HLA-DPA1和-DPB1基因第2、第3外显子同步测序分型的研究

目的:建立可靠的HLA-DPA1和-DPB1基因第2、第3外显子同步测序分型的方法。方法:采用一对位点特异性引物扩增HLA-DPA1基因的第2外显子、第2内含子、第3外显子及其两翼的部分内含子序列,采用2对位点特异性引物扩增HLA-DPB1目的基因片段:第1对引物扩增HLA-DPB1基因第2外显子及两翼的部分内含子序列,第2对引物扩增HLA-DPB1基因第3外显子及两翼的部分内含子序列。PCR产物经核酸外切酶和碱性磷酸酶纯化,用本文的测序引物分别对HLA-DPA1和-DPB1第2、第3外显子进行双向测序。纯化的测序反应产物,经ABI 3730测序仪电泳,用Assign 4.7.1分析软件判定基因型。结果:HLA-DPA1及-DPB1基因的PCR扩增获得了清晰的目的条带,对其第2、第3外显子进行测序,所获的序列中无背景杂峰。用本文的方法对随机的96人份造血干细胞志愿捐献者标本进行HLA-DPB1测序分型,与采用SeCore~(TM) DPB1商品化测序分型试剂盒平行对照检测的结果相一致。结论:本文的方法在群体遗传学及疾病关联研究等领域具有广泛的使用价值。     

PCR检测石蜡切片中HBV DNA

目前,PCR检测乙肝病毒DNA多为血清标本,而对肝组织尤其是石蜡包埋组织方面应用报道甚少。我们尝试把此项技术用于检测石蜡包埋组织中HBV DNA,并与血清检测进行了对照研究。     

阿尔茨海默病早老素-1基因第6号外显子突变分析

为了探讨早老素(presenilin，PS)-1基因在痴呆患者发病机制中的作用，我们于2001年3月至2003年9月应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和DNA测序技术对散发性阿尔茨海默病型痴呆(SAD)、血管性痴呆(VD)患者及健康老年人的PS-1基因第6号外显子进行检测，结果报道如下。     

MEF2A基因第11号外显子突变的检测及其基因结构分析

目的检测我国汉族人群中MEF2A基因第11号外显子区的突变,分析MEF2A特异性突变的基因结构和遗传学意义。方法用PER-SSCP和／或PCR产物直接测序法对536例冠状动脉粥样硬化性心脏病阳性病例、232例冠状动脉粥样硬化性心脏病阴性对照及232例健康体检者的MEF2A基因第11号外显子区进行突变检测,用质粒克隆测序法对各突变位点作进一步验证。结果在冠状动脉粥样硬化性心脏病阳性病例组发现一例MEF2A 21碱基的特异性突变。另外还发现二种罕见的突变类型。结论MEF2A基因第11号外显子区存在多种罕见的突变类型,基因结构分析显示MEF2A基因21碱基特异性突变有多种形成模式。     

石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5/6、7、9、10外显子基因改变的检测

目的研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5/6、7、9、10外显子基因的改变.方法用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术检测46例石蜡包埋胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中DPC4基因的缺失和突变.结果 5例胰腺癌未扩增出DPC4条带,DPC4基因第5/6、7、9、10外显子的纯合性缺失率为10.9%(5/46);1例胰腺癌可见异常泳动带,基因突变率为2.2%(1/46).结合以前实验,DPC4基因所有外显子的纯合性缺失率为39.1%(18/46),基因突变率为23.9%(11/46),总改变率为58.7%(27/46).27例有基因改变的胰腺癌除1例外均为中、低分化腺癌,中、低分化组与高分化组之间的差异有显著性(P<0.01).结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要的作用.DPC4基因改变与胰腺癌细胞分化程度密切相关.     

石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5／6、7、9、10外显子基因改变的检测

目的研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5／6、7、9、10外显子基因的改变。方法用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术检测46例石蜡包埋胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中DPC4基因的缺失和突变。结果 5例胰腺癌未扩增出DPC4条带,DPC4基因第75／6、7、9、10外显子的纯合性缺失率为10．9％(5／46)；1例胰腺癌可见异常泳动带,基因突变率为2．2％(1／46)。结合以前实验,DPC4基因所有外显子的纯合性缺失率为39．1％(18／46),基因突变率为23．9％(11／46),总改变率为58．7％(27／46)。27例有基因改变的胰腺癌除1例外均为中、低分化腺癌,中、低分化组与高分化组之间的差异有显著性(P<0．01)。结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要的作用。DPC4基因改变与胰腺癌细胞分化程度密切相关。     

中国人甘露糖结合蛋白基因第1外显子核苷酸序列的测定

目的：为了阐明中国人甘露糖结合蛋白（MBP）的基因突变对健康的影响和疾病的关系,须测定中国人MBP基因的第1外显子基因序列。方法：应用PCR产物直接经310型全自动遗传分析仪进行DNA序列分析。结果：测定了中国人甘露糖结合蛋白基因第1外显子核苷酸序列,检测到密码子54例的纯合和杂合的点突变,未检测到密码子52例和57例的突变。结论我们检测出中国人MBP基因第1外显子的核苷酸序列,密码子54基因的突变。     

石蜡切片研究H9N2亚型禽流感病毒的免疫原性

目的 用石蜡切片评估龠流感病毒A／Chicken／Guangdong／SS／94(H9N2)株的免疫原性，以获得免疫原性良好的疫苗候选株。方法 以A／CKcken／Guangdong／SS／94(H9N2)株为抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫1Od龄SPF鸡，免疫21d后，以该毒株静脉注射免疫组与非免疫对照组，定期剖杀试验鸡并取脑、心肌、肺、胰腺、肝、肾、脾、气管和法氏囊等组织用石蜡切片进行病理组织学检查。结果 两组试验鸡的的病理组织学变化有明显差异，免疫组试验鸡获得保护，而对照组病变明显。结论 A／CKcken／Guangdong／SS／94(H9N2)株的免疫原性良好，可作为制备油乳剂灭活疫苗的候选株。     

乳腺癌nm23基因第5外显子检测及其临床意义

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对４４例乳腺癌患者进行ｎｍ２３基因第５外显子检测,１１例发生突变（２５％）,将１１例突变患都分为两组,一组（６例）加大放疗、化疗剂量,另一组（５例）常规治疗。随访２年,前组６例中仅１例复发,后组５ 中３例复发,二者有显著差异。提示检测ｎｍ２３基因第５外显子对乳腺癌的降预后判断具有重要意义。     

E-选择素第2外显子G98T基因多态性与高血压病的相关性研究

目的 观察原发性高血压病(EH)患者E-选择素(E-selectin)基因第2外显子G98T多态性,并探讨高血压发病的遗传学机制。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测155例高血压患者和160例正常对照者E-selectin基因型,生化技术测定血脂水平。结果 E-selectin基因型GG、GT频率在高血压组和对照组分别为85.2％、14.8％和92.5％、7.5％;等位基因G、T频率在高血压组和对照组分别为92.6％、7.4％和96.3％、3.7％。基因型频率和等位基因频率在高血压组和对照组比较差异均有显著性(P<0.05)。结论 E-selectin第2外显子G98T基因多态性与高血压的发病有关性,T等位基因可能是高血压发病的危险因素之一。     

北京市汉族人群MEF2A基因第7号外显子突变的检测及其意义

目的 检测我国汉族人群中MEF2A基因第7号外显子的突变，探讨这一突变的临床意义。方法 用PCR-单链构象多态性（SSCP）和（或）PCR产物直接测序法对500例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者、157例经冠状动脉造影证实无冠状动脉堵塞者为非冠心病组及242例健康体检者的MEF2A基因第7号外显子进行基因突变的检测。结果 对参与研究的899例受试者MEF2A基因第7号外显子基因突变的检测结果表明，在MEF2A第7号外显子中未发现任何类型的基因突变。结论 MEF2A第7号外显子的突变可能不是我国汉族人群冠状动脉粥样硬化性心脏病的遗传易感因素。与国外研究比较，在MEF2A第7号外显子突变的临床意义上，我国汉族人群与白种人群间存在明显的地域和种族差异。     

抵抗素基因外显子4第1308G/A多态性与2型糖尿病相关性研究

目的研究抵抗素基因外显子4第1308的位点核苷酸G／A变异与武汉地区2型糖尿病和肥胖者发病风险的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测武汉地区汉族160例抵抗素基因外显子4第1308位点的G／A变异。结果2型糖尿病组和肥胖组的GG、从基因型及G／A等位基因频率与正常组比较,均有显著性差异（P〈0．05）。GG基因型携带者使个体患肥胖和糖尿病的危险性分别增加1．33倍和2．22倍,将G等位基因视为暴露因素,其使个体患肥胖以及糖尿病的危险性分别增加1．12倍和1．80倍。结论抵抗素基因外显子4第1308位点核苷酸多态性与2型糖尿病和肥胖的易感性相关,等位基因G可能是由肥胖致2型糖尿病的一个重要的相关因素。     

黑龙江省东部地区汉族人群PCSK9基因第1外显子多态性与脂代谢的相关性

目的 研究黑龙江省东部地区汉族人群前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9基因第1外显子多态性与脂代谢的相关性.方法 因心绞痛和(或)运动试验阳性及有冠脉管腔狭窄证据而需入院行冠状动脉造影者220例中,110例冠心病(CHD)者为病例组,110例非CHD者为对照组,检测PCSK9基因第1外显子基因多态性及血脂水平,并对基因多态性与血脂水平进行相关性分析.结果 共发现c.121C>G、c.299C>T、c.427-428insGCT、A53V、P56S和c.556A>G 6个突变位点,其中在A53V突变位点上发现CC和TC两种基因型,但未发现TT基因型.病例组和对照组各基因型间血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平差异具有统计学意义(P<0.05).病例组中TC基因型血清TG、TC和LDL-C水平均显著高于CC基因型(P<0.05);对照组中TC基因型血清TC水平显著高于CC基因型(P<0.05).结论 PCSK9基因第1外显子在黑龙江省东部地区汉族人群中存在多态性,且与CHD患者脂代谢有关.     

MICA基因第2、3和4外显子多态性与血清阴性脊柱关节病关联研究

目的：探讨MICA基因外显子2，3和4的多态性与血清阴性脊柱关节病（SpA)的发生是否存在关联。方法：采用地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术（PCR－SSOP），调查上海地区199例B27（＋）SpA患者MICA外显子2，3和4的多态性，结果：SpA病例组中MICA*007的频率比随机对照组显著升高（RR＝3．04，Pc＝0.000045），但比较B27（＋）病例组与B27（＋）正常对照组差异无显著性（P＞0．05），结论：MICA*007等位基因与SpA的发生可能无直接的关联，MICA＊007的频率在SpA病例组中显著升高可能由于和HLA－B27基因存在连锁不平衡所致。     

胰岛素受体基因第17外显子多态性与老年脑梗死的相关性

目的 探讨胰岛素受体（INSR）基因第17外显子1058位点多态性在老年脑梗死（CI）发生、发展中的作用。方法 采用PCR-限制性内切酶消化法检测150例老年CI患者（CI组）及80例健康查体者（对照组）胰岛素受体基因第17外显子的多态性。结果 CI组及CI组胰岛素抵抗（IR）者INSRT等位基因频率显著高于对照组,P〈0．01;CI组非胰岛素抵抗（NIR）者与对照组T等位基因频率的差别无显著性。结论 INSR基因17外显子多态性与CI的发生密切相关;INSR基因改变通过IR而对CI的发生发挥作用,而非直接导致CI。     

卵巢癌组织中肺癌抑癌基因1基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的探讨肺癌抑癌基因1(TSLC1)在卵巢癌中基因启动子甲基化状态及临床意义。方法应用甲基化特异性PCR检测TSLC1基因启动子在50例卵巢癌组织和10例正常卵巢组织中的甲基化状态并结合临床病理资料进行分析。结果在卵巢癌组织中TSLC1甲基化阳性率(36%,18/50),正常卵巢组织未出现TSLC1甲基化。TSLC1甲基化与肿瘤淋巴结转移与Silverberg分期密切相关(P0.05)。结论 TSLC1甲基化可能是参与卵巢癌发展的重要分子事件。     

胰岛素受体基因第8外显子多态性与原发性高血压病的关系

目的：探讨ＩＮＳＲ基因第８ 外显子ＮｓｉＩ多态性与原发性高血压（ＥＨ）的关系。方法：ＥＨ 患者（ｎ＝ １２０）和正常对照组（ｎ＝ ８６）进行血压、身高、体重及空腹血糖（Ｇｌｕ）、血总胆固醇（Ｔｃｈ）、甘油三脂（ＴＧ）浓度测定;用饱和盐析法常规提取外周血白细胞ＤＮＡ,采用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶方法检测基因多态性。结果：高血压组除收缩压、舒张压显著高于对照组外,其它临床指标如体重指数、空腹血糖及血脂水平两组间无显著差异;ＩＮＳＲ基因Ｎ２ 等位基因频率在ＥＨ组高于正常对照组（０．２５４ｖｓ０．１６９, Ｐ＜ ０．０５）。结论：ＩＮＳＲ基因ＮｓｉＩ多态性与中国人高血压病有关,Ｎ２ 等位基因可能是中国人高血压病的一个易感基因     

2型糖尿病与β细胞素基因外显子1 Cys7Gly多态性的相关性研究

目的探讨β细胞素基因外显子1Cys7Gly多态性与2型糖尿病（T2DM）的关系。方法采用聚合酶链反应,限制性片段长度多态法检测天津地区211名T2DM患者和102名正常对照者β细胞素基因外显子1基因型,比较两组G等位基因频率差异。结果在BMI≥24kg/m^2受试者,对照组G等位基因频率为7.3%,T2DM组为0.4%,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论β细胞素基因外显子1Cys7Gly多态性可能与部分国人T2DM发生相关,TG基因型在T2DM发病中可能具有一定保护作用。     

TIM-1外显子4基因多态性与类风湿关节炎关系的研究

目的探讨湖北地区汉族人群T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)外显子4基因多态性与类风湿关节炎(RA)之间的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)法检测86例RA患者和1130名正常对照的TIM-1外显子4插入,缺失多态性,同时检测类风湿因子(RF)、抗CCP抗体和抗角蛋白抗体(AKA)三种自身抗体。结果正常对照组TIM-1外显子4 del/del、ins/del和ins/ins基因型频率分别为0．650、0．280、0．070；RA组TIM-1外显子4 del/del、ins/del和ins/ins基因型频率分别为0．616、0．302、0．082,与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0．05)。RA组RF、抗CCP抗体和AKA检测阳性率分别为79．08%、73．26%和53．49%,与对照组比较均有统计学意义(P＜0．01)。通过统计分析发现RA组中RF、抗CCP抗体检测阳性率与TIM-1外显子4基因分型均无相关性(P＞0．05)；AKA检测阳性率与TIM-1外显子4基因分型显著相关(P＜0．01)。结论湖北地区汉族人群TIM-1外显子4插入/缺失多态性与RA无相关性,TIM-1外显子4基因分型可能影响RA患者抗角蛋白抗体的表达。