多巴胺D2受体基因敲除导致体重减轻以及棕色脂肪PRDM16、UCP1、FAS和ACC的表达变化#br#

目的　以多巴胺D2受体基因敲除（D2KO）小鼠为动物模型,研究D2KO小鼠体重减轻后,棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）重量,白色脂肪重量,BAT中含PR结构域蛋白16（PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16,PRDM16）、解偶联蛋白1（uncoupling protein 1,UCP1）、脂肪酸合酶（fatty acid synthase,FAS）以及乙酰辅酶A羧化酶（acetyl Coenzyme A carboxylase,ACC）的mRNA和蛋白表达变化,以期为肥胖机制研究提供线索。 方法　8周龄野生型小鼠组（wild type,WT）和D2KO小鼠组各10只。分别称量各小鼠体重及其白色脂肪、棕色脂肪重量。Real-time quantitative RT-PCR方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的mRNA表达水平,Western blotting方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的蛋白表达水平。 结果　WT组动物体重为（23.78±0.54）g,D2KO组动物体重为（20.54±1.15）g,P＜0.05。WT组动物附睾脂肪（epididymal adipose tissue,eAT）重量为（1.083±0.02）g,D2KO组动物eAT重量为（0.978±0.03）g,P＜0.05。WT组动物皮下脂肪（subcutaneous adipose tissue,sAT）重量为（1.85±0.05）g,D2KO组动物sAT重量为（1.72±0.03）g,P<0.05。WT组动物BAT重量为（31.38±4.22）mg,D2KO组动物BAT重量为（42.44±2.47）mg,P<0.05。半定量PCR与Western blotting检测结果显示,相对于WT组,D2KO组小鼠棕色脂肪中PRDM16、FAS、ACC的mRNA与蛋白的表达均显著增加,UCP1的mRNA与蛋白表达显著减少。 结论　D2KO小鼠的体重减轻与棕色脂肪中的PRDM16、UCP1、FAS以及ACC存在一定关联。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

胎鼠表皮干细胞的体外分离培养及rAAV2/eGFP转染的研究

目的 对表皮干细胞(ESCs)进行分离培养和鉴定,利用携带绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV)转染表皮干细胞,探索不同滴度rAAV2/eGFP的转染效率.方法 1.获取胎鼠表皮单细胞悬液.2.利用层黏连蛋白(laminin)和Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)筛选ESCs,在体外进行培养和鉴定.3.将ESCs按5×104个/孔接种入24孔培养板中,按照不同的病毒基因数与转染细胞数之比(MOI)加入所需rAAV2/eGFP病毒,计数绿色荧光细胞数目,并计算转染效率. 结果 1.ESCs对Laminin和Collagen Ⅳ的吸附性很好,克隆形成率较高.2.对ESCs进行β1整合素(Integrinβ1)单抗、角蛋白19(Keration 19,K19)单抗的免疫细胞化学染色,均呈阳性表达.3.利用rAAV1eGFP病毒体外转染ESCs,可稳定表达eGFP.结论 用Laminin和Collagen Ⅳ快速黏附法可从胎鼠皮肤分离和富集ESCs.     

