罗哌卡因对人结肠癌顺铂耐药细胞株顺铂敏感性的增强作用及其机制

目的 观察罗哌卡因对人结肠癌顺铂耐药细胞株顺铂敏感性的增强作用，并进一步探讨其作用机制。方法通过浓度递增法将人结肠癌LOVO细胞暴露于顺铂中诱导顺铂耐药株LOVO/DDP形成。将LOVO和LOVO/DDP两种结肠癌细胞株分别分为罗哌卡因联合顺铂组、罗哌卡因组、顺铂组、对照组。对照组加入细胞培养液，顺铂组加入细胞培养液和1.0μmol/L浓度顺铂，罗哌卡因联合顺铂组加入细胞培养液后再同时加入1.0μmol/L浓度顺铂及1 mmol/L浓度罗哌卡因培养。培养14 d，采用平板克隆实验观察细胞增殖能力。培养48 h后，采用Transwell和流式细胞术观察细胞迁移、凋亡情况；JC-1和ROS实验测定细胞线粒体膜电位和活性氧（ROS）;Western blotting法、免疫荧光法检测细胞株中MMP-9及铁死亡相关蛋白GPX4、Nrf-2、SLC7A11；亚铁离子染色法检测结肠癌细胞株中亚铁离子。结果 LOVO细胞中，与对照组比较，顺铂组LOVO细胞株克隆体的形成减少、迁移细胞株数减少、MMP-9蛋白水平降低、凋亡率升高、存活率降低，罗哌卡因组克隆体形成数、迁移细胞株数、MMP-9蛋白水平、细...     

二十二碳六烯酸联合5氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的研究DHA联合5-FU对肝癌细胞在抑制细胞增殖、诱导凋亡的影响。方法用Annexin-V-PE/PI荧光双标记法、Hoechst33258染色及JC-1线粒体膜电位检测法检测DHA、5-FU两药单用和联用对肝癌细胞HepG2增殖的影响。结果联合处理组细胞凋亡率较单独使用5-FU组或单独使用DHA均明显增加。Hoechst33258染色显示,5-FU联合DHA组细胞中出现明显的凋亡核表现,细胞凋亡率较单独采用5-FU及对照组细胞显著增高。JC-1线粒体膜电位检测结果显示,联合组细胞线粒体膜电位较单独使用5-FU组显著降低。结论 DHA联合5-FU对肝癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡具有协同作用。     

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

非诺贝特联用顺铂对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体仪激动剂非诺贝特联用顺铂对体外培养的人肺癌A549细胞增殖和凋广的影响及可能机制。方法采用MTF法分别检测单用非诺贝特、顺铂和非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechest染色观察非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制作用。流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用。RT—PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase－3、survivinmRNA的表达变化情况。结果非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系。联合用药组作用肺癌A549细胞48h后比单用药组的细胞抑制作用强（P〈0．05）。形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组A549凋亡细胞数目多于单药组,RT—PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase－3mRNA的表达,下调stirvivin mRNA的表达。结论非诺贝特与顺铂联用可以增强顺铂杀伤肺癌A549细胞作用,其机制可能与上调caspase－3的表达和下调survivin的表达有关。     

谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞HepG_2增殖及凋亡的影响

目的 探讨谷胱甘肽 (GSH) 与顺铂 (CDDP) 联合应用对人肝癌细胞HepG_2细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用酸性磷酸酶法 (APA) 检测细胞生长抑制率;用倒置显微镜观察经CDDP、GSH处理后的细胞形态学改变;采用流式细胞术研究GSH与CDDP合用对细胞周期的影响;AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡率;罗丹明123染色检测线粒体膜电位 (Δψm) 变化.结果 GSH与CDDP联合应用可以明显抑制HepG_2细胞增殖,癌细胞出现凋亡形态变化,其作用明显高于GSH组与对照组细胞,且不低于CDDP单独给药组;GSH与CDDP联合应用引起Δψm更明显地下降.结论 GSH与CDDP联合用药不降低CDDP对肝癌细胞的作用,其诱导肝癌细胞HepG_2凋亡的作用可能是通过线粒体通路实现的.     

