高效液相色谱法测定人血浆中霉酚酸及其代谢产物的浓度

目的建立高效液相色谱法建立测定人血浆中霉酚酸(MPA)、霉酚酸葡萄糖苷(MPAG)、霉酚酸酰基葡萄糖苷(Ac MPAG)的浓度。方法血浆处理采用乙腈蛋白沉淀法。色谱柱为Gemini C18(250mm×4.6 mm,5μm),柱温为40℃。Ac MPAG、MPA采用荧光检测,流动相:甲醇-10 mmol·L-1KH2PO4(43:57,p H=8.0),荧光激发波长343 nm,发射波长425 nm。MPAG采用紫外检测,流动相:甲醇-10 mmol·L-1 KH2PO4(45:55,p H=3.0),检测波长254 nm。结果 MPA、MPAG、Ac MPAG血药浓度分别在0.2~20μg·m L-1、4.75~475μg·m L-1、0.02~2μg·m L-1内与峰面积线性关系良好。MPA、MPAG、Ac MPAG的相对回收率分别为88.1%~104.3%、95.7%~99.6%、94.2%~96.0%。日内及日间RSD均<10%。结论该方法测定人血浆中MPA、MPAG、Ac MPAG的浓度,操作简便,方法灵敏度高,适合用于MPA及其代谢产物的药动学研究及血药浓度监测。     

HPLC测定人血浆中霉酚酸及其代谢物浓度

目的建立反相高效液相色谱法,同时测定人血浆中霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）、酚化葡萄糖醛麦考酚酸（phenol glucuronide metabolite,MPAG）、酰基化MPAG（acyl-MPAG,AcMPAG）的浓度。方法用蛋白沉淀法对样品进行处理。固定相为Zorbax Eclipse XDB C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相：甲醇：20 mmol-L-1 NaH2PO4（用20%磷酸调至pH 3.0）为55∶45,流速：1.2 mL-min-1,检测波长：304 nm,柱温：45℃。结果 MPA、MPAG、AcMPAG浓度在0.2~50μg-mL-1（r=0.999 7）、2.8~531μg-mL-1（r=0.999 9）、0.3~24μg-mL-1（r=0.999 4）内呈良好的线性关系。MPA及其代谢物的绝对回收率均大于80%,MPA、MPAG、AcMPAG的相对回收率分别为94.0%~101.4%,98.4%~101.9%和96.1%~104.2%。日内及日间RSD远低于15%。结论采用反相高效液相色谱法测定人血浆中MPA、MPAG、AcMPAG的浓度和进行药物代谢动力学研究,方法灵敏度高、重复性强。     

HPLC测定人血浆中霉酚酸及其代谢物浓度

目的 建立反相高效液相色谱法,同时测定人血浆中霉酚酸(mycophenolic acid, MPA)、酚化葡萄糖醛麦考酚酸(phenol glucuronide metabolite, MPAG)、酰基化MPAG(acyl-MPAG, AcMPAG)的浓度。方法 用蛋白沉淀法对样品进行处理。固定相为Zorbax Eclipse XDB C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 mm),流动相：甲醇: 20 mmol×L^-1 NaH₂PO₄(用20%磷酸调至pH 3.0)为55∶45,流速：1.2 mL×min^-1,检测波长：304 nm,柱温：45 ℃。结果 MPA、MPAG、AcMPAG浓度在0.2~50 mg×mL^-1(r=0.999 7)、2.8~531 mg×mL^-1(r=0.999 9)、0.3~24 mg×mL^-1( r=0.999 4)内呈良好的线性关系。MPA及其代谢物的绝对回收率均大于80%,MPA、MPAG、AcMPAG的相对回收率分别为94.0%~101.4%,98.4%~101.9%和96.1%~104.2%。日内及日间RSD远低于15%。结论 采用反相高效液相色谱法测定人血浆中MPA、MPAG、AcMPAG的浓度和进行药物代谢动力学研究,方法灵敏度高、重复性强     

