恩替卡韦对慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+Treg细胞的影响

目的 研究恩替卡韦抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的影响.方法 采集经恩替卡韦治疗4、12、24周的50例慢性乙肝患者的外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞技术,检测CD4+ CD25+ Treg细胞的比率,并分析其与乙型肝炎病毒DNA和血清丙氨酸转氨酶的相关性.结果 恩替卡韦治疗4、12、24周后CD4+ CD25+ Treg细胞的比例显著下降,与治疗前相比,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.05,P＜0.01).CD4+ CD25+ Treg细胞数量占PBMCs的比率与ALT的变化呈正相关(r=2.82,P＜0.05).结论 恩替卡韦抗病毒治疗能降低CD4+ CD25+ Treg/PBMCs的细胞比率;改善慢性乙型肝炎患者的免疫调节功能.     

支气管哮喘患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的分析

目的 观察支气管哮喘(哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)水平及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA表达的变化,探讨CD4+ CD25+ Treg在哮喘发病中的作用.方法采用流式细胞仪检测78例哮喘患者(急性发作期组30例,慢性持续期组25例,缓解期组23例)和29例健康志愿者(正常对照组)PBMCs中CD4+ CD25+ Treg的比例;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中Foxp3 mRNA的表达.结果 急性发作期组和慢性持续期组PBMCs中CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达明显低于缓解期组和正常对照组(P＜0.05);缓解期组CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达虽亦低于正常对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);急性发作期组CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达低于慢性持续期组(P＜0.05).结论 哮喘患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+ CD25+ Treg数量减少,功能下降,可能参与哮喘的发生和发展.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞在进行期银屑病中的差异表达

目的 研究CD4+CD25+ Foxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)在进行期银屑病患者外周血Treg中的比例及Foxp3表达并探讨其临床意义.方法 采用流式细胞术检测20例进行期斑块型银屑病患者、28例急性点滴型银屑病患者以及20例健康对照者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+Treg及其Foxp3表达情况.结果 进行期斑块型银屑病患者和急性点滴型银屑病患者外周血中,CD4+ CD25+Foxp3+/CD4+ Treg均低于健康对照者[(2.09±1.04)％、(1.09±0.71)％比(4.16±1.48)％,P＜0.05],Foxp3的平均荧光强度均低于健康对照者(26.84±13.85、21.74±13.81比40.47±22.60,P＜ 0.05),与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分无相关性(P＞0.05).结论 进行期银屑病患者Treg水平及Foxp3表达低下,与PASI评分无相关性,为其作为银屑病病情变化的判断指标之一提供进一步证据.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+T细胞亚群变化及意义

[目的]探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化及意义。[方法]入选病例为我院从2006年6月到2008年12月共59例原发性胆汁性肝硬化患者(活动期36例、稳定期23例),同时以30例健康体检者为对照,借助双色荧光标记技术对外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+占CD4+T细胞比例进行流式细胞术测定。[结果]活动期PBC患者外周血CD4+CD25+细胞比例(1.66±0.83)%低于稳定期(2.53±1.06)%和正常组(4.06±2.36)%(P﹤0.05);而CD4+CD28-细胞比例(4.15±1.89)%则高于稳定组(3.66±0.7)%和正常组(1.54±0.99)%(P﹤0.05)。[结论]活动期PBC患者外周血CD4+CD25+T细胞比例减少而CD4+CD28-T细胞比例升高,CD4+CD25+比例降低可能使外周免疫耐受失去平衡,参与了PBC疾病的发生发展。     

地塞米松对哮喘大鼠气道炎症及CD4+ CD25+ 调节性T细胞的影响

目的 观察地塞米松对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Tr)的影响,探讨地塞米松治疗哮喘的机制.方法 30只Wistar大鼠随机分成正常对照组,哮喘组,地塞米松组.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用HE染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+ CD25+ Tr的比例.结果 地塞米松组BALF细胞总数及淋巴细胞(Lym)、中性粒细胞(Neu)和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组明显减少(P＜0.05,P＜0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).病理组织学显示:地塞米松组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.哮喘组PBMCs中CD4+ CD25+ Tr比例较正常对照组明显减少(P＜0.05),地塞米松组CD4+ CD25+ Tr比例较哮喘组明显增加(P＜0.05).结论 地塞米松可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4+ CD25+ Tr产生有关.     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞与乙型肝炎疫苗接种后应答关系的研究

