电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法将30只4月龄雌性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组。百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,干预28 d,野生组和模型组不干预。采用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力;免疫组化技术观察小鼠大脑皮质β-淀粉样蛋白的沉积;Western blotting和RT-PCR法检测小鼠皮质脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和基因的表达情况。结果与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),跨越平台次数明显增加(P0.01);β-淀粉样蛋白的沉积减少(P0.05);BDNF蛋白和基因的表达明显增多(P0.01)。非穴组与模型组相比无显著性差异(P0.05)。结论电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与增加大脑皮质BDNF蛋白和基因的表达,降低β-淀粉样蛋白的沉积有关。     

中枢学习记忆功能与环磷酸腺苷反应单元结合蛋白的关系

环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cAMP response element binding protein，CREB)是一种重要的核蛋白，属于结构相关转录因子CREB家族成员之一，其调节启动子中具有环磷酸腺苷反应单元(cAMP response element，CRE)的基因转录。这种核转录因子具有调节包括学习记忆在内的广泛的生物学功能，是细胞内多种信号通路的一种关键成分。包括cAMP通路、Ca^2 -CaMK通路、Ras／ERK通路、P13激酶／Akt通路、应激状态诱导的P38MAPK通路以及磷酸酶反向调节通路等在内的多种信号转导通路涉及CREB的磷酸化及其活化作用。目前，来自海兔、果蝇、小鼠以及大鼠的药理学和遗传学研究已表明，细胞内构成长期而非短期记忆的变化需要依赖CREB的转录，CREB是长期记忆形成过程所必需的一种普遍存在的调节分子。由于已知人类CBP的突变可导致以精神迟缓为特征的Rubinstein-Taybi综合征，故CREB在记忆方面的重要性也有可能适合于人类，对CREB在记忆作用方面的研究不但可促进对记忆的了解，且有助于对与人类记忆障碍有关的认知疾病的认识。     

脑源性神经营养因子对改善东莨菪碱致学习记忆障碍的实验研究

目的：探讨脑源性神经营养因子对中枢神经系统高级机能活动的作用机理,为临床应用脑源性神经营养因子治疗学习记忆障碍疾病提供实验依据。方法：以小鼠为实验对象,采用学习记忆行为训练和生化测定的方法,观察脑源性神经营养因子对东莨菪碱致学习记忆障碍、海马脑区蛋白质含量的影响。结果：脑源性神经营养因子能显著地改善东莨菪碱所致的学习记忆障碍,使东莨菪碱实验小鼠海马脑区的蛋白质含量显著增加。结论：脑源性神经营养因子对东莨菪碱所致的小鼠学习记忆障碍的改善与康复均具有明显作用。     

中枢学习记忆功能与环磷酸腺苷反应单元结合蛋白的关系

环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)是一种重要的核蛋白,属于结构相关转录因子CREB家族成员之一,其调节启动子中具有环磷酸腺苷反应单元(cAMPresponseelement,CRE)的基因转录。这种核转录因子具有调节包括学习记忆在内的广泛的生物学功能,是细胞内多种信号通路的一种关键成分。包括cAMP通路、Ca2+-CaMK通路、Ras/ERK通路、PI3激酶/Akt通路、应激状态诱导的P38MAPK通路以及磷酸酶反向调节通路等在内的多种信号转导通路涉及CREB的磷酸化及其活化作用。目前,来自海兔、果蝇、小鼠以及大鼠的药理学和遗传学研究已表明,细胞内构成长期而非短期记忆的变化需要依赖CREB的转录,CREB是长期记忆形成过程所必需的一种普遍存在的调节分子。由于已知人类CBP的突变可导致以精神迟缓为特征的Rubinstein-Taybi综合征,故CREB在记忆方面的重要性也有可能适合于人类,对CREB在记忆作用方面的研究不但可促进对记忆的了解,且有助于对与人类记忆障碍有关的认知疾病的认识。     

基于αCaMKⅡ-CREB-BDNF信号通路研究调心方对APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆和突触可塑性的影响