脊髓脱细胞支架对大鼠脊髓缺损修复的影响

目的 用振荡法制备脊髓脱细胞支架修复同种异体大鼠脊髓缺损,观察术后大鼠行为学及组织再生情况。为脊髓缺损后修复提供新的研究思路。方法 将30只SD大鼠脊髓分别用50 ml 3%聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）和2%脱氧胆酸钠溶液在摇床上做振荡处理,对比处理前后细胞残留情况及组织的空间结构,了解支架本身的组织构成。将90只SD大鼠随机分成空白对照组、单纯脊髓缺损组和支架移植组。切除单纯脊髓缺损组和支架移植组大鼠腰椎9～10节段,移植脱细胞支架至支架移植组大鼠。术后饲养12周,期间进行行为学评分观察,分别在4、8及12周时取大鼠损伤部位的脊髓进行HE染色及神经再生相关蛋白免疫荧光检测。结果 通过HE、Masson、甲苯胺蓝染色显示,脱细胞处理后的脊髓脱细胞支架上神经细胞及轴突彻底清除,保留了脊髓细胞外基质。扫描电子显微镜观察发现,支架保留一定多孔网状支架结构。脱细胞支架在体实验中,Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分显示,移植有脱细胞支架的大鼠后肢运动功能恢复优于单纯损伤组大鼠。组织学HE染色显示,脱细胞支架能够填补缺损的脊髓节段,加快损伤脊髓的修复过程。免疫荧光显示,支架移植组大鼠的损伤部位有一定轴突再生。结论 脊髓脱细胞支架保留了细胞外基质并具有一定空间结构,能够一定程度加快脊髓缺损修复,对神经再生具有一定的促进作用。     

脱细胞脂肪组织制备：能否成为异体注射或原位成脂的软组织填充物

文题释义： 细胞外基质(extracellular matrix,ECM)：是由动物细胞合成并分泌到胞外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子,主要是一些多糖和蛋白,或蛋白聚糖。这些物质构成复杂的网架结构,支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动。细胞外基质是动物组织的一部分,不属于任何细胞,它决定结缔组织的特性,对于一些动物组织的细胞具有重要作用。 脱细胞脂肪组织：脂肪组织移植已成为整形外科及修复重建领域重要的手段,广泛用于软组织缺损的修复和以美容为目的的软组织填充。来源于脂肪组织由细胞外基质组成的脱细胞基质已成为脂肪医学一个新的发展方向,展示出良好的应用前景。脂肪组织脱细胞基质的产生原因可以分为物理性、化学性、酶学以及多种方法的联合,不同的方法对脂肪组织清除细胞的效果不同,对细胞外基质的影响也不同,最终会使宿主对移植的脱细胞材料产生的反应不同,进而影响脱细胞产品的安全性和有效性。 背景：通过脱细胞脂肪组织构建无种子细胞的组织工程脂肪为当前软组织填充的研究热点。 目的：探讨近年来脱细胞脂肪组织的制备方法对其移植后诱导脂肪再生效果的影响,并展望其临床应用前景。 方法：检索1971年1月至2018年12月 PubMed数据、Elsevier数据库相关文献,英文检索词为“adipose tissue engineering;adipose tissue extracellular matrix;soft tissue repair;angiogenesis;adipogenic induction”。阅读近年国内外与脱细胞脂肪组织制备和移植相关的文献,从脱细胞脂肪组织制备方法的改良,交联细胞因子和生物材料等方面进行总结归纳。 结果与结论：当前研究表明,脂肪组织细胞外基质可作为软组织填充的理想支架材料,植入皮下可募集宿主干细胞并诱导期增殖和成脂分化。但现有的脱细胞方案会导致细胞外基质蛋白和结构的损失,这极大的影响了脱细胞脂肪组织植入体内的脂肪再生能力,但通过超临界二氧化碳设备脱油、机械力预处理、交联细胞因子或生物材料等手段可以减少脱细胞脂肪组织制备过程中细胞外基质蛋白的损失和或补充具有促进组织再生功能的蛋白,最终提高脱细胞脂肪组织移植后的血管和脂肪新生能力。脱细胞脂肪组织由于其天然的成脂诱导能力,在脂肪组织工程中具有强大的应用前景,若能克服其制备流程中细胞外基质蛋白损耗或在安全可控的前提下,有望成为可异体注射并原位成脂的理想软组织填充物。 ORCID: 0000-0002-9784-2874(聂佳莹) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其用于肌腱损伤修复的前期研究