吗替麦考酚酯在自身免疫性疾病患者体内的药代动力学研究

目的探讨免疫抑制剂吗替麦考酚酯(MMF)在自身免疫性疾病患者体内首次给药和稳态后的药代动力学。方法自身免疫性疾病患者14例,口服吗替麦考酚酯0.75 g,q12 h,连续服药7 d达稳态,用高效液相色谱法测定MMF的活性代谢物麦考酚酸(MPA)及二级代谢物酚化葡萄糖醛麦考酚酸(MPAG)的血药浓度,并评价2种代谢物的体内暴露药量与患者肾功能的关系。结果 MPA首次服药及稳态后的Cmax分别为(8.45±7.54),(10.89±4.37)mg·L-1,AUC0-12h分别为(41.07±49.26),(55.09±41.74)mg·h·L-1;MPAG首次及稳态后的Cmax分别为(41.24±28.57),(67.63±36.98)mg·L-1,AUC0-12h分别为(487.25±326.53),(720.79±413.86)mg·h·L-1;两者在患者个体间药代动力学参数差异均较大,且稳态后的AUC0-12h与首次给药相比均明显增大(P<0.05);MPAG的体内暴露药量与肾功能存在明显负相关(P<0.05),而MPA的体内暴露药量与患者肾功能无明显相关性(P>0.05)。结论自身免疫性疾病患者同方案给药后,MPA及MPAG血药浓度及药代动力学个体间差异大,且在体内存在明显蓄积现象。     

RP—HPLC法测定发酵液中麦考酚酸的含量

目的:建立发酵液中麦考酚酸含量的反相高效液相色谱分析方法。方法:发酵液样品用甲醇提取后进样。采用 Sino-Chrom ODS-BP(5μm,200 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L~(-1)醋酸铵(67:33)为流动相,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长220 nm,艾瑞昔布为内标,测定了63株菌发酵液样品中麦考酚酸的含量。结果:发酵液中麦考酚酸含量在0.30～6.00mg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r=0.9997,n=6),平均回收率为102.4%(n=9)。结论:本测定方法准确、简便,重复性好,为筛选发酵法合成麦考酚酸的高产菌株提供了可靠依据。     

高效液相色谱法测定人血浆中麦考酚酸的浓度

目的:建立人血浆中麦考酚酸(MPA)含量的高效液相色谱法(HPLC法),并用该方法对肾移植患者血浆中的浓度进行测定。方法:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸(40∶60),流速为1.0 mL.min-1,柱温为35℃,紫外检测波长为215 nm,血样用乙腈沉淀蛋白法进行处理。结果:麦考酚酸浓度在0.20～49.96μg.mL-1(r=0.999 6)范围内线性关系良好,最小检测浓度为0.20μg.mL-1,平均回收率均>90%,提取回收率>100%,批间和批内RSD<15%。结论:本方法准确、简便、重现性好,可用于麦考酚酸的血药浓度监测及药动学研究。     

固相萃取亲水作用色谱法测定人体血浆中表阿霉素

目的:建立固相萃取-亲水作用色谱法(SPE—HILIC)测定人体血浆中的表阿霉素。方法:血浆样品中加入表柔红霉素作为内标,经 Oasis HLB 固相萃取(SPE)小柱萃取后进样测定,色谱柱为 Kromasil KR100—5SIL 硅胶色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),乙腈-甲酸铵缓冲液(40 mmol·mL~(-1),pH 2.9)(90:10)为流动相,检测波长为254 nm。结果:血浆中表阿霉素的线性范围为0.05～2.5μg·mL~(-1)(r~2=0.9991);最低检测限为0.05μg·mL~(-1);样品的回收率高于89.4%;日内及日间精密度RSD 小于7.0%。结论:方法简便,准确可靠,流动相与质谱检测器兼容,适用于血浆表阿霉素浓度测定及药代动力学研究。     

HPLC法同时测定人尿液中霉酚酸及其代谢物葡糖苷酸结合物的浓度

目的用HPLC测定人尿液中霉酚酸(MPA)及其代谢物葡糖苷酸结合物(MPAG)的浓度。方法分析柱为Zorbax Eclipse XDB-C8(150 mm×4．6mm,5μm);流动相为甲醇-0．1％三氟乙酸溶液(55:45,V／V);尿稀释5倍后直接进样。MPAG采用紫外检测,检测波长为250nm;MPA采用柱后添加0．2 mol·L-1 NaOH溶液进行荧光检测,荧光激发波长325 nm,发射波长435 nm。结果MPA和MPAG的线性范围分别为0．1-50 mg·L-1和10-500 mg·L-1,MPA、MPAG日内和日间RSD均<10％。结论此法能简便、灵敏、准确地测定人体尿液中MPA与MPAG的浓度,可用于临床药动学研究和治疗药物浓度监测。     