目的:观察调心方对APP/PS1双转基因AD小鼠海马CA1区长时程增强(LTP)、海马区α钙/钙调素依赖激酶Ⅱ(αCaMKⅡ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、突触后致密物95(PSD-95)mRNA和蛋白表达的影响,从αCaMKⅡ-CREB-BDNF信号通路的角度探讨调心方改善APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆和突触可塑性的作用机制。方法:选择54只3月龄APP/PS1雄性小鼠,采用随机数字表法分为模型组、调心方组、多奈哌齐组,每组18只,另设同月龄同品系18只C57/BL6雄性野生型小鼠为正常组。参照药理试验中动物与人体间的等效剂量换算标准进行折算,多奈哌齐组和调心方组均按照人的等效剂量(体质量:60 kg)折算出药物剂量。正常组和模型组给予等量的生理盐水,剂量10 mL/(kg·d);多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐灌胃,剂量为0.05 mg/(kg·d),调心方组给予调心方颗粒灌胃,剂量为0.057 g/(kg·d);4组小鼠于3月龄时进行灌胃给药处理,1次/d,连续灌胃3个月。采用电生理技术在离体海马脑片上诱导4组小鼠海马CA1区LTP;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测4组小鼠海马αCaMKⅡ、CREB、BDNF、PSD-95 mRNA表达情况;采用免疫印迹(WB)法检测4组小鼠海马p-αCaMKⅡ、p-CREB、BDNF、PSD-95蛋白表达情况。结果:①电生理结果:在0.1～0.7 mA刺激强度下,4组小鼠海马I/O曲线斜率无明显差异,差异无统计学意义(P0.05)。在20～250 ms刺激间隔下,4组小鼠的PPF易化无明显差异,差异无统计学意义(P0.05)。在第50～60 min稳定期内,与模型组比较,调心方组小鼠诱导的LTP中fEPSP斜率明显提高(P0.05)。②RT-qPCR结果:与正常组比较,模型组小鼠海马αCaMKⅡ、CREB、BDNF和PSD-95 mRNA表达均明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,调心方组小鼠海马αCaMKⅡ、CREB、BDNF和PSD-95 mRNA表达均明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。③Western blot法检测结果:与正常组比较,模型组小鼠海马p-αCaMKⅡ、p-CREB、BDNF和PSD-95蛋白表达均明显减少,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,调心方组小鼠海马的p-αCaMKⅡ、p-CREB、BDNF和PSD-95的蛋白表达均明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:调心方能够改善APP/PS1双转基因AD小鼠海马CA1区LTP、提高PSD-95 mRNA和蛋白的表达,从而改善APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆功能和突触可塑性,其作用机制可能与其上调海马αCaMKⅡ-CREB-BDNF信号通路水平有关。     

神经干细胞和脑源性神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的:观察神经干细胞和脑源性神经营养因子联合应用对老年痴呆大鼠学习记忆能力及其基底前脑小白蛋白神经元的作用。方法:实验于2003-12/2005-10在广州医学院解剖教研室神经生物学实验室完成。取健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组、损伤组、移植组和联合组,每组10只。①利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马神经干细胞。②除正常组外,其他3组切断SD大鼠左侧穹隆海马伞建立老年痴呆大鼠模型;移植组和联合组,基底前脑注射神经干细胞;联合组同时侧脑室注射脑源性神经营养因子。③4周后行Y迷宫测试大鼠学习、记忆能力(学习次数分值高表示差,记忆能力分值低表示差),免疫组织化学结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元数目受影响的情况。结果:①损伤组大鼠比正常对照组大鼠学习、记忆能力明显下降(98.2±5.6比59.8±4.1,3.5±0.5比8.4±0.4,P<0.01)。②移植组学习、记忆能力均有改善(74.1±5.4,6.7±0.5,P<0.05),但与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05)。③联合组学习记忆能力(56.7±0.9,8.3±0.3)与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。④大鼠的学习记忆能力与基底前脑小白蛋白阳性细胞数呈正相关。结论:神经干细胞和脑源性神经营养因子联用较单独使用神经干细胞或脑源性神经营养因子更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

