非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平.结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株.     

c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线。结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05)。存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P>0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别<0.05、<0.05、<0.01)。结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关。     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞分化和凋亡的影响

目的研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人肺鳞癌L78细胞、A2细胞分化和凋亡的影响.方法以1和5μmol/L 9-cis-RA处理肿瘤细胞株,分别于0、12、24、36、48、72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化,应用流式细胞术分析细胞周期分布、Bcl-2表达和凋亡细胞数.结果9-cis-RA可抑制肺鳞癌细胞生长;用药后细胞分化征明显,可见凋亡细胞.流式细胞计数显示,用药组细胞G0/G1百分率明显升高,S期细胞百分率下降,细胞凋亡率增加,Bcl-2的表达下降.结论9-cis-RA能抑制人肺鳞癌L78细胞、A2细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡.     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸(9-cis-RA)处理前后人肺鳞癌细胞株L78、A2的细胞周期调控因子Cy-clinD1、Cdk4转录水平的变化。探讨其抑制肺鳞癌细胞生长的作用机制。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平的变化。结果:9-cis-RA对两细胞株的细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论:9-cis-RA抑制肺鳞癌细胞株L78、A2增殖的作用机理与其调节细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4的转录有关。     

圆柱瘤基因（CYLD）的增强表达介入Fas/FasL途径诱导人肺癌细胞株A549/H460坏死的研究

目的探讨圆柱瘤基因（CYLD）在肺癌细胞株A549/H460的表达,及增强其表达对Fas/FasL途径诱导肺癌细胞死亡的影响,并探讨其可能的机制。方法选取5例肺腺癌手术患者癌组织标本作为实验组,自身癌旁正常组织作为对照组,进行CYLD基因实时荧光PCR定量分析;肺癌细胞株A549/H460分别进行CYLD基因增强质粒转染,同样采取实时荧光定量PCR及统计学检验对转染效果进行分析;转染前后的A549/H460细胞株FasL膜蛋白刺激进行培养24 h,通过流式细胞分析细胞死亡情况。结果 5例癌组织和癌旁正常组织均有CYLD表达,且差异有统计学意义（P〈0.05）,对照组为实验组的2.53倍;CYLD基因在A549细胞的表达较转染前高1.40倍,在H469细胞则比转染前高1.83倍;A549/H460细胞的坏死率较转染前增加,尤其是在提前加入zVAD-fmk后进行Fas信号诱导坏死率增加显著。结论肺癌细胞CYLD基因的表达较正常肺组织下调,有效增强肺癌细胞株A549/H460的CYLD基因表达后,FasL膜蛋白可通过Fas信号诱导其显著坏死。     

9—顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察9－顺维甲酸（9-cis-RA)处理前后人肺腺癌细胞株PG和A549维甲酸受体（RARs)及维甲类X受体（RXRs）不同时相mRNA转录水平的表达。方法：用RT－PCRT相对定量检测人肺腺癌细胞株PG和A549加9-cis-RA前后RARs和RXRs mRNA转录水平。结果：应用9-cis-RA后，两细胞株的RARα和RARβ mRNA转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体RARα和RARβ可能与9-cis-RA对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

榄香烯诱导人肺癌细胞株A549凋亡研究

目的:探索榄香烯对体外培养人肺癌细胞株的作用及其原因.方法:设不同浓度(0.5、1、2、8、16μmoi/L)的榄香烯实验组和一个空白阴性对照组,应用MTT方法分析榄香烯对肺癌细胞株A549生长的影响.免疫细胞化学及流式细胞仪检测bcl-2、p53表达.结果:榄香烯能明显抑制肺癌细胞生长.透射电镜超微结构证实榄香烯能诱发肿瘤细胞凋亡的典型形态变化;流式细胞仪检测到Bcl-2蛋白表达降低,p53蛋白表达增多;RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平下降.结论:榄香烯能诱导肺癌细胞凋亡,其作用机制可能与癌基因bcl-2表达减少、抑癌基因p53表达增多有关.     

肺癌细胞株c-erbB-2基因与放疗抵抗的相关关系

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线.结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05).存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株D0值依次为1.18 Gy±0.05 Gy、1.67 Gy±0.13Gy和1.50 Gy±0.26Gy,细胞株间差异无统计学意义(F=0.287,P0.05),Dq值分别为3.98 Gy±0.03Gy、2.43 Gy±0.47Gy和1.32 Gy±0.08 Gy(F=61.670,P<0.05),其中CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株之间差异有统计学意义(P分别为<0.05、<0.05、<0.01).结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;三种细胞株中,CALU-3对?射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关.     

抑制miR-21对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能机制探讨

目的:探讨抑制miR-21表达对非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能的机制?方法:应用Real-time PCR技术分别检测人非小细胞肺癌细胞株A549及其耐药株A549/DDP中miR-21的表达;将miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor) ASO-21转染至A549/DDP中,下调其miR-21的表达,在不同时间点使用MTT检测细胞的增殖,流式细胞仪Annexin-FITC检测细胞凋亡;使用生物信息学和miR的预测软件预测miR-21在非小细胞肺癌中的可能靶点?结果:①miR-21在A549/DDP细胞株的表达均为A549的3倍;②A549/DDP细胞株中转染ASO-21孵育,加入顺铂后,与对照组相比,其凋亡增加,增殖能力明显降低;③生物信息学软件分析后发现miR-21在非小细胞肺癌A549有多个调节靶点,一些蛋白分子可以调节miR-21的表达,组成肿瘤细胞的调节网络而影响肺癌细胞对顺铂的敏感性?结论:抑制miR-21可以促进顺铂耐药细胞A549/DDP的凋亡增加及抑制其增殖,miR-21可能成为逆转肺癌对顺铂耐药的新靶点?     

牛磺酸对人肺癌细胞株A549细胞凋亡的影响

探讨牛磺酸（Tau）对人肺癌细胞株A549细胞凋亡的作用及其初步机制。方法 将A549细胞分为6组:Control组（正常对照组,未给予任何药物处理）和Tau 1组(给予Tau 10 mmol·L-1)、Tau 2组(给予Tau20mmol·L-1)、Tau 3组(给予Tau 40 mmol·L-1)、Tau 4组(给予Tau 80 mmol·L-1)、Tau 5组(给予Tau160mmol·L-1);阳性对照组DDP 4mg·L-1,作用时间分别为24、48、72h。应用MTT比色法检测人肺癌细胞株A549的细胞增殖,流式细胞术检测人肺癌细胞株A549的细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3的活性,免疫印迹法检测p53正向细胞凋亡调控因子（PUMA）的水平及Bax蛋白、Bcl-2蛋白的表达水平。结果Tau能够以时间剂量依赖方式来抑制A549细胞增殖,并显著增加A549细胞凋亡率。Tau可以明显增加A549细胞内Caspase-9、Caspase-3的活性,以及诱导A549细胞内PUMA、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。Tau对人胚肾细胞293T的细胞活性无明显影响。结论 Tau对人肺癌细胞株A549有增殖抑制和凋亡诱导的作用,其机制可能是Tau通过上调PUMA、Bax表达及下调Bcl-2表达,进而增加Caspase-9、Caspase-3的活性来诱导A549细胞发生凋亡。