发作总时间、海马区细胞凋亡指数及突触素、Bax表达水平低于低剂量组和高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卡马西平能降低癫痫模型大鼠海马损伤程度,起到一定的抗癫痫作用,可能与调控Fascin-1、突触素、Bcl-2、Bax表达水平有关。     

七氟烷对幼鼠认知功能及海马CA1区NMDAR1表达的影响

目的观察七氟烷麻醉对幼鼠认知功能的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为三组各16只,高浓度组吸入3%七氟烷6 h,低浓度组吸入1.5%七氟烷6 h,对照组吸入空气。各组分别于出生后21 d（Ⅰ期）、60 d（Ⅱ期）随机取8只行Y型迷宫试验,连续3 d记录全天总反应时间（TRT）和错误次数（EN）;于最后一次测试后处死,采用免疫组化染色法测定脑海马CA1区N-甲基-D-天冬氨酸1（NMDAR1）表达情况。结果与对照组比较,高浓度组试验Ⅰ期T1时TRT延长,EN增加（P〈0.05）;Ⅱ期各组测试成绩差异无统计学意义;各组海马CA1区NMDAR1表达Ⅰ、Ⅱ期差异均无统计学意义。结论七氟烷麻醉后早期可导致幼鼠一过性认知功能减退,但对NMDAR1表达无明显影响。     

大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构及Apaf-1表达的变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构及凋亡相关基因凋亡蛋白激活因子(Apaf)-1表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组,其中模型组缺血30 min后再灌注,根据再灌注时间不同又分为2、24、72 h3个亚组.采用Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,透射电镜下观察海马CA1区神经元超微结构变化,免疫组织化学法和Western印迹法检测大鼠海马组织凋亡相关基因Apaf-1蛋白表达的变化.结果 透射电镜结果显示:假手术组海马CA1区神经元胞核较大,呈圆形或椭圆形,核膜清晰完整,常染色质呈细颗粒状均匀分布,胞浆内可见丰富的细胞器.模型2h组海马CA1区神经元核膜凹陷,核染色质密度增高,线粒体轻微肿胀;模型24 h组海马CA1区神经元核膜邹缩严重,核仁物质增多、偏移,线粒体结构松散、空泡状,线粒体嵴断裂,粗面内质网脱颗粒;模型72 h组海马CA1区神经元核固缩,核染色质呈团块状边集于核膜下,线粒体不同程度脱空.免疫组化和Western印迹结果显示:假手术组Apaf-1蛋白仅有少量表达,模型组各时间点Apaf-1蛋白表达均增高(P＜0.05).结论 大鼠脑缺血再灌注可导致海马CA1区神经元的凋亡,这可能与凋亡相关基因Apaf-1的激活有关.     

米诺环素抑制大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及Caspase-12的表达

目的 探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及半胱天冬酶-12(Caspase-12)表达的影响.方法 用大脑中动脉栓塞(线栓)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.18只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组和米诺环素干预组.应用DNA原位末端缺口标记(TUNEL)法检测神经元凋亡,免疫组化法检测组织Caspase-12蛋白的表达.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组海马CA1区凋亡神经元数增加(P<0.05),Caspase-12表达增加(P<0.05);米诺环素处理后显著缓解凋亡神经元数的增加,抑制Caspase-12的表达(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05).结论 抑制Caspase-12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素减少缺血再灌注损伤神经元凋亡的机制之一.     

大鼠脑缺血后海马CA2区FLVCR和BCRP的表达及益气活血法干预

目的 研究脑缺血后血红素铁转运蛋白人类猫白血病C亚类病毒受体（feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR）及胸腺癌抵抗蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP）随时间表达及益气活血法脑泰方（黄芪、川芎、地龙、僵蚕）提取物干预对FLVCR及BCRP表达的影响。方法 实验分两步进行,第一部分实验：随机将SD大鼠分为2 h、6 h、12 h、24 h、72 h组,采用大脑中动脉栓塞法（middle cerebral artery occlusion,MCAO）行大鼠局灶性脑缺血模型制备,分别在术后2 h、6 h、12 h、24 h、72 h各时间点取材,通过免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA随时间表达的变化。第二部分实验,随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组（3、9、27 g/kg）。各组大鼠预处理藻胃给药连续3天, MCAO模型制备术后连续藻胃给药3天,每日1次。术后3天取材,电镜检测海马神经元内铁样颗粒分布,免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP 及FLVCR mRNA和BCRP mRNA表达。结果 72 h组FLVCR 表达明显降低（P<0.05）,BCRP的表达2 h、6 h较高,12 h、24 h、72 h表达明显降低（P<0.05）;电镜下脑泰方各剂量组神经元内铁样颗粒聚集较模型组减少。脑泰方高剂量组FLVCR及FLVCR mRNA表达明显增加（P<0.05）,BCRP表达无明显改变。结论 大鼠脑缺血后第72 h FLVCR表达下降,益气活血中药脑泰方提取物干预可增加脑缺血后FLVCR的表达,促进血红素铁的外排,可能是治疗脑缺血损伤的新机制。     

