青藤碱通过抑制缺血诱导的异常自噬缓解MCAO模型大鼠脑损伤

目的:探究青藤碱(SM)对脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠脑缺血损伤的作用及机制。方法:线栓法复制大鼠MCAO模型,TTC染色检测脑梗死面积,免疫组化和Western blot检测增殖、凋亡及自噬标记蛋白的表达,ELISA检测脂质过氧化物及炎症因子的含量。结果:SM能显著减少MCAO大鼠脑梗死面积;免疫组化及Western blot结果显示,SM能明显促进MCAO大鼠增殖标记蛋白Ki67及凋亡标记蛋白Bcl-2的表达,降低Caspase-3和Bax表达水平。同时,SM还能明显降低MCAO大鼠血清脂质过氧化物(LDH、MDA)及炎症因子(NO、IL-6)的含量。此外,SM可明显抑制MCAO大鼠自噬标记蛋白Beclin1表达,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,促进p62的表达。SM处理后还能显著抑制m TOR/Ulk1通路蛋白Ulk1表达,升高m TOR表达水平。结论:SM可通过m TOR/Ulk1通路抑制缺血诱导的异常自噬,从而缓解MCAO大鼠脑缺血损伤。     

氯喹调控视网膜神经节细胞自噬的研究

目的:探究氯喹对CoCl_2诱导的视网膜神经节细胞凋亡的保护作用。方法:小鼠视网膜神经节细胞RGC-5细胞加入300μmol/L CoCl_2及30μmol/L氯喹处理24 h后,采用qPCR、Western blot、flow cytometry及MTT法分别检测自噬相关基因Beclin1、LC3b、Atg5、Atg7、自噬相关蛋白LC3、凋亡相关蛋白Caspase-3的表达、细胞凋亡率和细胞存活率。结果:相比于单纯CoCl_2组,CoCl_2及氯喹处理后的RGC-5细胞中,相关基因Beclin1、LC3b、Atg5、Atg7、自噬相关蛋白LC3B、凋亡相关蛋白Caspase-3均被明显抑制(P0.05),细胞凋亡率显著下降(P0.05),细胞存活率明显升高(P0.05)。结论:自噬抑制剂氯喹抑制CoCl_2导致的细胞自噬和凋亡,从而保护视网膜神经节细胞。     

鸡内金对冠状动脉内皮细胞损伤的影响及可能机制研究

目的 探究鸡内金对冠状动脉内皮细胞(HCAEC)的影响及可能机制。方法 将HCAEC细胞分为对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组和ox-LDL+鸡内金组。CCK-8方法检测各组细胞的活力;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot方法检测各组细胞自噬相关蛋白LC3II和p62的表达以及PI3K、Akt、mTOR的表达。结果 ox-LDL可显著抑制HCAEC的细胞活力,抑制LC3II和PI3K/Akt/mTOR的表达水平,促进凋亡和p62蛋白的表达;而鸡内金预培养则可显著缓解由ox-LDL引起的细胞活力降低和凋亡率的升高,促进自噬,激活PI3K/Akt/mTOR通路。结论 鸡内金可通过调控自噬和上调PI3K/AKT/mTOR通路减轻ox-LDL引起的冠状动脉内皮细胞损伤。     

AMPK/mTOR信号通路介导的自噬在血根碱抑制鼻咽癌细胞增殖中的作用研究北大核心CSCD

目的:研究血根碱(SAN)对人鼻咽癌5-8F细胞自噬和增殖的影响,并探讨5-8F细胞自噬与增殖的关系及作用机制。方法:MTT和实时无标记细胞分析技术(RTCA)检测细胞增殖;单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察自噬情况;Western blot检测蛋白表达。结果:与Control组相比,SAN可显著抑制鼻咽癌细胞增殖,降低PCNA表达,诱导自噬小体形成,降低P62表达,提高Beclin-1表达、LC3Ⅱ/Ⅰ;而抑制自噬后(3-MA预处理),SAN诱导自噬和抑制细胞增殖作用显著减弱,同时,SAN对Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、PCNA的影响改变;SAN可激活AMPK/mTOR信号通路关键蛋白AMPK、p-AMPK并抑制mTOR表达;而抑制AMPK/mTOR信号通路后(抑制剂Compound C预处理),SAN诱导自噬和抑制细胞增殖作用显著减弱。结论:SAN能够抑制人鼻咽癌5-8F细胞增殖并诱导自噬,可能通过诱导细胞自噬抑制细胞增殖,其机制可能与激活AMPK/mTOR信号通路有关。     