五味子乙素联合顺铂对H22肿瘤小鼠的抑瘤作用

目的探讨五味子乙素联合顺铂对H22小鼠的抑瘤作用及其对p53表达的影响。方法建立小鼠H22实体瘤模型,并对小鼠H22实体瘤模型进行五味子乙素、顺铂和两者联合处理,HE染色观察细胞形态变化,免疫组化方法检测实体瘤组织中p53的表达。结果用药组细胞呈现凋亡形态,联合组中p53蛋白表达率为21.51%,肿瘤抑制率为68.80%。结论五味子乙素联合顺铂对H22肿瘤抑制作用较单独应用有明显增强。其抗瘤作用与诱导细胞凋亡有关。     

鸦胆子油乳对肺癌A549细胞顺铂化疗的增敏作用及其机制

目的 观察鸦胆子油乳对肺癌A549细胞顺铂化疗的增敏作用并分析其机制。方法 体外培养人肺癌细胞A549,MTT法检测鸦胆子油乳、顺铂对细胞生长的抑制率,计算鸦胆子油乳、顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）,观察不同浓度（2.44、9.77、78.12μg/mL）鸦胆子油乳对顺铂IC50的影响。将A549细胞分为对照组、鸦胆子油乳组、顺铂组及鸦胆子油乳+顺铂组,对照组不做处理正常培养细胞,鸦胆子油乳组、顺铂组及鸦胆子油乳+顺铂组分别给予鸦胆子油乳单药、顺铂单药、鸦胆子油乳及顺铂联合处理。采用荧光显微镜观察细胞形态及生长情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率,二氯荧光素二乙酸酯荧光探针染色检测细胞内ROS水平。结果 顺铂IC50随着鸦胆子油乳处理浓度的增高而下降（P均<0.05）。对照组细胞生长较好,细胞数量较多且形状为正常生长状态;顺铂组及鸦胆子油乳组细胞数量较对照组均减少,可见少量碎片;鸦胆子油乳+顺铂组细胞生长受抑制较明显,细胞数量最少,细胞形状不规则且细胞碎片增多。G0/G1期细胞比例鸦胆子油乳+顺铂组>顺铂组、鸦胆子油乳组>对照组,细胞凋亡率鸦胆子油乳+顺铂组...     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

雷帕霉素联合顺铂对肝癌细胞凋亡及自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对肝癌细胞凋亡、自噬的影响。方法将雷帕霉素及顺铂分别或联合作用于Hep G-2细胞,采用MTT法检测Hep G-2细胞增殖抑制情况,采用流式细胞仪检测Hep G-2细胞凋亡,采用MDC染色、转染p GFP-LC3检测细胞自噬。结果与正常对照组相比,雷帕霉素组未出现明显的细胞凋亡情况;顺铂组细胞凋亡情况较明显,凋亡率达到(21.27±3.65)%;顺铂联合雷帕霉素组细胞凋亡率最高,达到(43.33±5.64)%。三组Hep G-2细胞均出现点状的自噬泡,顺铂联合雷帕霉素组自噬泡数量显著高于雷帕霉素组和顺铂组。结论顺铂可直接诱导Hep G-2细胞凋亡,雷帕霉素本身不诱导Hep G-2细胞凋亡,但其可显著促进顺铂诱导Hep G-2细胞凋亡;顺铂和雷帕霉素均可直接诱导Hep G-2细胞自噬,但两者联合应用促进Hep G-2细胞自噬情况非常明显。     

自噬在顺铂诱导的心肌细胞凋亡中的调控作用

目的探讨自噬在顺铂心脏毒性损伤中的调控作用。方法采用顺铂处理心肌细胞,通过检测LC3、P62观察自噬的变化;通过阻断自噬,观察心肌细胞经顺铂处理后细胞活力的变化,并通过TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果采用顺铂分别处理原代新生大鼠心肌细胞(Neonatal rat cardiomyocyte,NRCM)和H9c2细胞系,观察到LC3-II的增加和P62蛋白的下调,表明顺铂可显著诱导心肌细胞自噬。采用自噬抑制剂氯喹或3-MA联合顺铂处理细胞后,发现细胞活力较单纯顺铂处理组显著下调。TUNEL染色结果显示,联合处理组细胞凋亡率较单纯顺铂处理组显著上调。结论顺铂诱导心肌细胞自噬,阻断自噬增强顺铂对心肌细胞的损伤作用。     

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。     

灰树花多糖联合顺铂对H22小鼠腹水瘤的抑制作用

目的观察灰树花多糖(PGF)协同顺铂对H22腹水瘤小鼠的影响。方法将建模后的80只小鼠随机分为4组,以PGF、顺铂和两者联合分别对小鼠用药。测量小鼠腹水量;记载小鼠生存时间;观察腹水细胞形态变化;检测小鼠腹膜渗透性;流式检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,联合组、PGF组及顺铂组均能减少小鼠的腹水量、延长小鼠生存期,提高细胞凋亡率(均P0.05),且联合组作用优于PGF组及顺铂组(P0.05,P0.01)。与对照组及顺铂组比较,PGF组及联合组均能显著降低小鼠腹膜渗透性(均P0.05)。结论 PGF与顺铂联合应用对H22小鼠腹水瘤具有显著抑制作用。     

