载脂蛋白E基因多态性检测技术的对比性研究

目的建立并比较载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性检测技术,为ＡｐｏＥ基因分型提供良好的方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测技术对１１０例患者及相同人数的正常人进行ＡｐｏＥ基因型检测和分析。结果应用ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ技术测得正常对照组：ε２／２（０,０．０２０）,ε３／３（０．７００,０．７６０）,ε４／４（０,０．０４０）,ε２／３（０．１００,０．０６０）,ε２／４（０,０．０２０）,ε３／４（０．２００,０．１００）,ε２（０．０５０,０．０６０）,ε３（０．８５０,０．８４０）,ε４（０．１００,０．１００）。经χ２检验,ＡｐｏＥ基因型频率和等位基因频率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。上两种检测技术与既往两种检测技术（ＩＥＦ,ＷｅｓｔｅｒｐＢｌｏｔｉｎｇ）的结果经χ２检验,其ＡｐｏＥ等位基因频率的差异也无显著意义（Ｐ＞０．０５）,均符合中国汉族人ＡｐｏＥ基因频率分布。结论ＰＣＲＲＦＬＰ方法是一种稳定可靠的ＡｐｏＥ基因多态性分析方法,多重ＰＣＲＳＳＣＰ技术更加简便有效,使ＡｐｏＥ基因多态性的研究更加完善。     

肝细胞癌p53基因杂合缺失的检测

目的建立快速、简便及敏感的ｐ５３基因杂合缺失的检测方法。方法采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术对２８例肝细胞癌ｐ５３基因外显子４和内含子６的杂合缺失进行检测。结果发现２８例肝细胞癌患者肝组织外显子４上存在较高的ＢｓｔＵＩ酶切位点多态性（６１％），肝细胞癌杂合缺失率为５３％；而内含子６上ＭｓｐⅠ酶切位点多态性低，不适于分析肝细胞的杂合缺失。结论杂合缺失是肝细胞癌ｐ５３基因失活的重要机制；ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术检测ｐ５３基因杂合缺失方法简单、快速经济，值得推广     

肿瘤坏死因子α,γ干扰素和红细胞生成素与类风湿性关节 …

目的 探讨类风湿性关节炎（ＲＡ）伴慢性病性贫血（ＡＣＤ）的特征,及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、γ干扰素（ＩＦＮ－γ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）在其发病中的作用。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测ＲＡ患者血清ＴＮＦα、ＩＦＮ－γ水平及ＲＡ伴ＡＣＤ虱的血清Ｅｐｏ产生的影响及ＴＮＦα、ＩＦＮ－γ和Ｅｐｏ对正常骨髓ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ的影响;以及ＲＡ自身血清、Ｅｐｏ对ＲＡ骨髓ＣＦＵ－Ｅ的影响。结果 与正常对照组比     

2型糖尿病患者载脂蛋白B基因型频率分布的初步探讨

目的：研究载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）基因多态性在本地区２型糖尿病患中的分布及其与血脂的关系。方法：运用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法检测４１例２型糖病患及６０例正常对照的ＡｐｏＢ基因型。结果：两组Ｘ＾＋和Ｅ＾－等位基因频率分别为０．０８５,０．０１７和－．１１,０．０３３（ｐ〈００１）。糖尿病组血脂总胆固醇（ＣＨ）、甘油三脂（ＴＧ）、低密度脂蛋白脂固醇（ＬＤＬ－ｃｈ）     

回族人FVIIIi18／BclIRFLPs及其在甲型血友病基因连锁分析中的应用

回族人ＦＶＩＩＩｉ１８／ＢｃｌＩＲＦＬＰｓ及其在甲型血友病基因连锁分析中的应用滕葵，李厚钧，周郁我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增位于ＦＶＩＩＩ基因１８内含子的１４２ｂｐ的ＤＮＡ片段，分析了该片段内的ＢｃｌＩ酶切位点多态性，首次报告了回族人这一位点...     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测维生素D受体基因型

目的建立一种简便、实用、准确的人维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型的检测方法，以利于ＶＤＲ基因变异在骨质疏松研究中的应用。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ＶＤＲ基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｍⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果应用ＰＣＲＲＦＬＰ法检测了１１０名健康汉族人ＶＤＲ基因型，ｂｂ、Ｂｂ、ＢＢ基因型分布频率分别是９４％（１０３例）、６％（７例）、０。结论该方法简便、准确、重复性好，适用于一般实验室及流行病学调查。     

Alzheimer‘s disease患者载脂蛋白E多态性的检测

人类ＡｐｏＥ基因型存在多态性，这种多态性是老年性痴呆发病的易和危险因子之一，可为临床诊断提供重要的实验指标和信息。方法，本文采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术，Ｈｈａｌ酶切ＰＣＲ扩增产物后的片段经１０％ＰＡＧ电泳和４％琼脂糖电泳，分析了ＡｐｏＥ基因型。在此基础上，我们分析了４０名ＡＤ患者和３５名正常对照者。结果实验显示：ＡＤ组和正常对照组的ＡｐｏＥ基因型有显著的差异，且ＡＤ组中ε４等位基因明显高于对照组，分     

