激素抵抗性哮喘患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及IL-10、TGF-β1的变化及意义

目的 观察激素抵抗性哮喘(SRA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)及白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)的变化,分析其在SRA发病机制中的作用.方法 采用流式细胞术检测40例SRA患者(激素抵抗组)外周血单个核细胞CD4+CD25+Foxp3+ Treg数目,并计算CD4+CD25+Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清IL-10、TGF-β1水平,并与激素敏感性患者(激素敏感组,46例)及正常体检者(正常组,30例)进行对比.结果 激素抵抗组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比、CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对值及血清IL-10、TGF-β1水平均明显低于激素敏感组与正常组(P＜0.01,P＜0.05);激素敏感组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比、CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对值及血清TGF-β1水平明显低于正常组(P＜0.01,P＜0.05),血清IL-10无明显差异(P＞0.05);CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数均与血清IL-10、TGF-β1水平呈明显正相关(P＜0.01).结论 SRA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+ Treg数目减少及IL-10、TGF-β1含量减低可能与SRA的发生、发展有关.     

激素抵抗性哮喘患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及IL-10、TGF-β1的变化及意义

目的 观察激素抵抗性哮喘(SRA)患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)及白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)的变化,分析其在SRA发病机制中的作用.方法 采用流式细胞术检测40例SRA患者(激素抵抗组)外周血单个核细胞CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg数目,并计算CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清IL-10、TGF-β1水平,并与激素敏感性患者(激素敏感组,46例)及正常体检者(正常组,30例)进行对比.结果 激素抵抗组患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比、CD4+ CD25+Foxp3+ Treg绝对值及血清IL-10、TGF-β1水平均明显低于激素敏感组与正常组(P＜0.01,P＜0.05);激素敏感组患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比、CD4+ CD25+ Foxp3+Treg绝对值及血清TGF-β1水平明显低于正常组(P＜0.01,P＜0.05),血清IL-10无明显差异(P＞0.05);CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg/CD4+T及CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg绝对数均与血清IL-10、TGF-β1水平呈明显正相关(P＜0.01).结论 SRA患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg数目减少及IL-10、TGF-β1含量减低可能与SRA的发生、发展有关.     

淋巴细胞功能相关抗原-1调节Treg细胞对炎症性肠病的疗效观察

背景:Treg细胞对炎症性肠病(IBD)具有免疫保护作用,淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)参与了IBD时Treg细胞的分化和迁移。目的:探讨LFA-1调节Treg细胞对IBD疗效的影响。方法:将LFA-1基因缺失小鼠和相同遗传背景野生型小鼠各20只分别随机分为炎症组和治疗组。小鼠饮用2.5%DSS溶液诱导结肠炎模型,治疗组小鼠通过尾静脉回输体外诱导的Treg细胞。观察小鼠一般情况和结肠组织学表现,流式细胞术检测外周血、脾脏、肠系膜淋巴结中Treg细胞比例,ELISA法检测血清TGF-β1、IL-10、IL-17A、IFN-γ水平,实时PCR检测结肠组织TGF-β1、IL-10mRNA表达。结果:LFA-1缺失治疗组结肠组织学评分与野生型治疗组无明显差异。LFA-1缺失治疗组肠系膜淋巴结Treg细胞比例显著高于相应炎症组(P0.05);LFA-1缺失治疗组外周血、脾脏、肠系膜淋巴结Treg细胞比例显著低于野生型治疗组(P0.05)。与相应炎症组相比,野生型和LFA-1缺失治疗组血清TGF-β1、IL-10以及结肠组织TGF-β1 mRNA表达显著升高(P0.05),IL-17A、IFN-γ以及IL-10 mRNA表达显著降低(P0.05)。野生型治疗组血清TGF-β1、IL-10以及TGF-β1、IL-10 mRNA表达显著高于LFA-1缺失治疗组(P0.05),IL-17A、IFN-γ显著降低(P0.05)。结论:LFA-1参与了Treg细胞功能的调控,能促进Treg细胞分泌抗炎因子TGF-β1、IL-10等。Treg细胞治疗LFA-1缺失结肠炎小鼠的疗效低于野生型小鼠,可能与Treg细胞功能和细胞因子的分泌受到抑制相关。     