益智健脑颗粒对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响

目的 运用蛋白质组学技术观察益智健脑颗粒对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响,从而探讨益智健脑颗粒治疗阿尔茨海默病(AD)的部分作用机制.方法 将6月龄SAMP8 20只随机分为治疗组(n=10)和对照组(n=10),治疗组以益智健脑颗粒浓缩液灌胃,对照组以等剂量双蒸水灌胃.8 w后,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分别分离治疗组和对照组SAMP8海马区组织总蛋白,经胶体考马斯亮蓝染色,利用ImageScanner图像扫描仪及ImageMaster双向凝胶电泳软件对图像进行扫描分析,将有意义的差异蛋白质点经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析得到肽质量指纹图谱(PMF),经 MSDB和NCBI数据库查询,鉴定差异蛋白质点.结果 鉴定出治疗组13个差异表达大于2倍的蛋白质,其中有8个上调,5个下调.结论 益智健脑颗粒可调节SAMP8小鼠海马组织的多种蛋白质表达,提示该药具有多靶点治疗的作用.     

电针对拟老年性痴呆大鼠学习记忆功能和海马CA1区突触可塑性的影响

目的 探讨电针对拟老年性痴呆(AD)大鼠学习记忆功能和海马CA1区突触可塑性的影响.方法 采用腹腔注射D-半乳糖、东莨菪碱,胃饲三氯化铝(AlCl3)制备多因素损伤拟AD动物模型,在造模同时给予电针干预,应用跳台实验检测大鼠学习和记忆能力,HE染色观察海马CA1区形态学变化,免疫组化测定海马区CA1区突触素表达水平,透射电镜测定突触面数密度、面积密度和体积密度变化.结果 电针能明显改善拟AD大鼠学习记忆能力,增加海马CA1区神经元数目,上调突触素表达.结论 ①多因素损伤能成功制备拟AD大鼠动物模型.②电针促进海马CA1区重建而提高突触素表达可能是改善拟AD鼠的学习记忆功能的机制之一.     

中长期慢性脑低灌注海马CA1区神经元凋亡及加减薯蓣丸干预作用的实验研究

目的探讨中长期慢性脑低灌注(CCH)海马神经元凋亡及加减薯蓣丸(MSP)的干预作用。方法将40只SD大鼠按随机数字表随机分为假手术组、模型组及药物组。采用改良的双侧颈总动脉阻断(BCCAO)法进行CCH大鼠造模,药物组以加减薯蓣丸浓缩汤剂[10 g/(kg·d)]灌胃45 d,模型组和假手术组以生理盐水灌胃,剂量、疗程同药物组。采用水迷宫行为学实验对各组大鼠智能进行测定;取大鼠海马CA1区进行病理学观察及免疫组化测定Bax、Bcl-2及核转录因子(NF-κB)表达。结果与模型组相比,药物组定位航行的逃避潜伏期明显降低(P0.05),平台跨越次数及平台所在象限的游行距离及时间明显增加(P0.05或P0.01)。病理学检查发现:与假手术组相比,模型组海马CA1区椎体神经元明显减少、胞浆空泡较多、胞核固缩或消失、细胞排列紊乱;药物组可见明显神经元增多,细胞结构基本正常。免疫组化可见药物组Bax平均光密度值(0.020 20±0.000 84)明显低于模型组(0.036 50±0.001 91),但高于假手术组(0.008 50±0.000 62);药物组Bcl-2表达(0.013 20±0.000 45)明显高于模型组(0.007 20±0.000 36)和假手术组(0.010 00±0.000 46);药物组NF-κB表达(0.012 90±0.000 51)明显低于模型组(0.016 10±0.000 90),但较假手术组(0.010 30±0.000 99)高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论中长期CCH导致的海马CA1区椎体神经元的进一步凋亡和丢失,加减薯蓣丸可明显减少神经元凋亡并干预神经炎症,保持神经有序联系,是其抗痴呆的机制之一。     

癫痫大鼠海马CA3区凋亡相关蛋白表达及意义

目的探讨癫痫大鼠神经元凋亡的分子机制。方法将SD大鼠分为观察组36只和对照组12只,观察组腹腔注射海人藻酸（KA）制作癫痫模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。制模3、6、12h及1、3d采用免疫印迹法检测两组海马CA3区凋亡相关蛋白p-c-Jun、FasL、Bax、Bcl-2的表达;制模7d后采用TUNEL染色法检测CA3区神经元凋亡情况。结果制模6、12h观察组胞核内c-Jun的磷酸化和表达、胞质中FasL表达均明显高于对照组（P均〈0.05）;制模6h时Bax的表达急剧增加,而Bcl-2蛋白表达却明显降低,P均〈0.05;制模7d后CA3区每1mm长度范围内TUNEL阳性细胞数为（177.0±24.7）个,对照组为（21.4±6.8）个,两组相比P〈0.05。结论c-Jun介导的核通路和Bcl-2介导的非核通路共同参与了大鼠海马神经元的凋亡过程。     

