丹参酮ⅡA诱导PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究丹参酮ⅡA诱导PC-3人前列腺癌细胞凋亡的细胞周期调控机制。方法 PC-3人前列腺癌细胞与不同浓度的丹参酮ⅡA共同培养48 h后,MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;检测细胞周期调控因子CyclinD1和CDK4的表达。结果与对照组相比,0.25、0.5、1 mg/L丹参酮ⅡA组G0/G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少(P<0.01);CyclinD1和CDK4的表达量均随丹参酮ⅡA剂量增加而减少(P<0.05,P<0.01)。结论丹参酮ⅡA拮抗PC-3人前列腺癌细胞增殖,其主要机制可能与CyclinD1及CDK4低表达所致细胞周期抑制有关。     

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。     

RNA干扰诱导肝癌HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响

目的:探讨载体介导的RNA干扰技术诱导HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响.方法:应用靶向细胞周期E(cyclin E)基因的siRNA真核表达载体转染HepG2细胞诱导凋亡,再以丹参酮ⅡA处理48h(cyclinE siRNA+丹参酮ⅡA组),同时设立cyclin EsiRNA组、无义siRNA组、丹参酮ⅡA组以及空白对照组,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,吖啶橙荧光染色检测细胞凋亡形态,Western blot法观察细胞Caspase-3蛋白表达.结果:单用cyclinE siRNA质粒转染或丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞,细胞凋亡率显著高于空白对照组(P＜0.01),2μg/ml剂量凋亡率分别达到21.6%、23.6%.cyclinE siRNA质粒转染预诱导再经丹参酮ⅡA处理,HepG2细胞G0～G1期比例显著增高,S期、G2～M期细胞所占有比例明显下降;与单用cyclinE siRNA质粒转染、丹参酮ⅡA两组比较,细胞凋亡率分别增高了1.81和1.61倍,比两组合计增高0.35倍,Caspase-3蛋白表达水平分别增高了0.91倍和0.66倍.结论:通过cyclinE siRNA质粒转染诱导的HepG2细胞凋亡可提高丹参酮ⅡA药物敏感性,其机制与增强凋亡控制相关基因表达有关.     

正五聚蛋白3对血管紧张素Ⅱ刺激后血管内皮细胞凋亡及血管活性物质分泌的影响

目的探讨正五聚蛋白(PTX)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激后的血管内皮细胞(HUVECs)凋亡及血管活性物质分泌的影响。方法以10~(-7) mol/L AngⅡ刺激体外培养的HUVECs 0、12、24和48 h后,Western印迹检测HUVECs中PTX3蛋白的表达。利用Lipofectamine2000将PTX3 siRNA转染至HUVECs,Western印迹检测其转染效果。将HUVECs随机分为空白组(未做任何处理)、AngⅡ组(10~(-7)mol/L AngⅡ刺激)、AngⅡ+siNC组(转染阴性对照序列后,给予10~(-7) mol/L AngⅡ刺激)和AngⅡ+siPTX3组(转染PTX3 siRNA后,给予10~(-7)mol/L AngⅡ刺激),噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中血管活性物质内皮素(ET)-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达。结果随着AngⅡ刺激时间的延长,PTX3蛋白表达水平显著升高。转染PTX3 siRNA后成功下调了AngⅡ引起的PTX3表达。AngⅡ刺激可引起HUVECs增殖减弱,凋亡增强,ET-1和iNOS mRNA表达升高;下调PTX3表达能够减弱AngⅡ引起的HUVECs损伤,促进HUVECs增殖,抑制凋亡,并下调ET-1和iNOS mRNA表达。结论 PTX3在AngⅡ刺激后HUVECs中表达升高,下调其表达可抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡及血管活性物质的分泌。     