急性冠脉综合征病人外周血Th17细胞与CD_4~+CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞水平变化及临床意义

目的观察急性冠脉综合征(ACS)病人外周血辅助性T细胞(Th17细胞)、CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg调节性T细胞(Treg细胞)水平。方法选择105例冠心病病人,包括稳定型心绞痛(SA,30例)、非ST段抬高型急性冠脉综合征(NSTEACS,45例)、ST段抬高型急性心肌梗死(STEAMI,30例),另选取30例冠状动脉造影正常病人作为对照组。采用流式细胞仪分析4组Th17细胞、CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞水平,采用ELISA法检测4组转化生长因子-β(TGF-β)、白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,并分析Th17细胞、CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞比例与TGF-β、IL-10、IL-6水平的相关性。结果 STEAMI组和NSTEACS组外周血Th17细胞比例、IL-6水平升高,CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞比例、TGF-β、IL-10降低(P0.05)。与SA组和对照组比较,STEAMI组和NSTEACS组Th17/CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg升高,且STEAMI组高于NSTEACS组,NSTEACS组高于SA组(P0.05)。NSTEACS组和STEAMI组Th17细胞比例与TGF-β、IL-10水平呈负相关(P0.05);Gensini评分和C反应蛋白与IL-6呈正相关(P0.05);CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞比例与TGF-β和IL-10水平呈正相关(P0.05),与IL-6呈负相关(P0.05)。NSTEACS组和STEAMI组Gensini评分、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C-反应蛋白与CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞比例呈负相关(P0.05),与Th17细胞比例呈正相关(P0.05)。结论 STEAMI和NSTEACS病人血Th17/CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg比例失衡,Th17、CD_4~+ CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞可能通过影响TGF-β、IL-10、IL-6水平影响ACS的发生发展。     

中药单体绿原酸对深静脉血栓形成大鼠Th17/Treg亚群失衡的影响

目的观察中药单体绿原酸对深静脉血栓形成(DVT)大鼠Th17/Treg亚群失衡的影响。方法将60只大鼠随机分为6组各10只,A、B、C、D组Reyers法建立大鼠DVT模型,分别给予绿原酸40、20、10 mg/kg及等量生理盐水灌胃7 d;E组为假手术组,F组不处理。分离大鼠脾脏单核细胞,流式细胞术检测各组Th17、Treg亚群比例,ELISA法检测大鼠血清IL-17、TGF-β蛋白,分析Th17/Treg比例与血清IL-17、TGF-β相关性。结果与E、F组比较,B~D组脾脏Th17亚群比例升高、Treg亚群比例降低、Th17/Treg升高、IL-17表达升高、TGF-β表达降低,P均<0.05;与D组比较,A、B、C组Th17亚群比例降低、Treg亚群比例升高、Th17/Treg降低、IL-17表达降低、TGF-β表达升高(P均<0.05);Th17/Treg值与IL-17呈正相关(r=0.618,P<0.05),与TGF-β呈负相关(r=-0.577,P<0.05)。结论在大鼠DVT发病过程中存在Th17/Treg亚群失衡,中药单体绿原酸诱导T细胞向Treg亚群偏移,逆转Th17/Treg亚群失衡状态,进而减轻炎症反应,保护血管内皮,抑制血栓形成。     

肺癌患者外周血Treg细胞与IL-10、TGF-β检测及其临床意义

目的测定肺癌患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+FoxP3~+Treg细胞、CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞、IL-10及TGF-β的表达水平,并分析它们之间的相关性。方法采用流式细胞术检测73例肺癌患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞及CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞表达水平,采用酶联免疫吸附反应检测IL-10及TGF-β值,并与19例健康人进行比较。结果肺癌患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞、CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞、IL-10及TGF-β表达水平较正常对照组显著升高(P0.05)。CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞及CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞成正相关(P0.05)。CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞与IL-10、TGF-β成正相关(P0.05)。CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞与IL-10、TGF-β成正相关(P0.05)。结论CD_4~+CD_(25)~+FoxP3~+Treg、CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)这两种标记方法都是检测Treg细胞的可靠方式,Treg细胞、IL-10、TGF-β参与了肺癌患者肿瘤微环境的构成,是导致肺癌免疫功能抑制的原因之一,检测其水平变化可作为评估肺癌患者免疫功能的可靠指标。     

