献血员中TT病毒DNA检测及部分基因序列分析

目的探讨献血员中一种与输血后肝炎有关的病毒—ＴＴＶ的感染情况。方法采用ＴＴＶ基因组ＯＲＦ１区的套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法检测２６２份献血员血清标本。结果在血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）异常、ＨＢｓＡｇ及抗－ＨＣＶ阴性的５８份献血员血清标本中，１８份ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率为３１０％；在２０４份正常献血员血清标本中检出３０份（１４７％）ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率明显低于ＡＬＴ异常献血员人群（χ２＝３８１，Ｐ＜００５）。序列分析结果显示，其序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列的同源性大于９７％，可能属同一基因型。结论提示我国献血员中存在ＴＴＶ感染，ＴＴＶ存在“健康携带状态”，输血可能成为传播ＴＴＶ感染的途径之一     

7株TT病毒部分核苷酸及氨基酸序列分析

目的 了解TT病毒（Transfusion transmitted virus,TTV）在我国的流行情况,研究我国TTV株序列特点。方法 采用半巢式聚合酶链反应（PCR）扩增TTVDNA,PCR阳性扩增产物直接测序。结果 我国7例TTVDNA株部分序列与日本株相比,核苷酸及氨基酸同源性分别为64．7％－98．4％及62．7％－96．4％;7株间的核苷酸及氨基酸同源性分别为63．5％－98．4％及60．2％－96．4％,分别属于两种型及其中一型中的两种亚型。结论 我国存在TTV并可能存在多种TTV基因型。     

南京市部分幼儿TT病毒DNA检测及基因序列分析

目的 了解幼儿人群中TT病毒的流行率及基因判别。方法 设计、合成引物,采用半套式聚合酶链反应（hemi-nested PCR)方法检测幼儿血清标本并进行序列分析。结果 在110份幼儿血清中,TTV DNA总检出率为12．73％。在107名ALT正常,抗HAV－IgM、HBsAg、抗HCV阴性的幼儿血清中,TTV DNA检出率为11．2％（12／107）;从1名ALT升高幼儿血清中检出TTV DNA,从2名HBsSg阳性幼儿血清中检出TTV DNA阳性血清1份。对2株TTV DNA阳性株序列分析结果显示,它们与日本分离株N22、TA278（G1a)、TX011（G1b)、TS003(G2a)、NA004（G2b)和中国株CHN1相应位置核苷酸序列的同源性分别为83．3％／86．0％、84．2％／87．8％、93．7％／98．6％、67．6％／67．1％、64．9％／64．4％、83．8％／88．3％,经系统发育分析它们属于G1b型。结论 幼儿人群中存在TTV感染,TTV流行率为12．73％。TTV感染可能存在血源传播途径外的其他传播途径,并存在健康携带状态。     

特异核酸捕获-PCR技术在从高背景标本中检测TT病毒DNA的应用

目的 解决因TTV在样本中的水平极低而导致从高背景核酸样本中检测TTV DNA存在非特异性扩增的问题。方法 采用辛和素生物素系统将TTV特异的核酸片段包括被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的TTV DNA,从而建立特异核酸捕获－PCR检测TTV DNA方法,并以10份血清（4份TTV DNA阳性）和肝组织配对标本为对象与抽提法进行比较,阳性产物进行DNA序列分析,最后评价特异核酸捕获－PCR的特异性。结果 抽提法在血清和肝组织中的检出率分别为4／10和9／10。RFLP初步分析产物具有特异性,但经DNA序列分析证实的检出率仅分别为2／10和3／10。采用特异核酸捕获－PCR检测的结果与抽提法经DNA序列分析后的结果一致,获得的电泳条带也更为清晰。结论 特异核酸捕获－PCR方法能显著提高TTV DNA检测的特异性,特别是针对高背景核酸标本,表明该方法在其他低水平病原体检测及高背景核酸样本检测中也有广泛的应用前景。目前广泛采用的TTV DNA检测方法如不进行DNA序列分析则可导致过高地估计了TTV的感染率。．     

腮腺炎病毒疫苗株与野毒株的部分核苷酸序列分析

目的比较腮腺炎病毒疫苗株与野毒株的核苷酸序列差异。方法腮腺炎病毒疫苗株Ｓ７９株和ＪｅｒｙｌＬｙｎｎ株在鸡胚细胞上从第５代连续传至第２５代,采用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）法,从传代前后的腮腺炎病毒疫苗株以及野毒株的基因组中扩增血凝素－神经氨酸酶基因片段（ＨＮ）、融合蛋白基因片段（Ｆ）和小分子疏水蛋白基因（ＳＨ）,并利用双脱氧核苷酸链终止法对ＰＣＲ产物进行测序。结果传代之前第５代的两种疫苗株的目的基因的核苷酸序列完全一致;传至第２５代的Ｓ７９株的目的基因的核苷酸序列比２５代的ＪｅｒｙｌＬｙｎｎ株显示了更高的突变率。比较现行疫苗株与野毒株的核苷酸序列后发现,１９９５年分离的野毒株的核苷酸序列与疫苗株有明显的差异。结论推测Ｓ７９株可能与ＪｅｒｙｌＬｙｎｎ株同源,同一地区可能有两种以上的腮腺炎病毒野毒株导致流行性腮腺炎的发生     

