实时荧光PCR定量检测丙型肝炎病毒核酸的临床价值

目的探讨实时荧光PCR定量检测丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）的临床价值。方法采用实时荧光PCR技术对180例可疑丙型肝炎病毒（HCV）感染患者的血清行HCV-RNA定量检测,同时采用酶联免疫法检测抗-HCV含量,酶法检测ALT水平,分析HCV-RNA定量与后两者的相关性。结果180例患者中HCV-RNA阳性率为46．7％,抗-HCV阳性率为49．4％,ALT异常率为46．7％;HCV-RNA阳性患者中抗-HCV阳性率及ALT异常率与HCV-RNA阴性患者差异均有统计学意义（均P〈0．01）;HCV-RNA含量与抗．HCV滴度、ALT异常率及水平之间呈正相关。结论实时荧光PCR定量检测HCV-RNA的临床价值较大,结合抗．HCV及ALT柃测有利于提高丙型肝炎的诊断水平。     

探讨丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）和丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）荧光定量检测在丙型肝炎诊断中的临床应用价值

目的探讨丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）和丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）荧光定量检测在丙型肝炎诊断中的临床应用价值。方法对我院96例丙型肝炎患者同时应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测丙型肝炎抗体（抗-HCV）,应用实时荧光定量法(FQ-PCR)检测HCV-RNA。结果FQ-PCR检测阳性率为73.96%(71/96),漏检率为26.04%。ELISA法检测阳性率为75.0%（72/96）,漏检率为25%。两种方法联合检测敏感性为92.71%(89/96),漏检率为7.29%（7/96）。结论两种方法联合检测,可实现优势互补,降低丙型肝炎病毒的漏检率,有利于疾病的早期诊断,有利于“窗口期”感染的筛选并提高输血安全。     

维持性血液透析患者丙型肝炎病毒感染血清学诊断方法的比较

目的比较丙型肝炎病毒(HCV)感染的血清学诊断方法,探索诊断维持性血液透析患者HCV感染的可靠方法。方法分别使用国产和进口HCV抗体试剂盒检测抗-HCV,使用TMA法定性检测HCV-RNA,荧光定量PCR法定量检测HCV-RNA,比较各种诊断方法对HCV的检出率,评价ALT变化与HCV-RNA载量的关系,评价抗-HCVS/CO值与HCV-RNA载量的关系。结果国产和进口试剂检测抗-HCV的检出率均为7.3%(P=1.000);TMA法检测HCV-RNA的检出率为9.5%,免疫荧光定量PCR法的检出率为5.6%,两者之间差异无统计学意义(P=0.330);单独检测HCV-RNA比单独检测抗-HCV的检出率高,两者差异有统计学意义(P=0.000);联合检测抗-HCV和HCV-RNA的检出率为10.6%,与单独检测抗-HCV相比较差异有统计学意义(P=0.000)。HCV-RNA的载量和ALT的变化无相关性(r=0.189,P=0.536);抗-HCV初筛的S/CO值与HCV-RNA载量无相关性(r=0.174,P=0.569)。结论检测HCV-RNA能缩短HCV感染后检出的窗口期,以便更早诊断维持性血液透析患者HCV感染,联合检测抗-HCV和HCV-RNA能避免漏诊处于血清转换期或慢性病毒携带的患者。ALT的变化和HCV载量无明显相关性,在血液透析患者中辅助早期诊断HCV感染的作用较小。     

丙型肝炎病毒核酸定量测定的临床价值

目的　研究丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法　用FQ-PCR法检测128份怀疑HCV感染的血清中的HCV-RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果　128份样本中HCV-RNA阳性率为53.9%(69/128);抗-HCV阳性率为62.5%(80/128);ALT异常率为51.0%(65/128)。HCV平均载量为8.52×105 拷贝/ml血清。抗-HCV滴度和ALT异常随着HCV-RNA载量升高而增加。结论　用FQ-PCR法检测HCV-RNA可以确定(1)抗HCV与抗-HBs不同,不是中和抗体,(2)高滴度抗-HCV血清具有传染性。(3)抗-HCV滴度与HCV-RNA浓度之间呈正相关性r=0.952, P<0.001,且有符合性和互补性,(4)对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV-RNA阴性或阳性可以鉴别活动性、复制性程度,(5)是评价丙型肝炎抗病毒治疗效果的重要指标。     