间充质干细胞在成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者中免疫抑制作用的研究

目的探讨脐带间充质干细胞(MSCs)对LADA患者单核细胞衍生的树突状细胞(DCs)的免疫调节作用。方法选取5例LADA患者外周血DCs与MSCs进行共培养(MSCs+DCs组),之后刺激自体T细胞。流式细胞术检测DCs组成熟和活化水平、CD3+T、Treg、Th17细胞比例,ELISA法检测细胞培养上清中TGF-β、前列腺素E2(PGE-2)、IL-10和IL-6水平,流式多因子检测法测定细胞培养上清T细胞因子水平,全转录组测序分析筛选新的治疗靶点。结果 MSCs与DCs共培养后,调节性DCs(regDC)增加,同时TGF-β、PGE-2、IL-10和IL-6数量显著增加。两组与T细胞共培养结果显示,MSCs+DCs组IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13和TGF-β表达水平升高(P0.05),INF-γ、TNF-α和IL-17A表达水平降低(P0.05);MSCs+DCs组T细胞增殖活化水平显著降低,MSCs+DCs组Th17细胞比例降低(P0.05),Treg细胞比例增加(P0.05)。结论在LADA中,MSCs能在体外诱导未成熟DCs(imDCs)分化生成CD11b~(high)1a~(low)CD11c~(low)regDCs,表现出免疫抑制作用,这些DCs有助于抑制T细胞介导对胰岛β细胞的破坏,促进MSC发挥抗炎作用。     

胸腺法新为基础的药物治疗对肝移植术后肿瘤复发及相关细胞因子的影响

目的:探讨以胸腺肽联合槐耳颗粒对肝移植术后肿瘤复发及Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)、白介素(interleukin,IL)-10、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达.方法:从2011-01/2015-01在解放军第309医院接受肝移植的患者中搜集病例数共计42例患者的临床资料(均符合杭州标准),包括肝细胞癌(肝癌)患者42例.根据患者术后用药情况分为联合用药组19例,槐耳颗粒组16例,胸腺法新组7例.术后各组根据个体差异调整免疫抑制剂的种类和剂量[他克莫司(F K506)+吗替麦考酚酯(M M F)+西罗莫司].1 mo后联合用药组采用以胸腺法新联合槐耳颗粒抗肿瘤药物治疗,其他2组分别单用槐耳颗粒及胸腺法新.观察肝癌患者肿瘤的复发时间及各组外周血中调节性T细胞(Treg细胞)、IL-10、TGF-β的表达情况.每例患者的观察时间均为12 mo.结果:联合药物组的无瘤生存时间明显高于槐耳颗粒组及胸腺法新组(P0.05);术后第6个月联合用药组中Treg细胞和IL-10的表达明显高于胸腺法新组(P0.05),而联合药物组与胸腺法新组差异无统计学差异(P0.05).术后第12个月,联合药物组Treg、TGF-β、IL-10的表达明显高于胸腺法新组及槐耳颗粒组(P0.05).结论:胸腺法新联合槐耳颗粒抗肿瘤疗法可明显延长肝癌肝移植术后肿瘤的复发时间,较单用胸腺法新或者槐耳颗粒有良好的临床效果,术后定期监测Treg细胞、IL-10、TGF-β表达,可作为肝癌肝移植术后肿瘤复发的辅助指标.     