神经干细胞和脑源性神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的：观察神经干细胞和脑源性神经营养因子联合应用对老年痴呆大鼠学习记忆能力及其基底前脑小白蛋白神经元的作用。方法：实验于2003-12／2005-10在广州医学院解剖教研室神经生物学实验室完成。取健康雄性SD大鼠40只，随机分为4组：正常对照组、损伤组、移植组和联合组，每组10只。①利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马神经干细胞。②除正常组外，其他3组切断SD大鼠左侧穹隆海马伞建立老年痴呆大鼠模型；移植组和联合组，基底前脑注射神经干细胞；联合组同时侧脑室注射脑源性神经营养因子。（3）4周后行Y迷宫测试大鼠学习、记忆能力（学习次数分值高表示差，记忆能力分值低表示差），免疫组织化学结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元数目受影响的情况。结果：①损伤组大鼠比正常对照组大鼠学习、记忆能力明显下降（98．2&;#177;5．6比59．8&;#177;4．1，3．5&;#177;0．5比8．4&;#177;0．4，P〈0．01）。②移植组学习、记忆能力均有改善（74．1&;#177;5．4，6．7&;#177;0.5，P〈0．05），但与正常组比较差异有显著性意义伊〈0．05）。③联合组学习记忆能力（56．7&;#177;0．9，8．3&;#177;0．3）与正常组比较无显著性差异（P〉0．05）。④大鼠的学习记忆能力与基底前脑小白蛋白阳性细胞数呈正相关。结论：神经干细胞和脑源性神经营养因子联用较单独使用神经干细胞或脑源性神经营养因子更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

学习记忆过程中磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在大鼠脑纹状体内的表达

背景：脑纹状体边缘区是在大鼠脑纹状体发现的一个新亚区，已证明边缘区与脑的学习记忆功能密切相关。而且，即刻早期基因c-fos，c-jun涉及边缘区内学习记忆的信号转导过程。但边缘区在参与学习记忆过程中还启动了其他哪些中间环节？环磷酸腺苷反应单元结合蛋白是长期记忆形成过程所必需的一种关键分子。检测磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在纹状体是否有表达及其分布情况，有助于从分子水平探索学习记忆过程中纹状体的信号转导机制问题。目的：探讨大鼠在学习记忆过程中磷酸化环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在脑纹状体内的表达情况。设计：完全随机对照。单位：第一军医大学珠江医院神经科学研究所。材料：实验于2003-04/08在第一军医大学珠江医院神经科学研究所完成。选择第一军医大学实验动物中心提供的健康雄性成年SD大鼠48只，经两次Y型迷宫（MG-2型，三兴声电公司）实验筛选后获得合格动物40只。方法：40只合格动物随机分成4组：训练组10只大鼠在Y迷宫中接受厌暗逃避反射训练；假训练灯光刺激组10只大鼠进入Y迷宫后仅接受灯光刺激，迷宫底部电网无电流通过；假训练电网刺激组10只大鼠进入Y迷宫后，则在无灯光刺激的情况下仅接受迷宫底部的电网刺激；对照组10只大鼠被单纯置于无光无电的Y迷宫环境中。动物在Y迷宫中进行学习记忆训练后，应用免疫组织化学方法检测磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在脑纹状体内的表达。主要观察指标：磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在脑纹状体内的表达。结果：40只实验大鼠均进入结果分析。①训练组大鼠经电Y迷宫训练后，脑纹状体内侧的边缘区内即有明显的磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白阳性表达，而假训练组或对照组的边缘区内均无明显的磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白阳性表达。②在海马、前额叶皮质和扣带回等处也有较多的磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白阳性表达。结论：大鼠进行电Y迷宫厌暗学习时，脑纹状体边缘区内的转录因子磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白参与学习记忆的信号转导过程。     

