重度子痫前期母血胎儿有核红细胞水平与红细胞免疫黏附功能的关系

子痫前期(preeclampsia)是妊娠期特有的严重并发症,是影响孕产妇和围产儿发病率和死亡率的主要原因之一.研究发现,子痫前期的发生与胎儿细胞、滋养层细胞、炎性合体滋养层细胞穿透胎盘,向母体输送与释放增加有关[1-3],尤其是目前用于无创性产前诊断的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)的穿透渗漏成为研究热点,报道认为子痫前期孕妇血循环中FNRBC数量增加[4-6].人体内部起免疫功能的细胞主要有红细胞和白细胞,而红细胞清除免疫复合物的作用比普遍认为具有免疫和防御功能的白细胞高.研究认为子痫前期的发生与孕妇自身免疫系统病理损伤和紊乱有关[7-9],目前国内尚未检索到有关该类孕妇母血FNRBC数量变化及其与红细胞免疫黏附功能相关性分析的报道.本研究对此进行了探讨,期望为阐明重度子痫前期发病的可能机制提供依据,现将结果报告如下.     

孕妇血中胎儿细胞和游离胎儿核酸的变化与子痫前期预测

存在于孕妇外周血中的胎儿细胞与子痫前期发生的相关性早已被认识.1997年Lo等[1]首次发现在孕妇血中存在着游离的胎儿DNA,可以利用这种DNA对胎儿遗传病进行产前诊断.其后的研究发现,在子痫前期患者血中有高浓度的胎儿核酸,而且,游离胎儿核酸升高发生在子痫前期症状出现之前,因此利用这种核酸可以预测子痫前期的发生.现将近年来的相关研究进行综述.     

Toll样受体在子痫前期中的研究进展

免疫因素可能是导致子痫前期发生的重要原因,Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在正常孕妇和子痫前期孕妇的外周血及胎盘组织等均有差异表达,近年来研究发现在子痫前期患者体内存在新的TLRs配体以及调控机制,参与诱发炎症反应、损伤血管及诱导滋养细胞凋亡,可能在子痫前期的发生发展中发挥着重要作用。     

应用血清蛋白质组学筛选子痫前期胎盘组织相关抗原

目的筛选子痫前期胎盘组织相关抗原蛋白,为研究子痫前期发病机制提供线索。方法病例来源于2008年1月至10月天津医科大学总医院妇产科分娩的孕妇,用筛选实验对8例重度子痫前期患者胎盘组织采用双向凝胶电泳(2-DW)的方法提取胎盘蛋白,用免疫印迹技术获得免疫印迹图谱,识别差异反应的蛋白质点,根据差异反应的蛋白质点位置在平行胶上找出匹配的蛋白质点,对相应的蛋白质点进行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和数据库搜索。用验证实验选择子痫前期患者48例,其中轻度子痫前期24例,重度子痫前期24例。对照组为同期产前检查健康孕妇23例,采用ELISA方法检测子痫前期患者血清中纤维蛋白原beta链抗体、热休克蛋白70抗体的表达水平。结果筛选实验子痫前期患者胎盘组织2-DE分离后与患者自身血清免疫印迹反应,而与正常孕妇血清未见免疫印迹反应的蛋白点,经质谱鉴定分别为纤维蛋白原beta链(FBG-β)、热休克蛋白70(HSP70)、线粒体核糖体蛋白的可溶性结构蛋白以及细胞角蛋白9。验证实验证实FBG-βAb、HSP70Ab在子痫前期患者血清中表达升高。结论子痫前期患者体内存在针对胎盘组织相关抗原的体液免疫。这些胎盘抗原蛋白可能在子痫前期的发病中起重要作用。     