Th17、Treg及其平衡与大鼠肝移植术后免疫耐受的研究

目的探讨肝移植术后肝组织T淋巴细胞Th17/Treg表达变化和肝移植免疫耐受之间的关系.方法以采用改良Kamada二袖套法建立LEWIS→BN原位肝移植大鼠急性排斥反应模型:LEWIS大鼠为供体,BN大鼠为受体,行原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT).对照组为:BN→BN原位肝移植大鼠耐受模型:BN大鼠为供体,BN大鼠为受体,行OLT.术后观察大鼠一般情况,并于第1、3、5及7天分别处死大鼠取肝组织,HE染色观察肝组织结构.检测血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、白介素(interleukin,IL)-17、IL-23、IL-10和转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)的表达水平.结果与对照组比较,LEWIS→BN组各时间点肝功能指标ALT、AS T明显上调(P0.05).对照组第7天ALT:819.29 IU/L±79.33 IU/L;OLT组第7天ALT:1305.62 IU/L±94.82 IU/L;对照组第7天AST:337.82 IU/L±32.17 IU/L;OLT组第7天AST:867.75 IU/L±73.97 IU/L;大鼠第7天外周血Th17相关因子IL-17(对照组:28.67 pg/m L±2.55 pg/m L,OLT组:92.36 pg/m L±9.00 pg/m L)、IL-23(对照组:26.82 pg/m L±8.17 pg/m L,OLT组:62.98 pg/m L±12.96 pg/m L)明显上升,而Treg相关因子IL-10(对照组:76.92 pg/m L±12.87 pg/m L,OLT组:47.92 pg/m L±7.00 pg/m L)、TGF-β1(对照组:129.47 pg/m L±18.37 pg/m L,OLT组:82.48 pg/m L±11.83 pg/m L)明显下降,Th17/Treg表达失去平衡.同时,TGF-β下游Smad2/3蛋白具有跟TGF-β1相同变化趋势,LEWIS→BN急性排斥组与BN→BN免疫耐受组相比,差异具有统计意义(P0.05).结论IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1、Smad2/3参与了同种异体大鼠肝移植急性排斥反应,引起Treg向Th17的免疫偏移,可作为治疗大鼠肝移植免疫耐受的靶向指标.     

青蒿素对 AECOPD 患者外周血中炎症因子及 Th17/Treg 失衡的调控

目的：通过检测青蒿素干预前后慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者外周血中 Th17细胞,Treg 细胞占 CD4+ T 细胞的比例,炎症因子 IL-6、IL-21、转化生长因子β(TGF-β)的含量,初步探讨青蒿素对 COPD 患者外周血中炎症因子和 Th17/Treg 失衡的调控机制。方法随机收集 AECOPD 20例,将其分为1640干预组和青蒿素干预组,收集同一时期肺功能正常健康体检者20例作为对照组,抽取清晨空腹静脉血,采用流式细胞术检测所有实验对象 CD4+ Th17细胞和 Treg 细胞占 CD4+ T 细胞的比例;采用 ELISA 方法检测所有实验对象血清中炎症因子 IL-6、IL-21、TGF-β的水平。结果①CD4+ Th17细胞/CD4+ T 细胞和 Th17/CD4+ Treg 细胞的比例1640干预组高于青蒿素干预组和对照组,青蒿素干预组高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。Treg 细胞/CD4+ T 细胞的比例1640干预组则低于青蒿素干预组和对照组,青蒿素干预组低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。炎症因子 IL-6和 IL-21的水平1640干预组高于青蒿素干预组和对照组;青蒿素干预组高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。④炎症因子 TGF-β的水平1640干预组则低于青蒿素干预组和对照组,青蒿素干预组低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。⑤Th17/Treg 细胞的比值与炎症因子 IL-6(r =0.095,P <0.05),IL-21(r =0.051,P <0.05)的水平呈正相关,与 TGF-β(r =-0.002,P <0.05)的水平呈负相关;炎症因子 TGF-β的水平与炎症因子 IL-6(r =-2.075,P <0.05),IL-21(r =-2.869,P <0.05)的水平呈负相关。结论 AECOPD 患者外周血中存在 Th17/Treg 的失衡,炎症因子 IL-6、IL-21、TGF-β与 Th17/Treg 的失衡密切相关,青蒿素可能能够通过下调 IL-6和 IL-21的表达,上调 TGF-β的表达来调节其失衡。     

