固定化酵母细胞生产1,6—二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株，改变通透性后的酵母细胞，在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ＾２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞，用卡拉胶固定化后，装入酶反应柱，连续生产ＦＰＤ，柱反应可稳定在１０天以上，转化率维持在２０％以上。     

1，6－二磷酸果糖的制备和应用

１，６－二磷酸果糖的制备和应用．张宏兴，王，吴梧桐．中国医药工业杂志，１９９５，２６（３）：１３９～１４２综述了国内外１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）制备工艺的研究进展，包括游离酵母细胞酶法转化，固定化酵母细胞转化，嗜热脂肪芽孢杆菌酶法转化和人工多酶体系...     

应用酶工程技术生产1，6－二磷酸果糖

应用酶工程技术生产１，６－二磷酸果糖由王副教授主持的国家＂八五＂攻关课题１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ），是利用现代酶工程技术，从蔗糖生产ＦＤＰ。已完成了小试和中试。用该工艺生产ＦＤＰ具有工艺稳定，三废少，工业成本较低的特点，其固定化酶半衰期＞２０ｄ，固...     

固定化酵母生产L－间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选，并将其固定化，海藻酸钙包埋法比聚乙烯醇（ＰＶＡ）－海藻酸钙包埋法效果好，其浓度为１％，包埋量为３ｇ／１０ｍｌ。固定化细胞的最佳底物浓度、糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致，分别为１０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ；但最适反应温度比游离细胞高５℃，为３０℃；最佳ｐＨ比游离细胞高１～２个ｐＨ单位，为ｐＨ６。固定化细胞能反复用于羟基苯基乙酰基甲醇生产５次。但在柱式反应器中，转化效率大大下降。固定化细胞在４℃时贮存３０ｄ活性基本上无损失。     

人 FN cDNA 重组逆转录病毒载体及高表达 FN 肿瘤细胞株的构建

目的：探讨 Ｆ Ｎ 对肿瘤细胞生物学行为的影响，将人 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 基因导入低表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株２５３ Ｊ中，构建高表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株２５３ Ｆ Ｎ。方法：通过 Ｄ Ｎ Ａ 重组技术，将人全长 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段插入到逆转录病毒载体ｐ Ｌ Ｊ中，经 Ｐ Ａ３１７细胞包装，生产出４代病毒液，感染 Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３细胞后，测得假病毒滴度。用高滴度病毒液感染２５３ Ｊ细胞，经４００ μｇ／ｍ ｌ Ｇ４１８筛选，产生抗性克隆。继续传代培养，一步法提取细胞总 Ｒ Ｎ Ａ，进行 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交。结果：２５３ Ｆ Ｎ 细胞除７６ ｋｂ 处显示微弱的内源杂交带以外，在９６ ｋｂ 处有一条较强的杂交带；免疫组化结果显示２５３ Ｆ Ｎ 细胞的胞浆及胞膜均为棕红着色，而２５３ Ｊ细胞和空载体转染细胞仅轻微着色。结论：转染后的细胞染色体中成功地整合了 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段，并能够在转录水平和蛋白水平表达。从而建立了高表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株，为深入研究肿瘤的转移机理奠定了基础。     

血小板衍生生长因子在梗阻性黄疸鼠肝中的免疫组化分析

通过大白鼠胆总管结扎模型，研究血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）在肝内的免疫组化定位，探讨ＰＤＧＦ在梗阻性黄疸肝纤维化中的作用。实验结果：胆总管结扎２ｗ后肝小叶汇管区有明显的间质细胞和胆管增生及肝纤维化，胆总管结扎４ｗ导致肝硬变形成；肝脏ＰＤＧＦ－Ｂ链免疫组化染色显示胆总管结扎２ｗ后肝间质细胞和胆管上皮细胞呈阳性染色反应。表明ＰＤＧＦ在肝间质细胞增生、产生大量细胞外基质的过程中起重要作用，与胆道梗阻所     