126例丙型肝炎病者临床病毒血清学分析

分析126例丙型肝炎病者的临床资料,丙型肝炎病毒血清抗体(抗-HCV)滴度及丙型肝炎核酸(HCV-RNA)。发现有明确输血(浆)史者103例,该病史中发现输血后2个月内有肝损者87例占84.4％。抗-HCV检出率为91.3％,其中急性病者检出率82.6％,慢性者95.8％。抗-HCV强阳性者(OD>1.0),HCV-RNA的检出率48.1％,明显高过OD<1.0的低阳性者。抗-HCV阴性者中有18·18％(2/11)检出HCV-RNA。另外,HCV-RNA的检出与谷-丙转氨酶(ALT)水平有一定关系,有肝损者比ALT正常者HCV-RNA检出率明显高。提示HCV-RNA的检出与活动性肝病有关系。     

HCV RNA和抗-HCV联合检测的诊断意义

目的通过丙型肝炎病毒(HCV)与抗-HCV检测结果的比较,探讨两项检测对丙型肝炎诊断的价值。方法采用真空抽滤柱提取法提取HCVRNA,用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测HCVRNA的含量,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎抗体(抗-HCV)。结果 92份临床血清标本中87份抗-HCV阳性,阳性率为95%,有66份HCVRNA阳性,阳性率为72%,结果显示HCVRNA检出率显著低于抗-HCV(P<0.01)。抗-HCV光密度值(D值)高低与HCVRNA检出率有一定关系,高D值的标本HCVRNA检出率相对较高。结论抗-HCV阳性患者并不是都有病毒复制,HCVRNA才是病毒复制的直接指标。抗-HCVD值与HCVRNA检测结果有一定的关系。     

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸含量与丙型肝炎病毒抗体和丙氨酸氨基转移酶的相关性

[目的]探讨丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量与丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)间的相关性.[方法]采用实时荧光定量PCR检测302例丙型肝炎患者血清中HCV RNA含量,同时采用ELISA法检测抗-HCV水平,利用全自动生物化学检测仪测定ALT水平.[结果]302例丙型肝炎患者血清标本中,抗-HCV均呈阳性,其中199份标本HCV RNA含量高于检测上限(103 U/mL),2种检测方法的符合率为65.9%.ALT异常率随HCV RNA含量的增高而升高,两者呈显著正相关(r=0.155,P<0.05);而ALT水平变化与HCV RNA含量无相关性(r=0.001,P>0.05).[结论]HCV RNA含量与抗-HCV水平是诊断HCV感染的重要指标,HCV RNA含量结合ALT水平测定可帮助临床了解HCV在体内复制的状况及肝脏损伤情况.     

HCV不同标志物检测结果比较分析

目的分析丙型肝炎病毒抗原、抗体及核酸标志物实验室检测结果之间的关联性。方法用丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)扩增(PCR)荧光定量、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-CAg)及丙型肝炎病毒抗原(HCV-Ag)检测试剂盒,分别检测血清或血浆样品中的HCV-Ab、HCV-RNA、HCV-CAg和HCV-Ag丙型肝炎病毒4种标志物,对检测结果之间的关联性进行分析。结果在1551份血清或血浆样品中,共检出HCV-Ab阳性样品565份(36.43%)、HCV-Ag(游离抗原)阳性样品48份(3.09%)、HCV-RNA阳性样品317份(20.44%)、HCV-CAg阳性样品25份(1.61%),HCV-Ab及HCV-RNA检出率明显高于抗原检出率(P<0.01),其阳性样品检出率按高低顺序依次为HCV-Ab、HCV-RNA、HCV-Ag和HCV-CAg。结论 4种标志物的检测可以联合运用,能有效降低HCV-Ab检测带来的漏检风险。     

116例血清中HCV RNA定量检测与抗-HCV结果对比分析

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和HCVRNA定量检测阳性结果对丙型肝炎诊断治疗的临床意义。方法采用第三代ELISA夹心法检测抗-HCV，荧光定量PCR法检测HCVRNA检测116例血清抗-HCV或HCVRNA阳性标本。结果在116例标本中，抗-HCV( )／HCVRNA( )双阳性者83例，抗-HCV( )／HCVRNA(-)者12例，抗-HCV(-)／HCVRNA( )者21例)。两者阳性符合率为71．6％(83／116)。在HCVRNA定量阳性结果中，则有104例为HCV感染，其中抗-HCV的阳性检出率为80．0％(83／104)。随着血清HCVRNA滴度的增高，抗-HCV的阳性率也增加，两者变化趋势一致。结论抗-HCV检测，HCVRNA荧光定量PCR法检测均有一定的局限性，同时应用抗-HCV和HCVRNA检测对临床上完善HCV诊断、评价抗病毒疗效更为准确。     