目的 通过检测乙型肝炎(简称乙肝)疫苗接种后弱应答和无应答人外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞(CD4+ CD25+ regulatory T cell,简称Treg细胞)的频率,探讨CD4+ CD25+ 调节性T细胞与乙肝疫苗接种后弱和(或)无应答之间的关系.方法 利用流式细胞分析方法 对25例乙肝疫苗无应答、30例乙肝疫苗弱应答者外周血Treg细胞的频率进行分析,另外选取20例乙肝疫苗强应答者作为对照.结果 强应答组Treg细胞的频率为(4.32±1.21)%,弱应答组Treg细胞的频率为(7.01±1.06)%,无应答组Treg细胞的频率为(12.75±2.01)%,无应答组和弱应答组与强应答组相比Treg细胞频率显著升高(t=8.426,t=3.289,P值均＜0.01).结论 乙肝疫苗接种后无应答和弱应答现象与外周血CD4+ CD25+ 调节性T细胞频率升高存在一定关系.     

肺癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞检测及其临床意义

目的了解肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的比例和其临床意义,探讨CD4+CD25+调节性T细胞与临床分期的相关性。方法流式细胞分析仪检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例。结果肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比为(15.7±1.6)%,明显高于健康对照者(7.1±1.5)(p<0.05),且外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平与患者病情分期呈显著正相关。结论肺癌患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD25+调节性T细胞比例较高,对肺癌患者具有免疫抑制功能。     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞及C反应蛋白在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的变化及临床意义

目的 探讨COPD急性加重期患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞及CRP水平的变化及意义.方法 以36例COPD急性加重期患者(COPD组)和36例COPD稳定期患者(对照组一)及36例健康人(对照组二)作为研究对象,采用流式细胞技术检测三组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平,并常规检测血清CRP水平.结果 COPD组外周血中CD4+CD25+占CD4+T细胞的百分比为(2.56±1.83)%,明显低于对照组一和对照组二(P均<0.01);COPD组CRP水平为(55.7±14.8)mg/L,明显高于对照组一和对照组二(p均<0.01).CD4+CD25+调节性T细胞表达水平与CRP水平呈负相关(r=-0.312,P<0.05).结论 CD4+CD25+调节性T细胞比例减少导致COPD急性加重期患者细胞免疫失调,CRP参与了炎性反应激活过程,可能为COPD急性加重期免疫治疗提供理论依据.     

臭氧暴露对哮喘大鼠CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞数量和Foxp3mRNA表达的影响

目的 探讨低浓度臭氧暴露对支气哮喘大鼠CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量及转录因子Foxp3mRNA表达的影响.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、臭氧暴露组、哮喘组和臭氧暴露哮喘组,每组15只.哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,正常对照组雾化生理盐水,臭氧暴露组予吸入低浓度臭氧,臭氧暴露哮喘组于每日雾化激发OVA前给予低浓度臭氧吸入.流式细胞仪检测外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血和肺组织γ-干扰素(γ-INF)以及白细胞介素-4(IL-4)含量;聚合酶链反应(PCR)检测肺组织Foxp3mRNA表达水平.结果 哮喘组大鼠CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞占CD4T细胞的比例为6.12％±1.03％,臭氧暴露组为5.87％±1.26％,均低于正常对照组(9.85％±1.34％);臭氧暴露哮喘组CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞占CD4T细胞的比例为(3.31％±0.85％),低于正常对照组和哮喘组,差异均有统计学意义(P＜0.01).哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[血浆:(21.83±5.12) ng/L,肺组织:(0.89±0.13) ng/L]高于正常对照组[血浆:(10.58±2.73) ng/L),肺组织:(0.32±0.11) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.01);臭氧暴露哮喘组血浆和肺组织中IL-4含量[血浆:(35.47±7.24) ng/L,肺组织:(1.58±0.43) ng/L]高于正常对照组和哮喘组,差异有统计学意义(P＜0.01).哮喘组血浆和肺组织中γ-INF含量[血浆:(61.78±23.45) ng/L,肺组织:(0.69±0.21) ng/L]低于正常对照组[血浆:(158.89±60.23) ng/L,肺组织:(1.86±0.29) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.01),臭氧暴露哮喘组γ-INF含量[血浆:(10.28±2.63) ng/L,肺组织:(0.46±0.12) ng/L低于正常对照组和哮喘组,差异有统计学意义(P＜0.01).臭氧暴露哮喘组和哮喘组Foxp3mRNA表达低于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 低浓度臭氧暴露可能通过下调CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量并抑制Foxp3mRNA表达,加重哮喘大鼠体内Th1/Th2比例失衡,提示臭氧暴露可能是诱发哮喘发病的因素之一.     

