麦考酚酸及其代谢物血药浓度的HPLC法简介

麦考酚吗乙酯是麦考酚酸的2-乙基酯前体药物，临床广泛应用于器官移植后的抗排斥治疗。本文查阅国内外相关的HPLC分析方法文献，对麦考酚酸总浓度、游离药物浓度及其葡萄糖苷酸代谢物的检测方法进行了归纳和总结，为研究麦考酚酸药动学及其个体化给药提供参考。     

HPLC法测定人血浆中麦考酚酸的浓度

目的建立人血浆中麦考酚酸酯活性代谢物麦考酚酸的HPLC测定法。方法色谱柱为HYPERSIL C18(150 mm×5.0mm,5μm),预柱为岛津ODS(5.0 mm×3.9 mm,10μm)。流动相为甲醇-磷酸二氢钠缓冲液(pH=3.25)-乙腈(40∶40∶20,V/V),流速0.8 mL.min-1,检测波长254 nm,柱温25℃。结果麦考酚酸的血浆样品为0.23~46.13 mg.L-1时线性良好(r=0.999 7)。方法回收率96%~106%,日内RSD<6%,日间RSD<7%。结论本方法简单、灵敏、重现性好,适用于临床血药浓度监测,以及人体药动学的研究。     

人血浆中麦考酚酸的HPLC法测定

建立人血浆中麦考酚酸酯活性代谢物麦考酚酸的HPLC测定法.以10%三氯乙酸的乙醇溶液直接沉淀血浆蛋白,色谱柱为Lichromsorb RP-18(200×3.9mm,5μm),预柱为岛津ODS(5×3.9mm,     

HPLC法同时测定人血浆中霉酚酸与霉酚酸葡糖苷酸的浓度

目的:建立以高效液相色谱法同时测定人血浆中霉酚酸(MPA)与霉酚酸葡糖苷酸(MPAG)浓度的方法。方法:色谱柱为LunaC18,流动相为(20mmol·L-1磷酸二氢钾+40mmol·L-1四丁基溴化铵(pH5·5))-乙腈=73:27,流速为1·6mL·min-1,MPA与MPAG采用二极管阵列检测器和荧光检测器串联检测,MPAG检测波长为250nm,MPA荧光检测波长为316nm(激发波长)、430nm(发射波长),柱温为38℃,其中血样加乙腈沉淀蛋白后进样10μL。结果:MPA、MPAG检测浓度分别在0·2～20(r=0·9993)、1～100(r=0·9999)μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,最低检测限分别为0·05、0·1μg·mL-1;平均回收率分别为95·54%、100·22%;MPA日内、日间RSD均<6%,MPAG日内、日间RSD均<4%。结论:本方法快捷、简便、灵敏,可用于测定人血浆中MPA与MPAG的浓度。     

RP—HPLC法测定发酵液中麦考酚酸的含量

目的:建立发酵液中麦考酚酸含量的反相高效液相色谱分析方法。方法:发酵液样品用甲醇提取后进样。采用 Sino-Chrom ODS-BP(5μm,200 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L~(-1)醋酸铵(67:33)为流动相,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长220 nm,艾瑞昔布为内标,测定了63株菌发酵液样品中麦考酚酸的含量。结果:发酵液中麦考酚酸含量在0.30～6.00mg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r=0.9997,n=6),平均回收率为102.4%(n=9)。结论:本测定方法准确、简便,重复性好,为筛选发酵法合成麦考酚酸的高产菌株提供了可靠依据。     

HPLC法同时测定人尿液中霉酚酸及其代谢物葡糖苷酸结合物的浓度

目的用HPLC测定人尿液中霉酚酸(MPA)及其代谢物葡糖苷酸结合物(MPAG)的浓度。方法分析柱为Zorbax Eclipse XDB-C8(150 mm×4．6mm,5μm);流动相为甲醇-0．1％三氟乙酸溶液(55:45,V／V);尿稀释5倍后直接进样。MPAG采用紫外检测,检测波长为250nm;MPA采用柱后添加0．2 mol·L-1 NaOH溶液进行荧光检测,荧光激发波长325 nm,发射波长435 nm。结果MPA和MPAG的线性范围分别为0．1-50 mg·L-1和10-500 mg·L-1,MPA、MPAG日内和日间RSD均<10％。结论此法能简便、灵敏、准确地测定人体尿液中MPA与MPAG的浓度,可用于临床药动学研究和治疗药物浓度监测。     