学习记忆过程中磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在大鼠脑纹状体内的表达

背景脑纹状体边缘区是在大鼠脑纹状体发现的一个新亚区,已证明边缘区与脑的学习记忆功能密切相关.而且,即刻早期基因c-fos,c-jun涉及边缘区内学习记忆的信号转导过程.但边缘区在参与学习记忆过程中还启动了其他哪些中间环节?环磷酸腺苷反应单元结合蛋白是长期记忆形成过程所必需的一种关键分子.检测磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在纹状体是否有表达及其分布情况,有助于从分子水平探索学习记忆过程中纹状体的信号转导机制问题.目的探讨大鼠在学习记忆过程中磷酸化环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在脑纹状体内的表达情况.设计完全随机对照.单位第一军医大学珠江医院神经科学研究所.材料实验于2003-04/08在第一军医大学珠江医院神经科学研究所完成.选择第一军医大学实验动物中心提供的健康雄性成年SD大鼠48只,经两次Y型迷宫(MG-2型,三兴声电公司)实验筛选后获得合格动物40只.方法40只合格动物随机分成4组训练组10只大鼠在Y迷宫中接受厌暗逃避反射训练;假训练灯光刺激组10只大鼠进入Y迷宫后仅接受灯光刺激,迷宫底部电网无电流通过;假训练电网刺激组10只大鼠进入Y迷宫后,则在无灯光刺激的情况下仅接受迷宫底部的电网刺激;对照组10只大鼠被单纯置于无光无电的Y迷宫环境中.动物在Y迷宫中进行学习记忆训练后,应用免疫组织化学方法检测磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在脑纹状体内的表达.主要观察指标磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白在脑纹状体内的表达.结果40只实验大鼠均进入结果分析.①训练组大鼠经电Y迷宫训练后,脑纹状体内侧的边缘区内即有明显的磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白阳性表达,而假训练组或对照组的边缘区内均无明显的磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白阳性表达.②在海马、前额叶皮质和扣带回等处也有较多的磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白阳性表达.结论大鼠进行电Y迷宫厌暗学习时,脑纹状体边缘区内的转录因子磷酸化的环磷酸腺苷反应单元结合蛋白参与学习记忆的信号转导过程.     

脑源性神经营养因子通过AKT和ERK1/2信号通路诱导内皮细胞血管生成

本研究探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western blot方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验和管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,MTT法检测内皮细胞增殖活性,FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞调亡。结果表明：BDNF以时间依赖性的方式激活PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路。应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100ng/ml的BDNF体外促内皮细胞血管新生能力与25ng/ml血管内皮生长因子（VEGF）相当,其中BDNF诱导的细胞迁移分别被Ly294002和PD98059阻断,其抑制率分别约为74%和36%;同样,Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱导的小管形成效应,其阻断率分别约57%和37%;而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗,抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。结论：BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的：探讨Neurturin和神经生长因子(nerve growth factor，NGF)联合应用对老年痴呆鼠学习记忆能力的影响以及与基底前脑小白蛋白(parvalbumin，PV)神经元的关系。方法：切断老年SD大鼠左侧穹窿海马伞(fimbria-fornix，FF)，侧脑室注射Neurturin和NGF，用Y迷宫测试大鼠的学习记忆能力。用免疫组化结合图像分析技术观察Neurturin，NGF对大鼠基底前脑PV阳性神经元数目的影响。结果：损伤组大鼠空间学习记忆能力明显下降(P&;lt;0．01)；NGF组学习记忆能力均有改善(P&;lt;0．05)，但与正常组比较差异有显著性意义(P&;lt;0.05)；联合组的学习记忆能力与正常组差异显著无显著性意义(P&;gt;0.05)。大鼠的学习记忆能力与基底前脑PV阳性细胞数呈正相关。结论：Neurturin和NGF的联合应用较单独使用NGF更好改善老年FF损伤鼠学习记忆能力。     