环孢霉素A对不明原因反复自然流产者CD4+CD25+调节性T细胞作用的体外研究

目的 探讨环孢素A(CsA)对不明原因反复自然流产患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr)的体外作用. 方法 以CsA作用反复自然流产患者外周血单个核细胞的体外实验模型,用流式细胞术分析对CD4+CD25+Tr细胞表达频率的变化. 结果 CsA处理外周血后CD4+CD25+Tr细胞占CD4+T细胞的百分比1.0 μmol/L组为(11.78±1.61)%,10.0 μmol/L组为(13,42±1.98)%,与正常生育组(6.52±2.38)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CsA可提高外周血CD4+CD25+Tr细胞比例.     

子宫内膜异位症治疗前后CD19＋CD5＋B细胞变化的研究

目的研究子宫内膜异位症患者治疗前、后CD19＋CD5＋B细胞数量及分泌细胞因子的变化,为临床治疗提供实验依据。方法对本院35例子宫内膜异位症患者（实验组）,29例子宫肌瘤患者（对照组）行流式细胞术、Q—PCR检测患者外周血、腹腔冲洗液及子宫内膜组织中CD19＋CD5＋B细胞的数量及分泌细胞因子的检测,比较治疗前、后子宫内膜异位症患者外周血中CD19＋CD5＋B细胞数量以及分泌细胞因子的变化。结果子宫内膜异位症患者外周血、腹腔冲洗液及异位子宫内膜组织中CD19＋CD5＋B细胞的比例高于对照组[（13．1±1．9）％、（12．1±2．0）％、（11．7±1．7）％vs（2．9±0．8）％、（2．6±0．9）％、（2．8±1．1）％,P〈0．01],CD19＋CD5＋B细胞的IFN-1mRNA的表达水平高于对照组[（7．2±1．0）×10^3、（7．9±1．3）×10^3、（7．4±1．1）×10^3拷贝vs（1．9±0．7）×10^3、（2．2±0．8）×10^3、（2．0±0．5）×10^3拷贝],IL-10mRNA表达水平高于对照组[（6．4±0．9）×10^3、（6．8±1．2）×10^3、（6．1±0．8）×10^3拷贝vs（1．7±0．5）×10^3、（2．1±0．9）×10^3、（1．6±0．4）×10^3拷贝,P〈0．01]。治疗后,子宫内膜异位症患者外周血中CD19＋CD5＋B细胞数量低于治疗前[（13．1±1．9）％vs（7．3±1．2）％,t=16．12,P〈0．01],仍高于对照组[（2．8＋-0．7）％,t=18．51,P〈0．01],CD19＋CD5＋B细胞中的IFN-y mRNA的表达水平低于治疗前[（7．2±1．0）×10^3拷贝vs（3．3±0．6）×10^3拷贝,t=20．89,P〈0．01],仍高于对照组[（2．4±0．5）×10^3拷贝,t=6．702,P〈0．01],IL-10mRNA的表达水平低于治疗前[（6．4±0．9）×10^3拷贝vs（3．2±0．7）×10^3拷贝,t=17．53,P〈0．01],仍高于对照组[（2．1±0．4）×10^3拷贝,t=7．79,P〈0．01]。结论子宫内膜异位症中CD19＋CD5＋B细胞数量的增加,通过高分泌IFN-γ、IL-10,其参与了疾病的发生。     