生长因子在视网膜增殖膜的表达

目的：了解血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在视网膜增殖膜细胞的表达及其与增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的关系。方法：免疫组化法研究ＰＤＧＦ和ｂＦＧＦ在２０例视网膜前膜和１例视网膜下膜（视网膜脱离术后继发）细胞中的表达情况。结果：①１５／２１（７１．４％）例标本对抗ＰＤＧＦ抗体呈阳性反应，１４／２１（６６．７％）例对抗ｂＦＧＦ呈阳性反应；②Ｅａｌｅｓ病和增殖性糖尿病视网膜病引起的血管增殖性前膜（≥６１个细胞／视野，１０００×）较ＰＶＲ引起的非血管增殖性前膜（３１～６０个细胞／视野）内细胞密度高，黄斑前膜（≤３０个细胞／视野）最低。结论：ＰＤＧＦ和ｂＦＧＦ在ＰＶＲ发展过程中起重要作用；ＰＶＲ膜上增殖细胞可产生ｂＦＧＦ，它是导致严重ＰＶＲ时玻璃体内ｂＦＧＦ含量异常升高的主要原因。     

应用酵母双向杂交系统筛选和鉴定P75NGFR作用的蛋白

目的：探讨Ｐ７５ＮＧＦＲ介导神经细胞凋亡的分子机制。方法;以转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的大鼠小脑神经细胞株Ｒ２Ｌ２为细胞模型,应用酵母双向杂交系统（ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ）筛选和鉴定Ｐ７５ＮＧＦＲ胞内区Ｐ７５ＩＣＤ作用的蛋白。结果：和Ｐ７５ＮＧＦＲ作用的蛋白由一个６００ｂｐ大小的ＣＤＮＡ片段编码。结论：该工作将有助于探讨Ｐ７５ＮＧＦＲ介导细胞凋亡的分子机制和信号,为勃勃系统退行性病变的病因、     

血小板衍生生长因子在梗阻性黄疸鼠肝中的免疫组化分析

通过大白鼠胆总管结扎模型，研究血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）在肝内的免疫组化定位，探讨ＰＤＧＦ在梗阻性黄疸肝纤维化中的作用。实验结果：胆总管结扎２ｗ后肝小叶汇管区有明显的间质细胞和胆管增生及肝纤维化，胆总管结扎４ｗ导致肝硬变形成；肝脏ＰＤＧＦ－Ｂ链免疫组化染色显示胆总管结扎２ｗ后肝间质细胞和胆管上皮细胞呈阳性染色反应。表明ＰＤＧＦ在肝间质细胞增生、产生大量细胞外基质的过程中起重要作用，与胆道梗阻所致肝纤维化、肝硬变有关。     

人脑源性神经营养因子cDNA克隆及在酵母中的表达

目的：克隆和表达人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）。方法和结果：从原代培养人雪旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取了编码带前导肽的和成熟的ｈＢＤＮＦ２个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序表明其顺序与文献报道一致。将这２个ｃＤＮＡ片段分别插入到大肠－酵母穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定，大小都在１５０     

1,6—二磷酸果糖生产条件的优化控制

在用啤酒酵母发酵生产１，６－二磷酸果糖的过程中，通过优化控制过程中的ｐＨ温度，糖及磷酸盐含量，搅拌速度等条件可使ＦＤＰ的生成速率以及磷的转化率达到适应工业化生产的水平。     

国产1,6-二磷酸果糖治疗小儿病毒性心肌炎疗效观察

目的观察国产1,6-二磷酸果糖(FDP)治疗小儿病毒性心肌炎(VMC)的疗效。方法小儿病毒性心肌炎患儿80例,随机分为3组,A组应用国产FDP,B组应用进口FDP治疗,C组应用维生素C对照观察,1疗程(15d)结束后对患儿血清心肌酶谱的变化及临床治疗效果进行评价。结果A、B组血清心肌酶学恢复及临床治疗效果明显优于C组,且A、B组疗效相当。结论国产FDP治疗小儿病毒性心肌炎效果明显且可替代进口FDP,国产FDP价格较低,值得临床推广应用。     

