重楼皂苷Ⅶ抑制结肠癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞迁移、侵袭的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法用MTT方法测定重楼皂苷Ⅶ对HCT116细胞和SW620细胞的半数抑制浓度;划痕实验和Transwell迁移实验观察重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞的迁移能力;侵袭实验观察重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞的侵袭能力。Western blot检测蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达。结果重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞增殖,其IC50值分别为(3.72±0.09)μmol/L和(3.46±0.13)μmol/L;重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞迁移、侵袭有一定的抑制作用,其作用呈明显的剂量依赖性;Western blot检测发现,给予重楼皂苷Ⅶ处理细胞后,明显升高E-cadherin蛋白表达水平,降低N-cadherin蛋白表达水平,均具有统计学意义(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用,其作用呈明显剂量依赖性,并影响上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,其机制可能是调控EMT过程抑制细胞迁移和侵袭。     

重楼皂苷Ⅰ抗肝癌细胞作用的初步研究

目的:本文旨在研究重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞株Huh7和HepG2的抑制作用并探讨其是否具有抑制肝癌干细胞的功效.方法:不同剂量的重楼皂苷Ⅰ处理肝癌细胞后,MTT方法检测细胞存活情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;磁珠分选出CD133+-Huh7和CD133--HepG2细胞后,成球实验...     

Axin抑制肺腺癌SPC-A-1细胞系侵袭的作用和可能机制

目的 Wnt通路的异常激活与恶性肿瘤的发生和进展关系密切,我们在前期研究中发现肺癌中也有Wnt通路异常激活的现象,而体轴抑制因子Axin是Wnt通路的抑制因子,本研究的目的是探讨Axin对肺癌细胞侵袭力的影响及其机制。方法构建野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变),转染人肺腺癌SPC-A-1(SPC)细胞,应用GSK-3βsiRNA阻断β-catenin的降解,Western bolt检测各处理组细胞中β-catenin和MMP-7的变化,Transwell检测各处理组细胞侵袭能力的变化。结果转染野生型Axin明显的下调β-catenin和MMP-7的蛋白表达以及SPC细胞的侵袭力(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能,转染突变型Axin不能有效的下调β-catenin和SPC细胞的侵袭能力。结论 Axin抑制SPC细胞的侵袭力,可能与其下调β-catenin,负向调控Wnt通路有关,Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。     

Caspase-8在非小细胞肺癌中的表达及其在肺癌A549细胞侵袭转移中作用

目的:研究caspase-8蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达、临床意义及其在癌细胞侵袭转移方面的作用。方法:运用免疫组织化学方法对临床非小细胞肺癌标本中caspase-8蛋白的表达情况进行检测;运用RNAi技术对肺癌A549细胞内的caspsae-8基因进行沉默,通过Western blot、划痕实验及Transwell小室等实验对caspase-8蛋白的生物学功能进行探究。结果:癌组织中caspase-8的阳性率为73.1%,癌旁组织73.3%,正常组织中为65.4%,之间的差别无统计学意义,不同部位组织中caspase-8蛋白表达的阳性强度之间有统计学差别(P<0.05)。caspase-8蛋白在癌组织、癌旁组织及正常组织细胞内定位上也有着显著的统计学差异(P<0.05)。caspase-8蛋白的表达与癌组织的病理类型、组织学分化以及患者吸烟与否没有统计学上的差异,但caspase-8在癌组织中的表达与淋巴结转移及临床分期阳性之间有统计学相关性(P<0.05)。shRNA-Cas-8质粒转染肺癌A549细胞后,实验组转染,caspase-8被完全沉默,经过24 h的培养,划痕出的空白几乎未见缩小,对照组划痕后24 h,划痕两侧的细胞已基本迁移铺盖了划痕处的空白。Transwell小室结果显示实验组细胞的侵袭能力远较对照组弱,这种差异有统计学意义(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌组织中caspase-8蛋白的表达强度低于正常组织,且定位于胞核,它在癌组织里的表达预示着更高的淋巴结转移几率和更晚的分期;完全沉默肺癌A549中caspase-8蛋白的表达,可降低肿瘤的侵袭及迁移。     