系统性红斑狼疮患者调节性T细胞及相关细胞因子的变化

目的 检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4 CD25 T细胞和CD4 CD25highT细胞占CD4 T细胞的比率以及可溶性细胞因子TGF-β及IL-10、IL-12的血清浓度,初步探讨调节性T细胞在SLE体内发病机制中可能的作用.方法 采用流式细胞仪检测54例SLE患者及20例正常对照外周血CD4 CD25 T细胞和CD4 CD25highT细胞比率,ELISA检测血清细胞因子(TGF-β及IL-10、IL-12).结果 ①SLE组CD4 CD25highT细胞的比率较正常对照组降低;TGF-β水平较正常对照组降低,IL-10、IL-12水平较正常对照组均升高;CD4 CD25highT细胞与IL-12呈负相关;②初发SLE组CD4 CD25 T细胞和CD4 CD25highT细胞的比率均较正常对照组显著降低;CD4 CD25highT细胞与IL-10及IL-12均呈负相关.结论 调节性T细胞可能通过细胞因子TGF-β、IL-10、IL-12参与SLE的发病机制,但具体机制有待于进一步研究.     

子宫内膜异位症患者中CD19＋CD5＋B细胞及BAFF变化的研究

目的 了解子宫内膜异位症患者中CD19＋CD5＋B细胞的变化,CD19＋CD5＋B细胞中BAFF（B淋巴细胞刺激因子）的表达和凋亡敏感性变化,探讨CD19＋CD5＋B细胞与子宫内膜异位症的关系.方法 39例子宫内膜异位症患者为实验组,31例子宫肌瘤患者为对照组,流式细胞术检测患者外周血、腹腔冲洗液以及子宫内膜组织中CD19＋CD5＋B细胞的变化,Q-PCR检测CD19＋CD5＋B细胞中BAFF mRNA的表达,流式细胞术PI-Annexin V检测CD19＋CD5＋B细胞对CD95L诱导的凋亡敏感性.结果 实验组患者外周血、腹腔冲洗液以及异位子宫内膜组织中CD19＋CD5＋B细胞高于对照组（P＜0.01）;实验组患者各样本中CD19＋CD5＋B细胞的BAFF mRNA表达水平高于对照组,CD19＋CD5＋B细胞能明显抵抗CD95L所诱导的凋亡（P＜0.01）.结论 在子宫内膜异位症中,CD19＋CD5＋B细胞高表达BAFF,高对抗CD95L诱导的凋亡,参与疾病的发生.     

CD4+CD25+调节性T细胞在艾滋病病毒感染中的作用

CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)是一类具有特殊免疫调节功能的T细胞亚群,是Tregs的重要组成部分,参与多种感染性疾病的免疫应答,在病毒感染的慢性化、免疫病理、阻止自身免疫应答和维持机体免疫平衡等方面发挥重要的作用.此文就CD4+CD25+Tregs在HIV感染进程中的作用作了综述.     

肺炎链球菌疫苗抗原促进CRTH2(CD4~+CD294~+Th2)细胞增殖的实验研究

目的研究肺炎链球菌疫苗通过树突状细胞抗原递呈作用对CRTH2(CD4~+CD294~+Th2)细胞促增殖作用,为扩增及分选Th2细胞提供新方法。方法外周血单核细胞培养为树突状细胞,负载肺炎链球菌疫苗抗原后与T淋巴细胞共培养,CCK8法测定混合淋巴细胞反应,流式细胞仪分析DC及CRTH2细胞。结果肺炎链球菌疫苗可促进树突状细胞成熟,与TNF-a共同是DC成熟佐剂。DC负载肺炎链球菌疫苗抗原能使第5天CRTH2细胞亚群比率[(0.93±0.10)%]较首日[(0.70±0.02)%]升高,其绝对数也升高(均P0.05)。结论树突状细胞负载肺炎链球菌疫苗抗原能够促进CRTH2细胞增殖,可能是扩增Th2细胞有效方法之一。     