循环IgG类免疫复合物作为妇科恶性疾患中有力的肿瘤标志

在人类某些恶性疾患已显示循环免疫复合物(CIC)浓度升高。Robins等报告活动性卵巢癌病人CIC值比缓解期病人高,但其他报告未证实妇科恶性疾患中CIC与临床的关系。为了确定IgG类CIC是否可作为女性生殖道恶性疾患进展的生化标志,作者对139个住院手术的病人的IgG类CIC作了纵向研究,并与以后临床缓解期和临床诊断为复发以前所测的数值作比较。对照组为31个健康妇女,14个非恶性疾病,26个良性卵巢囊肿病人。方法是从200μl血清中沉淀出免疫复合物,用商业药箱和激光比浊计定量测定含IgG的复合物。结果:(1)手术前数值:卵巢、宫颈、宫内膜和阴道/外阴癌的平均值分别为120.9μg/ml、~132.4μg/ml、101.9μg/ml和179.2μg/ml,这些值之间无明显差异。卵巢、宫颈或宫内膜癌的CIC     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78( GRP78)在子痫前期孕妇胎盘组织中表达及其与子痫前期发病机制的关系.方法:选择2009年1 ～12月在青岛市市立医院及青岛市第八人民医院住院的子痫前期孕妇120例,其中早发型轻度子痫前期孕妇30例(早发轻度组),晚发型轻度子痫前期孕妇30例(晚发轻度组),早发型重度子痫前期孕妇30例(早发重度组),晚发型重度子痫前期孕妇30例(晚发重度组);另选同期健康孕妇30例为健康孕妇组.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胎盘组织中GRP78mRNA相对表达量;采用免疫组织化学方法、West-ern-Blotting检测胎盘组织GRP78蛋白的表达.结果:①子痫前期各组胎盘组织中GRP78 mRNA表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).②子痫前期各组和健康孕妇组胎盘组织中都有GRP78蛋白表达,主要表达于细胞质,呈棕黄色染色.Western-Blotting检测结果显示,子痫前期各组胎盘组织中GRP78蛋白表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:GRP78在子痫前期胎盘组织中表达升高,GRP78的表达水平变化可能与子痫前期发病有关.     

重度子痫前期母血FNRBC水平与红细胞免疫黏附调节因子活性的关系

目的:探讨重度子痫前期孕妇外周血胎儿有核红细胞(FNRBC)水平及其红细胞免疫黏附(RCIA)调节因子活性的变化及相关性.方法:采用病例对照研究方法,选择重度子痫前期孕妇34例为研究组,同期18例正常孕妇为对照组,采用单密度梯度离心法,富集计算FNRBC数量;同时采用ELISA法测定孕妇血清RCIA促进因子和抑制因子活性及红细胞受体花环率(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR),分析指标变化及相关性.结果:研究组孕妇外血中FNRBC数量较对照组显著升高(P<0.05);研究组RBC.C3bR花环促进率(RFER)与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而RBC-C3bR花环抑制率(RFIR)明显高于对照组(P<0.05);研究组RBC-C3bRR明显低于对照组(P<0.05),而RBC-ICR则明显高于对照组(P<0.05).研究组FNRBC水平与RBC.C3bRR呈负相关(r=-0.568,P<0.05)、而与RFIR、RBC-ICR呈正相关(r=0.673,P<0.05;r=0.712,P<0.05).结论:重度子痫前期孕妇外周血中FNRBC数量增多能引起患者红细胞免疫黏附抑制因子活性增加,红细胞免疫功能低下,胎儿物质向母血的渗漏增多,机体免疫调控失衡和紊乱,均可能是重度子痫前期免疫学发病机制中的重要环节.     

ACE基因I/D多态性与子痫前期高血压和肾脏损害关系的研究

目的探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因插入／缺失（I／D）多态性与子痫前期患者高血压和肾脏损害程度的相关性。方法选择子痫前期患者82例，正常孕妇45例，利用多聚酶链反应（PCR）分析其外周血白细胞中ACE基因多态性，计数两组孕妇ACE基因型和等位基因分布频率，比较不同基因型子痫前期患者高血压程度和肾功能。结果根据插入／缺失片段的有无，将ACE基因分为DD、ID、II三种基因型，子痫前期患者和正常孕妇ACE基因型和等位基因频率无统计学差异。子痫前期患者中携带D等位基因孕妇的收缩压和舒张压呈升高趋势，血清尿酸含量显著增加，但肌酐、尿素氮水平无统计学差异。结论ACE基因与子痫前期肾脏损害密切相关，携带D等位基因的子痫前期患者肾脏损害严重，血压也有升高趋势，提示D等位基因可能是子痫前期患者病情加重的不利因素。     