中国汉族人群vWF基因MspⅠ和RsaⅠ限制性片段长度多态性研究

目的：研究我国汉族人群ｖＷＦ基因的多态性特点。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术结合ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ酶切分析研究了５２名汉族人１０４条染色体ｖＷＦ基因ＭｓｐⅠ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和４８名汉族人９６条染色体的ＲｓａⅠＲＦＬＰ。结果：在我国汉族人中，等位基因ＭｓｐⅠ＋／ＭｓｐⅠ－的频率为０．２０∶０．８０，理论杂合频率为３６％；ＲｓａⅠ＋／ＲｓａⅠ－的频率为０．９３∶０．０７，理论杂合频率为１３％。结论：在我国汉族人中，在ｖＷＦ基因的５′端存在ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ的多态性位点，可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。     

冠心病患者载脂蛋白E基因型及表型的研究与临床意义

目的：探讨在冠心病（ＣＨＤ）发生发展中的载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因多态性的作用及其对血脂水平的影响。方法 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法,测定２１０例ＣＨＤ患者和１７２例正常对照者的ａｐｏＥ基因型。应用ＳＰＳＳ统计软件包分析该基因对两组受试者的血脂,脂蛋白和载脂蛋白ＡＩ（ａｐｏＡＩ）载脂蛋白Ｂ１００（ａｐｏＢ１００）的影响及其与ＣＨＤ的临床相关关系,结果：ＣＨＤ组ａｐ     

胆固醇调节元件结合蛋白

胆固醇调节元件结合蛋白（ＳＲＥＢＰｓ），是一类能与胆固醇调节元件１（ＳＲＥ－１）结合的“碱性螺肇－环－螺旋－亮氨酸拉链”蛋白，在细胞内缺乏胆固醇的情况下，ＳＲＥＢＰｓ通过和ＳＲＥ－１的结合，激活具有ＳＲＥ－１的基因，如低密度脂蛋白受体（ＬＤＬＲ）基因、羟甲基戊二酸单酰ＣｏＡ合酶（ＨＭＧＣｏＡｓｙｎｔｈａｓｅ）基因，发挥调节基因翻译的作用，从而维护细胞内胆固醇含量的平衡。对ＳＲＥＢＰｓ的研究，可能会     

3型血管性血友病的基因突变与临床研究

目的：研究３型血管性血友病（ｖＷＤ）的分子病理机制。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选了３型ｖＷＤ患者ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因编码区的基因突变，对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ行为发生改变的片段直接进行ＤＮＡ序列分析。结果：检测到１例基因突变，在ｖＷＦ基因外显子３第２１２号核苷酸，发生了Ｃ→Ａ的替换，使Ｓｅｒ７１突变为终止密码子。该突变创造了ＸｂａⅠ酶切位点，消除了原有的ＴａｑⅠ位点。结论：ＰＣＲ－ＤＧＧＥ和酶切分析均证实，患者为该突变的纯合子，其父母则均为该突变的携带者。     

巨幼细胞贫血、骨髓增生异常综合征及白血病患者叶酸结合蛋白的研究

为研究叶酸结合蛋白特性，用放射受体结合技术及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和同位素扫描结合的方法，分析了巨幼细胞贫血（ＭＡ）、骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和白血病患者血清可溶性叶酸受体（ｓＦＲ）及骨髓单核细胞膜叶酸受体（ＦＲ）的分子量。发现白血病细胞膜上有两种叶酸结合蛋白：分子量为３．５万的ＦＲ以及分子量为４．５万的还原叶酸载体（ＲＦＣ）。ＭＤＳ组中５例ＲＡＥＢ、ＲＡＥＢ－ｔ患者骨髓单个核细胞膜上亦出现ＦＲ和ＲＦＣ；７例ＲＡＳ和ＲＡ以及ＭＡ患者骨髓单核细胞膜叶酸结合蛋白仅为ＦＲ。ＲＦＣ是一种幼稚型蛋白，在ＭＤＳ患者骨髓细胞膜上出现，可能是白血病前期表现。     

巨幼细胞贫血,骨髓增生异常综合征及白血病患者叶酸结合蛋…

为研究叶酸结合蛋白特性，用放射受体结合技术及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和同位素扫描结合的方法，分析了巨幼细胞贫血（ＭＡ）、骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和白血病患者血清可溶性叶酸受体（ｓＦＲ）及骨髓单核细胞膜叶酸受体（ＦＲ）的分子量。发现白血病细胞膜上有两种叶酸结合蛋白；分子量为３．５万的ＦＲ以及分子量为４．５万的还原叶酸载体（ＲＦＣ）。ＭＤＳ组中５例ＲＡＥＢ、ＲＡＥＢ－ｔ患者骨髓单个核膜上亦出现Ｆ     