HPLC荧光检测法测定人血浆中替米沙坦的浓度

目的:建立HPLC测定人血浆中替米沙坦浓度的方法。方法:以萘普生为内标,血浆用液-液萃取进行处理。采用Kromasil C_8(150mm×4.6mm,5μm),柱温:室温,流动相:乙腈-0.02mol·L~(-1)磷酸二氢钾溶液(50:50),流速:1.2mL·min~(-1),荧光激发波长305nm,发射波长365nm。结果:血浆内源性杂质对样品测定无干扰。替米沙坦最低定量浓度为1ng·mL~(-1),在1-300ng·mL~(-1)范围内线性关系良好(r=0.9996)。替米沙坦的日内、日间RSD均小于11%,样品多次冻融及提取后在24h内稳定性良好。结论:该法快速、灵敏、准确,可用于替米沙坦的体内分析及临床药学研究。     

HPLC法测定1例肾功能衰竭患者血浆中更昔洛韦浓度

目的:建立人血浆中更昔洛韦的HPLC测定方法,测定肾功能衰竭患者静脉滴注更昔洛韦的血浆药物浓度。方法:取血浆样品100μL,以阿昔洛韦为内标,10%高氯酸沉淀蛋白后,取10μL进样。HPLC分离采用Shim-pak CLC-ODS (150 mm×60 mm, 5μm)柱,流动相为0. 03 mol·mL~(-1)磷酸二氢铵水溶液:乙腈=97:3 (磷酸调节pH至3.0),流速为1.0 mL·min~(-1),柱温35℃,紫外检测波长254 nm。应用上述HPLC方法测定1例肾功能衰竭患者静脉滴注更昔洛韦(75 mg)后的血浆药物浓度。结果:标准曲线在0.5～50μg·mL~(-1)浓度范围内线性良好(r=0. 9999),低、中、高浓度质控样品(1、8、30μg·mL~(-1))的日内、日间精密度(RSD) 1.01%～5.55%(n=5),准确度-0.15%～8.00%(n=5),更昔洛韦的提取回收率为98.60%～100.36%。应用该方法成功测定了1例肾功能衰竭患者血浆更昔洛韦药物浓度。结论:本方法灵敏度高,准确性好,简便快捷,适用于临床患者血浆中更昔洛韦浓度的测定。     

霉酚酸与代谢物的血药浓度测定及基于UGTs酶的性别相关的药动学研究

目的 应用UPLC同时测定大鼠血浆中霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)及代谢物霉酚酸葡萄糖醛酸苷(MPA-glucuronide,MPAG)的血药浓度,并对其性别相关的药动学特征进行分析研究。方法 选取12只SD大鼠,雌雄各半,灌胃给予90 mg·kg^-1·d^-1霉酚酸酯,于给药后不同时间点眼眶采血,血浆样本经液液萃取处理,采用UPLC测定血浆中MPA及代谢物MPAG的药物浓度。选用Waters BEH C₁₈色谱柱,采用梯度洗脱程序,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),流速为0.35 mL·min^-1,检测波长为266 nm,柱温为40 ℃,使用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果 MPA和MPAG的血药浓度分别在0.31~160 µg·mL^-1(R²=0.999 8)和0.62~320 µg·mL^-1(R²=0.999 4)内线性关系良好,建立的MPA和MPAG的分析测定方法均符合方法学验证要求。雌性大鼠体内MPA和MPAG的AUC_0-t和C_max均高于雄性大鼠(P<0.05或P<0.01),染料木素[葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGTs)底物]和MPA在雄性大鼠肝微粒体酶中的代谢速率均明显快于雌性大鼠肝微粒体酶。结论 该方法灵敏、准确、专属性强,适用于MPA及代谢物MPAG的血药浓度测定,大鼠体内MPA和MPAG的药动学具有性别差异性,可能与UGTs活性的性别差异有关。     

肾移植患者中麦考酚酸游离分数的影响因素

目的：探讨肾移植患者中影响麦考酚酸（MPA）游离分数的因素。方法：采集23名肾移植术后3个月内患者12h内11个时间点的血浆样本，HPLC法测定血浆中游离和总的MPA及其代谢物葡萄糖醛酸结合物（MPAG）浓度。多元线性回归法考察受试者生理、病理特征和MPA游离分数（FUMPA）的相关性。结果：MPA游离分数的自然对数[In（FUMPA）]与白蛋白（ALB），血红蛋白的自然对数[In（Hb）]呈负相关，与MPA游离浓度AUC（MPAfAUG0-12），MPAG的游离分数（FUMPAG）呈正相关，相关系数r分别为-0．552，-0．459，0．781和0．458；P值分别为0．006，0．028，0．000和0．028。其关系式为：In（FUMPA）=-0．0554（ALB）-1．924，r=-0．552；ln（FUMPA）=1．128MPAf＋2．181FUMPAG-5．171，r=-0．850。结论：ALB升高，可致FUMPA呈指数增加；MPAG可与MPA竞争性结合蛋白。     