儿科临床各种体液FDP微量检测

本文对Hoq’s法进行改良,建立起微量精确、快速可靠,简便易行的“微量醛化鞣化红细胞血凝抑制免疫实验”(MGTRCHII),并用此法对羊水、脑脊液、胸水、腹水、血清,尿液中FDP进行了定量测定。文中对致敏血球制备,特异抗体纯化,体液中FDP微量检测技术,引起非特异凝集物质的吸收等作了较详介绍。并对本法的特是性、敏感性、可靠性作了检验。同时通过实验手段对各种影响因素进行了观察、研究和讨论。     

1,6-二磷酸果糖的体内过程研究

目的:研究1,6-二磷酸果糖的体内过程。方法:取SD大鼠,静脉注射三种剂量的[32P]FDP,考察其在大鼠体内吸收、分布、代谢、排泄过程。结果:三种剂量给药后的药物动力学显示血浆半衰期约为10min,表观分布容积与体重相当。心、肝、肾、脾和肺的放射性浓度高,肌肉和脂肪中的浓度低。给药后第1天约通过尿排泄10%。结论:[32P]FDP静脉注射后迅速随血流分布,心中浓聚,此研究为其治疗心血管、慢性阻塞性肺病(COPD)等疾病提供临床理论依据。     

持续低温微量灌注丹参和1,6-二磷酸果糖对离体大鼠心脏的保护作用研究

目的观察附加丹参注射液（SM）和1,6-二磷酸果糖（FDP）的St.Thomas液持续低温微量灌注离体大鼠心脏的保护作用.方法SD大鼠24只,随机分为4组（n=6）：对照组、SM组、FDP组、SM＋FDP组.离体大鼠心脏用冰冷的St.Thomas液停搏后,用Langendorff方式灌注K-H液30min,测定心功能：左心室压力变化速率最大值（±dP/dtmax）、左心室发展压（LVDP）、心率（HR）和冠脉流量（CF）,然后分别用St.Thomas液、St.Thomas液＋SM、St.Thomas液＋FDP、St.Thomas液＋SM＋FDP停搏心脏,并在4℃条件下持续灌注（20μL/min）保存6h,再以Langendorff方式复灌30min,再次测定心功能指标,最后分析持续灌注保存液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性以及心脏含水量.结果SM组、FDP组和SM＋FDP组的＋dP/dtmax恢复率和FDP组的LVDP恢复率均明显高于对照组;SM组、FDP组、SM＋FDP组的LDH活性和FDP组、SM＋FDP组的CK活性均明显低于对照组（P〈0.05）;在心功能和酶学测定结果中,SM、FDP分别单用与两者合用相比较无明显差异（P〉0.05）.结论应用低温持续微量灌注保存方法,在St.Thomas液中单独添加SM或FDP均可改善心脏保存效果,两者伍用效果与单用比较无明显差别.     

1,6-二磷酸果醣对兔心肌细胞中LDH漏出和ATP含量的影响

为探讨 1,6 -二磷酸果醣 (FDP)对心肌细胞的影响 ,采用胶原酶二步灌流法将成年兔心肌细胞分离出来 ,培养于含有 2 5和 5 0mmol/LFDP的培养基中 ,分别于 0 ,4 ,8,12h取样 ,作台盼兰染色和光学显微镜上的观察 ,并对培养基中乳酸脱氢酶 (LDH)活性及心肌细胞中三磷酸腺苷 (ATP)含量进行了测定 .结果 ,在上述条件下 ,圆形细胞 (死亡的或受损后尚存活 ,但形态变圆的细胞 )的百分率一直保持恒定 .在FDP实验组 ,各时间点的LDH活性均低于对照组 .在 2 5mmol/L ,4h时 ,LDH的活性显著降低 (P <0 0 5 ) .而在 5 0mmol/L浓度 ,12h时 ,LDH活性却显著升高 (P <0 0 5 ) .在FDP低浓度为 2 5mmol/L和高浓度 5 0mmol/L时 ,与对照组相比 ,在各时间点 ,心肌细胞中ATP含量呈增加趋势 ,并在 5 0mmol/L浓度 ,8h时 ,差别显著 (P <0 0 5 ) .本研究表明 :在浸泡式培养的条件下 ,不同浓度的FDP ,在不同的接触时间 ,对兔心肌细胞膜产生不同的影响 .低浓度时 ,FDP对兔心肌细胞膜有稳定作用 ,浓度高 ,接触时间长 ,可造成心肌细胞膜通透性增高 ,进而造成心肌细胞损害 .结论 :无论将FDP用于临床医疗或科学研究中 ,根据用药目的 ,给药途径 ,方法及接触时间的不同 ,FDP的剂量可有很大差异 .因此 ,为满足使用需要 ,寻找出FDP的最适     