目的探究大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其复合脂肪间充质干细胞构建微组织,为组织工程法修复肌腱损伤所需生物材料提供实验基础。方法取20只150~200 g SD大鼠鼠尾作为实验材料,分别抽取出大鼠尾腱,经PBS彻底清洗后反复冻融3次,然后经过1%SDS于室温下处理24 h,并用大量PBS清洗1周除去细胞残渣,最后~(60)Co消毒备用。对制备的大鼠尾腱细胞外基质进行病理学染色,观察细胞残留情况。同时,检测该来源的生物源性材料残留α-Gal含量。此外,观察制备的大鼠尾腱细胞外基质复合脂肪间充质干细胞对细胞增殖的影响。同时,用CCK-8试剂盒检测该生物材料的细胞毒性。结果大体观察可见,经脱细胞处理过的尾腱体积增大,呈乳白色匀浆状。HE以及DAPI染色结果显示,经脱细胞处理后的尾腱细胞核大量减少,细胞数量显著降低,每个高倍镜视野内细胞残余量不大于5个。脱细胞尾腱残留α-Gal含量与正常尾腱相比有统计学差异,脱细胞尾腱残留DNA极少。复合脂肪间充质干细胞培养7 d相比培养1 d活细胞数量明显增多。CCK-8毒性测试结果显示这种脱细胞大鼠尾腱的生物相容性较好,没有细胞毒性。结论经过脱细胞方法制备的大鼠尾腱细胞外基质可有效除去细胞成分,并且与脂肪间充质干细胞有较好的生物相容性,可作为一种生物材料用于肌腱损伤修复。     

COX-2/sEH双抑制剂PTUPB通过抑制内质网应激改善小鼠非酒精性脂肪性肝病

目的　探讨环氧合酶2（COX-2）和可溶性环氧化物水解酶（sEH）的双抑制剂PTUPB对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠肝脏的保护作用及机制。 方法　将32只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组（Control）、双抑制剂对照组（PTUPB）、高糖高脂饲料组（HFD）和双抑制剂治疗组（HFD+PTUPB）。其中PTUPB组和HFD+PTUPB组每天皮下注射COX-2/sEH双抑制剂PTUPB（5 mg/kg）,Control组和HFD组皮下注射PTUPB的溶剂PEG400。12周后,观察各组小鼠的体重变化;HE染色、油红O染色和Masson染色分别观察小鼠肝组织病理改变、脂质堆积及胶原沉积;Western blot法检测小鼠肝组织内质网应激相关蛋白IRE-1α和XBP-1s的表达;Real-time PCR检测棕榈酸（PA）处理的小鼠肝细胞（AML-12）内质网应激相关基因（Perk、Ire-1α、Xbp-1s和Aft-6）的表达。 结果　与HFD组小鼠相比,HFD+PTUPB组小鼠体重及体重变化率显著降低,肝组织病理损伤、脂质堆积和胶原沉积明显改善,IRE-1α和XBP-1s的蛋白表达显著下调;进一步在细胞水平观察到,PTUPB预处理可降低PA诱导的AML-12细胞内质网相关基因的表达。 结论　抑制COX-2和sEH可减轻HFD诱导的小鼠NAFLD,其机制与抑制肝细胞内质网应激有关。     

COX-2/sEH双抑制剂PTUPB通过抑制内质网应激改善小鼠非酒精性脂肪性肝病

目的　探讨环氧合酶2（COX-2）和可溶性环氧化物水解酶（sEH）的双抑制剂PTUPB对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠肝脏的保护作用及机制。 方法　将32只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组（Control）、双抑制剂对照组（PTUPB）、高糖高脂饲料组（HFD）和双抑制剂治疗组（HFD+PTUPB）。其中PTUPB组和HFD+PTUPB组每天皮下注射COX-2/sEH双抑制剂PTUPB（5 mg/kg）,Control组和HFD组皮下注射PTUPB的溶剂PEG400。12周后,观察各组小鼠的体重变化;HE染色、油红O染色和Masson染色分别观察小鼠肝组织病理改变、脂质堆积及胶原沉积;Western blot法检测小鼠肝组织内质网应激相关蛋白IRE-1α和XBP-1s的表达;Real-time PCR检测棕榈酸（PA）处理的小鼠肝细胞（AML-12）内质网应激相关基因（Perk、Ire-1α、Xbp-1s和Aft-6）的表达。 结果　与HFD组小鼠相比,HFD+PTUPB组小鼠体重及体重变化率显著降低,肝组织病理损伤、脂质堆积和胶原沉积明显改善,IRE-1α和XBP-1s的蛋白表达显著下调;进一步在细胞水平观察到,PTUPB预处理可降低PA诱导的AML-12细胞内质网相关基因的表达。 结论　抑制COX-2和sEH可减轻HFD诱导的小鼠NAFLD,其机制与抑制肝细胞内质网应激有关。     

NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的：探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法：使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM)，应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况，应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果：NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好，勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整，排列正常，保留了基本的真皮构筑。HLA—DR呈阴性，Fibronectin(FN)呈弱阳性，Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论：NaOH消蚀法简易经济，去除细胞成分较彻底，所制备的ADM韧性好，胶原纤维形态完整，排列正常，但对基膜的成分及结构破坏较重。     

Comparison of three methods for the derivation of a biologic scaffold composed of adipose tissue extracellular matrix

Extracellular matrix (ECM)-based scaffold materials have been used successfully in both preclinical and clinical tissue engineering and regenerative medicine approaches to tissue reconstruction. Results of numerous studies have shown that ECM scaffolds are capable of supporting the growth and differentiation of multiple cell types in vitro and of acting as inductive templates for constructive tissue remodeling after implantation in vivo. Adipose tissue represents a potentially abundant source of ECM and may represent an ideal substrate for the growth and adipogenic differentiation of stem cells harvested from this tissue. Numerous studies have shown that the methods by which ECM scaffold materials are prepared have a dramatic effect upon both the biochemical and structural properties of the resultant ECM scaffold material as well as the ability of the material to support a positive tissue remodeling outcome after implantation. The objective of the present study was to characterize the adipose ECM material resulting from three methods of decellularization to determine the most effective method for the derivation of an adipose tissue ECM scaffold that was largely free of potentially immunogenic cellular content while retaining tissue-specific structural and functional components as well as the ability to support the growth and adipogenic differentiation of adipose-derived stem cells. The results show that each of the decellularization methods produced an adipose ECM scaffold that was distinct from both a structural and biochemical perspective, emphasizing the importance of the decellularization protocol used to produce adipose ECM scaffolds. Further, the results suggest that the adipose ECM scaffolds produced using the methods described herein are capable of supporting the maintenance and adipogenic differentiation of adipose-derived stem cells and may represent effective substrates for use in tissue engineering and regenerative medicine approaches to soft tissue reconstruction.     

Comparison of decellularization techniques for preparation of extracellular matrix scaffolds derived from three-dimensional cell culture

Extracellular matrix (ECM) scaffolds derived from cultured cells have drawn increasing attention for use in tissue engineering. We have developed a method to prepare cultured cell-derived ECM scaffolds by combining three-dimensional cell culture, decellularization, and selective template removal. Cell-ECM-template complexes were first formed by culture of cells in a poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) mesh template to deposit their own ECM. The complexes were subsequently decellularized to remove cellular components. Finally, the PLGA template was selectively removed to obtain the ECM scaffolds. Seven decellularization methods were compared for their decellularization effects during scaffold preparation. They were: freeze-thaw cycling (-80°C, six times) with ammonia water (25 mM); 0.1% Triton? X-100 (TX100) with 1.5M KCl aqueous solution; freeze-thaw cycling alone; ammonia water alone; TX100 extraction; osmotic shock with 1.5M KCl; and freeze-thaw cycling with 3M NaCl. Among these methods, the methods of freeze-thaw cycling with NH(4) OH and TX100 with 1.5M KCl showed the best effect on the removal of cellular components from the complexes, while the other five methods could only partially remove cellular components. The ECM scaffolds prepared by these two methods had similar gross appearances and microstructures. In vivo implantation of the ECM scaffolds prepared by these two methods induced mild host responses. The two decellularization methods were demonstrated to be effective for preparation of cultured cell-derived ECM scaffolds.     