凋亡素基因质粒载体对人肝癌细胞的影响

目的探讨凋亡素基因表达对人肝癌细胞的影响。方法将凋亡素基因克隆入真核表达载体pEGFP-C2,构建成pEGFP-VP3 为了使EGFP和EGFP-VP3在人肝癌细胞中表达,用非脂质体脂质转染法将pEGFP-C2和pEGFP-VP3分别转染人类肝癌细胞系(HepG2),通过荧光显微镜观察EGFP和EGFP-VP3在HepG2中的定位、表达、细胞生长及凋亡,用Annexin V-藻红素(PE)检测细胞凋亡。结果在HepG2/EGFP组细胞中,EGFP均匀分布于细胞浆和细胞核,细胞形态无变化。与非转染细胞的自然凋亡相比,转染细胞中细胞凋亡没有增加。在HepG2/EGFP-VP3组细胞中,EGFP-VP3以荧光颗粒形式集中在细胞核,细胞核中EGFP-VP3颗粒逐渐变粗,细胞变得小而圆,最后成为碎片,Annexin V-PE染色显示细胞凋亡;HepG2/EGFP-VP3组的细胞凋亡率明显高于HepG2/EGFP组和HepG2组(P<0.01)。结论 pEGFP-VP3转染人肝癌细胞后,凋亡素基因表达并导致癌细胞凋亡。     

ROS在齐墩果酸诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的 观察ROS在齐墩果酸(OA)诱导HL-60细胞凋亡中的作用.方法 分瓶培养细胞,实验设空白对照组和12、24、48 h的OA用药组.收集细胞,提取细胞总蛋白,制备去线粒体细胞浆蛋白,Western印迹法检测caspase-9表达.流式细胞术检测ROS水平.结果 OA处理HL-60细胞后,ROS含量增加,并引起caspase-9的激活.结论 OA使ROS量增加,通过线粒体凋亡信号通路诱导HL-60细胞凋亡.     

DAPT及顺铂对人卵巢癌H08910细胞生物学性能的影响

目的观察γ-分泌酶抑制剂DAPT及顺铂对人卵巢癌H08910细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响,为卵巢癌治疗提供新思路。方法常规培养H08910细胞至对数生长期,随机分为DAPT组、顺铂组、联合组及对照组,前三组分别以不同质量浓度DAPT、顺铂及DAPT＋顺铂处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MIT）比色法检测细胞增殖情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,体外迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果与对照组比较,DAPT组、联合组细胞增殖明显受抑（P均〈0．05）,且呈DAPT作用时间和剂量依赖性,尤以联合组为著（P〈0．05）;倒置显微镜下对照组细胞形态正常,DAPT组及联合组均出现细胞密度减低及凋亡现象;DAPT组、顺铂组、联合组细胞凋亡率均显著高于对照组（P均〈0．05）,尤以联合组为著（P均〈0．05）;与对照组比较,余三组细胞迁移抑制率、细胞侵袭抑制率均显著升高（P均〈0．05）,尤以联合组为著（P均〈0．05）。结论DAPT与顺铂可协同抑制人卵巢癌H08910细胞增殖、促进细胞凋亡、降低细胞侵袭及迁移能力,此为卵巢癌的治疗提供了新思路。     

tBHQ对NaAsO2诱导HaCaT细胞凋亡的拮抗作用

目的探讨叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2,sodium arsenite)诱导人角质上皮HaCaT细胞凋亡的拮抗作用。方法 tBHQ(10、25、50μmol/L)预处理12 h,再与NaAsO2(5、10、30μmol/L)共同处理HaCaT细胞24 h。用Annxin V/PI染色流式细胞术法检测细胞凋亡率;DAPI染色观察细胞形态学改变;JC-1法测定线粒体膜电位。结果将实验数据进行ANOVA分析处理后表明,5,10、30μmol/L NaAsO2单独作用时,细胞凋亡率与对照组相比显著升高,而线粒体膜电位则显著下降(P<0.05或P<0.01),形态学观察可见高强度DAPI染色细胞数目增加和凋亡小体出现;当给予tBHQ(10、25、50μmol/L)预处理后,NaAsO2致HaCaT细胞凋亡率升高和线粒体膜电位下降均明显受到抑制(P<0.05),形态学观察可见高强度DAPI染色细胞数目和细胞核碎片明显减少。结论实验结果表明tBHQ可能通过线粒体凋亡途径抑制NaAsO2引起的HaCaT细胞凋亡。     

灰树花多糖协同顺铂对HeLa细胞凋亡的影响

目的探讨灰树花多糖(PGF)协同顺铂(DDP)对He La细胞凋亡的作用。方法流式细胞仪测定不同药物处理组的凋亡率,苏木素-伊红(HE)染色观察凋亡细胞形态,免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白表达。结果流式细胞仪检测显示:PGF(0.05 mg/L)、DDP(1 mg/L)及联合组(PGF 0.05 mg/L+DDP 1 mg/L)作用24 h凋亡率分别为21.28%、23.60%和42.13%,与空白对照组比较差异显著(P<0.05),协同作用组与各单药组比较差异显著(P<0.05);HE染色观察到凋亡细胞形态学改变;免疫组化显示,联合用药组与两单药组比较caspase-3蛋白表达上调。结论联合用药对He La细胞的凋亡率较单独用药组有明显提高,其作用机制可能与caspase-3蛋白表达上调有关。     

