下调SLP-2基因表达抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

目的：探讨下调人Stomatin like protein 2(SLP-2)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响。方法：SLP-2的靶向siRNA序列转染人脑胶质瘤U251细胞（SLP-2敲低组）,另设空白组（细胞未做任何处理）和阴性对照组（细胞转染无义siRNA序列）,转染48 h后Western blot检测各组细胞中SLP-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：阴性对照组SLP-2的蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组SLP-2的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）;阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Bax、Notch1、Hes1蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组细胞存活率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Notch1、Hes1的蛋白表达显著低于空白组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于空白组（P>0.05）。结论：下调SLP-2基因表达可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导细胞的凋亡,下调炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

连续血液净化对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织及Notch1信号表达的影响

目的：探讨连续血液净化对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠胰腺组织、Notch 信号表达的影响。方法：将大 鼠随机分为3 组,空白组仅作开腹处理,未建立SAP模型,SAP组和干预组均建立SAP模型,建模后干预组进行 12 h 连续连续血液净化,其余大鼠不进行连续血液净化。H-E 染色检测胰腺形态,并作病理评分,TUNEL 检测 胰腺细胞凋亡率,免疫印迹和PCR检测Notch 等信号蛋白和mRNA表达。结果：建模后12 h,SAP组病理评分与 空白组比较差异有统计学意义,干预组病理评分低于SAP组。SAP组胰腺细胞凋亡率与空白组比较升高明显,与 SAP组比较,干预组凋亡率降低,组间比较差异有统计学意义。3 组大鼠胰腺组织Notch1、Hes1、Bcl-2 及Bax 表达比较差异有统计学意义。SAP组胰腺组织中Notch1、Hes1、Bcl-2 蛋白及mRNA表达高于空白组,Bax 蛋白 及mRNA表达低于空白组;干预组胰腺组织中Notch1、Hes1、Bcl-2 蛋白及mRNA表达与SPA 组比较降低明显, Bax 蛋白及mRNA表达与SPA 组比较有所升高。结论：重症急性胰腺炎采用连续血液净化治疗后胰腺细胞凋亡减 少,胰腺组织病理损伤改善,其机制可能与抑制Notch1、Hes1、Bcl-2 表达,激活Bax 活性相关。     

STIM1 对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析

目的：探讨STIM1对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析。方法：以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照,Western blot检测乳腺癌 MCF7、HCC1569、MDA-MB-231、BT549细胞中STIM1的蛋白表达;将STIM1的靶向siRNA序列（STIM1-siRNA组）转染MDA-MB-231细胞,并设置阴性对照组和空白对照组,转染48 h后检测各组细胞STIM1的蛋白表达;MTT法检测转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率;RT-PCR检测IL-6 和TNF-α 的mRNA表达;Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：乳腺癌细胞中STIM1的蛋白表达均显著高于在MCF-10A细胞表达（P<0.05）;转染STIM1的siRNA后MDA-MB-231细胞中STIM1的蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）;与空白对照组比较,STIM1-siRNA 组细胞在48 h和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,IL-6 和TNF-α 的mRNA表达显著降低,PCNA、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达显著降低,Bax和Caspase3蛋白表达显著升高。结论：STIM1基因在乳腺癌细胞高表达,通过RNA干扰抑制其表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡、提高免疫及下调STAT3信号。     

HMGA2基因调控Notch信号通路对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨下调HMGA2基因表达对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞凋亡及Notch信号的影响。方法:分别用5、10、20和30 mmol/L的D-葡萄糖刺激人肾小管上皮HK-2细胞2 h及30 mmol/L的D-葡萄糖刺激HK-2细胞10 min、60 min和120 min,通过Western blot检测HMGA2蛋白的表达。将HK-2细胞分为4个处理组,即正常葡萄糖(NG)组、HG组、HG+si-HMGA2组和HG+NC组,其中siRNA转染参照Lipofectamine~(TM) 2000说明。处理细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;活性氧簇(ROS)检测试剂盒测定细胞ROS含量;Western blot检测Notch1、Hes1、Bcl-2和Bax的蛋白表达。使用Notch信号通路抑制剂DAPT处理HK-2细胞,将细胞分为HG组、HG+DAPT组和HG+si-HMGA2+DAPT组,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:不同浓度D-葡萄糖处理HK-2细胞及D-葡萄糖处理HK-2细胞不同时间均可明显上调HMGA2蛋白的表达,与5 mmol/L D-葡萄糖或0 min比较差异均具有统计学意义(P0.05)。与NG组比较,HG组HMGA2、Notch1和Hes1蛋白的表达明显升高,Bcl-2/Bax表达明显降低,细胞凋亡率明显升高,ROS含量明显升高(P0.05);和HG组比较,HG+si-HMGA2组HMGA2、Notch1和Hes1蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax表达明显升高,细胞凋亡率降低,ROS含量明显降低(P0.05)。HG+DAPT组的细胞凋亡率明显低于HG组,而HG+si-HMGA2+DAPT组的细胞凋亡率明显低于HG+DAPT组(P0.05)。结论:下调HMGA2基因表达可通过调控Notch信号通路、降低细胞内ROS产生而抑制肾小管上皮细胞凋亡。     

敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 将HepG2细胞接种于6孔板,分为3组：siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂。通过Western blotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被最大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。 结果 与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高（P<0.05）,Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低（P<0.05）,而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化（P>0.05）。结论 敲低膜联蛋白A7可促进HepG2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值。     

RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。     

STC2 基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞生物学特性的影响研究

目的:探讨斯钙素鄄2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法: RT鄄PCR 及Western blot 分别检测乳腺癌组织中STC2 基因的mRNA 及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA 转染人乳腺癌MCF-7 细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h 后,Western blot 检测各组细胞中 STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1 蛋白表达; CCK8 检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:STC2 基因在乳腺癌中的mRNA 及蛋白表达均显著高于癌旁组 织(P<0.05);STC2 基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0郾05),与病理分期、肿瘤大小相关(P< 0.05);NC-siRNA 组STC2 的蛋白表达与Control 组差异无统计学意义(P>0.05),STC2鄄siRNA 组STC2 的蛋白表达显著低于 Control 组(P<0.05);STC2鄄siRNA 组细胞存活率、S 期和G2/ M 细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1 蛋白表达显著低于Control 组,细胞凋亡率、G0/ G1 期细胞及Cleaved caspase3 蛋白表达显著高于Control 组(P<0.05)。结论:STC2 基因在乳腺癌中高表 达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1 期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调 ki67、cyclin D1 和上调Cleaved caspase3 表达及下调Notch1 信号通路有关。     

HOXB5 基因调控STAT3 信号对膀胱癌细胞凋亡及免疫抑制因子的影响研究

目的:探讨HOXB5基因调控STAT3信号对膀胱癌细胞凋亡及免疫抑制因子影响及机制研究。方法:以正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1为对照,Western blot检测膀胱癌T24、5637和BIU-87细胞HOXB5的蛋白表达。将HOXB5的特异性siRNA(si-HOXB5组)转染T24细胞,同时转染无干扰的siRNA(NC组),并设置空白组,AG490作为STAT3信号通路抑制剂,48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率; Western blot检测各组细胞p-JAK2、p-STAT3、STAT3、Bax、VEGF和TGF-β1蛋白表达。结果:HOXB5在T24、5637和BIU-87细胞的蛋白表达均显著高于在SV-HUC-1细胞中的表达(P0. 05)。转染si-HOXB5的T24细胞HOXB5蛋白表达显著低于空白组(P0. 05)。与NC组比较,si-HOXB5组细胞凋亡率显著升高,p-JAK2、pSTAT3、VEGF和TGF-β1的蛋白表达显著降低,Bax的蛋白表达显著升高(P0. 05)。si-HOXB5+AG490组细胞凋亡率显著高于si-HOXB5组和AG490组(P0. 05)。结论:HOXB5基因表达抑制可诱导膀胱癌细胞凋亡,下调免疫抑制因子VEGF和TGF-β1的表达,其机制与抑制STAT3信号通路有关。     