Perifosine通过抑制PI3K/Akt途径调节人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡与自噬

 目的: 探讨Akt激酶抑制剂perifosine对人胶质瘤U251细胞凋亡、细胞周期和自噬的影响,确定perifosine诱导的细胞自噬与其促进胶质瘤细胞凋亡的相关性。方法: Perifosine处理U251细胞后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析perifosine对U251细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双标法检测perifosine对胶质瘤细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测细胞内P21、P27和cyclin B1等细胞周期调控相关蛋白以及caspase-9、PARP等细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过观察细胞内自噬标志分子LC3-Ⅱ的分布与表达来确定perifosine对自噬的诱导作用。结果: Perifosine剂量依赖性地抑制U251细胞活力,能够通过抑制cyclin B1的表达而阻滞胶质瘤细胞周期于G₂期。Perifosine促进了U251细胞内caspase-9和PARP的剪切,抑制survivin表达,从而诱导胶质瘤细胞发生凋亡。同时,perifosine与自噬抑制剂氯喹联用后,U251细胞凋亡数量明显增加。结论: Perifosine能够抑制U251细胞的增殖,同时诱导细胞发生凋亡与自噬,抑制自噬促进了perifosine诱导的胶质瘤细胞凋亡。     

迷迭香酸通过调控PI3K 通路诱导急性T 细胞白血病Jurkat细胞自噬和细胞凋亡

目的:探究迷迭香酸(RA)对急性T 细胞白血病Jurkat 细胞存活的作用及机制。方法:将细胞随机分为Jurkat 组、RA (5 μmol/ L) 组、RA (10 μmol/ L) 组和RA (20 μmol/ L) 组,分别用0、5、10 和20 μmol/ L 的RA 处理细胞,CCK8 检测培养不同时间的细胞增殖倍数,克隆形成实验检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫印迹检测Beclin1、P62、LC3、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt 和mTOR 的表达,免疫荧光检测LC3 的表达。结果:RA 处理细胞4 d 后,RA (5、10、20 μmol/ L) 组细胞增殖倍数与Jurkat 组比较明显降低,存活细胞数明显减少,细胞凋亡率明显升高;同时与Jurkat 组比较,RA (5、10、20 μmol/ L) 组细胞Beclin1 表达水平和LC3Ⅰ/ LCⅡ的比值明显降低,P62 表达水平明显升高,LC3 阳性表达与Jurkat 组比较也明显减少;此外,RA (5、10、20 μmol/ L) 还能显著降低p-PI3K/ PI3K、p-Akt/ Akt 的比值和mTOR 的表达水平。结论:RA 可诱导急性T 淋巴白血病Jurkat 细胞自噬和细胞凋亡,作用机制可能与抑制PI3K/ Akt 通路激活有关。     

双氢青蒿素通过调控细胞自噬性死亡增强宫颈癌细胞的化疗敏感性

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性的影响及作用机制。方法:用5、10、20μmol/L的DHA处理细胞,CCK8检测细胞存活率;顺铂联合不同浓度DHA处理细胞并检测细胞活性;将细胞分为Control、DHA(20μmol/L)、Cisplatin(10μg/ml)和DHA+Cisplatin组,分别用溶媒、DHA(20μmol/L)、顺铂(10 mg/L)和DHA联合顺铂处理细胞24 h,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫荧光检测LC3表达,免疫印迹检测Ki67、Cleaved Caspase-3、Beclin1、LC3、P62、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、p-mTOR、p-Ulk1和Ulk1的表达。结果:DHA处理细胞4 d后,细胞增殖倍数明显降低;DHA (10,20μmol/L)联合顺铂处理细胞后,细胞活性显著降低,并具有量效关系;与Control组比较,DHA(20μmol/L)组Ki67表达水平明显降低,细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平明显升高;与Cisplatin组比较,DHA+Cisplatin组Ki67表达水平明显降低,凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平显著降低;同时,DHA(20μmol/L)组自噬相关蛋白Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率均显著低于Control组,P62的表达水平明显升高; DHA+Cisplatin组细胞Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率与Cisplatin组比较均显著降低,P62的表达水平升高;此外,DHA还能明显升高降低He La细胞p-mTOR/m TOR和p-Ulk1/Ulk1的比值。DHA能显著减弱顺铂下调p-mTOR/m TOR和p-Ulk1/Ulk1的作用。结论:DHA能通过激活m TOR/Ulk1信号通路抑制自噬增强宫颈癌He La细胞的化疗敏感性。     

NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响

目的:探讨NOD8(也称NLRP10或PYNOD)是否能抑制胰腺癌细胞发生自噬及其可能机制,并研究凋亡对NOD8调控自噬的影响。方法:用JetPRIME阳离子聚合物将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-NOD8分别转染入胰腺癌Panc-1细胞,并设立空白对照组,48 h后应用Western blot检测NOD8蛋白、自噬相关蛋白(beclin-1和LC3-Ⅱ)以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白(Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR)的表达;并采用免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点的数量。此外,用caspase抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达NOD8的Panc-1细胞后,Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点数量。结果:pEGFP-NOD8组细胞NOD8蛋白表达明显高于对照组和pEGFP-C2组(P0.01)。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-NOD8组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及细胞LC3斑点数量显著降低;并且pEGFP-NOD8组细胞p-Akt及p-mTOR蛋白表达量显著上升(P0.01),而AKT和mTOR蛋白表达无明显差异。与pEGFP-NOD8组相比,pEGFP-NOD8+Z-VAD-FMK组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平及LC3斑点数量显著高于pEGFP-NOD8组。结论:NOD8可抑制Panc-1细胞自噬,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路有关;凋亡可增强NOD8对自噬的抑制作用。     

自噬在红景天甙诱导胃癌细胞凋亡中的作用及机制

目的:探讨自噬在红景天甙诱导人胃癌细胞凋亡中的作用及机制。方法:红景天甙处理人胃癌AGS细胞,Hoechst33342染色观察凋亡形态学变化,流式细胞术检测凋亡细胞数;透射电镜观察自噬体形成,mRFP-GFP-LC3转染观察荧光自噬斑点;Western blot观察凋亡蛋白、自噬蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达;自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理AGS细胞,流式细胞术检测凋亡细胞数,Western blot观察凋亡相关蛋白变化,Hoechst33342染色观察凋亡形态学变化;PI3K/AKT激动剂胰岛素样生长因子(IGF-1)预处理AGS细胞,mRFP-GFP-LC3转染和Western blot分别观察自噬变化。结果:红景天甙诱导人胃癌AGS细胞自噬体形成,荧光自噬斑点增多,抑制PI3K/AKT/mTOR通路蛋白活化;CQ预处理胃癌细胞后,细胞凋亡数量显著增加,细胞核固缩现象增强,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase9表达上调;IGF-1预处理胃癌细胞明显减弱红景天甙诱导的自噬现象。结论:中药红景天甙可诱导人胃癌AGS细胞自噬,与抑制PI3K/AKT/mTOR通路相关,抑制自噬可促进红景天甙诱导的细胞凋亡。     

黄芩素诱导乳腺癌细胞自噬

目的:考察黄芩素诱导乳腺癌细胞的自噬作用,并初步探讨其机制。方法:采用MTT实验考察黄芩素对乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞活力的影响,确定给药剂量。Western blot检测黄芩素(25、50和100μmol/L)及联合自噬抑制剂3-MA作用下,MCF-7细胞和4T1细胞中自噬特征蛋白LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的表达水平,流式细胞术Annexin V/PI双染法观察3-MA对黄芩素诱导MCF-7细胞和4T1细胞凋亡的影响,确认黄芩素诱导自噬的作用。通过Western blot考察自噬信号通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT和AKT的蛋白水平,结合AKT-mTOR激活剂EGF明确AKT-mTOR通路在黄芩素诱导乳腺癌自噬中的作用。结果:50μmol/L及其以上剂量的黄芩素可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞的活力,其作用具有显著的时效和量效性。Western blot结果表明,50和100μmol/L黄芩素作用下MCF-7细胞和4T1细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例显著增强,3-MA加入后又明显降低。流式细胞术结果显示,相比黄芩素单用组,联合自噬抑制剂可促进MCF-7细胞的坏死和凋亡。通路蛋白研究表明mTOR和AKT总量不变,其活化蛋白水平在黄芩素作用下显著降低,而加入EGF后又再次增加。结论:黄芩素可通过抑制AKT-mTOR通路诱导乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞自噬。     