HPLC法测定人血浆中吗替麦考酚酸浓度的不确定度评定

目的:建立HPLC法测定人血浆中吗替麦考酚酸浓度的不确定度分析方法.方法:建立HPLC法测定含量的数学模型,分析测量不确定度的来源,量化各个测量不确定度分量,合成标准测量不确定度,给出扩展测量不确定度报告.结果:高、中、低3个浓度的扩展不确定度分别为0.052,0.156,1.96 μg·ml-1.结论:该方法适用于HPLC法测定血浆吗替麦考酚酸的不确定度评定,为用HPLC法测定血浆浓度的不确定度评定提供了重要参考.     

HPLC/MS/MS法测定人血浆中麦考酚酸浓度

目的 建立测定人血浆中麦考酚酸(免疫抑制剂)含量的HPLC/MS/MS方法 .方法 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以15 mmol·L-1醋酸铵-甲醇梯度洗脱,用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱,通过电喷雾离子化三重四极杆串联质谱,经多反应监测模式检测,m/z321.2→m/z 303.0(麦考酚酸),m/z237.0→m/z194.0(卡马西平,内标).结果 血浆中麦考酚酸的线性范围为0.1～10 μg·mL-1,方法 回收率为104.1%～106.6%,日内、日间精密度均小于7%.结论 本法简便、快速、灵敏、准确,已应用于肾移植后患者麦考酚酸酯的治疗药物监测.     

高效液相色谱法测定人血浆中麦考酚酸的浓度

目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中麦考酚酸的药物浓度.方法:色谱柱为SupelcosilTMLC18(5 μm,4.6 mm×150 mm);流动相为甲醇-0.025 moL·L-1磷酸二氢钠溶液(含1%的醋酸,pH 5.0)(45:55);柱温:25℃;流速为1.2 mL·min-1;检测波长为218 nm.结果:本测定方法的线性范围:0.25～50 mg·L-1,r=0 9998.平均回收率为(102.4±5.8)%,日内RSD≤7.0%,日间RSD≤7.9%.结论:本方法简单、灵敏、重现性好,适用于临床血药浓度监测,以及人体药动学的研究.     

肾移植患者中麦考酚酸游离分数的影响因素

目的：探讨肾移植患者中影响麦考酚酸（MPA）游离分数的因素。方法：采集23名肾移植术后3个月内患者12h内11个时间点的血浆样本，HPLC法测定血浆中游离和总的MPA及其代谢物葡萄糖醛酸结合物（MPAG）浓度。多元线性回归法考察受试者生理、病理特征和MPA游离分数（FUMPA）的相关性。结果：MPA游离分数的自然对数[In（FUMPA）]与白蛋白（ALB），血红蛋白的自然对数[In（Hb）]呈负相关，与MPA游离浓度AUC（MPAfAUG0-12），MPAG的游离分数（FUMPAG）呈正相关，相关系数r分别为-0．552，-0．459，0．781和0．458；P值分别为0．006，0．028，0．000和0．028。其关系式为：In（FUMPA）=-0．0554（ALB）-1．924，r=-0．552；ln（FUMPA）=1．128MPAf＋2．181FUMPAG-5．171，r=-0．850。结论：ALB升高，可致FUMPA呈指数增加；MPAG可与MPA竞争性结合蛋白。     