晚期糖基化终产物受体、P-选择素与子痫前期的相关性研究

目的:探讨晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、P-选择素(P-selectin)在子痫前期发生、发展中的作用及意义。方法:应用RT-PCR检测30例正常孕妇和40例子痫前期患者(轻度子痫前期患者20例和重度子痫前期患者20例)胎盘组织和血液中RAGE和P-选择素mRNA的表达情况。结果:RAGE和P-选择素在子痫前期患者和正常孕妇胎盘组织和血液中均有表达。子痫前期组RAGE、P-选择素的mRNA表达水平均高于正常孕妇(对照组)(P<0.05),且重度子痫前期组高于轻度子痫前期组(P<0.05)。RAGE和P-选择素在子痫前期胎盘组织和母血中的表达均成正相关(胎盘r=0.814,血液r=0.796)。结论:子痫前期患者胎盘组织及血液中RAGE、P-选择素的mRNA表达升高可能与子痫前期的发病及病情发展有关;RAGE、P-选择素在子痫前期的发生、发展中可能有协同作用。     

子痫前期患者血清中H2O2与中性粒细胞及T淋巴细胞活化的关系

大量研究证实,子痫前期孕妇存在系统性的高氧化应激状态及炎症性免疫活化[1-2].研究发现,子痫前期孕妇血清中存在高水平的氧化应激产物H2O2,其可能来源于氧化应激性胎盘组织及外周大量活化的中性粒细胞[3].血管内皮细胞损伤和功能紊乱被认为是子痫前期疾病进展中的关键环节,而氧化应激和免疫细胞活化可能是引发内皮系统损伤的两个主要因素[4-5].但是,关于子痫前期氧化应激和免疫细胞活化之间的关系至今尚不明确.本研究旨在探讨子痫前期患者血清中H2O2在中性粒细胞及T淋巴细胞活化过程中的作用.     

子痫前期孕妇血清和胎盘组织中干扰素-γ诱导蛋白10的表达及意义

目的:检测子痫前期孕妇胎盘组织及血清中干扰素-γ诱导蛋白10(IP-10)的表达情况,探讨其与子痫前期发病的关系。方法:收集正常妊娠、轻度子痫前期、重度子痫前期孕妇的胎盘组织及血清,采用ELISA、实时荧光定量PCR及Western blot方法检测IP-10在3组孕妇胎盘组织及血清中的表达变化。结果:ELISA结果显示,与正常对照组相比,轻度子痫前期组、重度子痫前期组孕妇血清中IP-10表达均明显增加(P均<0.05);实时荧光定量PCR及Western blot结果显示,与正常对照组相比,轻度子痫前期组、重度子痫前期组孕妇胎盘组织中IP-10 mRNA及蛋白表达水平均有不同程度增高(P均<0.05)。结论:子痫前期孕妇胎盘及血清中IP-10表达升高,可能与子痫前期的发病有关。     

子痫前期患者内皮素受体A基因G-231A多态性的研究

目的:探讨内皮素受体A(EDNRA)G-231A基因多态性与子痫前期有无关联。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP),对成都地区220例子痫前期患者(其中轻度71例,重度149例)和270例健康对照组孕妇EDNRA基因G-231A多态性进行检测。结果:子痫前期组和正常孕妇组EDNRA基因G-231A位点A等位基因频率分别为35.9%、31.3%,两组之间等位基因频率分布无显著差异(P>0.05);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,A等位基因频率分别为36.3%、35.2%,二者无显著差异(P>0.05)。此外,子痫前期组和正常孕妇组不同基因携带者收缩压和舒张压水平无统计学差异(P>0.05)。结论:本研究未发现EDNRA基因G-231A多态性与子痫前期发病有关联。     