异丙酚下调PKM2抑制人肺腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨异丙酚对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 MTT法检测异丙酚(60、100、120μmol/L)处理的人肺腺癌细胞系A549、Anip973的抑制率或增殖;将si-NC组(转染si-NC)、si-PKM2(丙酮酸激酶M2)组(转染si-PKM2)、pc DNA3. 1组(转染pc DNA3. 1)、pc DNA3. 1-PKM2组(转染pc DNA3. 1-PKM2)用脂质体法转染至Anip973细胞,部分组用120μmol/L异丙酚处理;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;RT-qPCR检测细胞中PKM2的mRNA的表达;Western blot检测细胞中PKM2、E-cadherin、MMP-2的蛋白表达。结果异丙酚(60、100和120μmol/L)呈浓度依赖性抑制人肺腺癌细胞A549、Anip973增殖(P <0. 05),Anip973细胞对异丙酚的敏感性较强,最适浓度为120μmol/L;异丙酚可抑制Anip973细胞迁移和侵袭,并下调PKM2、MMP-2蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达;敲减PKM2具有与异丙酚相同的抑制Anip973细胞的增殖、迁移和侵袭作用,下调MMP-2蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达的作用;过表达PKM2可减轻异丙酚对Anip973细胞增殖、迁移和侵袭及E-cadherin、MMP-2蛋白表达。结论异丙酚可抑制肺腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,其机制与下调PKM2表达相关。     

eEF2K沉默联合丹参酮ⅡA磺酸钠协同抑制人肺腺癌细胞系A549增殖

目的探讨真核延伸因子2激酶(eEF2K)基因转染及丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对肺腺癌细胞系A549增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法预实验筛选STS最佳作用浓度。将A549细胞分为siRNA-NC组(转染siRNA-NC)、siRNA-eEF2K组(转染siRNA-eEF2K)、siRNA-NC+STS组(转染siRNA-NC+10μg/mL STS)和siRNA-eEF2K+STS组(转染siRNA-eEF2K+10μg/mL STS)。CCK-8法、克隆形成实验、Transwell小室法、划痕实验和流式细胞测量术检测细胞存活率、克隆形成率、穿膜细胞数、迁移率和凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT、Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达。结果与siRNA-NC组比较,siRNA-eEF2K组、siRNA-NC+STS组和siRNA-eEF2K+STS组细胞存活率、克隆形成率、穿膜细胞数、迁移率和p-AKT、Ki67、MMP-2、Bcl-2蛋白均明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<...     

circ＿0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制

目的 探讨环状RNA(circRNA)circ＿0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制。方法 收集2018年1月至2021年4月见未出现转移的肺腺癌患者46例、出现转移的肺腺癌患者42例和健康者50例。通过RT-qPCR检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和circ＿0014130的水平。通过Pearson检测二者的相关性。肺腺癌细胞分为对照组、缺氧组、si-circ＿0014130组、缺氧+si-circ＿0014130组。通过转染抑制circ＿0014130,通过降低氧气浓度（10%）构建体外缺氧环境。比较各组细胞的迁移和侵袭能力。结果 肺腺癌组患者血清中的HIF-1α mRNA(2.14±0.27)和circ＿0014130(2.59±0.23)水平均显著高于健康组（分别为1.00±0.16、1.00±0.14）(P<0.01);肺腺癌转移组的HIF-1α mRNA(3.85±0.42)和circ＿0014130(4.36±0.44)水平均显著高于健康组和肺腺癌组（P<0.01）;HIF-1...     

miR-655-3p靶向KIF20A抑制人肺腺癌细胞系A549迁移及侵袭

目的 探讨miR-655-3p靶向驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 RT-qPCR检测人肺腺癌细胞系H460、A549、HCC-2935、H1299细胞中miR-655-3p的表达;取对数增殖期的A549细胞,分为:空白组、miR-NC组、miR-655-3p mimics...     

重楼皂苷Ⅶ下调S100A8抑制肺癌转移前微环境形成

目的:评估重楼皂苷Ⅶ干预MDSCs介导转移前微环境形成的作用,揭示“正虚伏毒”转移核心病机的生物学基础.方法:在C57BL/6小鼠上建立皮下移植瘤模型,随机分为4组,分别为生理盐水对照组(NS)、重楼皂苷Ⅶ组(PP7)、紫杉醇组(PTX)、重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇组(PP7+PTX),每组8只,每周给药3次,共用药两周.活...     