塞来昔布对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及MAPK/ERK通路的影响

目的研究塞来昔布对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路的影响。方法细胞培养大鼠H9c2心肌细胞,将细胞分为5组:空白组(未加任何药物处理);AngⅡ组(加入1μmol/L的AngⅡ诱导心肌肥大);AngⅡ+塞来昔布50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L组,各组细胞加入药物培养48 h后用于后续实验。观察细胞形态学变化,测定细胞表面积和细胞中总蛋白浓度变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹检测各组细胞中p38MAPK、ERK1/2、磷酸化(p)-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量。结果与空白组比较,AngⅡ组细胞形态增大,细胞贴壁不牢,漂浮细胞增多;与AngⅡ组比较,塞来昔布各处理组细胞形态变小,漂浮细胞减少;与空白组比较,AngⅡ组细胞表面积显著增大(P0.05),细胞中总蛋白浓度显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著增加(P0.05),细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量显著减少(P0.05);与AngⅡ组比较,塞来昔布处理各组细胞表面积显著减少(P0.05),细胞中总蛋白浓度和细胞凋亡率显著降低(P0.05),细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量显著增多(P0.05);AngⅡ+塞来昔布50 mg/L组和100 mg/L组细胞表面积、细胞中总蛋白浓度、细胞凋亡率显著高于空白组(P0.05),细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量低于空白组(P0.05),AngⅡ+塞来昔布150 mg/L组细胞表面积、细胞中总蛋白浓度、细胞凋亡率及细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论塞来昔布对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有抑制作用,其抑制心肌细胞肥大的作用可能与激活MAPK/ERK信号通路有关。     

丹参酮ⅡA对子宫内膜癌KLE细胞增殖及凋亡的影响

目的观察丹参酮ⅡA对子宫内膜癌KLE细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用。方法将体外培养子宫内膜癌KLE细胞株分组,丹参酮组常规细胞培养24 h后加入不同浓度的丹参酮ⅡA,顺铂组加入60μg/mL顺铂,阴性对照组进行常规细胞培养。倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化,采用中性红法以酶联免疫检测仪检测12、24、48 h细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测24、48 h细胞凋亡率及细胞周期。结果低浓度(<50μg/mL)丹参酮ⅡA对KLE细胞增殖抑制作用不明显,但当浓度达到100μg/mL以上时,则能显著抑制子宫内膜癌细胞增殖并促进其凋亡;细胞明显被阻止于G0～G1期,而G2期细胞明显减少;其各种影响效应随时间和浓度的增加呈逐渐增强趋势。结论丹参酮ⅡA在体外对子宫内膜癌KLE细胞具有显著的抑制增殖、促进凋亡的作用,其机制可能为将细胞阻滞于G0～G1期。     

丹参酮Ⅱ A对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的体外观察丹参酮(Tan)ⅡA对人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞的增殖、凋亡情况的影响及其抑癌机制。方法选取0.5、1、2.5、5、10μg/ml浓度的TanⅡA作用于体外培养的A431细胞,同时设空白对照组,分别于作用24、48、72 h时间点,应用MTT法、流式细胞术检测A431细胞增殖和凋亡情况。结果不同浓度的TanⅡA作用于A431细胞后,细胞生长受到不同程度的抑制,各浓度组与空白对照组比较,均有统计学意义(P<0.05)。随着药物浓度的增加和作用时间的延长,TanⅡA对A431细胞增殖抑制率有明显差异(P<0.05);流式细胞术检测结果表明,TanⅡA可以诱导A431细胞凋亡。各浓度组的细胞凋亡率明显均高于空白对照组(P<0.05)。细胞凋亡率随TanⅡA浓度的增加而上升(P<0.05)。结论TanⅡA通过抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和诱导其凋亡途径,抑制人皮肤鳞状细胞癌的发生发展,且具有浓度和时间依赖性。     

鼠双微基因2在血管紧张素Ⅱ和神经酰胺致内皮细胞凋亡中作用的实验研究

目的探讨神经酰胺和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致内皮细胞凋亡过程中鼠双微基因2（mdm2）的变化及其作用。方法体外培养脐静脉内皮细胞,分别用AngⅡ1型受体拮抗剂氯沙坦、AngⅡ2型受体拮抗剂PDl23319、神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉素B1（FB1）预处理细胞,再加入AngⅡ与双蒸水对照组比较观察细胞凋亡情况及mdm2 mRNA和蛋白的表达,并用不同浓度的c2-神经酰胺进行处理,RT—PCR和Western blot检测mdm2的mRNA和蛋白表达及细胞凋亡的情况。结果PD123319组和FB1组抑制了AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡,其凋亡指数明显下降（P〈0．05）,而与对照组相比差异无统计学意义,相反氯沙坦组凋亡指数较对照组显著增加（P〈0．05）,FB1组抑制了mdm2的表达。c2．神经酰胺呈剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡,mdm2的表达随着C2-神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论AngⅡ诱导内皮细胞凋亡通过AT2受体和神经酰胺起作用,AngⅡ和神经酰胺可能是通过抑制mdm2来诱导凋亡的。     