氧化低密度脂蛋白及其受体与子痫前期发病的关系

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)与子痫前期发病的关系.方法 选择2007年6月至2008年1月在青岛大学医学院附属医院产科住院分娩的子痫前期孕妇73例,其中轻度子痫前期孕妇35例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇38例(重度子痫前期组).选取同期正常晚期妊娠妇女45例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组孕妇血浆中oxLDL水平;采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测各组孕妇胎盘组织中LOX-1 mRNA及蛋白表达水平;采用RT-PCR检测各组孕妇胎盘组织中半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达水平.结果 (1)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平分别为(0.42±0.11)及(0.68±0.12)mg/L,明显高于对照组的(0.35±0.14)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(2)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1mRNA表达水平分别为0.70±0.10及0.84±0.08,明显高于对照组的0.58±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(3)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为0.79±0.15及0.90±0.12,明显高于对照组的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(4)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中caspase-3 mRNA表达水平分别为3.82±0.18及5.39±0.14,明显高于对照组的2.19±0.20,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(5)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平与胎盘组织中LOX-1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.93,P<0.05);胎盘组织中LOX-1 mRNA表达与胎盘组织caspase-3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.84,P<0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中oxLDL水平升高,并上调胎盘组织中的LOX-1表达水平,从而参与子痫前期的病理生理过程.     

可溶性血管内皮生长因子受体-1在子痫前期胎盘及在外周血的研究

目的研究可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1) mRNA在正常妊娠和子痫前期胎盘中的表达差异及相应的母体外周血中sFlt-1水平的变化。方法选取15例子痫前期孕妇(子痫前期组)和14例孕周与之相匹配的血压正常妊娠孕妇(对照组),用ELISA方法测定其外周血中sFlt-1的水平;并应用实时荧光定量PCR测定两组胎盘组织中sFlt-1 mRNA水平。结果外周血中sFlt-1的水平子痫前期组明显高于对照组,分别为(16.9±8.32)μg/L、(5.48±2.09)μg/L,两者差异有显著性(P<0.05)。sFlt-1 mRNA在两组胎盘中均有表达,在子痫前期组的表达明显高于对照组的表达分别为(4.11±4.09)、(1.69±1.61),两者差异有显著性(P<0.05)。子痫前期组血清sFlt-1水平与24h尿蛋白定量呈明显正相关(r=0.741,P<0.05)。结论sFlt-1 mRNA在子痫前期组孕妇的外周血中及胎盘组织表达升高,可能与子痫前期的病因及病理生理有关。     

孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及应用研究

从1997年首次在孕妇外周血中发现胎儿DNA以来,众多学者致力于将其应用于无创性的产前诊断。荧光定量PCR实现了胎儿游离DNA浓度的检测,目前研究发现,正常孕妇血浆胎儿DNA浓度稳定于某一水平,有望成为产前诊断和孕期检测的一项新指标。有学者认为,子痫前期母循环中胎儿DNA可有异常增高,而且子痫前期的孕妇在有临床症状前,孕妇血浆胎儿DNA水平异常增高,这与较多胎儿DNA释放到母血中,和肝肾功能异常导致胎儿DNA在母血中清除紊乱有关。此外许多妊娠合并症和并发症都伴有母外周血DNA水平的异常增高,例如:性连锁疾病、Rh血型不合、父系遗传性疾病、染色体非整倍体胎儿、早产等。现就孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及临床应用作一综述。     

子痫前期天然杀伤细胞活性和抗体依赖细胞介导细胞毒活性

人胎儿是暂时种植成功的同种异体组织移植物。免疫调节机制在维持正常妊娠和减少病理妊娠中有重要作用。各种研究证实妊娠时天然杀伤细胞(NK)能力下降,但有关子痫前期NK杀伤能力的报告矛盾,而妊娠和子痫前期的抗体依赖细胞介导细胞毒(ADCC)至今无报导。本文报告了子痫前期初孕妇、正常初孕和非孕妇女的NK和ADCC活性。作者检测19例确诊为子痫前期的初孕妇和19例正常初孕妇,19例正常非孕妇女作对照。初孕妇中34例于产前12小时取血,另4例(每组2例)产后4小时取血。常规分离外周血单核细胞,经塑料培养瓶培养后去除粘附细胞。以~(51)Cr标记的K562靶细胞     