255例抗-HCV与HCV RNA定量检测结果比较分析

目的 探讨血清丙型肝炎病毒抗体和核糖核酸检测阳性结果的临床意义。方法 采用第三代试剂药盒ELISA法检测抗-HCV、荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测HCV RNA。结果 抗-HCV阳性／HCV RNA阴性135例(52．94％),抗-HCV／HCV RNA均阳性者99例(38．82％),而抗-HCV阴性／HCV RNA阳性者21例(8．24％)。结论 临床上疑诊丙型肝炎病毒感染的患者在检测抗-HCV的同时,应加做HCV RNA定量检测。     

慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA水平与AST/ALT比例的关系

目的分析抗-HCV阳性患者血清水平HCVRNA与AST/ALT活性的关系;评价AST/ALT比值,HCVRNA水平在判断丙肝患者预后方面的价值。方法采用ELISA法检测抗-HCV,阳性标本分别用荧光PCR试剂盒测定HCVRNA;全自动生化分析仪检测AST/ALT。结果 78份抗-HCV阳性标本经PCR检测后有31份标本含有HCVRNA,HCVRNA拷贝量与AST/ALT比例呈正相关。结论动态监测AST/ALT比例和HCVRNA的水平,可用于丙型肝炎的预后估计。     

易被忽视的血清HCV-RNA阴性丙型肝炎的诊治

目的研究血清HCV-RNA阴性慢性丙型肝炎（CHC）的诊断及治疗。方法2004-02／2008-02连续收治的血清HCV-RNA阴性CHC患者12例,平均年龄41．1岁。11例有创伤或手术史,10例血清抗．HCV检查阳性至少3次,另2例阴性（此前曾有过阳性）。血清ALT、AST持续或反复升高6mo以上。头5例肝穿活检见HCV-RNA,炎症活动度为Ⅱ度4例,Ⅲ度1例。排除其它肝病。所有患者均予干扰素α300万U,im,1次／2d;利巴韦林900mg／d,分次口服,前11例疗程48wk、最后1例24wk后随访。结果10例治疗48wk,1例治疗36wk自行停药,1例完成24wk治疗。所有患者血清ALT和AST均于4wk内降至正常。12例均有不同程度的干扰素副反应,均未影响治疗。治疗结束后随访10-48mo所有患者血清ALT和AST均正常,HCV-RNA及抗-HCV无变化。结论有创伤／手术史,血清抗-HCV阳性或以前曾有过阳性,HCV-RNA阴性、ALT、AST持续或反复异常超过6mo当考虑血清HCV-RNA阴性CHC诊断,排除其它肝病及／或肝组织检测到HCV-RNA时当诊断血清HCV-RNA阴性CHC并积极抗病毒治疗,对干扰素α和利巴韦林反应良好。     

荧光定量巢式逆转录PCR(FQ-nRT-PCR)在检测HCV-RNA中的意义

目的:采用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测丙型肝炎患者外周血清HCV-RNA,探讨HCV-RNA的临床应用价值。方法:用FQ-nRT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测192例HCV感染患者血清,比较HCV-RNA和抗-HCV的临床意义。结果:192例丙型肝炎患者血清标本中,HCV-RNA检出率为75.53%(145/192),抗-HCV检出率为91.66%(176/192)。急性丙型肝炎患者HCV-RNA定量均值达5.21×106拷贝/ml,慢性肝炎次之,肝硬化相对偏低,为5.14×103拷贝/ml。结论:192例丙型肝炎患者抗-HCV检出率高于HCV-RNA检出率,但HCV-RNA对丙型肝炎的早期诊断具有灵敏度高、定量准、假阳性率低等优点,此外在病毒复制水平及抗病毒治疗的疗效评估方面具有重要的临床价值。     

抗-HCV和HCV-RNA检测及其与ALT的相关性分析

目的探讨化学免疫发光法(CLIA)定量检测抗-HCV和FQ-PCR法检测HCV-RNA含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的相关性。方法用CLIA定量筛选抗-HCV阳性的100例病人标本,以荧光定量PCR法检测HCV-RNA含量和酶速率法检测ALT浓度水平,并对所得数据进行统计分析。结果在100份抗-HCV阳性标本中,检出HCV-RNA阳性者76例,阳性率为76%。随着抗-HCV的S/CO值增高,HCV-RNA检出率增高较明显;ALT水平与HCV-RNA含量无显著相关性(P>0.05),但ALT异常率与HCV-RNA含量呈正相关。结论在HCV诊断与疗效观察中,血清抗HCV、HCV-RNA和ALT指标各有利弊,3者有机结合能正确诊断和预测肝脏损伤及评价疗效。     

丙型肝炎病毒感染与原发性肝癌

为了解丙型肝炎病毒（HCV）感染与原发性肝癌的关系,应用酶联免疫法（ELISA）及聚合酶链反应（PCR）法对105例肝硬化患者,67例原发性肝癌患音进行了血清抗-HCV和HCV-RNA的检测,结果表明肝硬化及肝癌患者HCV感染明显高于对照组。提示HCV感染与原发性肝癌的发生密切相关。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

High prevalence of hepatitis C virus-ribonucleic acid positivity in anti-hepatitis C virus negative renal transplant patients

Background

Hepatitis C virus (HCV) infection is common in renal transplant (RT) patients. Some of these patients remain anti-HCV negative despite presence of infection and these are identified by a positive HCV-ribonucleic acid (RNA) test.

