过表达SIRT1对口腔癌细胞增殖、免疫应答及氧化应激的影响

目的 探讨过表达沉默信息调节因子(SITR)1对口腔癌细胞增殖、免疫反应和氧化应激的影响。方法 构建pcDNA SIRT1过表达质粒并转染CAL27细胞。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测过表达效率，克隆形成实验检测细胞生长，Western印迹检测裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3/caspase3、p21和p-P65/P65蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)-6和IL-10含量，试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量水平，免疫荧光检测活性氧(ROS)含量。结果 与对照组相比，SIRT1过表达组SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05),克隆形成率显著减少，Cleaved caspase3/caspase3和p21蛋白表达显著上调(P<0.05),iNOS和IL-6含量显著降低，IL-10含量显著升高，p-P65/P65蛋白表达水平明显下调，SOD含量水平显著降低，MDA、LD...     

SIRT1对低氧诱导肺动脉内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨沉默信息调节因子1相关酶(SIRT1)对低氧诱导肺动脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法 体外培养人肺动脉内皮细胞，将细胞分为8组：对照组、低氧组、SRT1720(SIRT1激动剂)组、EX-527(SIRT1抑制剂)组、低氧+SRT1720组、低氧+EX-527组、低氧+TEMPOL(mitoROS抑制剂)组和低氧+NAC(ROS抑制剂)组。正常组细胞置于正常细胞培养箱中培养，低氧模型细胞置于3%O₂,5%CO₂低氧舱中处理24 h，其余组分别予SRT1720、EX-527、TEMPOL和NAC处理24 h后低氧处理。DHE和MitoSOX染色法检测细胞内及线粒体活性氧水平，试剂盒检测细胞MDA水平，免疫荧光法检测细胞沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、核苷酸结合寡聚化片段结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、发动蛋白相关GTP酶(Drp1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)水平，JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位水平，ELISA法检测细胞炎症因子IL-1β和IL-18水平，免疫印...     

栀子苷抑制高糖诱导的乳鼠心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞的表型转化

目的探讨栀子苷(GE)对高糖诱导过程中体外培养的乳鼠心脏成纤维细胞(CF)表型转化及胶原合成的影响及机制。方法提取新生大鼠原代CF,给予高糖刺激(葡萄糖浓度为33.3 mmol/L)和GE干预,24 h后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CF细胞内Ⅰ型胶原(ColⅠ)、ColⅢ及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达水平;试剂盒检测氧化应激相关指标,包括超氧化物歧化酶(SOD)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)活性及丙二醛(MDA)的产量;Western blot检测转化生长因子β(TGF-β)、乙酰化的Smad3(ac-Smad3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白质的表达水平。给予SIRT1抑制剂EX-527后,采用免疫荧光共染SIRT1及α-SMA。再次检测氧化应激及ac-Smad3信号通路相关蛋白的表达。采用SPSS 22.0统计软件进行统计学分析。结果不同浓度的GE处理高糖刺激后的大鼠CF 24 h后,ColⅠ、Ⅲ及CTGF mRNA表达有所降低,且随GE浓度的增加,抑制作用增强,在1～100μmol/L之间呈现浓度依赖性。GE可明显降低高糖诱导过程中NADPH的活性及MDA的含量,增强SOD活性。Western blot结果显示,高糖诱导下,TGF-β、ac-Smad3及α-SMA水平明显升高,而GE能明显抑制这3种蛋白的升高。同时,GE明显逆转了高糖条件下SIRT1的下调。免疫荧光结果显示,应用SIRT1抑制剂EX-527后,GE对高糖条件下α-SMA及氧化应激的抑制作用消失。结论 GE能够抑制高糖诱导的大鼠CF表型转化及胶原合成,其机制可能与SIRT1介导的TGF-β/ac-Smad3信号通路及氧化应激有关。     

二陈汤合桃红四物汤含药血清对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的观察二陈汤合桃红四物汤含药血清对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护作用并探讨其可能的机制。方法培养EA.hy926细胞,随机分为对照组、ox-LDL组、干预组、抑制剂组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P0.01),细胞内MDA含量显著升高(P0.01),SOD活性明显降低(P0.05),上清液中NO水平显著降低(P0.01),活性氧(ROS)含量和细胞凋亡率明显升高,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01)。与ox-LDL组比较,干预组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著降低(P0.01),细胞内MDA含量显著降低(P0.01),SOD活性明显升高(P0.05),上清液中NO水平显著升高(P0.01),ROS含量和细胞凋亡率明显降低,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著升高(P 0.01)。与干预组比较,抑制剂组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P0.01),细胞内MDA含量显著升高(P0.01)、SOD活性明显降低(P0.05),上清液中NO水平明显降低(P0.05),细胞内ROS含量升高,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01)。结论二陈汤合桃红四物汤含药血清能有效保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤,其机制可能与激活PI3K/AKT/eNOS信号通路有关。     