慢性应激诱导DPP-4表达及对脂肪炎症和代谢的影响

目的　分析慢性应激诱导脂肪二肽基肽酶-4（DPP-4）表达及对脂肪炎症和糖代谢的影响。 方法　雄性SPF级小鼠20只随机分慢性应激（Stress）组和正常对照（Control）组。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h，实验持续14 d。采用免疫组化方法检测巨噬细胞表面标志物（CD11b）在脂肪中的表达，实时定量PCR法检测脂肪组织中DPP-4、细胞因子（Adiponectin、MCP-1、IL-6、TNF-α）及糖代谢（IRS-1、GLUT-4）等指标的mRNA的相对表达量；ELISA法检测DPP-4酶活性及GLP-1浓度。 结果　Stress小鼠腹部白色脂肪组织（WAT）与Control组相比显著的退缩及其重量显著降低（P<0.001）。Stress组WAT出现大量的单核细胞、中性粒细胞浸润反应和炎症性改变；Stress显著降低Adiponectin的表达，并显著增高MCP-1、IL-6、TNF-α的mRNA表达及其血液中的浓度（P<0.001）；Stress组WAT组织中DPP-4 mRNA表达及其血液中的活性显著增高，而GLP-1血液中的浓度显著降低（P<0.001）；Stress组WAT组织中IRS-1及GLUT-4的mRNA水平显著低于Control组（P<0.001）。 结论　慢性应激诱导脂肪DPP-4异常表达，进而引起脂肪炎症和糖代谢异常等反应。     

猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究

目的　 灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究三种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响。 方法　取健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1% Triton X-100和1% SDS溶液完成去细胞化。两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析。 结果　家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性, Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显著性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而三种支架组之间PCNA/DAPI值无显著性差异。 结论　本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备三者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。     

人体脱细胞脂肪组织的制备及组织学评价

目的 通过为人体吸脂来源的脂肪组织脱细胞,评估脱细胞脂肪组织的组织学成分,探讨其作为组织工程支架材料的可能性。 方法 采用改良的脱细胞方法为5例人吸脂来源的脂肪组织脱细胞,观察制备过程的大体形态,对脱细胞脂肪进行HE染色、Masson染色、Gomori染色、油红O染色、DAPI染色,并对脱细胞组织中残留的DNA、胶原蛋白及糖胺聚糖含量进行定量检测。 结果 本实验制备的脱细胞脂肪,外观呈不透明的乳白色,无固定形态。HE染色和DAPI染色无可见细胞成分残留,Masson染色可见胶原纤维,Gomori染色可见网状纤维存在,油红O染色无可见脂质残留。组织中残留的DNA含量微小,胶原和糖胺聚糖含量均有所保留。结论 应用结合物理化学和酶学的脱细胞方法,可以为人体的吸脂来源脂肪组织脱细胞,得到的脱细胞组织去除了脂肪组织中的细胞及脂质成分,保留了脂肪组织细胞外基质的组成成分。     

An overview of tissue and whole organ decellularization processes

Biologic scaffold materials composed of extracellular matrix (ECM) are typically derived by processes that involve decellularization of tissues or organs. Preservation of the complex composition and three-dimensional ultrastructure of the ECM is highly desirable but it is recognized that all methods of decellularization result in disruption of the architecture and potential loss of surface structure and composition. Physical methods and chemical and biologic agents are used in combination to lyse cells, followed by rinsing to remove cell remnants. Effective decellularization methodology is dictated by factors such as tissue density and organization, geometric and biologic properties desired for the end product, and the targeted clinical application. Tissue decellularization with preservation of ECM integrity and bioactivity can be optimized by making educated decisions regarding the agents and techniques utilized during processing. An overview of decellularization methods, their effect upon resulting ECM structure and composition, and recently described perfusion techniques for whole organ decellularization techniques are presented herein.     