Methods

We studied 404 RT patients for prevalence of HCV-RNA positivity in anti-HCV negative patients. Serum was tested for presence of anti-HCV antibodies using a third generation HCV micro-ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) test, which utilises a combination of HCV structural and nonstructural antigens. The RNA was extracted from patient serum for HCV viral quantification using Quiagen Ql Amp Viral RNA mini extraction kit. The HCV-RNA viral load was performed on Corbet Rotor Gene 3000 thermocycler using Taqman principle.

Results

About 308 patients were anti-HCV negative and 96 were anti-HCV positive, resulting in prevalence of overt HCV infection of 23.7%. A total of 130 anti-HCV negative patients tested positive for HCV-RNA making a prevalence of occult HCV infection of 42.2%. There was no significant difference in the rate of overt or occult HCV infection between males and females. Patients with HCV infection (whether overt or occult) had received more number of dialysis sessions (62.5 vs 32.2) and blood transfusions (2.78 vs 1.99) when compared to those without HCV infection (P=0.001). The mean duration on dialysis was also longer (8.15 months vs 4.53 months) in patients with HCV infection (P= 0.0001).

Conclusion

A direct test for HCV viraemia is important to accurately determine the epidemiology of HCV infection in RT patients who remain anti-HCV negative despite harbouring active HCV infection.     

High prevalence of hepatitis C virus-ribonucleic acid positivity in anti-hepatitis C virus negative renal transplant patients

Background

Hepatitis C virus (HCV) infection is common in renal transplant (RT) patients. Some of these patients remain anti-HCV negative despite presence of infection and these are identified by a positive HCV-ribonucleic acid (RNA) test.

Methods

We studied 404 RT patients for prevalence of HCV-RNA positivity in anti-HCV negative patients. Serum was tested for presence of anti-HCV antibodies using a third generation HCV micro-ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) test, which utilises a combination of HCV structural and nonstructural antigens. The RNA was extracted from patient serum for HCV viral quantification using Quiagen Ql Amp Viral RNA mini extraction kit. The HCV-RNA viral load was performed on Corbet Rotor Gene 3000 thermocycler using Taqman principle.

Results

About 308 patients were anti-HCV negative and 96 were anti-HCV positive, resulting in prevalence of overt HCV infection of 23.7%. A total of 130 anti-HCV negative patients tested positive for HCV-RNA making a prevalence of occult HCV infection of 42.2%. There was no significant difference in the rate of overt or occult HCV infection between males and females. Patients with HCV infection (whether overt or occult) had received more number of dialysis sessions (62.5 vs 32.2) and blood transfusions (2.78 vs 1.99) when compared to those without HCV infection (P=0.001). The mean duration on dialysis was also longer (8.15 months vs 4.53 months) in patients with HCV infection (P= 0.0001).

Conclusion

A direct test for HCV viraemia is important to accurately determine the epidemiology of HCV infection in RT patients who remain anti-HCV negative despite harbouring active HCV infection.Key Words: hepatitis C, real time PCR, renal replacement therapy     

丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体联合检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体检测联合应用的意义。方法抗-HCV和HCV-cAg用ELISA法检测,HCV-RNA用RT-PCR法检测。结果1761例病人共测得阳性标本57例,其中抗-HCV阳性54例,HCV-cAg阳性22例,同时阳性为19例。3例HCV-RNA而抗-HCV阴性样本中检出HCV-cAg。22例HCV-cAg阳性标本经HCV-RNA检测均为阳性。结论HCV-RNA、抗-HCV和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高检出阳性率,有利于早期诊断。     

丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体联合检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体检测联合应用的意义。方法抗-HCV和HCV-cAg用ELISA法检测,HCV-RNA用RT-PCR法检测。结果1761例病人共测得阳性标本57例,其中抗-HCV阳性54例,HCV-cAg阳性22例,同时阳性为19例。3例HCV-RNA而抗-HCV阴性样本中检出HCV-cAg。22例HCV-cAg阳性标本经HCV-RNA检测均为阳性。结论HCV-RNA、抗-HCV和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高检出阳性率,有利于早期诊断。