慢性阻塞性肺疾病患者SIRT1表达与氧化应激的相关性研究

目的检测慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者外周血单个核细胞(PBMC)中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT-1)蛋白表达和血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,探讨SIRT-1和氧化应激的相关性。方法选择慢阻肺患者30例,分为慢阻肺低风险组和慢阻肺高风险组,每组各15例,并与20名健康非吸烟者(对照组)做比较。采用Western blot法检测3组研究对象PBMC中SIRT-1蛋白表达,同时测定血清MDA、SOD水平,分析SIRT-1蛋白表达和氧化应激相关性。结果与对照组相比,慢阻肺组患者PBMC中SIRT1蛋白表达显著降低;与慢阻肺低风险组相比,慢阻肺高风险组SIRT1蛋白表达进一步降低(P均0.05);慢阻肺血清MDA升高,SOD降低,在慢阻肺高风险组尤为明显(P均0.05);Pearson直线相关法分析SIRT-1蛋白表达水平与血清MDA呈显著负相关(r=-0.687,P0.05),与SOD呈正相关(r=0.471,P0.05)。结论慢阻肺患者PBMC中SIRT1蛋白表达显著降低,与氧化应激密切相关,提示SIRT1在慢阻肺发病过程中具有重要作用。     

紫檀芪减轻人肾小管上皮细胞高糖缺氧复氧损伤及其作用机制的研究

目的探究紫檀芪(PTE)对人肾小管上皮细胞(HK-2)高糖缺氧复氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法随机将HK-2细胞分为低糖缺氧复氧组(LR)、高糖缺氧复氧组(HR)、高糖缺氧复氧+PTE组(HR+P)、高糖缺氧复氧组+PTE+沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂组(HR+P+EX)。缺氧复氧结束后采用CCK-8试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞活性,超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性及MDA含量;活性氧簇(ROS)染色检测细胞内ROS含量;Western blot检测HK-2细胞SIRT1、Beclin1、泛素结合蛋白(SQSTM1/p62)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达。结果与LR组比较,HR组LDH、MDA及ROS染色荧光强度增加,CCK-8及SOD降低,SQSTM1/p62表达上调(P0. 05),SIRT1、Beclin1、LC3B表达降低(P0. 05)。与HR组比较,HR+P组CCK-8和SOD增加,LDH、MDA及ROS荧光强度下降;SIRT1、Beclin1、LC3B表达上调(P0. 05),SQSTM1/p62表达下调(P0. 05)。与HR+P组比较,HR+P+EX组LDH、MDA及ROS染色荧光强度增加,CCK-8及SOD降低,SQSTM1/p62表达上调(P0. 05),SIRT1、Beclin1、LC3B表达降低(P0. 05)。结论 PTE通过促进HK-2细胞SIRT1表达,促进自噬的恢复,减轻高糖缺氧复氧引起的损伤。     

黄芪多糖对2型糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激水平及SIRT3表达的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对2型糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激水平以及去乙酰化酶(SIRT)3表达的影响。方法50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和APS低、中、高剂量组,每组10只。对照组给予普通饮食并注射等体积无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,模型组喂以高糖高脂饲料并给予链脲佐菌素溶液。根据禁食8 h后空腹血糖水平和口服糖耐量试验结果判断造模是否成功。APS低、中、高剂量组在模型制造成功后分别给予100、200、400 mg·kg~(-1)·d~(-1)三种不同剂量APS。给药8 w后测定各组血糖水平、体重变化及空腹胰岛素(FINS)水平,大鼠肌肉中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH),活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量PCR检测SIRT3 mRNA转录水平,Western印迹法检测SIRT3蛋白表达。结果糖尿病病情方面,模型组血糖和FINS较对照组显著升高(P0.05),体重显著下降(P0.05),APS处理组血糖和FINS均较模型组显著下降(P0.05)。氧化应激方面,模型组中GSH、SOD水平较对照组显著降低(P0.05),同时ROS、MDA水平较对照组显著升高(P0.05)。APS处理组GSH、SOD水平较模型组显著升高(P0.05),呈剂量效应关系;高剂量组ROS、MDA水平较模型组显著降低(P0.05)。模型组SIRT3转录和表达水平均较对照组显著下降(P0.05),APS处理后该蛋白转录和表达水平较模型组显著上升(P0.05)。结论 APS处理可以显著降低大鼠体内氧化应激水平,缓解糖尿病的发展,这可能与促进肌肉中SIRT3转录和表达介导有关。     