RNA 干扰抑制BAG-1 基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响研究

目的:探讨抑制BAG-1(Bcl-2-associated athanogene-1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响。方法:采用LipofectamineTM2000 将BAG-1 的siRNA 转染皮肤鳞状细胞癌A431,转染后48 h,RT-PCR 检测BAG-1 的mRNA 表达,Western blot 检测BAG-1 的蛋白表达;CCK8 和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot 检测B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2)家族促凋亡蛋白Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Wnt/β-catenin 信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、Survivin 的蛋白表达;ELISA 试剂盒检测白介素6 (IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与空白组和阴性对照组比较,转染BAG-1 的siRNA 可明显抑制BAG-1 在转录和翻译水平上的表达;与空白组较,BAG-1-siRNA 组细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax 蛋白表达上调, β-catenin、Survivin 蛋白表达下调,IL-6、VEGF 含量均显著降低(P<0.05)。结论:BAG-1 表达沉默可降低皮肤鳞状细胞癌增殖,促进细胞凋亡,上调Bax 及下调Wnt/ β-catenin 信号通路表达,降低IL-6、VEGF 因子的分泌。     

miR-195在胃癌细胞中的表达及对癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR-195在胃癌细胞中的表达及对癌细胞凋亡的影响和机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中mi R-195基因的表达;将mi R-195 mimics转染BGC-823细胞,48 h后RT-PCR检测mi R-195的mR NA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 mi R-195在MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中的mR NA表达均显著低于GES-1(P0.01),miR-195在BGC-823细胞中的表达最低,选择作为后续研究对象;过表达组细胞凋亡率及cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组,Notch1、Hes1蛋白表达显著低于对照组(P0.01),而空转染组细胞凋亡率及cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论 mi R-195在胃癌细胞的过表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与下调cleaved caspase3蛋白表达及Notch1信号通路有关。     

转录因子CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响*

 目的： 探索CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、生长和细胞周期的影响及其分子机制。方法: 采用携带CDX2基因的重组慢病毒颗粒（LV-CDX2-GFP）感染SGC-7901细胞,作为实验组（LV-CDX2-GFP组）;以对照慢病毒颗粒（LV-GFP）感染SGC-7901细胞,作为阴性对照组（LV-GFP组）;空白对照组常规培养,不做任何处理。分别采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞周期的分布,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting技术检测细胞中CDX2、Bax、Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达。结果: 与LV-GFP组和空白对照组比较,LV-CDX2-GFP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),G0/G1期所占比例上升(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达降低（P<0.05）,Bax mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,而LV-GFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论: 慢病毒介导的CDX2过表达抑制胃癌细胞增殖和生长,使细胞周期停滞在 G0/G1期,其机制可能与CDX2过表达使胃癌细胞Bcl-2、cyclin D1、survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

 目的:探究沉默Jagged 1 (JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:
用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞, 采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G 0/G 1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。     

Rab1A对多发性骨髓瘤细胞系8226增殖和凋亡的影响

目的 探讨Rab1A对多发性骨髓瘤(MM)细胞系8226增殖和凋亡的影响.方法 采用siRNA干扰RabIA表达,将多发性骨髓瘤细胞8226分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组.其中空白对照组的多发性骨髓瘤细胞8226不做任何处理,阴性对照组的多发性骨髓瘤细胞8226转染阴性对照siRNA.Rab1A ...     

脂多糖调控Notch 信号通路作用于人牙髓干细胞增殖、分化、凋亡的实验研究

目的:探讨脂多糖调控Notch 信号通路对人牙髓干细胞增殖、分化、凋亡的影响及机制。方法:从牙髓组织中分离出人牙髓干细胞(hDPSCs),CCK8 实验检测0、0.1、1、10 μg/ ml 的脂多糖处理hDPSCs 1、3、5、7 d 后细胞的增殖情况;RT-PCR 检测1 μg/ ml 的脂多糖处理hDPSCs 0、3、7、14、21 d 后矿化相关基因ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达情况;流式细胞仪检测1 μg/ ml 的脂多糖处理hDPSCs 0、7、14、21 d 后的细胞凋亡情况;Western blot 检测Cleaved caspase3、Notch1、Hes1 的蛋白表达。结果:不同浓度的脂多糖刺激hDPSCs 1、3、5 d 后细胞的增殖均无显著差异,培养至第7 天时,0.1、1、10 μg/ ml 的脂多糖组细胞的增殖均显著低于0 滋g/ ml 的脂多糖组(P<0.01);脂多糖处理hDPSCs 3 d 时ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),7、14、21 d 时ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达均显著高于对照组(P<0.01);脂多糖处理hDPSCs 7、14、21 d 时细胞的凋亡率及Cleaved caspase3、Notch1、Hes1 蛋白表达均显著高于对照组(P<0.01),21 d 时ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达及细胞凋亡率和Cleaved caspase3、Notch1、Hes1 蛋白表达均有下降趋势。结论:脂多糖可降低hDPSCs 的增殖,促进其矿化和凋亡,其机制与激活Notch 信号通路有关。