小鼠巨细胞病毒感染鼠胚胎成纤维细胞对共培养调节性T细胞增殖和活化的影响

目的 研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对共培养体系中调节性T细胞(Treg)的诱导作用和Treg在抗病毒免疫中的调节作用.方法 建立小鼠T淋巴细胞与感染CMV的同系小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)体外共培养的细胞模型.蚀斑法检测共培养上清液中MCMV负荷量;细胞计数法分析体系中T淋巴细胞的扩增;流式细胞术检测共培养体系中CD4+ CD25+ Treg细胞比例,Western印迹法检测T淋巴细胞中Foxp3蛋白表达强度;RT-PCR法检测MEF中转化生长因子(TGF)-β mRNA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β蛋白表达水平.组间差异采用单因素方差分析.结果 T淋巴细胞与MCMV感染的MEF共培养1 d和3 d后,培养上清液中病毒负荷量较对照组显著减少;但是共培养6 d后,T淋巴细胞的免疫保护作用消失,病毒量为(5.58±0.67)×105 PFU/mL,与感染对照组的(6.05±0.34)×105 PFU/mL比较,差异无统计学意义.CMV感染3 d后,T淋巴细胞数由感染前的(2.02±0.05)×106 /mL 增至(2.25±0.13)×106 /mL (P＜0.05);但继续培养至6 d时,T淋巴细胞数为(2.08±0.14)× 106/mL,与3 d时比较,差异无统计学意义.CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞比例和Foxp3蛋白表达变化相似,均随MCMV感染时间延长而增加,在感染后6 d分别增至对照组的2倍和3倍;TGF-β在MEF中的基因转录水平(A值)由感染前的1.09±0.13增至感染3 d后的3.15±0.54,共培养上清液中的蛋白表达强度在感染后3 d增至(3.85±0.32)μg/L,与感染前的(1.74±0.14)μg/L比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论随感染时间延长,MCMV可能通过促进TGF-β表达等多种途径诱导Treg增殖活化.     

Faecalibacterium prausnitzii对LFA-1基因敲除的结肠炎小鼠中Treg细胞和细胞因子的影响

背景:Faecalibacterium prausnitzii(Fp)可促进Treg细胞的分化,淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)亦参与Treg细胞的分化调节。目的:探讨Fp对LFA-1基因敲除(LFA-1~(-/-))的结肠炎小鼠中Treg细胞和细胞因子的影响。方法:将同样遗传背景下野生型小鼠和LFA-1~(-/-)小鼠随机分为野生型对照组、野生型治疗组、LFA-1~(-/-)对照组、LFA-1~(-/-)治疗组。小鼠饮用DSS溶液诱导结肠炎模型,治疗组小鼠予Fp灌胃。观察各组小鼠一般状况和组织病理学评分,以流式细胞术检测脾脏和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例,ELISA法检测外周血清IL-10、TGF-β1含量,实时PCR法检测结肠组织IL-10、TGF-β1 mRNA表达。结果:与相应对照组相比,野生型治疗组结肠组织学评分显著下降(P0.05);野生型治疗组和LFA-1~(-/-)治疗组脾脏和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例显著升高(P0.05),血清IL-10、TGF-β1含量显著升高(P0.01),TGF-β1 mRNA表达显著升高(P0.05);LFA-1~(-/-)治疗组IL-10 mRNA表达显著降低(P0.01)。与野生型治疗组相比,LFA-1~(-/-)治疗组血清TGF-β1含量显著降低(P0.05),IL-10、TGF-β1 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:Fp在LFA-1~(-/-)小鼠中可上调Treg细胞比例,促进Treg细胞分泌抗炎因子IL-10、TGF-β1。Fp治疗野生型结肠炎小鼠的疗效优于LFA-1~(-/-)小鼠,可能与LFA-1缺失对Treg细胞功能的发挥和细胞因子分泌受限有关。     