PLCE1通过调控p53抑制肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)抑制肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法:选用人肺腺癌细胞株A549作为研究对象。采用real-timePCR和Westernblotting法分别检测PLCE1抑制剂U-73122处理前、后肺腺癌细胞株A549中PLCE1和p53mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:肺腺癌细胞株A549高表达PLCE1,低表达p53;抑制PLCE1表达后A549细胞中p53表达上调,细胞凋亡明显增加。结论:PLCE1通过抑制肺腺癌A549细胞株中p53的表达,从而抑制A549细胞凋亡。     

环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照（si-NC）组及circ0004771小干扰RNA（siRNA）组（si-circ0004771组）,将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果 si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义（t=51.34、13.96,P值均<0.001）。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前（0 h）和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义（P值均>0.05）;而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15, 小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义（t=4.46,P=0.011）。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义（t=3.58,P=0.023）。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义（t=16.26、8.83,P值均<0.001）。结论 下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。     

原发性肺腺癌胃转移1例

原发性肺癌胃转移患者罕见,患者往往有相对典型但不具有特征性的消化系统症状,当患者已经开始化疗后易误诊系化疗所致症状而忽略消化道转移的可能.赣州市人民医院病理科近期诊断肺原发腺癌胃转移患者1例,镜下肿瘤细胞分化较差;免疫组织化学结果示:TTF-1(+),NapsinA(+),CDX-2(-),提示肺来源.     

芒柄花苷靶向ADORA1抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨芒柄花苷靶向腺苷A1受体(adenosinereceptor A1, ADORA1)抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,将肺腺癌细胞(SPC-A1和A549)分成对照组(细胞不处理)、芒柄花苷组(芒柄花苷处理细胞)、ADORA1组(转染ADORA1质粒)和芒柄花苷+ADORA1组(经芒柄花苷处理细胞后转染ADORA1质粒)。通过生物信息学分析芒柄花苷的作用靶点及其恶性行为。以不同浓度芒柄花苷干预细胞,随后通过MMT法检测细胞活力、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖能力、Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测芒柄花苷体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki-67。Western blotting检测细胞ADORA1蛋白表达。生物信息学结果显示ADORA1是芒柄花苷的作用靶点之一,且在肺腺癌中高表达,与临床恶性行为有关。细胞实验表明,芒柄花苷可以抑制肺腺癌细胞活力(P<0.05),且能抑制其细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验显示,芒柄花苷处理明显抑制移植瘤体积和重量增长(P<0.05)。分子水平揭示,...     

K-ras反义核酸抑制肺腺癌细胞A549的生长

目的:探讨K-ras反义核酸抑制肺癌生长的机制。方法:应用Westernblotting检测K-ras基因在6例肺腺癌标本和A549细胞中的表达;构建K-ras基因的反义表达载体(命名为antisense-K-ras-pcDNA3.1),转染后,MTT法测细胞的生长曲线,AnnexinV检测细胞凋亡;Westernblotting检测cyclinA、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4、P53、Rb和caspase-3的表达。结果:在A549细胞和6例肺腺癌标本中,A549细胞和4例标本中K-ras基因高表达;MTT结果显示从第4d开始,转染K-ras反义核酸的细胞生长明显受到抑制,而且细胞凋亡现象较明显;Westernblotting显示转染反义K-ras基因的细胞中cyclinA、cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4的表达降低,而caspase-3、P53和Rb的表达升高。结论:K-ras基因反义核酸能够抑制细胞生长,可能与cyclinA、cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4的表达降低和caspase-3、P53、Rb的表达升高有关。     

基膜聚醣基因过表达对肺腺癌细胞A549增殖的影响及可能机制

目的 为探讨基膜聚糖(lumican)基因对肺腺癌细胞A549增殖能力的影响以及可能机制.方法 以携带人lumican基因的重组慢病毒感染A549细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选法构建稳定细胞株;荧光定量PCR和Western blot法检测lumican mRNA及蛋白的表达.采用MTT法、流式细胞仪检测细胞生长曲线、倍增时间、增殖指数,在体动物实验检测其成瘤情况,Western blot法检测RhoC、p-Akt蛋白的表达.结果 成功构建lumican基因过表达的A549细胞株;与空载体组或对照组比较,实验组细胞生长速度变快(P＜0.05)、倍增时间缩短(P＜0.05)、增殖指数增大(P＜0.05)、皮下瘤体积、瘤体质量及分裂相细胞均增加(P＜0.05),RhoC及p-Akt的蛋白表达量均增高(P＜0.05);以上各参数比较对照组与空载体组之间均没有明显差异(P＞0.05).结论 Lumican基因能促进肺腺癌细胞A549的增殖,其机理可能与RhoC及p-Akt蛋白增高有关.     

nm23-HI基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法：构建nm23-HI基因的真核表达载体。转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中，通过G418筛选出稳定表达克隆，RT—PCR及免疫组化检测nm23-HI在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-HI基因对细胞生长的影响，流式细胞仪检测细胞周期，原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果：转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-HI基因，抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-HI基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少，停滞于G0期。转染nm23-HI基因后细胞边缘的伪足减少。结论：nm23-HI基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖，可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。     