丹参酮ⅡA对大鼠血管平滑肌细胞BIP和CHOP表达的影响

目的研究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA促进HCY诱导增殖VSMC凋亡的相关机制。方法大鼠VSMC原代培养、鉴定,建立HCY诱导的细胞增殖模型,用不同浓度的丹参酮ⅡA干预,Annexin/PI双染法检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测BIP和CHOP表达量。结果丹参酮ⅡA可促进VSMC凋亡,与HCY组比较差异显著(P<0.05,P<0.01);实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照组比较,HCY刺激使BIP和CHOP表达上调(P<0.05,P<0.01);丹参酮ⅡA组剂量依赖性上调VSMC BIP表达,与HCY组比较差异显著(P<0.05,P<0.01);与HCY组比较,0.5 mg/L丹参酮ⅡA处理对大鼠VSMC CHOP表达无明显影响,而1 mg/L丹参酮ⅡA使CHOP表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可促进HCY诱导增殖的VSMC凋亡,凋亡过程由核转录因子CHOP介导,BIP基因可能是其作用靶点之一。     

丹参酮ⅡA对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA对N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)诱导的视网膜神经节细胞系RGC-5细胞损伤的保护作用。方法体外培养RGC-5细胞,分为NMDA损伤组、正常对照组、地卓西平阳性对照组、丹参酮ⅡA预保护组,丹参酮ⅡA预保护组又分为3个亚组(0.4μg/mL、4μg/mL、40μg/mL)。除正常对照组外,其余各组加入NMDA(100μmol/L)诱导损伤,观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率; Hoechst染色检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定Bax和Bcl-2的mRNA变化。结果与正常对照组相比,NMDA损伤组RGC-5细胞损伤,细胞存活率降低,细胞凋亡增加,Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高(P0.05)。与NMDA损伤组相比,4μg/mL、40μg/mL丹参酮ⅡA预保护亚组RGC-5细胞存活率提高,细胞凋亡减少(P0.05),另外4μg/mL丹参酮ⅡA预保护亚组Bax mRNA的表达水平降低,Bcl-2mRNA表达水平增加(P0.05)。结论丹参酮ⅡA可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元,其机制可能与下调Bax mRNA和上调Bcl-2 mRNA的表达有关。     

丹参酮ⅡA对肝癌SMMC-7721细胞COX-2表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的影响及其作用机制．方法:体外培养肝癌SMMC-7721细胞株,经丹参酮ⅡA(终浓度0．5 mg／L)作用后,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,透射电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学SABC法检测COX-2蛋白表达,放射免疫法检测前列腺素E2(PGE2)含量．结果:丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性．以0．5 mg／L作用终浓度抑制作用最明显,其48 h的抑制率为 69．3％,与对照组相比差异有显著性(P<0．01)．电镜下观察,丹参酮ⅡA作用后肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态改变．5 mg/ L丹参酮ⅡA作用后,随时间的延长,凋亡率逐渐升高,48 h达到高峰,随后逐渐下降(24,48, 72 h凋亡率分别为7．45％±0．33％、6．59％± 0．45％、4．78％±1．05％),与对照组比较,各处理组都有显著性差异(均P<0．01),丹参酮作用组肝癌细胞COX-2表达明显减少,其培养液中 PGE2的产生量下降,与对照组相比差异均有显著性(P<0．01)．结论:丹参酮ⅡA可能是通过下调COX-2 mRNA的表达水平发挥其对肝癌细胞生长抑制及促进凋亡作用．     