我国急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）自深圳、长春、杭州等地４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶｃＤＮＡ，对其中３株ＨＥＶｃＤＮＡ的ＯＲＦ２基因片段，用荧光法直接测定其核苷酸序列，并与戊型肝炎病毒墨西哥株（Ｍ）、缅甸株（Ｂ）和新疆流行株（ＣＨ１·１）进行了比较，结果该３株散发性ＨＥＶ与Ｍ株的核苷酸序列同源性分别为８０．２％、７９．９％和７９．４％；与Ｂ流行株的同源性为９５．５％、９３．９％和９５．１％；与散发株的同源性为９３．４％、９２．３％和９３．８％；与ＣＨ１·１的同源性为９７．０％、９６．５％和９５．９；表明该３株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＣＨ１·１的核酸序列同源性较高，可能属同一亚型。     

登革4型病毒包膜蛋白基因的克隆和部分核苷酸序列测定

利用反转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术分离并克隆了登革４型０１株病毒的包膜蛋白（Ｅ）基因，并测定了部分核苷酸序列，发现该株与国外发表的一株相应区域核苷酸序列的同源性为９３．４％，由此推测出氨基酸序列的同源性为９２．１％。     

散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

目的为阐明戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）毒株的地理分布、流行特征以及研制血清学诊断试剂和基因工程疫苗提供资料。方法选择１例浙江仙居山区散发性ＨＥ患者，从其血清中分离ＨＥＶＲＮＡ，通过逆转录－套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ），扩增该散发性ＨＥＶ（Ｚ－３３株）ＯＲＦ２区部分ｃＤＮＡ片段（４９７ｂｐ），然后进行直接序列分析，并与ＨＥＶ各主要代表株序列作比较。结果Ｚ－３３株与新疆流行株ＣＨ１．１的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为９６．７％及９８．２％；与缅甸流行株的同源性分别为９４．２％及９９．１％；与缅甸散发株的同源性分别为９５．２％及９９．１％，与墨西哥株的同源性分别为８１．８％及９４．５％。结论浙江仙居散发性ＨＥＶＺ－３３株和新疆流行株ＣＨ１．１一样，与ＨＥＶ缅甸株可能为同一亚型。     

我国2型登革病毒NS1基因的克隆及部分碱基序列的测定

将我国登革２型病毒株ＮＳ１基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增片段直接克隆到Ｔ－载体ＤＮＡ中。用限制性内切酶分析经蓝／白斑筛选和ＰＣＲ鉴定的阳性克隆的ＤＮＡ，证明插入片段与扩增的ＮＳ１片段的大小一致。用双脱氧链末端终止法测序结果表明，ＮＳ１基因扩增片段５’端的部分碱基序列并未发生改变。     

北京地区TT病毒分离株全基因的克隆及序列测定

目的 克隆和测定北京地区ＴＴ病毒（ＴＴＶ）分离株全基因序列。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从１例临床非甲￣庚型肝炎病人血清中分段扩增ＴＴＶ全基因,获得５个互相重叠的片段,分别长１９９ｂｐ（１－１９９）,１２６７ｂｐ（９０－１３５６,８７８ｂｐ（１３５４－２２３１,１１２９ｂｐ（２１７８－３３０６,４３４ｂｐ（３３０６－３７３９）,用标准的分子生物学方法测定了这５个序列,从而得到全长ＴＴＶ基因     

TTV在肝炎患者中的检测及临床意义探讨

目的研究新近报道与丙氨酸转氨酶异常相关的ＴＴＶ在已知和未知病毒性肝炎中的临床意义。方法设计ＴＴＶ部分基因的特异性引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了１０４例病毒性肝炎的ＴＴＶＤＮＡ，并对１例ＴＴＶ阳性标本克隆测序。结果ＴＴＶＤＮＡ序列与日本ＴＴＶ部分基因序列相对应位置的核苷酸同源性为９８．４％。在１０４例肝炎患者中ＴＴＶＤＮＡ阳性检出率为２４．０％（２５／１０４），其中在非甲～戊和庚型肝炎患者中为４８．０％（１２／４２），在甲型肝炎中为１９．０％（４／２１），乙型肝炎为２５．０％（８／３２），丙型肝炎为１１．１％（１／９），９例ＨＧＶＲＮＡ阳性者中未检出ＴＴＶＤＮＡ。值得注意的是重型肝炎ＴＴＶ检出率极高，其中急性重型肝炎６例中阳性为４例（６６．７％），慢性重型肝炎６例中阳性为３例（５０．０％）。结论ＴＴＶ在我国肝炎病人中存在。在重型肝炎中有较高的发生率，可能是未知病毒致急性和慢性及重型肝炎的病因之一。     