神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的:探讨Neurturin和神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)联合应用对老年痴呆鼠学习记忆能力的影响以及与基底前脑小白蛋白(parvalbumin,PV)神经元的关系。方法:切断老年SD大鼠左侧穹窿海马伞(fimbria-fornix,FF),侧脑室注射Neurturin和NGF,用Y迷宫测试大鼠的学习记忆能力。用免疫组化结合图像分析技术观察Neurturin,NGF对大鼠基底前脑PV阳性神经元数目的影响。结果:损伤组大鼠空间学习记忆能力明显下降(P<0.01);NGF组学习记忆能力均有改善(P<0.05),但与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05);联合组的学习记忆能力与正常组差异显著无显著性意义(P>0.05)。大鼠的学习记忆能力与基底前脑PV阳性细胞数呈正相关。结论:Neurturin和NGF的联合应用较单独使用NGF更好改善老年FF损伤鼠学习记忆能力。     

电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白及其磷酸化水平的影响

目的探讨电针神庭、百会治疗脑卒中后认知功能障碍的机制。方法 45只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组15只。后两组线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型。电针组于造模后24 h开始电针神庭和百会,共7 d。每天电针后行Morris水迷宫测试。治疗后,取大鼠脑组织TTC染色测量脑梗死体积,免疫组化检测海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平(p-CREB)的表达。结果从第4天开始,与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期及游泳路程缩短(P0.05);穿越平台次数增多(P0.05)。电针组大鼠脑梗死体积小于模型组(P0.05);海马CA1区CREB、p-CREB表达量较模型组增加(P0.05)。结论电针神庭、百会后,脑缺血再灌注大鼠海马CA1区CREB、p-CREB表达量增加,从而保护神经元,改善学习记忆功能。     

孤独症鼠模型海马区脑源性神经营养因子-酪氨酸激酶受体B通路的动态变化研究

摘要 目的：探究孤独症模型鼠海马区脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）-酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor B,TrkB）通路在不同时间点的动态表达情况,为孤独症发病机制和临床治疗的研究提供思路。 方法：随机选取孕12.5天Wistar雌鼠24只,实验组12只腹腔注射丙戊酸钠,对照组12只腹腔注射生理盐水。分别对两组雌鼠生产的仔鼠进行行为学检测。于仔鼠P7、P21、P28、P35、P42时,从实验组和对照组中随机各取8只,采用Western Blot对两组仔鼠海马区BDNF和TrkB蛋白表达进行检测,采用Rt-PCR对两组仔鼠海马区BDNF和TrkB的mRNA表达进行检测。 结果：与对照组仔鼠相比,实验组仔鼠存在以下异常：①行为学方面：社会交流能力下降,重复性刻板行为增加,学习记忆能力下降,以上差异均有显著性意义（P＜0.05）。②Western Blot检测：在P7、P21、P28时,实验组仔鼠海马区BDNF和TrkB蛋白表达都高于对照组（P<0.05）,而在P35、P42时,实验组仔鼠海马区BDNF和TrkB蛋白表达低于对照组（P<0.05）。③Rt-PCR检测：在P7、P21、P28时,实验组仔鼠海马区BDNF和TrkB的mRNA表达都高于对照组（P<0.05）,而在P35、P42时,实验组仔鼠海马区BDNF和TrkB的mRNA表达低于对照组（P<0.05）。 结论：孤独症模型鼠海马区BDNF-TrkB通路早期过度表达,后期表达下降,且此改变在转录水平就已发生。     

电针百会穴对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠18F-FDGPET/CT成像及学习记忆的影响

目的:观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠葡萄糖代谢水平以及学习记忆的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法:将30只雌性12月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组。百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,每次30min,每天1次,每周5天,共治疗4周,野生组和模型组不干预。采用正电子发射断层扫描技术(PET)观察各组小鼠大脑18F-FDG摄取率的水平;Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆。结果:与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),跨越平台次数增加(P0.01);非穴组小鼠逃避潜伏期与模型组相比无显著性差异(P0.05);百会组小鼠18F-FDG摄取率高于野生组、模型组以及非穴组。结论:电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能是通过改善小鼠脑内葡萄糖代谢从而发挥神经保护作用。     