人脐带血间充质干细胞改善大鼠脑梗死免疫炎性反应的研究

目的研究人脐带血间充质干细胞(MSC)移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎性因子表达和调节性T细胞(Treg)数量及神经功能缺损的影响。方法选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、MSC组、生理盐水组,每组10只。于缺血前、缺血后30min、缺血再灌注2、3、6h测定血清白细胞介素(IL)-6、干扰素γ(IFNγ)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)水平变化,于1、3、7、14d对大鼠神经功能进行评分,并检测外周血中Treg表达。结果 MSC组缺血后IL-6、IFNγ水平升高,分别在缺血再灌注2h、缺血后30min达高峰,显著小于缺血再灌注组和生理盐水组;缺血后缺血再灌注组和生理盐水组IL-10、TGF-β水平降低,MSC组升高。MSC组缺血再灌注3、7、14d神经功能缺损评分明显低于缺血再灌注组和生理盐水组(P0.05)。结论人脐带血MSC移植可促进缺血再灌注大鼠神经功能恢复,诱导CD4CD25Treg细胞增殖,促炎性因子IL-6、IFNγ水平下降,抗炎性因子IL-10、TGF-β水平升高,从而减轻缺血性脑损伤。     

肝癌大鼠肝组织中Treg细胞及TGF-β1表达变化及相关性

目的探讨肝癌大鼠肝组织中调节性T细胞(Treg细胞)及转化生长因子(TGF)-β1的表达情况及其相关性。方法采用随机数字表法将60只雄性Wistar大鼠分为肝癌组(20只)、生理盐水对照组(20只)和正常对照组(20只),采用腹腔注射二乙基亚硝胺制备肝癌模型,100 mg/kg,1次/w,连续注射8 w。对比三组大鼠的CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞比例和TGF-β1灰度值,分析CD4~+CD25~+Treg细胞和TGF-β1表达的相关性。结果三组大鼠的CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞比例情况和TGF-β1灰度值整体比较差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组大鼠的CD4~+CD25~+Treg细胞占比显著高于正常对照组和生理盐水对照组,TGF-β1灰度值显著低于正常对照组和生理盐水对照组(均P<0.05);生理盐水对照组的TGF-β1灰度值显著低于正常对照组(P<0.05),CD4~+CD25~+Treg细胞占比与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05)。肝癌组大鼠CD4~+CD25~+Treg细胞和TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.823,P=0.000)。结论肝癌大鼠肝组织中CD4~+CD25~+Treg细胞及TGF-β1均呈现高表达,两者呈正相关,能对免疫微环境产生抑制作用,进而为肿瘤发展提供有利条件。     

慢性丙肝后肝硬化患者T淋巴细胞亚群检测对肝细胞损伤的预测价值

[目的]探析慢性丙肝后肝硬化患者T淋巴细胞亚群检测对肝细胞损伤的预测价值。[方法]选取100例慢性丙型肝炎患者,分为单纯慢性丙型肝炎组(CHC组,n=55)与慢性丙型肝炎后肝硬化组(CHC-LC组,n=45)。另从同期进行体检的健康人群中随机抽取50例作为对照组。检测3组研究对象的肝功能指标,包括谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL);HCV RNA滴度、血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)水平及Thl7细胞与Treg细胞。[结果]3组性别与年龄的差异无统计学意义。CHC-LC组血清AST、ALT、TBIL、HCV RNA滴度高于CHC组与对照组(P0.05),CHC组血清AST、ALT、TBIL、HCV RNA滴度高于对照组(P0.05)。CHC-LC组的Thl7细胞比例、Treg细胞比例、血清IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β水平、Th17/Treg比值分别为(5.95±0.81)%、(15.47±3.01)ng/L、(24.29±2.68)ng/L、(3.12±0.75)%、(21.40±3.38)ng/L、(7.33±1.54)ng/L、(1.91±0.42),高于CHC组与对照组(P0.05);CHC组Thl7细胞比例、Treg细胞比例、血清IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β、Th17/Treg比值水平分别为(4.74±0.72)%、(9.79±2.37)ng/L、(17.02±2.24)ng/L、(2.80±0.72)%、(16.98±2.18)ng/L、(5.32±1.24)ng/L、(1.69±0.37),高于对照组(P0.05)。Th17细胞比例、Treg细胞比例、血清IL-17、血清IL-10、血清TGF-β、Th17/Treg比值预测肝细胞损伤敏感度分别为0.530、0.518、0.665、0.727、0.879,特异度分别0.684、0.669、0.722、0.798、0.822。[结论]Thl7和Treg细胞平衡在慢性丙型肝炎患者的肝硬化发展具有促进作用,且可预测肝细胞损伤。     