重楼皂苷Ⅰ对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用研究北大核心CSCD

目的:探究重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用机制。方法:将小鼠随机分为对照(Control)组、LPS组、PPⅠ5 mg/kg组、PPⅠ10 mg/kg组、PPⅠ20 mg/kg组和地塞米松(DEX)组,每组8只。PPⅠ各组小鼠灌胃相应剂量PPⅠ,DEX组灌胃2 mg/kg DEX,对照组灌胃生理盐水预处理7 d,鼻腔滴入LPS(5 mg/kg)建立小鼠ALI模型。24 h后处死小鼠,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),检测肺湿/干重(W/D)值;HE染色观察肺组织损伤情况并评分;检测BALF中总蛋白含量、白细胞和巨噬细胞数;试剂盒检测一氧化氮(NO)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测小鼠肺组织中p38和AMPK的磷酸化及NLRP3、caspase-1、Nrf2和KEAP1的蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS组小鼠肺组织发生病理性变化,肺损伤评分、W/D值、BALF中总蛋白含量、炎症细胞、氧化应激水平和炎症细胞因子含量明显升高(P<0.05,P<0.01),p38磷酸化水平、NLRP3、caspase-1和KEAP1蛋白表达显著上调(P<0.01),AMPK磷酸化水平和Nrf2蛋白表达显著下调(P<0.01)。与LPS组比较,PPⅠ(10 mg/kg和20 mg/kg)和DEX减轻了LPS诱导的ALI,肺损伤评分、W/D值、BALF中总蛋白含量、炎症细胞、氧化应激水平和炎症细胞因子含量明显降低(P<0.05,P<0.01),p38磷酸化水平、NLRP3、caspase-1和KEAP1蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),AMPK磷酸化水平和Nrf2蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论:PPⅠ能够减轻LPS诱导的小鼠ALI,可能与p38-NLRP3/caspase-1和AMPK-Nrf2/KEAP1信号途径有关。     

人肺巨细胞癌细胞株裸小鼠肺内原位移植及其侵袭和转移的实验研究

Human lung giant cell carcinoma cell strains were implanted into the lungs of nude mice via an intrabronchial procedure. Tumorigenicity, invasion and metastasis of the xenografts, and their morphological features, including the findings by light and electronic microscopy and immunohistochemistry were investigated. Dissemination of xenografts within the airway (2/8), invasion to diaphragm (5/8), and development of bloody hydrothorax (5/8), were discovered. Metastasis via lymphatic and blood vessel routes as well as seeding metastasis occurred in all the tumor-bearing animals. The morphological features of xenografts were consistent with those of the parental giant cell carcinoma. These results indicate that lung cancer cell strains grow autonomously and the behavior of invasion and metastasis of the xenografts imitates more closely the clinical manifestation of lung cancer than their subcutaneous counterparts. Since microenvironment influences the biological behavior of the transplants, this model seemed to be more ideal for further investigation experimentally.     

健脾化瘀解毒方调控能量代谢抑制肺癌细胞侵袭转移的研究

目的:研究健脾化瘀解毒方的含药血清(JHJRMS)对人肺癌细胞能量代谢的影响.方法:TCGA数据库分析己糖激酶2(HK2)与肺癌患者预后之间的相关性;划痕实验用来检测JHJRMS对肺癌细胞侵袭转移的影响.RT-PCR检测JHJRMS对肺癌细胞中miR-143-3p表达水平的影响.数据库预测miR-143-3p与HK2蛋...     

RAB5A反义RNA对人肺腺癌细胞系侵袭转移影响的体外研究

目的　已知RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌恶性表型形成相关,本研究在此基础上进一步探 讨该基因过表达在人肺腺癌恶性演进中的作用。　方法　将RAB5A反义表达载体稳定转染入高浸润人肺腺癌细 胞系L18和高转移人肺腺癌细胞系95D中,采用重组基底膜侵袭、与基底膜成分黏附能力测定、趋化运动能力测 定、明胶酶分泌与活性检测等体外实验方法观察转染前后细胞生物学特性的改变。　结果　RAB5A反义RNA稳 定转染后L18细胞趋化运动和侵袭基底膜能力显著降低(P<0.05),明胶酶活性检测发现转染后细胞MMP 2的分 泌能力明显减弱;稳定转染后95D细胞趋化运动和侵袭基膜能力显著降低(P<0.05)。　结论　体外实验显示, RAB5A基因过表达对肿瘤细胞的趋化运动能力和侵袭重组基底膜能力起重要作用,进一步提示RAB5A基因过表 达在人肺腺癌的侵袭转移过程中发挥一定作用。