miR-23b通过MAPK信号通路对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究microRNA(miR)-23b对H_2O_2诱导的人血管内皮细胞(HUVECs)损伤中的保护作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法体外培养HUVECs,利用细胞转染法对HUVECs转染miR-23b mimic,同时转染miR-23b mimic阳性对照作为对照,分别对转染的细胞用100μmol/L H_2O_2诱导造成HUVECs氧化应激损伤,qRT-PCR法检测细胞中miR-23b水平,流式细胞术检测HUVECs凋亡情况,Western印迹检测细胞中MAPKs信号通路中p38-MAPK、磷酸化(p-) p38-MAPK(p-p38)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,并测定细胞中丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。用MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs,同样的方法检测细胞中p38-MAPK、p-p38、Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及细胞中MDA、SOD、LDH活性。结果转染miR-23b-mimic后细胞中miR-23b的表达水平明显升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0. 05)。转染后经H_2O_2处理的HUVECs miR-23b水平显著升高,细胞凋亡率明显降低,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平降低,细胞中p38-MAPK、p-p38的表达下调,SOD活性降低,MDA含量增加,LDH活性升高,与转染对照经H_2O_2处理的HUVECs相比,差异具有统计学意义(P<0. 05)。MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理后,HUVECs中p38-MAPK和p-p38表达升高,SOD活性升高,MDA含量减少,LDH活性降低,与上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs相比,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论上调miR-23b可减少H_2O_2诱导的HUVECs凋亡,减少对细胞的损伤,对H_2O_2诱导的HUVECs起到保护作用,其作用机制与抑制MAPK信号通路的激活有关。     

ACE2基因表达增加对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响

目的探索在AngII干预下ACE2基因表达增加对人血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法原代培养人脐静脉血管内皮细胞。用构建、包装好的慢病毒重组ACE2基因表达载体（Lentiviral—ACE2）以感染复数为10（MOI=10）感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。感染72h后,以AnglI（终浓度为10。mol／L）干预细胞,倒置相差显微镜观察各组HUVEC的形态学变化,AlamarBlue试剂检测各组HUVEC增殖功能,TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测各组HUVEC的凋亡。结果AngⅡ组与AngII＋Lentiviral—GFP组细胞生长状态差,生长缓慢,形态不规则并且有不同程度脱壁悬浮的细胞;而正常细胞对照组与AngII＋Lentiviral—ACE2组细胞生长状态良好,圆形、卵圆形,饱满,形态正常呈“铺路石”样生长,紧密贴壁,悬浮细胞少。AngII组较正常细胞对照组、Ang1I＋Lentiviral—ACE2组AlamarBlue被还原率明显降低（P〈O．05）。Ang11组的凋亡指数为（0．1165±0．0181）,与正常细胞对照组凋亡指数（0．0373±0．0113）和AngⅡ＋Lentiviral—ACE2组凋亡指数（0．0540±0．0061）相比差异有统计学意义（P〈0．05）。AngII组与AngⅡ＋Lentiviral—GFP相比、正常细胞对照组与AngII＋Lentiviral—ACE2组相比,AlamarBlue被还原率和凋亡指数差异无统计学意义。结论AngⅡ具有促进人脐静脉内皮细胞增殖能力下降和凋亡增加的作用。ACE2表达增~IIII抑制AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细朐增殖活件降低和凋亡增加．对人脐静脉内皮细胞具有保护作用。     

血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制分析

目的观察血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响并探讨其可能的作用机制。方法采用胰蛋白酶消化法原代培养HUVECs,取2～5代用于实验,培养的HUVECs随机分为:对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组,用吖啶橙(AO)/溴化乙啶(BE)法观察细胞凋亡的形态学变化,用流式细胞术检测内皮细胞的凋亡率;用West-em blot方法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化的表达水平。结果 (1)AngⅡ(10~(-6)mol/L)可以诱导HUVECs凋亡率增高,与对照组比较差异有统计学意义(25.60%±3.17%比2.32%±0.24%,P<0.005);不同浓度的Ang-(1-7)(10~(-9)～10~(-6)mol/L)呈剂量依赖性抑制AngⅡ所诱导的内皮细胞的凋亡,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(均为P<0.05);加用Ang-(1-7)特异性受体拮抗剂A-779可阻断Ang-(1-7)的上述效应,与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较差异有统计学意义(23.37%±0.75%比7.79%±1.50%,P<0.05);(2)与对照组相比,AngⅡ(10~(-6)mol/L)诱导后HUVECs p38MAPK磷酸化表达水平增加(P<0.05);不同浓度的Ang-(1-7)(10~(-9)～10~(-6)mol/L)呈剂量依赖性抑制AngⅡ所诱导的p38MAPK磷酸化表达水平,与AngⅡ组相比,差异有统计学意义(均为P<0.05),加用A-779可阻断Ang-(1-7)的上述效应,与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ可诱导内皮细胞凋亡及p38MAPK磷酸化表达增高,Ang-(1-7)呈浓度依赖性抑制AngⅡ的上述效应,并且是通过其特异性受体Mas发挥作用。     