Decellularized placental matrices for adipose tissue engineering

A tissue-engineered adipose substitute would be invaluable to plastic surgeons for reconstructive, corrective, and cosmetic procedures. This work involves the design of a scaffold for soft tissue augmentation incorporating the decellularized extracellular matrix (ECM) of human placenta. We have developed a protocol to decellularize an intact, large segment (8 cm by 8 cm) of the human placenta. To facilitate the complete decellularization of the dense matrix, a system was designed to perfuse the required chemicals into the placenta via the existing vasculature. Following processing, the original architecture of the placental ECM was preserved, including an intact vascular network. Histological, immunohistochemical, and scanning electron microscopic analyses confirmed the removal of the cells and cellular debris and characterized the composition and structure of the matrix. In vitro cell culture experimentation showed that the placental decellular matrix (PDM) could facilitate the adhesion of primary human adipose precursor cells at early time points. The PDM has great potential for use as a scaffold for adipose tissue engineering, as the placenta is a rich source of human ECM components that can be readily harvested without harm to the donor.     

The performance of decellularized adipose tissue microcarriers as an inductive substrate for human adipose-derived stem cells

With the aim of developing a clinically-translatable cell expansion and delivery vehicle for adipose tissue engineering, the adipogenic differentiation of human adipose-derived stem cells (ASCs) was investigated on microcarriers fabricated from human decellularized adipose tissue (DAT). ASCs seeded on the DAT microcarriers and cultured in adipogenic differentiation medium within a low-shear spinner culture system demonstrated high levels of adipogenic differentiation, as measured by the expression of adipogenic genes, glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH) enzyme activity, and intracellular lipid accumulation. In contrast, gelatin microcarrier controls did not demonstrate significant adipogenesis, emphasizing the role of the native matrix in mediating ASC differentiation. Interestingly, ASCs cultured on the DAT microcarriers in proliferation medium expressed elevated levels of the adipogenic markers, suggesting that the DAT provided an adipo-inductive substrate for the human ASCs. In vivo testing of the DAT and gelatin microcarriers in a subcutaneous Wistar rat model confirmed injectability and demonstrated stable volume retention over 28 days. Under histological analysis, the DAT microcarriers demonstrated no evidence of immunogenicity or cytotoxicity, with the DAT supporting cellular infiltration and tissue remodeling. Pre-seeding the DAT microcarriers with allogenic rat ASCs enhanced cellularity and angiogenesis within the implant region.     

脱细胞技术在组织工程血管中的应用进展

将天然血管经过脱细胞处理得到的脱细胞血管,被认为是一种具有广阔应用前景的组织工程血管支架材料.截至目前,细胞外基质(ECM)支架的制备方法仍缺乏统一标准.脱细胞方法的选择取决于组织来源和基质支架的用途,尤其对于脱细胞血管等需要长期承受血流冲击的基质支架材料来说,脱细胞方案的选择至关重要.细胞清除效率和细胞外基质支架的性...     

党参多糖介导Nrf2通路对缺氧缺血性脑损伤的抗氧化和神经保护作用

目的　研究党参多糖对缺氧缺血性脑损伤的抗氧化和神经保护作用及其机制。 方法　采用Rice法建立HIBI模型。假手术组和模型组灌胃给予生理盐水，模型加药组灌胃给予党参多糖。分别进行神经功能学评分，观察脑积水量，脑组织病理学改变，神经元细胞凋亡情况，脑组织脂质过氧化物水平，抗氧化和神经保护相关蛋白表达水平。 结果　党参多糖能显著改善模型大鼠神经功能、脑水肿（P<0.01）和病理改变，降低细胞凋亡率（P<0.01）和Bax表达（P<0.01），降低LDH和MDA含量（P<0.01）；同时，上调Bcl-2表达（P<0.01）和SOD活性（P<0.01），增加bFGF、BDNF、PSD95、SYP、Nrf2和HO-1表达（P<0.01）。 结论　党参多糖对缺氧缺血性脑损伤具有抗氧化和神经保护作用，可能与介导Nrf2信号通路相关。