妊娠期高血压疾病妊娠相关蛋白A与胎盘病理改变的关系

目的探讨妊娠中期妊娠相关蛋白A(PAPP-A)在预测妊娠期高血压疾病中的作用及其与胎盘病理改变的关系。方法 2008年1月至2009年12月在中山大学附属中山市人民医院对妊娠12~16周产科门诊建册并规律产检的正常单胎孕妇2025例进行研究,首次就诊时抽取肘静脉血,应用酶联免疫法检测其血清中的PAPP-A,并追踪这些孕妇的妊娠发展及分娩情况。对于发生妊娠期高血压疾病、早发型子痫前期和晚发型子痫前期者产时收集其胎盘组织,用HE染色后观察胎盘绒毛滋养细胞、合体滋养细胞结节增生情况及绒毛间质纤维化和绒毛血管病变情况。并随机抽取正常孕妇胎盘组织进行病理检查对比。结果纳入研究的孕妇2025例,剔除不符合要求病例后,共1862例孕妇中,妊娠期高血压疾病88例,需34周前终止妊娠的早发型子痫前期34例,34周后终止妊娠的晚发型子痫前期53例,正常孕妇1687例。早发型子痫前期组外周血PAPP-A水平比对照组低,P<0.05;妊娠期高血压疾病组、晚发型子痫前期组血清PAPP-A与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。妊娠期高血压疾病组、早发型子痫前期组及晚发型子痫前期组胎盘病理改变率与对照组比较,总病理改变率3组与对照...     

重度子痫前期及子痫孕妇外周血中FNRBC与EPO和NP-A水平的相关性

子痫前期及子痫是妊娠期的严重并发症,是导致孕产妇和围产儿病率和死亡率上升的主要原因之一.目前,子痫前期及子痫的发病机制尚未完全明确,有研究发现,子痫前期及子痫的发生,与胎儿细胞、滋养层细胞、合体滋养细胞穿透胎盘屏障进入母体增加有关[1-2].孕妇外周血中胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)的检测已经广泛用于无创性产前诊断研究,子痫前期孕妇血循环中FNRBC数量增加,提示子痫前期的发生与FNRBC穿过胎盘屏障相关[3-4].     

子痫前期孕妇血清与胎盘尿紧张素Ⅱ的表达及意义

目的:检测子痫前期孕妇外周血和新生儿脐血血清中尿紧张素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)水平和UⅡmRNA在胎盘组织的表达水平,探讨其在子痫前期发生发展中的作用。方法:(1)ELISA测定30例子痫前期患者及15例正常晚期妊娠孕妇(对照组)外周血和新生儿脐血血清UⅡ水平;(2)用RT-PCR法检测各组孕妇胎盘组织中UⅡmRNA的表达水平。结果:(1)重度子痫前期组孕妇外周血血清UⅡ水平明显高于轻度子痫前期组和对照组,差异均有显著性(P<0.05)。轻度和重度子痫前期组的脐静脉血清UⅡ浓度均明显高于对照组(P<0.05,P<0.001)。(2)胎盘组织UⅡmRNA表达水平在轻度和重度子痫前期组均明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:UⅡ可能参与子痫前期全身小血管痉挛的机制并在胎盘组织缺血缺氧和动脉粥样硬化的发生起重要作用。     

细胞因子检测在子痫前期诊断及预防中的应用

子痫前期的发生与细胞因子有关。细胞因子参与了子痫前期的发生、发展,与子痫前期孕妇和胎儿的预后有关。子痫前期时,孕妇血清中血管内皮生长因子和胎盘生长因子水平下降,可以预测其发病的严重程度。晚孕期子痫前期孕妇血浆中肿瘤坏死因子α升高,在晚孕期可能为有效的预测指标。转化生长因子-β与子痫前期孕妇发病的严重程度、肾脏受累情况和胎儿的预后有关。