丹参酮ⅡA抑制波动性高糖诱导的雪旺细胞凋亡的观察

目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对波动性高糖(IHG)所致的雪旺细胞(SC)凋亡的影响。方法原代培养大鼠SC分为正常糖组(Con,5.6 mmol/L)、稳定性高糖组(HG,50 mmol/L)、IHG组(IHG,5.6~50.0mmol/L)、渗透压对照组(mannitol)及IHG加不同浓度TanⅡA(0.1、1、10μmol/L)组。检测线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达。结果与Con组和HG组比较,IHG组MMP下降[(0.51±0.02)vs(1.42±0.08)vs(0.66±0.02)],细胞凋亡率增高[(5.01±0.26)%vs(42.33±2.76)%vs(31.64±3.04)%](P0.05或P0.01)、线粒体细胞色素c(cyto-c)及凋亡诱导因子(AIF)水平降低,胞浆cyto-c及胞核AIF表达增高(P0.01);活化半胱天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及caspase-3表达增高(P0.01)。TanⅡA可升高MMP,减少细胞凋亡,抑制cyto-C释放及AIF转位,降低caspase-9及caspase-3的活化。结论 TanⅡA能抑制SC凋亡,其机制是caspase活性降低,从caspase依赖性及非依赖性途径发挥作用。     

香烟提取物对大鼠血管内皮细胞的损害

目的探究香烟提取物(CSE)对大鼠血管内皮细胞(VEC)的影响。方法利用原代培养的方法获得大鼠主动脉VEC(RVEC),采用不同浓度的CSE处理RVEC,分别用MTT和流式细胞仪来检测三组细胞的增殖和凋亡情况,并检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放情况。同时,采用双抗体夹心ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF)-α、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2、MMP-3和MMP-10的情况。结果 MTT实验中,与0.05%组相比,0.5%浓度组的细胞生长显著变慢(P0.05),且这种抑制作用呈现剂量依赖性。LDH释放结果显示,与0.05%组相比,20%浓度的CSE处理可导致细胞LDH释放显著升高(P0.01),且随着CSE浓度的进一步升高,LDH释放逐渐增多。经过24 h后,CSE处理后的细胞凋亡逐渐增多,差异明显(P0.01)。而对于细胞分泌的TNF-α、MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-10含量,CSE干预组均比对照组明显增加(P0.01)。结论CSE可以明显抑制RVEC的生长,加剧其凋亡,并促进细胞分泌TNF-α、MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-10的能力。     

丹参酮ⅡA预防大鼠椎板切除术后硬膜外疤痕增生的机制分析

目的探究丹参酮ⅡA作用于成纤维细胞预防SD大鼠椎板切除术后硬膜外疤痕增生的机制。方法选取L1椎板切除SD大鼠24只,按照随机数字表分为Ⅰ～Ⅳ组,每组各6只。Ⅰ组腹腔注射100 mg/kg丹参酮ⅡA,Ⅱ组腹腔注射200 mg/kg丹参酮ⅡA,Ⅲ组腹腔注射300 mg/kg丹参酮ⅡA,Ⅳ组腹腔注射等体积生理盐水。观察术后各组大鼠伤口愈合情况,通过影像学方法计算瘢痕面积,利用流式细胞仪检测成纤维细胞凋亡率和细胞周期G0/G1期比例,通过Western blot技术检测各组大鼠疤痕组织中p53、survivin、Bcl-2、Bax和Caspase-3水平。结果术后所有大鼠伤口愈合良好,干预后1个月,4组瘢痕面积差异有统计学意义(P0.05),由大到小依次为Ⅳ组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。4组干预后24 h、72 h及120 h的成纤维细胞凋亡率和G0/G1期比例差异及3个时间点的组间差异均有统计学意义(P0.05)。干预后120 h,4组瘢痕组织中p53、survivin、bcl-2、bax和Caspase-3水平差异均有统计学意义(P0.05)。结论丹参酮ⅡA具有抑制成纤维细胞增殖、诱导凋亡的作用,其效果存在浓度依赖性,机制可能与多种细胞因子的调节有关。     