PNH患者骨髓红系祖细胞体外培养的研究

采用造血祖细胞体外培养技术研究了阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ）的增殖能力；骨髓细胞经新鲜酸化ＡＢ型血清处理后培养的ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ的增殖能力；以及ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）的反应能力。发现ＰＮＨ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ集落数明显低于正常；骨髓细胞经新鲜酸化ＡＢ型血清处理后培养的ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ集落数明显低于经热灭活酸化ＡＢ型血清处理后培养的集落数；ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ对Ｅｐｏ的反应回归直线呈低平状态。认为ＰＮＨ患者骨髓红系祖细胞膜缺陷可导致其在酸性条件下对补体的敏感性增高和导致其对Ｅｐｏ的敏感性降低。     

P38MAPK在旨多糖诱导人单核细胞产生肿瘤坏死因子中 …

目的：探讨Ｐ３８信号通道（Ｐ３８ＭＡＰＫ）在脂多糖（ＬＰＳ）诱导人单核细胞表达肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）中的作用。方法：采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定法、Ｗｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｐ３８ＭＡＰＫ在ＬＰＳ诱导的人单核细胞产生ＴＮＦ－α中的激活程度,应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）观察Ｐ３８信号通道抑制剂ＳＢ２０３５８０地单核细胞ＴＮＦ－αｍＲＮ     

深红沙雷菌染色体DNA分子生物学特性研究

院内感染流行病学调查方法已由生物学迈进到分子生物学领域。选用ＨｉｎｄⅢ、Ｅｃｏ ＲＩ、Ｂａｍ ＨＩ、Ｂｇｌ Ｉ和Ｘｂａ Ⅰ限制性核酸内切酶，对某院心外科６名患者术后感染和呼吸机三通接头分离的深红沙雷菌（ＳＲ），分别进行染色体ＤＮＡ酶切图谱（ＲＥＡ）分析，并应用ＰＣＲ技术，从Ｅ．ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ、２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因。以［α＾３２Ｐ］ｄＡＴＰ经缺口平移法标记探针ｒＤＮＡ为广     

上海正常人群血清apoE浓度及多态性分析的临床应用

调查上海部分地区正常人血清ａｐｏＥ浓度，了解它与年龄和性别的关系；建立ａｐｏＥ基因型的检测方法。方法采用夹心ＥＬＩＳＡ法进行ａｐｏＥ定量，应用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｎａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）和限制性片段长度多态性分析（ＲｅｓｔｒｉａｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｕｔｌｅｎｇｔｈＰａｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＲＦＬＰ）建立ａｐｏＥ多态性分析法。结果２００份正常人血清ａｐｏＥ定量确立参考值范围为８０±５３ｍｇ／Ｌ，女性略高于男性，不同年龄无显著差异；建立了快速抽提ＤＮＡ方法和ＰＣＲ扩增及ＲＦＬＰ法。结论建立血清ａｐｏＥ参考值范围和简便、快速的ａｐｏＥ多态性分析法，对ａｐｏＥ的研究具有十分重要参考价值。     

聚合酶链反应用于进行性脊髓性肌萎缩的诊断

目的了解儿童期发作的进行性脊髓性肌萎缩（ＳＭＡ）患者的运动神经元存活基因（ＳＭＮ）的缺失，探讨聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）技术用于检测ＳＭＡ疾病的诊断价值。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ技术对１０例拟诊为ＳＭＡ患者、６个家系的２０例非ＳＭＡ成员及３０例正常人的ＳＭＮ基因外显子７和８进行了检测。结果１０例ＳＭＡ可疑患者中９例（９０％）有ＳＭＮ基因缺失，其中仅外显子７或８缺失各为１例。家系其他成员及对照组均无ＳＭＮ端粒基因缺失。结论用ＰＣＲＲＦＬＰ法对高度可疑ＳＭＡ的病例进行诊断，具有较高敏感性和特异性，简便易行     

肝细胞癌p53基因杂合缺失的检测

目的建立快速、韶便及敏感的ｐ５３基因杂合缺失的检测方法。方法采用聚合酶链以应＝限制性片段长度多生（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术对２８例肝细胞癌Ｐ５３基因外显子４和内含子６的杂合缺进行检测。结果 发现２８例细胞癌患者肝组织一子４上存在较高的ＢｓｔＵＩ酶切位点多态性（６１％），肝细胞癌杂合缺失率为５３％；人含子６上Ｍｓｐ位 我态性低，不适于分析肝细胞的杂合缺失。结论 杂合缺失是肝细胞癌Ｐ５３基因失活的重要机     

载脂蛋白B基因MspI多态性分析及其临床应用

为研究载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）基因多态性与冠心病的关系，应用ＰＣＲ检测９０例冠心病患者和１２０例健康人ａｐｏＢＭｓｐＩ酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）。结果产生三种基因型：Ｍ＋Ｍ＋、Ｍ＋Ｍ－、Ｍ－Ｍ－，冠心病组等位基因Ｍ＋、Ｍ－频率分别为０．９２、０．０８；对照组Ｍ＋、Ｍ－频率分别为０．９８、０．０２，少见等位基因Ｍ－的频率在冠心病组显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），但两组各基因型之间的血脂、脂蛋白、载脂蛋白水平均无显著性差异。提示ａｐｏＢ基因该位点的多态性可能与冠心病的发病有关，但与血浆脂质及载脂蛋白的关系不明显