霉酚酸与代谢物的血药浓度测定及基于UGTs酶的性别相关的药动学研究

目的 应用UPLC同时测定大鼠血浆中霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)及代谢物霉酚酸葡萄糖醛酸苷(MPA-glucuronide,MPAG)的血药浓度,并对其性别相关的药动学特征进行分析研究。方法 选取12只SD大鼠,雌雄各半,灌胃给予90 mg·kg^-1·d^-1霉酚酸酯,于给药后不同时间点眼眶采血,血浆样本经液液萃取处理,采用UPLC测定血浆中MPA及代谢物MPAG的药物浓度。选用Waters BEH C₁₈色谱柱,采用梯度洗脱程序,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),流速为0.35 mL·min^-1,检测波长为266 nm,柱温为40 ℃,使用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果 MPA和MPAG的血药浓度分别在0.31~160 µg·mL^-1(R²=0.999 8)和0.62~320 µg·mL^-1(R²=0.999 4)内线性关系良好,建立的MPA和MPAG的分析测定方法均符合方法学验证要求。雌性大鼠体内MPA和MPAG的AUC_0-t和C_max均高于雄性大鼠(P<0.05或P<0.01),染料木素[葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGTs)底物]和MPA在雄性大鼠肝微粒体酶中的代谢速率均明显快于雌性大鼠肝微粒体酶。结论 该方法灵敏、准确、专属性强,适用于MPA及代谢物MPAG的血药浓度测定,大鼠体内MPA和MPAG的药动学具有性别差异性,可能与UGTs活性的性别差异有关。     

HPLC测定人血浆中霉酚酸及其代谢物浓度

目的建立反相高效液相色谱法,同时测定人血浆中霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）、酚化葡萄糖醛麦考酚酸（phenol glucuronide metabolite,MPAG）、酰基化MPAG（acyl-MPAG,AcMPAG）的浓度。方法用蛋白沉淀法对样品进行处理。固定相为Zorbax Eclipse XDB C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相：甲醇：20 mmol-L-1 NaH2PO4（用20%磷酸调至pH 3.0）为55∶45,流速：1.2 mL-min-1,检测波长：304 nm,柱温：45℃。结果 MPA、MPAG、AcMPAG浓度在0.2~50μg-mL-1（r=0.999 7）、2.8~531μg-mL-1（r=0.999 9）、0.3~24μg-mL-1（r=0.999 4）内呈良好的线性关系。MPA及其代谢物的绝对回收率均大于80%,MPA、MPAG、AcMPAG的相对回收率分别为94.0%~101.4%,98.4%~101.9%和96.1%~104.2%。日内及日间RSD远低于15%。结论采用反相高效液相色谱法测定人血浆中MPA、MPAG、AcMPAG的浓度和进行药物代谢动力学研究,方法灵敏度高、重复性强。     

高效液相色谱法测定人血浆中麦考酚酸的浓度

目的:建立人血浆中麦考酚酸(MPA)含量的高效液相色谱法(HPLC法),并用该方法对肾移植患者血浆中的浓度进行测定。方法:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸(40∶60),流速为1.0 mL.min-1,柱温为35℃,紫外检测波长为215 nm,血样用乙腈沉淀蛋白法进行处理。结果:麦考酚酸浓度在0.20～49.96μg.mL-1(r=0.999 6)范围内线性关系良好,最小检测浓度为0.20μg.mL-1,平均回收率均>90%,提取回收率>100%,批间和批内RSD<15%。结论:本方法准确、简便、重现性好,可用于麦考酚酸的血药浓度监测及药动学研究。     

HPLC法测定人血浆中霉酚酸的浓度及药动学研究

目的:建立以高效液相色谱法测定人血浆中霉酚酸浓度的方法,并对其在人体内的药动学参数进行研究。方法:霉酚酸血浆样品经甲醇沉淀后直接进样测定,其中色谱柱为Symmetry Shield C18,流动相为乙腈-水-三乙胺(40∶60∶0.3),流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃,测定波长为218nm,进样量为20μL。结果:霉酚酸检测浓度在0.2~50mg·L-1范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9996),定量下限为0.2mg·L-1;平均方法回收率为101.94%,平均提取回收率为87.06%;日内、日间RSD均<6%。另,人体药动学研究表明,霉酚酸在体内存在肠肝循环导致双峰出现,人体过程符合单室开放模型。结论:本方法简便、灵敏、专一、准确、精密,可用于霉酚酸的药动学研究。     