免疫功能失调与急性冠脉综合征发病关系的研究

目的 观察急性冠脉综合征(ACS)患者免疫功能变化情况,探讨其与斑块稳定性之间的关系.方法 急性冠脉综合征(ACS)组、稳定型心绞痛(SA)组及正常对照组3组病例于清晨空腹抽取静脉血,采用流式细胞术测定外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD4+T细胞和CD8+T细胞表达百分比,采用ELISA方法测定外周血中细胞因子转化生长因子β(TGF-β)、白介素-10(IL-10)水平.常规检测血糖及血脂水平.结果 ACS组外周血中Treg表达百分比显著低于SA组和对照组(P<0.05),ACS组CD4+/CD8+T细胞表达百分比的比值显著高于SA组和对照组(P<0.05).ACS组的TGF-β、IL-10水平显著低于SA组和对照组 (P<0.05).结论 急性冠脉综合征患者体内存在效应性T细胞和调节性T细胞之间的失衡,免疫调节功能紊乱参与了动脉粥样斑块的发生发展过程.     

冠心病患者阿司匹林抵抗与调节性T细胞的关系

目的:探讨冠心病患者阿司匹林抵抗(AR)与CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的关系。方法:选取112例冠心病AR患者为观察组(AR组),冠心病阿司匹林敏感(AS)患者(AS组)及健康对照组各112例为对照组,使用流式细胞术检测各组外周血Treg及其细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)及白细胞介素10(IL-10)的百分含量;使用花生四烯酸(AA)及二磷酸腺苷(ADP)作为诱导剂测定血小板聚集率(PAR)。将冠心病AR患者随机分为氯吡格雷及复方丹参滴丸两组分别进行干预,比较上述指标的变化。结果:AR组及AS组Treg、TGF-β1及IL-10均显著降低,且显著低于健康对照组(P0.05),AR组明显低于AS组(P0.05)。AR及AS组AA-PAR及FDP-PAR均显著高于健康对照组,3组间两两比较差异均有统计学意义(均P0.05)。治疗后氯吡格雷组Treg、TGF-β1及IL-10均显著高于复方丹参滴丸组(P0.05),且AA-PAR及FDP-PAR显著低于复方丹参滴丸组(P0.05)。相关性分析显示,Treg、TGF-β1及IL-10均与AA-PAR及FDP-PAR呈显著负相关性。结论:冠心病AR患者Treg、TGF-β1及IL-10均明显降低,其与PAR呈负相关性,提示Treg可能是AR患者的保护性因素。     

丹参多酚盐对动脉内膜增生的影响及其机制研究

目的观察丹参多酚盐对大鼠颈动脉内膜损伤后血管增生的影响,并探讨其机制。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组、手术组、丹参多酚盐组,每组6只,颈动脉内膜损伤术后14 d分别检测各组大鼠血清中白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,并取颈动脉切片作病理形态学观察内膜增生情况,测量血管新生内膜厚度(IT)、中膜厚度(MT)并计算IT/MT值,RT-PCR和Western Blot分别测定各组管壁LOX-1m RNA和蛋白的表达变化。结果大鼠颈动脉内膜损伤后14 d可见血管内膜增生,管腔狭窄;与假手术组比较,手术组管壁LOX-1m RNA和蛋白的表达升高,差异具有统计学意义(P均0.05),血清中促炎因子IL-6、TNF-α水平上升,抗炎因子IL-10、TGF-β水平下降,差异具有统计学意义(P均0.05);与手术组比较,丹参多酚盐组内膜增生显著减低,血清IL-6、TNF-α水平下降,IL-10、TGF-β水平升高,差异具有统计学意义(P均0.05),管壁LOX-1 m RNA和蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P均0.05);丹参多酚盐组与假手术组比较,大鼠颈动脉IT、MT和IT/MT,血清中IL-6、IL-10、TNF-α和TGF-β水平,管壁LOX-1m RNA和蛋白表达水平,差异不具有统计学意义(P均0.05)。结论丹参多酚盐能有效抑制大鼠颈动脉内膜损伤后内膜的增生,抑制炎症反应,其机制可能与下调增生内膜LOX-1表达有关。     

耐多药肺结核患者外周血调节性T细胞及表面共刺激分子的表达及作用探讨

目的探讨耐多药肺结核(MDR-TB)患者外周血中调节性T细胞(Treg)、相关细胞因子、表面共刺激分子的表达情况及免疫功能状态。方法回顾性收集2016年9月-2018年10月期间在我院初治的105例非耐药肺结核(DS-TB)患者、45例MDR-TB患者和50例健康志愿者的资料,采用ELISA法检测外周血转化生长因子β1(TGF-β1)和白介素10(IL-10)的含量;经荧光抗体标记后,采用流式细胞术检测CD4~+CD25~+Foxp3~+和CD4~+CD25~+CD127~- Treg细胞比例,以及Treg细胞表面共刺激分子-细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序性死亡因子-1(PD-1)、可诱导共刺激分子(ICOS)的表达情况,并进行相关性分析。结果 DS-TB患者和MDR-TB患者外周血TGF-β1和IL-10含量均高于对照组,且MDR-TB患者外周血TGF-β1和IL-10含量高于DS-TB患者(P0.05)。MDR-TB患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+和CD4~+CD25~+CD127~- Treg细胞比例分别为(5.24±1.18)%和(7.76±1.75)%,高于对照组和DS-TB患者(P0.05),且两者呈正相关性(R~2=0.674,P0.001)。另外,MDR-TB患者外周Treg细胞表面共刺激分子CTLA-4、PD-1和ICOS表达量分别为(0.49±0.15)%、(4.13±1.27)%、(0.46±0.23)%,均高于对照组和DS-TB患者(P0.05)。相关分析显示,TGF-β1(R~2=0.521,P0.001)、CTLA-4+Treg细胞(R~2=0.434,P0.001)、PD-1+Treg细胞(R~2=0.436,P0.001)、ICOS~+ Treg细胞(R~2=0.570,P0.001)比例与CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg细胞含量呈正相关性。结论 Treg细胞在肺结核患者特别是MDR-TB患者外周血中的表达明显升高,提示TB患者免疫功能受损程度可能与Treg细胞水平有关,且MDR-TB患者免疫抑制状态更严重。而Treg细胞表面共刺激分子CTLA-4、PD-1、ICOS有望成为未来肺结核治疗的潜在靶标。     

CHB患者Th17-Treg失衡中IL-21的作用及机制

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周Th17/调节性T细胞(Treg)失衡中IL-21的作用及其初步机制。方法流式细胞仪分别检测59例CHB患者和20例健康人外周血细胞中Th17细胞和Treg细胞频数,同时以ELISA法检测血清细胞因子IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β水平。体外分别以IL21、IL-2刺激CHB患者外周血单核细胞(PBMC),以实时PCR检测培养细胞转录因子RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,以ELISA法检测培养上清细胞因子IL-17、IL-10和TGF-β水平。结果与正常人群相比,IL-21、IL1 7、TGF-β水平显著升高(P均0.05),CHB患者外周Th17/Treg比例显著升高(P0.05),IL-21水平与Th1 7/Treg比例呈正相关(P=01.008)。与IL-2相比.IL-21刺激CHB患者PBMC的RORγt mRNA表达水平明显升高(P=0.016)而Foxp3 mRNA表达水平明显降低(P=0.018),相对应的培养上清中,IL-1 7水平显著上升(P=0.049)而IL-10、TGF-β水平明显降低(P=0.017,P=0.004)。结论 C、HB患者中IL-21能通过提高RORγt mRNA表达,同时抑制Foxp3 mRNA表达进而促进Th1 7/Treg失衡。