电针对血管性痴呆大鼠海马脑源性神经营养因子mRNA表达及学习记忆的影响

目的:通过观察电针后血管性痴呆(VD)大鼠不同时相海马脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA表达的变化规律,探讨电针改善VD大鼠学习记忆的可能机制.方法:通过结扎大鼠双侧颈总动脉,制成VD模型,分为l周组,2周组,4周组和6周组,其中每一组又分为电针组和模型组,用RT-PCR法检测各组BDNF mRNA表达的变化规律,观察电针的影响,并通过Morris水迷宫来观察各组神经行为学的改变.结果:经统计分析发现同时相电针组与模型组相比,电针组海马BDNF mRNA随着时间的延长表达升高(P＜0.05),而且与模型组相比,电针组大鼠的学习记忆能力比模型组好(P＜ 0.01,P＜ 0.05).结论:电针能够促进海马BDNF mRNA的表达,可能是针灸治疗治疗VD,改善VD大鼠症状的可能机制之一.     

AKT/eNOS信号途径在脑源性神经营养因子诱导内皮细胞血管新生中的作用

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进内皮细胞血管新生的机制及其参与的信号通路，为抗多发性骨髓瘤血管生成的研究提供新的实验依据。方法以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为对象，采用Western blot印迹法检测细胞内磷酸化丝／苏氨酸激酶（AKT）、内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS）蛋白质的表达；采用Transwell小室迁移实验、小管形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力，小鼠体内Matrigel plug实验评估体内内皮细胞血管新生的能力，采用硝酸还原酶法检测HUVEC上清中内皮细胞源性一氧化氮（eNO）的含量，FITC-Annexin V／PI双染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果BDNF以时间一浓度依赖性的方式激活P13K／AKT／eNOS信号通路，应用PI3K激酶抑制剂Ly294002可以明显阻断BDNF刺激后内皮细胞eNO的生成。在体外，BDNF诱导的细胞迁移和小管形成效应均分别能被Ly294002和L-NAME（NOS抑制剂）阻断；而BDNF的抑制凋亡效应与L-NAME无关，仅受Ly294002影响；在体内，经L-NAME喂养的小鼠皮下Matrigel栓中的新生血管数量与未经L-NAME喂养的小鼠相比显著减少。结论BDNF通过AKT／eNOS途径活化介导血管薪生，这可能成为治疗多发性骨髓瘤血管新生的新靶点。     

APP/PS1小鼠不同时期灰质体积变化与Aβ沉积和学习记忆功能的相关性分析

目的:分析阿尔兹海默病(AD)双转基因APP/PS1模型小鼠大脑灰质体积变化与其学习记忆能力和相关脑区β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的相关性,以期为探明AD动物模型的病理特征提供可靠的行为学和影像学依据。方法:共纳入野生组(WT)和APP/PS1组2组小鼠,每组36只。WT组小鼠选用C57-BL/6小鼠,APP/PS1组选用APP/PS1双转基因小鼠,2组均分别由2、6、12不同月龄小鼠组成,每组每个月龄小鼠12只。通过Morris水迷宫测试(定位航行实验和空间探索实验)检测2组小鼠空间记忆学习能力和空间记忆提取能力;采用磁共振T2加权成像(MRI T2WI)扫描检测小鼠大脑双侧内嗅皮质和海马的灰质体积变化情况;分离和制备2组不同月龄小鼠大脑石蜡切片,采用Thioflavine-s(Th-s)荧光染色检测2组小鼠大脑双侧内嗅皮质和海马的Aβ沉积情况;采用Pearson相关分析法分析2组小鼠不同时期的灰质体积变化与其学习记忆能力和对应脑区Aβ沉积的相关性。结果:①Morris水迷宫测试结果:与WT组比较,APP/PS1组2月龄小鼠行为学结果无明显区别,差异无统计学意义(P0.05);APP/PS1组6、12月龄小鼠逃避潜伏期明显增加、穿越平台次数明显减少,差异具有统计学意义(P0.05)。②MRI T2WI扫描结果:与WT组比较,APP/PS1组2月龄小鼠灰质体积无明显变化,差异无统计学意义(P0.05);APP/PS1组6月龄小鼠内嗅皮质体积明显缩小,APP/PS1组12月龄小鼠内嗅皮质和海马体积均明显缩小,差异具有统计学意义(P0.05)。③Th-s荧光染色检测结果:WT组、APP/PS1组2月龄小鼠均未检测出Aβ沉积;与WT组比较,APP/PS1组小鼠6月龄内嗅皮质和海马可检测到少量Aβ沉积,而12月龄时内嗅皮质和海马则可检测出大量致密Aβ斑块,差异具有统计学意义(P0.05)。④相关性分析结果:APP/PS1组小鼠内嗅皮质和海马体积变化与逃避潜伏期呈明显负相关关系(r=-0.729,P0.001;r=-0.643,P0.001);APP/PS1组小鼠内嗅皮质和海马体积变化与穿越平台次数呈明显正相关关系(r=0.705,P0.001;r=0.719,P0.001);APP/PS1组小鼠内嗅皮质和海马体积变化与Aβ沉积呈明显负相关关系(r=-0.865,P0.001;r=-0.885,P0.001)。结论:APP/PS1转基因小鼠可能于6月龄时就发生学习记忆功能障碍,且随时间渐进性加重;这种学习记忆功能障碍可能与大脑内嗅皮质和海马体积萎缩有关;而Aβ过度沉积可能是导致大脑灰质体积萎缩的因素之一。     