人参皂苷Rg1通过自噬抑制Raw 264.7巨噬细胞凋亡

目的探讨人参皂苷Rg1在血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡中的作用及其机制。方法体外培养小鼠Raw 264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+不同时间(24、36和48h)血清剥夺处理组;依据最佳血清剥夺时间进一步分为空白对照组、血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)+3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5mmol/L,1h)处理组。采用Western blotting检测LC3、Atg 5、Beclin 1、cleaved Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白水平的表达变化;采用免疫荧光双标记检测细胞内LC3蛋白水平表达的变化;采用Hoechst 33342/PI荧光双染检测细胞凋亡的变化。结果不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺诱导Raw264.7巨噬细胞凋亡;与血清剥夺处理组相比,人参皂苷Rg1处理组LC3、Atg 5及Beclin 1蛋白表达水平显著上调;加入3-MA抑制剂后,凋亡细胞较人参皂苷Rg1处理组明显增多,且Bcl-2蛋白表达水平明显下调的同时,cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达水平则显著上调。结论人参皂苷Rg1通过促进血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬,发挥抗凋亡的保护作用。     

松香酸通过诱导自噬减轻AGEs诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激反应

目的:本文旨在探索松香酸(abietic acid,AA)对晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激的影响及其相关机制。方法:H9c2细胞分为5组:对照组加入生理盐水处理24 h;AGEs处理组加入AGEs(100 mg/L)处理24 h;AGEs+AA(10、25和50μmol/L)组同时加入AGEs(100 mg/L)和AA(10、25和50μmol/L)处理24 h。MTT法检测H9c2细胞活力。Western blot分析肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、cleaved caspase-12、GADD34、Bi P、LC3、P62和beclin 1的蛋白水平。ELISA检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性。流式细胞术分析细胞凋亡。结果:低浓度(低于50μmol/L)的松香酸对H9c2细胞活力无明显影响,高浓度(高于50μmol/L)的松香酸会降低H9c2细胞活力。AGEs组Mb、CK-MB和c Tn I蛋白表达及LDH的水平明显高于对照组(P0.05);与AGEs组相比,AGEs+AA(10、25和50μmol/L)组Mb、CK-MB和c Tn I的蛋白表达及LDH的表达水平明显降低(P0.05)。松香酸(10、25和50μmol/L)可抑制AGEs诱导的心肌细胞凋亡、CHOP和cleaved caspase-12蛋白水平的升高及GADD34和Bi P表达的降低(P0.05)。而且,松香酸(10、25和50μmol/L)可抑制AGEs诱导的心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和beclin 1表达的降低及P62表达的升高(P0.05)。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤可逆转松香酸对心肌细胞LC3、Mb、cleaved caspase-12和Bi P蛋白水平的影响(P0.05)。结论:松香酸通过诱导自噬减轻AGEs诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激反应。     

丹酚酸B抑制氧化应激引起骨髓间质干细胞凋亡的研究

目的: 观察丹酚酸B (Sal B)对氧化应激介导骨髓间质干细胞(BMSCs)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法: 大鼠BMSCs培养鉴定后分为5组:空白对照组、氧化应激组、低浓度Sal B＋H₂O₂组、中浓度Sal B＋H₂O₂组和高浓度Sal B＋H₂O₂组。应用MTT、流式细胞仪(FCM)及Hoechst标记的方法检测Sal B对氧化应激介导的细胞活性下降以及凋亡效应的影响;通过DCF荧光染色的方法检测过氧化氢及Sal B对细胞内活性氧生成的影响;用Western blotting的方法检测p-ERK1/2表达情况。结果: MTT结果显示不同浓度的Sal B共处理BMSCs 24 h能够提高氧化应激情况下的细胞活性,其中中浓度组的作用更为明显。Hoechst标记以及FCM检测的结果表明:10 μmol/L Sal B处理能够提高细胞活性,减少凋亡数。正常组细胞的DCF阳性细胞率为28.7％±8.1％,经500 μmol/L H₂O₂刺激24 h后,阳性细胞数急剧上升,高达86.9％±12.4％。而10 μmol/L Sal B处理 组的上升不明显,仅有42.1％±10.8％。由此可见,Sal B处理可以减少细胞内活性氧的生成;细胞在氧化应激的条件下p-ERK1/2在15 min内开始上调,持续120 min。而这种上调经10 μmol/L Sal B处理可以有效降低,同时Sal B可以降低细胞基础的p-ERK1/2表达。结论: Sal B 增强BMSCs抗氧化应激能力从而减少H₂O₂刺激引起的细胞凋亡,其保护机制可能与参与调节凋亡相关信号通路MEK/ERK1/2和抑制细胞内活性氧生成有关。     

白花丹醌对人结肠腺癌Caco-2细胞凋亡、自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨白花丹醌是否诱导人结肠腺癌Caco-2细胞凋亡和自噬及其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响.方法:体外培养Caco-2细胞,分别加入2.5、5、7.5、10、12.5和15μmol/L的白花丹醌作用12、24和36 h后,采用MTT...     