Determination of total,free and saliva mycophenolic acid with a LC–MS/MS method: Application to pharmacokinetic study in healthy volunteers and renal transplant patients

Mycophenolic acid (MPA) is the active moiety of mycophenoate mofetil (MMF), an ester prodrug widely used as an immunosuppressant. Therapeutic drug monitoring (TDM) of MPA is becoming mandatory for transplant patients received MMF therapy in the routine clinical practice because of large individual variability, dose-related toxicity and the risk of acute rejection. In this study, a rapid, sensitive and selective LC–MS/MS method was developed and validated for the quantitative analysis of total and free MPA in plasma and in saliva that uses one identical liquid chromatographic and mass spectrometric condition. Following protein precipitation for total and saliva MPA, and ultrafiltration for free MPA, chromatographic separation was performed on an Allure PFP Propyl analytical column (100 × 2.1 mm, 5 μm, RESTEK Co., Bellefonte, PA, USA) with 0.1% formic acid in acetonitrile and 0.1% formic acid in water (45:55, v/v) as the mobile phases. The compounds were quantified by positive electrospray ionization tandem mass spectrometry. Selectivity, linearity, accuracy, precision, recovery, matrix effect, and saliva stability were evaluated during method validation. The validated method was applied to a pharmacokinetic study of MPA after an oral administration of a single 1000 mg of MMF to eight healthy male volunteers and 750 mg bid of MMF to nine renal transplant patients.     

麦考酚酸及其代谢物血药浓度的HPLC法简介

麦考酚吗乙酯是麦考酚酸的2-乙基酯前体药物，临床广泛应用于器官移植后的抗排斥治疗。本文查阅国内外相关的HPLC分析方法文献，对麦考酚酸总浓度、游离药物浓度及其葡萄糖苷酸代谢物的检测方法进行了归纳和总结，为研究麦考酚酸药动学及其个体化给药提供参考。     

HPLC法同时测定霉酚酸及其代谢产物的方法学研究

目的 建立测定器官移植患者血浆中霉酚酸（Mycophenolic acid,MPA）与其代谢物（霉酚酸葡萄糖苷,MPAG和霉酚酸酰基葡萄糖苷,AcMPAG）的一种新颖简单的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）方法.方法 以10%的偏磷酸为沉淀剂采用蛋白沉淀的方法提取血浆中的待测物,MPA的类似物（the carboxybutoxy ether of MPA,MPAC）被用作内标物质.色谱分析条件是以乙腈和磷酸缓冲液（pH2.7）作为流动相的梯度洗脱,流速1.2 mL·min-1,紫外检测波长为254 nm.结果 所有待测物基线分离好,在待测范围内与峰面积线性关系良好（r2≥0.999）,方法精密（日间和日内变异度均≤6.02%）且准确（日间和日内准确度均在92.17% ~104.78%之间）.MPA、MPAG和AcMPAG在血浆中的回收率分别超过83.11%、98.62% 和93.94%,最低检测限则分别为0.1、0.2、0.1 mg·L-1.三种物质的在酸化过的血浆中,室温放置6 h、4℃条件下放置12 h、-40℃条件下放置4周及反复冻融三次均稳定无明显降解.提取后的三种物质在进样盘中放置至12 h同样稳定无降解.结论 该方法简便、灵敏且准确,可应用于MPA与其代谢物的临床监测.     

高效液相色谱法测定人血浆中霉酚酸的浓度

目的建立用高效液相色谱测定人血浆中霉酚酸浓度的方法。方法采用SUPELCOSIL C18色谱柱（4.6mm×250 mm,5μm） 流动相：乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钾（pH=3.0）溶液（40∶60,v/v） 流速：1.0mL.min-1 检测波长：254 nm。结果霉酚酸在0.4~51.2 mg.L-1线性关系良好（r=0.999 3）,最低检测浓度为0.4 mg.L-1,霉酚酸低、中、高浓度检测的日内、日间RSD分别为2.22%、5.15%、4.13%和1.75%、6.75%、3.35%。结论该法具有操作简便可靠、准确、稳定性高等特点,适合应用于霉酚酸的治疗药物监测和药动学研究。