RP—HPLC法测定肾移植病人血浆中霉酚酸浓度及其应用

目的:建立反相高效液相色谱法测定血浆中霉酚酸浓度的方法。方法:采用美国Waters高效液相色谱仪,Symmetry C18(150mm×3.9mm,5μm)色谱柱,乙腈-0,05％磷酸(34:66)为流动相,流速1.0 mL·min-1,萘普生作内标。样品在酸性条件下用氯仿漩涡混合萃取浓集后手动进样,在254 nm波长下检测,按内标法定量。结果:标准曲线在0.1-40 mg·L-1范围内有良好线性,最低检测浓度为0.1 mg·L-1,方法回收率为98.3％-100.4％,萃取回收率为88.1％-92.4％,日内测定RSD为0.98％-1.5％,日间测定RSD为1.0％-4.4％。结论:本方法可用于肾移植患者霉酚酸的血药浓度测定和药动学研究。     

肾脏移植患者血浆霉酚酸浓度的高效液相色谱法测定

目的:建立快速测定肾脏移植血浆中麦考吗乙酯(Mycophenolate mofetil,MMF)活性代谢物霉酚酸(Mycophenolic acid,MPA)的高效液相色谱测定方法.方法:色谱条件为分析柱:Hypersil ODS2(4.6 mm×200 mm,5μm);流动相:A相:25%乙腈 75%0.02 mol/L KH2PO4缓冲液(pH 3.0),B相:70%乙腈 30%0.02 mol/L K2HPO4缓冲液(pH 6.5);梯度洗脱程序:0～14.5 min为分析梯度,霉酚酸在8.7 min出峰,继续用100%B流动相清洗4 min.流速:1.0 ml/min;检测波长254 nm;柱温30℃;进样量100 μl.9例肾脏移植患者口服MMF 1.5 g,不同时间采血,测定血浆中霉酚酸的浓度并计算药动学参数.结果:本方法线性范围为0.10～27 mg/L时,峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9998),最低检出浓度为4μg/L,方法回收率分别为97.20%、98.73%和98.61%,日内精密度和日间精密度分别为3.5%、1.7%、0.6%和5.5%、3.0%、1.1%.药代动力学参数表明霉酚酸的平均血药浓度-时间曲线符合一室开放模型,tmax,cmax和AUC0-12 h分别为0.94 h、11.30 mg/L和30.35 mg·h·L-1.结论:用高效液相色谱法梯度洗脱测定肾脏移植患者霉酚酸血药浓度,操作简便,结果准确.     

HPLC法测定血浆中非诺贝特活性代谢物非诺贝酸的浓度

目的:建立高效液相色谱法测定血浆中非诺贝特活性代谢产物非诺贝特酸浓度。方法:以甲醇直接沉淀血浆蛋白,色谱柱为Waters sunfire C_(18)柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为0.05 mol·L~(-1)磷酸二氢钾溶液-甲醇(70:30),用磷酸调pH 2.5,检测波长286nm。结果:非诺贝酸的保留时间约为6.7 min,线性范围为0.2～20.0μg·ml~(-1)(r=0.999 9),最低定量限为0.2μg·ml~(-1),方法回收率99.28%～101.38%,提取回收率97.18%～107.28%,日内和日间RSD均小于10%。结论:本法简便、快捷、灵敏,适用于非诺贝特药物动力学研究。     

HPLC法测定患者血浆中氯吡格雷的羧酸代谢产物浓度

目的:建立一种简易快速的方法测定人血浆中氯吡格雷代谢产物羧酸氯吡格雷(CCA)的浓度。方法:血浆样品经6%高氯酸液-液萃取后采用高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)法进样测定,内标为苯妥英钠,色谱柱为Hypersil ODS C18,流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾(三乙胺调pH至5.7)-乙腈(78∶22),紫外检测波长为220 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为50℃。结果:CCA血药浓度在0.10⁸.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 5),分析方法最低检测限为0.05μg/ml;方法回收率为99.7%8.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 5),分析方法最低检测限为0.05μg/ml;方法回收率为99.7%¹00.2%,提取回收率>75%;日内、日间RSD均小于3%,冻融稳定性RSD均小于10%(n=5)。结论:本方法简便、准确、灵敏度高,专属性和稳定性较好,适用于氯吡格雷的临床研究和药动学研究。