解郁1号影响抑郁大鼠皮质及海马区脑源性神经营养因子蛋白表达的效应

目的：观察以调理脾胃法组成的中药复方解郁1号对抑郁大鼠皮质、海马区脑源性神经营养因子蛋白表达的影响。 方法：实验于2004-03／04在广西中医学院中心实验室完成。SD大鼠40只，按随机表随机分为正常组、模型组、阿米替林组、解郁1号12.6g/（kg&;#183;d）剂量组，每组各8只。解郁1号为半夏，竹茹，枳实，茯苓，柴胡，石菖蒲，合欢花各10g等组成，中药购于广西中医学院附属一院中药房，经中药植化室鉴定后，水煎浓缩为1.5g／mL，置4℃冰箱内备用。采用慢性不可预见性应激诱导抑郁大鼠模型，各组在造模同时即开始给药，分别胃饲阿米替林10mg／（kg&;#183;d）（蒸馏水配置，浓度为1g／L），解郁1号提取液12.6g／（kg&;#183;d），模型组、正常组胃饲生理盐水（6mL／kg），每天8：00开始，除正常组外，各组接受21d长期慢性刺激。各组动物末次造模结束后，采用旷场实验进行行为学评分，24h后，立即断头，迅速冰皿上取脑，脑组织放入液氮罐内速冻5min，取出后冰冻切片机进行冰冻切片，片厚20μm，-20℃冰箱保存，用免疫组织化学法进行大鼠皮质、海马CA4内脑源性神经营养因子蛋白表达检测。 结果：实验大鼠38只进入结果分析。①与正常组比较，模型组额叶皮质、海马CA4区脑源性神经营养因子免疫标记阳性神经元数目明显减少（257．00&;#177;38.40，244．4&;#177;38．82，P〈0．01），而且免疫标记着色较浅，部分神经元胞浆有空化现象。②与模型组比较，阿米替林组、解郁1号12．6g／（kg&;#183;d）剂量组均能增强脑源性神经营养因子在额叶皮质、海马CA4区的表达（皮质神经元个数：394．25&;#177;27．70，403．5&;#177;27．77，378．38&;#177;32．61；海马CA4区神经元个数：363．29&;#177;29．94，354．50&;#177;41．07，345．00&;#177;36．39，P〈0．01），额叶皮质、海马CA4区脑源性神经营养因子免疫标记阳性神经元形态未见明显异常。 结论：解郁1号具有抗抑郁作用，其作用机制可能通过增强脑源性神经营养因子蛋白表达，从而发挥抗神经元损伤作用，达到抗抑郁目的。