吴茱萸次碱对氧化应激诱导血管平滑肌细胞增殖和一氧化氮合酶的影响

目的观察氧化应激对吴茱萸次碱作用血管平滑肌细胞增殖和一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法血管平滑肌细胞分空白组、二甲基亚砜组、药物A组(吴茱萸次碱0.4μmol/L)、药物B组(吴茱萸次碱1μmol/L)、药物C组(吴茱萸次碱4μmol/L),后4组药物刺激2h后,加入过氧化氢诱导氧化应激损伤,24h后检测细胞增殖率、活性氧、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、内皮型NOS(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)mRNA和蛋白表达。结果与空白组比较,二甲基亚砜组细胞增殖率明显升高[(104.48±4.89)%vs(94.58±1.87)%,P0.05],活性氧和丙二醛明显升高,SOD明显下降[(82.55±17.31)U/mg vs(111.76±18.25)U/mg,P0.05]。与二甲基亚砜组比较,药物A组、药物B组、药物C组细胞增殖率、活性氧和丙二醛明显下降,药物B组、药物C组SOD明显升高(P0.05);药物A组、药物B组、药物C组iNOS mRNA和蛋白表达明显下降,eNOS mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。结论吴茱萸次碱在氧化应激状态下能抑制平滑肌细胞增殖、抗氧化、维持NOS相对稳定。     

Diplacone通过抑制氧化应激作用及NF-κB信号通路活性降低Hcy诱导的血管内皮细胞损伤

目的采用高同型半胱氨酸血症(HHcy)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,通过Diplacone预处理,在之前实验的基础上进一步探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用机制。方法以HUVEC为研究对象,经过不同浓度的Diplacone预孵育2 h后,加入2 mmol/L同型半胱氨酸(Hcy)继续处理12 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;通过检测活性氧(ROS)细胞比率和抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及MDA含量的变化反应细胞氧化应激水平。Western blot和qRTPCR检测核因子κB(NF-κB)蛋白和mRNA表达水平的变化。结果与对照组比较,2 mmol/L Hcy模型组细胞凋亡率显著增加,ROS细胞比率和MDA含量显著升高,抗氧化指标SOD、GSH-Px的活性显著降低,NF-κB的蛋白和mRNA表达水平逐渐升高。与2 mmol/L Hcy模型组比较,0.1～10μmol/L Diplacone预处理后细胞凋亡率逐渐降低;氧化应激指标ROS细胞比率和MDA含量降低,抗氧化指标SOD、GSH-Px的活性增加; NF-κB的蛋白和mRNA表达水平逐渐降低。结论 Diplacone具有抑制Hcy诱导的HUVEC内皮损伤的作用,且作用机制可能是通过降低氧化应激作用和抑制NF-κB信号通路活性而降低细胞凋亡率,抑制细胞凋亡。     

miR-145抑制NF-κB p65表达促进ROS产生诱导卵巢癌细胞凋亡的机制

目的探讨微小RNA-145(miR-145)诱导卵巢癌细胞凋亡的潜在作用机制。方法收集卵巢癌临床组织样本,采用RT-qPCR法检测miR-145表达。体外培养OVCAR3人卵巢癌细胞,使用活性氧(ROS)试剂盒、脂质氧化产物丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、流式细胞仪、Western印迹检测细胞中ROS、MDA、SOD水平,细胞凋亡和B-淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bax、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3蛋白表达。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western印迹法验证miR-145和核因子(NF)-κB p65的靶向关系。抑制或激活NF-κB信号通路,检测细胞中ROS、MDA、SOD水平和细胞凋亡。结果 miR-145在卵巢癌组织中的表达低于显著癌旁组织(P0.05)。在OVCAR3细胞中过表达miR-145,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著增加(P0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.05),Caspase-3蛋白表达显著上调(P0.05)。miR-145可靶向调控NF-κB p65蛋白表达。抑制NF-κB信号通路,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05);细胞凋亡率显著增大(P0.05);激活NF-κB信号通路可减弱miR-145对OVCAR3细胞凋亡的诱导作用(P0.05)。结论 miR-145能够通过抑制NF-κB信号通路,上调ROS水平从而诱导卵巢癌细胞凋亡。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.