Caspase-9和Caspase-3在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及意义

目的探讨Caspase-9和Caspase-3在血管性痴呆大鼠海马CAl区的表达及意义。方法将100只大鼠按随机数字法分为假手术组及模型组,每组又分为1、2、4、8和12周5个亚组（n=10只）。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型,应用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化法检测Caspase-3及Caspase-9蛋白的表达。结果（1）与假手术组比较,在相同时间点模型组大鼠海马CAl区凋亡细胞数明显增多,差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）与假手术组比较,模型组大鼠海马CAl区Caspase-9、Caspase-3阳性表达在1周开始增多,2周达到高峰,4周开始下降,到12周仍增多,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Caspase-9及Caspase-3共同参与了血管性痴呆大鼠海马CAl凋亡的调控。     

孕酮对脑损伤大鼠海马CA1区细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

108只雄性SD大鼠随机分为假手术组、损伤组、孕酮（PROG）治疗组,各36只。用改进的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型。伤后6、12、244、8、72和144 h各组分别取6只大鼠麻醉后取其脑组织,用Tunel法和免疫组化法检测海马CA1区凋亡细胞及其Bcl-2蛋白。结果显示,假手术组未见神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白阳性细胞;PROG治疗组各时间点凋亡细胞数较损伤组减少,伤后244、8和72 h,PROG治疗组凋亡细胞数与损伤组相比,P均〈0.05;伤后12、24、48和72 h,PROG治疗组海马CA1区的Bcl-2蛋白阳性细胞数高于损伤组,两组相比,P均〈0.05。认为脑损伤后应用PROG可以上调脑组织Bcl-2蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。     

糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Fas蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的观察Fas蛋白在糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤中的表达。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导和线栓法制备糖尿病大脑中动脉闭塞模型(MCAO),应用免疫组化方法和流式细胞术观察糖尿病脑缺血再灌注组与缺血再灌注组海马CA1区Fas表达变化和细胞凋亡情况。结果缺血再灌注组及糖尿病脑缺血再灌注组大鼠海马CA1区Fas阳性染色阳性细胞分别为(21·3±3·1)个/100μm、(51·9±4·2)个/100μm,较正常对照组〔(1·1±1·7)个/100μm〕及假手术组〔(10·3±2·4)个/100μm〕增多(P<0·05);而糖尿病脑缺血再灌注组比缺血再灌注组增加得更明显(P<0·05);糖尿病脑缺血再灌注组海马CA1区Fas蛋白表达上调,细胞凋亡百分数〔(29·34±8·45)%〕明显高于缺血再灌注组〔(17·59±6·38)%〕(P<0·05)。结论糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马细胞发生凋亡,Fas介导的细胞凋亡机制可能是糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。     

芹黄素对SAMP8小鼠学习记忆及突触可塑性的影响

目的探讨芹黄素对快速老化SAMP8小鼠学习记忆能力及突触囊泡蛋白(Syn)及生长相关蛋白43(GAP43)mRNA及蛋白表达的影响。方法 6月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、芹黄素10、20、40 mg/kg剂量组,同龄SAMP1小鼠作为对照组,用Morris水迷宫训练测试其空间学习能力和记忆能力;用Western印迹及RT-PCR方法测定海马区Syn及GAP43蛋白及mRNA表达。结果芹黄素各剂量组的平均逃避潜伏期均缩短,穿越平台区次数增加,在目标象限的停留时间延长(与SAMP8模型组相比,P0.05),海马区Syn、GAP43蛋白及mRNA表达均较模型组增加(P0.05)。结论芹黄素可能通过促进海马神经突触Syn及GAP43的表达,提高突触修复及再生能力,改善小鼠的学习记忆。     

钙结合蛋白在老年人海马CA1和CA3区的分布

目的　探讨老年人海马中钙结合蛋白 (CalbindinD 2 8K ,CaBP)的分布及表达 ,并分析其在人衰老过程中对神经元的生理、病理变化的影响。方法　收集 12例 6 0岁以上老年人非脑部疾病尸检左侧大脑半球的海马组织 ,经病理常规处理后 ,切片 ,用免疫组织化学ABC染色法检测海马CA1与CA3区CaBP的分布。结果　CaBP阳性产物出现在神经元的细胞质中 ,CA1区的CaBP免疫阳性细胞数多于CA3区。结论　CaBP在老年人海马CA1、CA3中均有表达 ,但有差别。提示CaBP在老年人海马的功能活动中可能起重要作用。     

葛根素对去卵巢大鼠体重及大脑海马CA1区、CA3区神经元形态的影响

目的 观察不同浓度葛根素对去卵巢大鼠体重及海马CA1区、CA3区神经元形态的影响.方法 SD大鼠72只,摘除卵巢1 w后,随机分为葛根素高、中、低剂量组、倍美力组、模型组、假手术组,每组12只,除假手术组外,均摘除大鼠卵巢造成去势模型.灌胃过程中每5天称重一次,30 d后,用HE染色观察海马神经元形态变化.结果 与模型组比较,葛根素在不同浓度(30～ 120 mg/kg)范围内,随着浓度的增大,抑制海马神经元细胞凋亡的作用越强,并有一定的剂量依赖关系;但对大鼠体重变化无明显影响.结论 葛根素可以抑制大鼠海马神经元细胞的凋亡,而对大鼠体重改变无显著作用.