1,6-二磷酸果糖对小鼠阿霉素急性心肌损伤防治作用的研究

目的探索阿霉素(ADR)急性心肌损伤和1,6-二磷酸果糖(FDP)对该损伤防治作用的可能机制。方法将健康昆明小鼠48只,随机分成3组,即ADR组、FDP组和NS组。每组16只,雌雄各半。ADR组与FDP组均一次性腹腔注射ADR(30mg/kg),FDP组另外腹腔注射3次FDP[1100mg/(kg·次)],隔日1次,NS组注射等量生理盐水。结果用药至第6天,发现ADR组动物心肌组织中MDA含量升高,GSH含量降低,而FDP组这种变化幅度则较小。结论脂质过氧化反应的增强和机体抗氧化能力的下降参与了ADR急性心肌损伤;降低脂质过氧化反应程度和提高肌体的抗氧化能力,可能是FDP减轻ADR急性心肌损伤的机制之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯干预柔红霉素致小鼠心肌损伤的疗效观察

目的 观察1,6-二磷酸果糖(FDP)与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对柔红霉素介导的小鼠心肌毒性的预防作用。 方法 将昆明种小鼠采用随机数字表法随机分为正常对照组、模型组、FDP组、EGCG组,每组20只,其中FDP、EGCG两组分别灌胃给予FDP与EGCG 40 mg/kg,对照组和模型组同时灌胃给予等体积生理盐水(NS)。给药一周后,除正常对照组腹腔注射等体积的生理盐水(NS)外,其余各组均腹腔注射给予柔红霉20 mg/kg,给予柔红霉素48 h后测定各组小鼠血清心肌酶[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、-羟基丁酸脱氢酶(-HBDH)]水平,采用SPSS 19.0统计软件对数据进行统计分析。 结果 对照组小鼠存活率为100%,而模型组与对照组比较,存活率明显下降(60%),且其血清心肌酶指数升高(P<0.01);FDP组、EGCG组分别与模型组比较,存活率升高(90%),而心肌酶指数均有所降低(P<0.01),其中EGCG组心肌酶指数下降更为明显(P<0.05)。 结论 FDP及EGCG可减轻柔红霉素对小鼠的心肌毒性,而EGCG疗效相对FDP可能更佳。      

D二聚体及FDP检测在骨折患者的应用价值

目的:探讨D二聚体(DD)及纤维蛋白(原)降解产物(FDP)定量检测在骨折病人的临床价值。方法:采用免疫比浊法对124例骨折患者术前、术后第2天及第7天进行血浆DD及FDP的定量检测,观察指标变化。结果:124例患者有15例并发深静脉栓塞(DVT),其中3例并发肺栓塞(PE),并发DVT组术前、术后血浆DD及FDP的检测结果有显著性差异(P<0.05),呈进行性增高。未并发DVT组术前、术后的检测结果无显著性差异(P>0.05)。而并发DVT组与未并发DVT组相比较,血浆DD及FDP的检测结果有显著性差异(P<0.05)。结论:血浆DD及FDP的动态监测对骨折术后并发血栓性疾病具有早期诊断价值。     

口服FDP对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究二磷酸果糖钠（FDP）对D-氨基半乳糖引起的小鼠急性肝损伤的保护作用，并分析其对小鼠肝生化指标的影响。方法 对小鼠连续灌胃FDP3天后，采用腹腔注射D-氨基半乳糖造成小鼠急性肝损害，研究各组小鼠间肝损害的差异，衡量FDP的肝保护作用。同时检测FDP对小鼠生化指标（ALT、T-BIL、Asr）的影响。结果 FDP对肝损伤模型小鼠有一定的保护作用，并可降低血液中ALT、AST和T-BIL的水平。结论 FDP能防止化学物质造成的肝损伤，保护肝功能。