一株新型戊型肝炎病毒的部分克隆及分析

目的　对得自北京地区一例急性散发性戊型肝炎病人病毒 (ChinaT)作基因克隆分析。方法　用逆转录套式聚合酶链反应方法从患者粪便中克隆病毒并做核苷酸序列分析。结果　ChinaT株与 4株典型中国株HEV(ChinaA、ChinaB、ChinaC、ChinaD)、缅甸株、墨西哥株、美国株、非洲的乍得株核苷酸 /氨基酸同源性分别为 78% /92 %、78% /92 %、79% /90 %、78% /94%、76 % /92 %。结论　ChinaT株有较高的基因异质性 ,与其它HEV株有很大的不同 ,是一新型HEV。     

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测输血传播病毒DNA

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－微孔板杂交检测ＴＴ病毒（ＴＴＶ）ＤＮＡ的方法,探讨不国因素对方法敏感度和特异性的影响。方法 硫氰酸胍裂介异丙醇沉淀提取ＴＴＶ ＤＮＡ,以ＰＣＲ扩增,扩增产物上标记的生物素与包被在微孔板上的链亲和素结合标记有荧光素的探针与产物杂交,再与酶标抗荧光素抗体结合,经底物显果在各种影响因素中,当ＮａＯＨ浓度为０．３ｍｏｌ／Ｌ,杂交时间６０ｍｉｎ,酶反应时间为４５ｍｉｎ时,结     

中国和日本部分地区TT病毒的检出率及基因亚型 …

目的 比较中国及日本部分地区ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染情况及基因亚型分布特征。方法 采用半巢式－聚合酶链反应（Ｓｅｍｉ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）检测中国和日本部分慢性丙型肝炎患者及正常人血标本中的ＴＴＶ感染情况,并对阳性产物片段直接进行序列分析。结果 发现中国部分正常人群ＴＴＶ感染率为６４％;慢性丙型肝炎患者ＴＴＶ感染率中国国为６８％,日本为４９．１％,基因亚型分布中国ＴＴＶ Ｇ２ａ＋２ｂ亚型占６０％,     

9株YONBAN相关TTV变异株全基因序列测定及其结构、分型的研究

目的：对9个TTV新分离株全基因序列测定，基因结构及基因分型的研究。方法：从9名TTV第4基因群感染阳性的婴儿血清中抽提取其DNA，用long inverted PCR扩增出全基因组，克隆和测定全基因组序列，并对测序结果进行计算机分析。结果：首次次测定了TTV第4基因群共9个新分离株的全基因序列，其中8个分离株代表核基因群首次报道的8个新基因型。结论：TTV基因组核酸序列具有高度异质性及基因型的高度多样性，但是，其独特的转录特性和基因组的基本结构在各自的基因群及基因型中十分保守。     

Prevalence and genotypic distribution of TT virus in Athens, Greece

The prevalence of TT virus (TTV) infection in various population groups from Athens, Greece, was assessed by the polymerase chain reaction (PCR) using two primer sets from distinct regions of the genome: the conventional set derived from the open reading frame-1 (ORF-1) and the new, highly sensitive set targeting the region that includes the TATA signal localized upstream of ORF-2. Based on both primer sets, TTV DNA was detected in 42/50 (84.0%) healthy individuals, 42/50 (84.0%) chronic hepatitis C patients, 31/39 (79.5%) acute non-A-E hepatitis patients (group I), 14/16 (87.5%) renal failure patients with acute non-A-E hepatitis (group II), 47/50 (94.0%) intravenous drug users (IVDU), 36/50 (72.0%) hemophiliacs, and 21/31 (67.7%) hemodialysis patients. The presence of TTV was not associated with any particular risk group, and no differences were observed in relation to demographic, biochemical and virological characteristics between TTV DNA-positive and -negative patients. TTV did not seem to have a profound effect on the course of chronic C or acute non-A-E hepatitis either. Phylogenetic analysis revealed that TTV strains circulating in the greater metropolitan area of Athens belong not only to the G1 and G2 genotypes that are encountered worldwide, but also to G3 and to G5 that are found mainly in Europe and Asia, respectively. Further studies will shed light on the role of this highly prevalent virus.     

贵州地区不同人群TTV核酸检测及部分核苷酸序列分析

目的 了解贵州地区TTV感染状况，分析TTV贵州株的基因特点。方法 以公布的TTV第1读码区序列设计两对寡核苷酸引物，用套式聚合酶链反应法(nested—PCR)检测贵州地区不同人群血清中TTV核酸(TTV DNA)，并对3份TTV DNA阳性血清的PcR产物，用直接测序法测定核苷酸序列。结果 62例正常人，37例志愿献血员，50例血液透析患者，107例静脉药瘾者及139例肝病患者血清中TTV DNA阳性率分别为6．45％(4／62)，8．1％(3／37)，26.0％(13／50)，25.23％(27／107)和16.55％(23／139)。在肝病组中，重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的TTV DNA阳性率分别为35.71％(5／14)，14．15％(15／106)和15．79(3／19)。测定的282个核苷酸中，3株贵州株的同源性均高于99％，与日本株N22相比，同源性都为98％。结论 贵州存在TTV感染，血透患者中有较高的TTV感染率，TTV可能是重型肝炎的病原因子，3株贵州株可能为同一基因型。