低氧诱导神经干细胞凋亡和miR-26a低表达

目的:初步探讨氯化钴(cobalt chloride,Co Cl2)是否诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)凋亡及其机制,探讨NSCs凋亡是否引起microRNA-26a(miR-26a)表达变化。方法:用不同剂量的Co Cl2处理NSCs,CCK-8检测细胞活力;TUNEL检测细胞凋亡;建立Co Cl2诱导NSCs凋亡的模型,将NSCs分为对照组和凋亡组,real-time PCR检测miR-26a-3p、miR-26a-5p、GSK-3β、Bcl-2、Bax和caspase-3的表达;Western blotting检测Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CCK-8结果显示不同浓度(200、400和600μmol/L)Co Cl2作用24 h,NSCs活力呈剂量依赖性下降(P0.05)。TUNEL检测显示Co Cl2(200、400和600μmol/L)作用24 h后NSCs凋亡率呈剂量依赖性增加(P0.05)。Real-time PCR和Western blotting结果表明凋亡组miR-26a、GSK-3β、Bax和caspase-3表达增加,Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白水平下降(P0.05)。结论:Co Cl2(400μmol/L)作用24 h可建立NSCs凋亡模型,其机制可能与线粒体凋亡通路有关;NSCs凋亡时miR-26a表达减少。     

塞来昔布减低HL-60和HL-60A细胞活力、诱导凋亡及抑制自噬

目的:探讨塞来昔布对急性髓细胞白血病(AML)HL-60细胞和HL-60A细胞的活力、凋亡及自噬的影响。方法:用不同浓度的(0、20、40、60、80和100μmol/L)塞来昔布作用于HL-60细胞和HL-60A细胞,24h、48h和72h后用MTT法检测细胞活力。用流式细胞术检测塞来昔布作用HL-60细胞和HL-60A细胞24 h后的凋亡率。用Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved PARP,自噬相关蛋白LC3、P62,以及mTOR信号途径相关蛋白。结果:塞来昔布作用于HL-60细胞24h、48h和72h的IC_(50)分别为49.4μmol/L、32.0μmol/L和25.1μmol/L,对于HL-60A细胞,相应的IC_(50)分别是69.1μmol/L、42.5μmol/L和29.6μmol/L。塞来昔布作用24h后,流式细胞术检测显示HL-60细胞中Annexin-V~+PI~-、Annexin-V~+PI~+及Annexin-V~-PI~+细胞的比例增多;HL-60A细胞中Annexin-V~+PI~-及Annexin-V~+PI~+细胞的比例增多。Western blot实验结果显示塞来昔布作用后,cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平增高,提示该凋亡作用是通过caspase途径的。自噬相关蛋白LC3Ⅱ及P62的表达均增加,mTOR、p-mTOR以及下游的4-EBP、p-4-EBP的蛋白水平没有变化,说明塞来昔布能够抑制AML细胞自噬,该作用与mTOR途径无关。结论:塞来昔布对HL-60细胞和HL-60A细胞活力的抑制作用呈浓度以及时间依赖性,该作用与塞来昔布诱导细胞凋亡及坏死有关。塞来昔布能够通过非mTOR依赖途径抑制AML细胞自噬,有望联合应用于AML的治疗,有助于增强某些引起保护性自噬的化疗药物的细胞毒作用。     

二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞促凋亡作用

目的 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100 μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved Caspase-3）在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100 μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞; 流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100 μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase 3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

紫草素通过PI3K/Akt通路抑制氧糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡

目的:探讨紫草素对氧糖剥夺(OGD)损伤模型中大鼠原代皮层神经元的作用及机制。方法:用不同浓度(0. 02、0. 2、2和20μmol/L)紫草素对大鼠原代皮层神经元经进行预处理,再经OGD损伤处理,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法和荧光素二乙酸酯/碘化丙啶(FDA/PI)双染法分别检测神经元活性和凋亡情况,选择最适紫草素浓度。然后,在加入紫草素之前提前加入LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂,1μmol/L),用Wesern blot法检测神经元p-Akt(Ser473)水平变化,用LDH法和FDA/PI双染法检测神经元活性和凋亡率变化。结果:0. 2、2及20μmol/L的紫草素可显著提高神经元存活率(P 0. 05),同时还可使神经元内p-Akt(Ser473)水平显著升高(P 0. 05); LY294002可显著阻断紫草素对神经元p-Akt(Ser473)水平和凋亡率的影响(P 0. 05)。结论:紫草素可通过激活PI3K/Akt通路来减少OGD诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡。