早期反应基因在宫颈癌中表达及其与人乳头瘤病毒感染的关系

目的探讨早期反应基因(Iex-1)在宫颈癌中表达及与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法病理科留存的宫颈病变组织石蜡包块61份,免疫组化法检测宫颈良性病变、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中Iex-1表达,分析Iex-1表达与宫颈癌临床病理特征的关系。培养3种不同HPV感染情况的宫颈癌细胞株C-33A(HPV-)、SIHA(HPV16+)、HELA(HPV18+),实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测各宫颈癌细胞株中Iex-1 mRNA和蛋白表达;使用siRNA靶向沉默SIHA细胞中E6后检测Iex-1 mRNA和蛋白表达,分析其与HPV感染的关系。结果宫颈良性病变、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中Iex-1表达阳性率依次下降,差异有统计学意义(P<0.01)。分化程度为G1~G2的宫颈癌患者Iex-1阳性率明显高于分化程度为G3的患者(P<0.05);无宫旁浸润、有淋巴结转移的宫颈癌患者Iex-1阳性率明显高于宫旁浸润、无淋巴结转移的患者(P<0.05)。C-33A细胞株Iex-1 mRNA表达水平明显高于SIHA、HELA细胞株(P<0.01);C-33A细胞株Iex-1蛋白表达水平明显高于SIHA、HELA细胞株(P<0.01)。SIHA细胞株和HELA细胞株Iex-1 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组SIHA细胞中E6 mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);干扰组SIHA细胞中Iex-1 mRNA和蛋白表达水平明显高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组E6 mRNA和蛋白、Iex-1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论Iex-1在宫颈癌组织中低表达,且表达水平与宫颈癌病变程度呈负相关;HPV可能经E6蛋白参与调控的信号通路下调了Iex-1表达,促进宫颈癌发展与转移;首次提出了抑制Iex-1的促凋亡作用可能为HPV诱发宫颈癌的新通路。     

鼻咽癌组织中TRPC1表达及其对鼻咽癌细胞生物学特性的影响

目的探讨鼻咽癌组织中瞬时受时电位(TRPC)1的表达情况及其对鼻咽癌细胞生物学特性的影响。方法选择鼻咽癌组织标本80例和鼻咽慢性炎症标本80例;鼻咽癌C666-1细胞分为siRNA TRPC1组、阴性对照组、空白对照组。采用免疫组织化学法测定组织中TRPC1蛋白的表达,采用Western印迹检测细胞中TRPC1蛋白的表达,采用RT-PCR测定细胞中TRPC1 mRNA的表达,采用Transwell实验测定细胞的侵袭能力。结果鼻咽癌组TRPC1蛋白阳性率高于鼻咽慢性炎症组(P<0.05)。si-TRPC1组C666-1细胞中TRPC1蛋白和TRPC1 mRNA的表达量均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。第3天和第5天si-TRPC1组C666-1细胞OD值低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。si-TRPC1组C666-1细胞G1期比例高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),S期比例低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。si-TRPC1组C666-1细胞早期凋亡比例高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),C666-1细胞侵袭力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论鼻咽癌组织中TRPC1蛋白呈高表达,沉默TRPC1基因后鼻咽癌细胞中TRPC1水平下降,TRPC1能够促进鼻咽癌细胞的增殖和侵袭能力,抑制鼻咽癌细胞凋亡。     

siRNA靶向沉默hTERT基因对宫颈癌Caski细胞特性的影响

目的研究siRNA靶向沉默h TERT基因后对宫颈癌Caski细胞特性的影响。方法设计、合成特异性针对h TERT mRNA的siRNA,将其克隆入p Genesil-1.1质粒中,重组成h TERT mRNA-siRNA的表达载体,导致目的基因沉默,是由电转染入宫颈癌Caski细胞,从而产生RNA干扰作用。应用Western印迹法及RT-PCR法检测沉默h TERT基因后对于宫颈癌Caski细胞的蛋白及mRNA的表达情况;检测细胞周期运用流式细胞仪;沉默h TERT基因后宫颈癌Caski细胞的增殖能力可通过CCK-8增殖实验检测。沉默h TERT基因后宫颈癌Caski细胞的侵袭能力可通过小室侵袭实验检测。结果 h TERT基因沉默48 h以后,与空白组及未转染组相比,转染组宫颈癌Caski细胞的蛋白及mRNA表达出现明显降低(P<0.05);细胞周期的检测结果显示S期的细胞数目明显减低,转染组的宫颈癌Caski细胞停留于G0/G1周期,空白组、转染组及未转染组相比差异显著(P<0.05);宫颈癌Caski细胞在转染组的增殖过程中被明显抑制(P<0.05);转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P<0.05)。结论 Si RNA靶向沉默h TERT基因电转染后,使宫颈癌Caski细胞的增殖和迁移能力得到抑制,一定程度上改善了宫颈癌患者的预后。     

靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA(siRNA),探讨瘦素对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组(A549)5组细胞,分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况.噻唑蓝(MTT)比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6 d的生长情况,绘制生长曲线,比较各组细胞增殖差异.流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响.RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平.结果 siRNA-a细胞镜下形态基本正常,5d后荧光效率仍较高,感染稳定,但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢.siRNA-b细胞感染48 h后,镜下见细胞肿胀、变形,空泡出现,5d后见多量细胞碎片,凋亡小体形成,呈现凋亡状态,11d后可见细胞碎片,已近完全凋亡.MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢(P＜0.01).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果:siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组.RT-PCR和Western bloting结果 显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调.结论 慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达,从而抑制A549细胞增殖,促进其凋亡.由此可见,瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段.     

Fgl2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨纤维蛋白原样蛋白(Fgl)2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法空白试剂、阴性病毒和Fgl2 siRNA慢病毒感染H9C2心肌细胞,分别为空白对照组、阴性对照组、Fgl2-siRNA组,48 h后收集细胞,Western印迹检测各组细胞中Fgl2的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹检测酶切caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果空白对照组和阴性对照组Fgl2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),Fgl2-siRNA组Fgl2蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.01);与空白对照组及阴性对照组比较,Fgl2-siRNA组H9C2细胞凋亡明显降低,酶切caspase3蛋白表达显著下调,Notch1、Hes1蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论沉默Fgl2基因的表达可有效抑制H9C2心肌细胞凋亡,其机制与下调酶切caspase3蛋白表达、激活Notch1信号通路有关。     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响,以进一步探讨足细胞凋亡的分子机制。方法将条件永生性小鼠足细胞株随机分为阴性转染组、5μL siRNA组、10μL siRNA组、15μL siRNA组。经诱导分化成熟,在siRNA干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测足细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。将10μL siRNA组分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组三个亚组,用Western bolt检测podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果与阴性转染组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μL的siRNA组凋亡率明显增高。足细胞COX-2基因敲低组podocin蛋白表达显著低于足细胞阴性转染对照组(P<0.05)。与足细胞阴性转染对照组相比,足细胞COX-2基因敲低组BAX蛋白表达显著上调,而BCL-X1蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2基因表达可以导致足细胞凋亡,且随着siRNA干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加。在干扰浓度为10μL时,足细胞podocin蛋白的表达下调。BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

核糖核酸干扰沉默生长抑制因子1基因表达对胃腺癌AGS细胞凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰沉默生长抑制因子1(ING1)基因表达对胃腺癌AGS细胞凋亡的影响。方法人胃腺癌细胞株AGS经常规培养后分为空白对照组、阴性对照组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)序列]、siRNA组（转染特异性ING1 siRNA序列）。应用免疫荧光、定量PCR和免疫印迹方法检测转染后不同时间的ING1基因表达沉默效果。应用流式细胞技术检测ING1基因表达沉默对AGS细胞凋亡的影响。结果ING1主要在AGS细胞胞质中表达。在荧光定量PCR技术检测中将空白对照组的ING1基因表达量设为1,则转染后24和40 h阴性对照组的ING1基因相对表达量分别为0.88±0.16和0.92±0.13,siRNA组ING1基因相对表达量分别为0.38±0.09和0.17±0.06。空白对照组和阴性对照组比较,P值分别=0.78和0.82。空白对照组和siRNA组比较,P值均=0.01。阴性对照组和siRNA组比较,P值分别=0.02和0.01。免疫印迹技术检测结果显示,转染后40 h AGS细胞中ING1蛋白表达水平明显下调。空白对照组AGS细胞凋亡率为11.06％±0.97％,阴性对照组、siRNA组转染40 h后AGS细胞凋亡率为11.82％±0.69％和 6.70％±0.41％。空白对照组与siRNA组比较P=0.024。空白对照组与阴性对照组比较P=0.76。阴性对照组与siRNA组比较P=0.019。结论ING1在人胃癌细胞凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胃癌基因治疗的新靶点。     

半乳糖凝集素1表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制

目的观察半乳糖凝集素1(Galectin-1)表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制。方法利用脂质体2000转染食管鳞癌EC9706细胞。细胞分为3组,即未处理组、对照siRNA组和Galectin-1 siRNA组。采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学检测各组食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;运用流式细胞术分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响,采用Boyden小室分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞迁移能力的影响。采用半定量RT-PCR和Western印迹方法检测Galectin-1表达下调对细胞周期相关因子(cdk2、p27和p21)以及细胞迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)-14 mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 Galectin-1 siRNA组与未处理组和对照siRNA组相比,Galectin-1 siRNA组中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达均显著下调(P0.05);细胞周期在G0/G1期的细胞数呈显著升高(P0.05);细胞的穿膜数明显下降。Galectin-1 siRNA组中p27和p21 mRNA和蛋白的表达均显著高于未处理组和对照siRNA组(均P0.05),而cdk2和MMP-14 mRNA和蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组(均P0.05)。结论 Galectin-1 siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;Galectin-1表达下调能明显抑制食管癌EC9706细胞周期静止在G0/G1期,这可能与p21和p27表达的升高及cdk2表达的下调密切相关;并能降低食管鳞癌EC9706细胞的迁移,这可能与MMP-14表达的下调有关。     

PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca 109中的功能

目的:探讨PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca109中的作用.方法:用脂质体介导siRNA瞬时转染Ecal09细胞,转染细胞分为3组:空白对照组(正常培养的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列的siRNA)及实验组(转染PIK3CA-siRNA).运用Western blot技术检测PIK3CA基因干扰后蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和细胞划痕实验检测PIK3CA干扰后Eca109细胞增殖和迁移能力的改变;流式细胞仪检测PIK3CA干扰后细胞周期和凋亡率的变化.结果:干扰PIK3CA基因表达后,其蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组显著性降低(P0.05).MTT实验和划痕实验显示干扰PIK3CA的表达后,Eca109细胞增殖受到显著性抑制(P0.05),迁移能力显著性降低(P0.05).流式细胞仪检测下调P I K3C A的表达后细胞周期阻滞在细胞分裂的S期(P0.05),且使细胞凋亡率显著性增加(P0.05).结论:PIK3CA基因能够促进Eca109细胞的增殖和迁移能力,并具有抗凋亡作用.PIK3CA基因有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.     

信号传导及转录激活因子3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及基因沉默对甲状腺癌细胞的影响

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞的影响。方法将FTC-133细胞分为siRNA STAT3组、阴性对照组和空白对照组,RT-PCR测定FTC-133细胞STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 mRNA的表达,Western印迹测定甲状腺癌FTC-133细胞STAT3蛋白的表达,MTT法测定甲状腺癌FTC-133细胞的生长,Transwell法检测FTC-133细胞的迁移能力。结果老年甲状腺癌组织中STAT3阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中STAT3蛋白的表达量低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中STAT3、MMP2、MMP9 mRNA的表达量低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组第1、2、3天的抑制率均明显高于阴性对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中穿膜细胞数低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论老年甲状腺癌组织中STAT3呈高表达,沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有抑制作用。     

抑制干扰素诱导蛋白16表达对人脑血管外膜成纤维细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的探讨抑制干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达后对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAF)增殖、凋亡与迁移的影响及其可能机制。方法培养HBVAF分3组,未经处理的HBVAF作为空白对照组,转染非特异性小干扰RNA(siRNA)的HBVAF作为阴性对照组,转染IFI16siRNA的HBVAF作为IFI16siRNA组。应用蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定细胞中IFI16、p53、p21蛋白和mRNA表达水平。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell法测定细胞迁移情况。结果与阴性对照组比较,转染IFI16siRNA后,HBVAF中IFI16、p53及p21蛋白和mRNA表达水平下调,IFI16siRNA组MTT吸光度值增高(0.70±0.01比0.65±0.01,P0.05),IFI16siRNA组、阴性对照组与空白对照组之间在细胞迁移数目与凋亡比例上差异无统计学意义。结论抑制IFI16表达可促进HBVAF增殖,其机制可能部分与抑制p53及p21表达有关。     

siRNA沉默Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响

目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默Livin基因在胃癌BGC-823细胞中的表达, 并探讨Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计两条针对Livin基因的siRNA:Livin-sh-1和Livin-sh-2, 以此构建相应的表达载体并分别转染至对数生长期胃癌BGC-823细胞, 经G418筛选后分别采用半定量RTPCR检测不同siRNA实验分组细胞BGC-823mRNA水平变化, 四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖、流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组Livinα/β mRNA表达差别无显著性; 但转染siRNA组Livin α/β mRNA表达显著低于空白对照组和空siRNA载体组(Livin α:0.11±0.07 vs 0.37±0.10, 0.34±0.08; Livin β:0.13±0.04 vs 0.43±0.09, 0.45±0.11, 均P<0.05). 空白对照组与空siRNA载体组相比, 24、48、96 h和1 wk时细胞生长未受影响; 而siRNA组在转染后24 h和48 h细胞生长未受影响, 但在96 h和1 wk时则被明显抑制( P<0.01). 转染siRNA组的细胞的凋亡率与空白对照组和转染空siRNA载体组相比显著增加(14.85%±1.35% vs 4.51%±0.36%, 6.13%±0.71%, 均P<0.05).结论:siRNA沉默Livin基因能抑制胃癌细胞的生长, 促进胃癌细胞的凋亡, Livin基因有可能成为胃癌治疗的新靶点.     

RNA干扰survivin基因靶向治疗大肠癌

目的:通过RNA干扰观察其对suivivin及PTEN在大肠腺癌中表达的差异及对大肠腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:将survivin siRNA用脂质体2000转染SW620细胞,以荧光定量PCR仪检测survivin和PTEN mRNA的变化,Western蛋白印迹法半定量检测两者的蛋白变化,同时用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期分布的变化.结果:结肠腺癌SW620中免疫组化染色显示survivin呈阳性表达.siRNA作用于SW620细胞,survivin mRNA及蛋白的表达随着作用时间的延长而下调,PTEN mRNA及蛋白的表达随着作用时间的延长而呈现递增趋势,在12 h,24 h,48 h,survivin mRNA分别下调为对照组的75%,93.75%,97.8%,PTEN mRNA较对照组上调41%,100%,128%,均与对照组有显著性差异.MTT法检测siRNA干扰对细胞增殖的影响呈现出时间依赖性,与对照组相比有显著性差异(P<0.05),且作用各时间点之间比较亦有显著性差异(P<0.05).流式细胞仪检测细胞的凋亡率随时间的延长而增加.结论:survivin siRNA作用于结肠腺癌SW620可使survivin mRNA和蛋白的表达下调,同时使PTEN的表达上调,两者呈负相关,同时抑制细胞的增殖及促进细胞发生凋亡.     

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine~(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。     

siRNA干扰沉默EZH2基因对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的探讨小分子RNA(siRNA)干扰沉默靶基因EZH2对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法取对数生长期的HepG2细胞,分为转染组、阴性对照组及空白对照组,转染组与阴性对照组按照Lipofectamine2000使用说明分别瞬时转染EZH2 siRNA、荧光物FAM,对照组不予任何干预。分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期;qRealtime-PCR和Western blot方法检测EZH2 mRNA和蛋白表达。结果与阴性对照组相比,转染组细胞增殖明显受抑;与阴性对照组及空白对照组比较,转染组细胞凋亡率明显升高,G0/G1期细胞明显增多,S期明显细胞减少;转染组EZH2 mRNA和蛋白表达明显下调,P均<0.05。结论 EZH2 siRNA可抑制人肝癌细胞增殖活性,是一种潜在基因治疗新方法。     

沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC-9706细胞中MMP-9基因表达的影响

目的:探讨在食管鳞癌EC-9706细胞中沉默CXCR4基因对MMP-9基因表达的影响,为阐明CXCR4基因在食管鳞癌侵袭转移中的作用提供实验依据.方法:化学合成2条靶向CXCR4基因的siRNA1和siRNA2,同时设立荧光标记阴性对照和空白对照.脂质体法转染入EC-9706细胞,荧光显微镜下观察转染效率.转染48h后,半定量RT-PCR检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因蛋白表达的变化,侵袭小室检测各组细胞穿膜细胞数的变化,MTT检测各组细胞的A值.结果:与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞CXCR4mRNA和蛋白的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);同时与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达同样明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞穿膜细胞数与阴性对照和空白对照相比明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示转染CXCR4siRNA1和siR...     

靶向UCP-2基因siRNA慢病毒转染对胰腺腺泡细胞AR42J坏死、凋亡的影响及机制探讨

目的观察靶向解偶联蛋白2(UCP-2)基因小干扰RNA(siRNA)慢病毒转染对胰腺腺泡细胞AR42J坏死、凋亡的影响,并探讨其相关机制。方法构建靶向UCP-2基因siRNA慢病毒载体,转染AR42J细胞(实验组),并设立阴性对照组及空白对照组。荧光显微镜镜检确定感染效率,实时定量PCR检测各组细胞的UCP-2 mRNA。以1×108mol/L的蛙皮素刺激AR42J细胞,采用Annexin V/PI双标流式细胞仪检测蛙皮素刺激后不同时间点AR42J细胞的坏死率和凋亡率,同时检测细胞内的ATP、活性氧簇(ROS)。结果成功构建了滴度为5×108TU/mL的UCP-2基因siRNA慢病毒载体;实验组细胞UCP-2 mRNA表达明显降低,各时间点AR42J细胞凋亡率及其ROS、ATP水平显著高于阴性对照组(P均<0.05),细胞坏死率则显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论靶向UCP-2基因siRNA慢病毒转染可抑制AR42J细胞的UCP-2基因表达,促进细胞凋亡,抑制细胞坏死,其作用机制与其增加AR42J细胞内ROS、ATP表达有关。     

siRNA下调S100A4基因表达对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨应用小干扰RNA(siRNA)下调人胶质瘤U251细胞中S100A4基因表达和对U251细胞增殖及凋亡的影响。方法脂质体法U251细胞转染化学合成的针对S100A4基因的特异性siRNA,RT-PCR和Western印迹方法分别检测S100A4 mRNA和蛋白表达水平。分别应用CCK-8法、流式细胞术和酶标仪检测下调S100A4表达对U251细胞增殖、凋亡能力及细胞内含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3活性的影响。结果与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA转染48 h后,siRNA-S100A4组细胞中S100A4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),U251细胞的增殖受到抑制,细胞凋亡率明显增加(P<0.05),且沉默S100A4表达可以上调caspase-3活性(P<0.01)。结论 S100A4 siRNA能有效下调S100A4基因的表达,抑制U251细胞的增殖,诱导细胞凋亡,参与脑胶质瘤的生物学行为。     

siRNA和环氧合酶-2选择性抑制剂对结肠腺癌细胞survivin表达的影响

近年生存素（survivin）在结直肠腺癌发病机制中的作用备受关注，环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398在小干扰RNA（siRNA）静默survivin后对结直肠腺癌的影响目前鲜有报道。目的：研究survivin-siRNA和NS-398对结肠腺癌细胞株SW620的作用，为防治结直肠腺癌寻求新途径。方法：将SW620细胞分为空白组、NS-398组、siRNA干扰组、siRNA阴性对照组和联合组，分别以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测survivinmRNA和蛋白表达，分别以甲基噻唑基四唑（MTY）法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况。结果：与siRNA阴性对照组相比，siRNA干扰组和NS-398组survivin mRNA和蛋白表达显著下调，SW620细胞抑制率和凋亡率显著升高，作用均呈时间依赖性（P〈0．01）；两者联合应用的作用进一步增强（P〈0．01）。结论：survivin-siRNA和NS-398均可使SW620细胞survivin mRNA和蛋白表达下调，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，两者联用的作用进一步增强。     

表皮型脂肪酸结合蛋白-5基因沉默对人卵巢癌细胞A2780增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的探讨通过siRNA干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白(FABP)-5基因表达对人卵巢癌A2780细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法以人卵巢癌A2780细胞为研究对象,根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,实施瞬时转染卵巢癌A2780细胞。将人卵巢癌A2780细胞分为FABP-5 siRNA组,阴性对照组、空白对照组。用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达。细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞技术(FCM)检测各组细胞周期和凋亡的变化情况,划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价沉默FABP-5基因对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western印迹法显示,FABP-5 siRNA组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白相对表达水平均显著降低。FABP-5 siRNA组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5 siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),迁移、侵袭力显著下降(P0.05)。结论特异性干扰FABP-5基因表达可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移和侵袭能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,FABP-5的siRNA序列可能成为治疗宫颈癌的有效靶点。