红景天联合顺铂协同诱导人肺腺癌耐药细胞的凋亡

目的观察红景天联合顺铂对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的生长抑制和凋亡诱导作用。方法应用MTT法检测红景天、顺铂对A549/DDP细胞的生长抑制并计算IC50,采用Annexin V-FITC试剂盒、流式细胞仪定量检测凋亡率;采用Western印迹法检测各组细胞Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达水平。结果 A549/DDP对顺铂具有一定耐药性;在红景天、顺铂分别作用24 h后,A549/DDP细胞凋亡率为(11.49+1.73)%、(19.87+3.65)%;显著低于联合用药组(34.88+5.62)%(P<0.05)。联合用药组Caspase-3、PARP活化程度高于红景天组、顺铂组。结论联合红景天与顺铂具有协同作用,抑制肺腺癌耐药细胞生长,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,提示红景天在化疗耐药的肺癌治疗中有一定的应用前景。     

姜黄素对卵巢癌细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将SKOV3随机分为空白组、顺铂组、姜黄素组、联合组。除空白组外,顺铂组加入终浓度为2.5μmol/mL的顺铂、姜黄素组加入终浓度为10μmol/mL的姜黄素、联合组加入顺铂2.5μmol/mL和姜黄素10μmol/mL,均作用24 h。采用RT-PCR检测各组细胞中表皮生长因子受体(EGFR),用流式细胞术分析细胞周期、凋亡率。结果与空白组相比,顺铂组、姜黄素组、联合组细胞中EGFR表达明显下降,P均<0.01,顺铂组、姜黄素组、联合组细胞凋亡率、G0/G1期细胞增高,G2/M期细胞降低(P均<0.05);联合组EGFR相对表达量低于、细胞凋亡率和G0/G1期细胞高于顺铂组和姜黄素组(P均<0.05),顺铂组与姜黄素组EGFR表达、细胞凋亡率及G0/G1期细胞相近(P均>0.05)。结论姜黄素能有效促进卵巢癌细胞凋亡,其机制与下调细胞中EGFR表达有关;与单独用药比较,姜黄素联合顺铂的抑瘤作用明显增强。     

姜黄素对非酒精性脂肪肝细胞模型保护作用以及机制研究

目的 探讨姜黄素对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)细胞模型的保护作用以及保护机制。方法 体外用0.6 mmol/L 油酸诱导HepG2 细胞脂质沉积,建立NAFLD细胞模型。 将HepG2细胞分为对照组(Con)、模型组(OA)、姜黄素对照组和姜黄素干预组。采用Bodipy493/503荧光染色观察各组细胞内脂滴分布,使用透射电镜观察细胞线粒体超微结构变化,使用试剂盒检测培养上清液肿瘤坏死因子α和白介素-6(IL-6),采用DCFH-DA法检测HepG2细胞活性氧(ROS)生成量,采用Hoechst 33258染色检测HepG2细胞凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡和炎症相关蛋白Bcl-2、Bax、NF-κB、Caspase-3/9和线粒体内细胞色素C(mCytc)。结果 与 Con组比,OA组 HepG2细胞脂质沉积明显增加,而姜黄素干预组细胞脂质沉积明显减少;OA组细胞线粒体明显损伤,而姜黄素干预组细胞线粒体损伤明显减轻;与Con组比,OA组 HepG2细胞上清液TNF-α和IL-6显著升高,而姜黄素干预组细胞上清TNF-α和IL-6明显降低;OA组HepG2细胞绿色荧光强度为(52.24±5.11)%,显著强于Con组【(6.71±2.31)%, P<0.05],而姜黄素干预的HepG2细胞绿色荧光强度降低; OA组 HepG2细胞凋亡率为(12.12±0.72)%,显著增高Con组【(2.04±0.57)%,P<0.05 ],而黄素干预组细胞凋亡率显著降低【(5.71±0.61)%,P<0.05】;与Con组比,OA组细胞Bax、NF-κB和cleaved-Caspase-3/9蛋白表达增强,而Bcl-2和mCytc表达减弱(P均<0.05),而姜黄素干预组细胞Bax、NF-κB和Caspase-3/9蛋白表达减弱,而mCytc和Bcl-2表达增强(P均<0.05)。结论 姜黄素可缓解NAFLD细胞脂肪变性,其作用机制可能与减轻炎症反应、抑制氧化应激损伤和细胞凋亡有关。