丹参注射液联合地塞米松对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 探讨丹参注射液联合地塞米松(DXM)抑制哮喘气道炎症的免疫学机制.方法 50只Wistar大鼠随机分成正常对照(NC)组、哮喘组、丹参组、DXM组、联合用药组,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,HE染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)比例,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5含量.结果 与哮喘组比较,药物干预组细胞总数、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)、嗜酸性粒细胞(Eos)百分率下降(P<0.05,P<0.01),联合用药组下降程度大于丹参组、DXM组(P<0.05).哮喘组呈显著炎症变化,丹参组呈中度炎症变化,DXM组呈轻度炎症变化,联合用药组无炎症改变.与哮喘组比较,药物干预组CD4+CD25+Treg/CD4+T升高(P<0.05),IL4、IL-5含量下降(P<0.05),联合用药组CD4+CD25+ Tree/CD4+T升高程度和IL-4、IL-5下降程度大于丹参组和DXM组(P<0.05).结论 丹参注射液具有抑制哮喘大鼠气道炎症的作用,和DXM联合应用后,抑制作用更加明显,该作用可能和促进CD4+CD25+Treg产生,进而抑制IL-4、IL-5产生,纠正Th1/Th2失衡,最终减轻气道炎症有关.     

Identification of CD4+ and CD8+ T cell epitopes of woodchuck hepatitis virus core and surface antigens in BALB/c mice

A therapeutic vaccine against chronic hepatitis B virus (HBV) infection requires the development of a strong and multispecific Th1 cell immune response. Woodchucks chronically infected with the woodchuck hepatitis virus (WHV) closely resemble HBV infection and represent the best animal model for this hepadnavirus-induced disease. Using the BIMAS “HLA Peptide Binding Predictions” program, we have identified and further characterized novel H-2^d-restricted CD8+ epitopes within the WHV core (peptides C#12–21, C#18–32, C#19–27, C#61–69) and surface antigens (peptides preS2#10–18, preS2#27–35, S#76–84, S#133–140 and S#257–265), respectively. These peptides bind to H-2^d with high efficiency and upon immunization of mice with peptide and Freund's adjuvant they induce the development of IFN-γ producing T cells. More importantly, WHV core peptides C#19–27 and C#61–69 and WHV surface peptides S#133–140 and S#257–265 were also recognized by CD8+ T cells after immunization of mice with DNA/PEI nanoparticles. Direct stimulation of splenocytes obtained from such DNA-immunized mice with peptides C#18–32, S#76–84, and S#257–265 resulted in significant production of IFN-γ. Thus, we have identified T cell determinants in mice from WHV core and surface antigens that have important value for designing and evaluating an effective vaccine against hepadnavirus infection.     

CD27和CD28在肺结核病人抗原特异性CD4＋T细胞中的表达分析

目的 研究肺结核病人与健康人外周血结核抗原特异性CD4^＋T细胞中CD27和CD28的表达情况,了解不同分化程度T细胞在结核发病中的作用.方法 以荧光标记的抗CD4、CD154、CD27、CD28四种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核病人和健康人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27和CD28的分布比例.通过对比分析,了解不同分化阶段CD4^＋T细胞在病人与健康人之间的分布差异.结果 特异性结核抗原刺激后,肺结核病人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27^＋ CD28^＋（早期分化）、CD27^- CD28^＋ 和CD27^＋ CD28^-（中期分化）以及CD27^-CD28^-（晚期分化）T细胞的比例分别为（49.55±6.15）%、（26.85±3.87）%、（7.2±1.37）%和（16.35±3.97）%;而在健康人中这四群细胞的比例分别为（51.81 ±4.94）%、（29.83±5.33）%、（12.65±4.48）%和（5.7±2）%.结核病人与健康人以早期分化CD4^＋T细胞为主,在晚期分化CD4^＋T细胞比例上差异有统计学意义（t=2.26,P〈0.05）.结论 肺结核病人抗原特异性CD4^＋T细胞中晚期分化阶段细胞的比例显著高于健康人,提示抗原特异性CD4^＋T细胞的分化程度与结核病相关.