卡维地洛预处理的人脐静脉内皮细胞低密度脂蛋白诱导损伤情况观察

目的 观察卡维地洛预处理的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导损伤情况。方法 体外培养HUVECs,将细胞分为5组,A、B、C组分别加入5、10、20μmol/L卡维地洛预处理6 h,再加入100μg/mL的ox-LDL诱导培养24 h;D组仅加入100μg/mL的ox-LDL诱导培养24 h;E组加入不含细胞的DMEM（高糖）培养基。采用微板法检测各组细胞LDH活性,CCK-8法测算细胞增殖抑制率,油红O染色观察细胞内脂滴形成情况。结果 与E组比较,B、C、D组LDH活性增强（P均<0.05）;与D组比较,A、B、C组LDH活性减弱（P均<0.05）。与E组比较,C、D组OD值减小（P均<0.05）;与D组比较,A、B、C组细胞OD值及增殖率增加（P均<0.05）;与A组比较,B细胞OD值及增殖率减小（P均<0.05）。与E组比较,D组细胞内红色脂滴积累显著增加;与D组比较,A、B、C组细胞胞内脂滴形成明显减轻,其中以A组抑制脂滴积累效果最为明显。结论 卡维地洛预处理可以减轻ox-LDL诱导HUVECs损伤,尤以浓度为5...     

丹参酮ⅡA通过调节自噬小体对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的基于自噬小体形成信号通路探讨丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA+模型组、3-MA组、模型+3-MA组、丹参酮ⅡA+模型+3-MA组。比色法检测各组细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot技术检测细胞自噬小体形成信号通路相关蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P0.01);3-MA组LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量无明显变化(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA+模型组细胞中MDA含量降低(P0.01),SOD活力增高(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P0.01);模型+3-MA组MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少(P0.01)。与丹参酮ⅡA+模型组比较,丹参酮ⅡA+模型+3-MA组MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少(P0.01)。与正常组比较,模型组Atg3、Atg4b、Atg7蛋白表达水平明显增高(P0.05,P0.01);与模型组比较,丹参酮ⅡA+模型组Atg3、Atg7、Atg5-Atg12蛋白表达水平明显增高(P0.05,P0.01);与丹参酮ⅡA+模型组比较,丹参酮ⅡA+模型+3-MA组Atg3、Atg7、Atg5-Atg12蛋白表达水平均明显降低(P0.05,P0.01)。结论丹参酮ⅡA可能通过调节EA.hy926细胞自噬小体形成信号通路即Atg12-Atg5通路和LC3-PE通路相关蛋白,发挥其保护EA.hy926细胞抗氧化应激损伤的生物学活性,进而防治动脉粥样硬化的发生发展。     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞线粒体转录因子A表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ对血管内皮细胞线粒体转录因子A(TFAM)表达及细胞功能的影响。方法将不同浓度的AngⅡ(1×10~(-7)~1×10~(-5)mol/L)与原代人脐静脉细胞(HUVECs)共孵育,在24 h用免疫印迹技术和RT-PCR分别检测TFAM的表达量;在12 h用流式细胞仪检测线粒体膜电位及细胞的凋亡率变化。结果 AngⅡ以浓度依赖的方式降低TFAM的表达量;随着AngⅡ浓度升高,线粒体膜电位降低水平、细胞凋亡率增加(P<0.01)。结论 AngⅡ降低HUVECs TFAM表达量及导致细胞损伤。