HPLC法测定白花蛇舌草中熊果酸的含量

白花蛇舌草Oldenlandiadiffusa（Willd．）Roxb．中有效成分之一的熊果酸具有抗炎，提高机体免疫等功效，运用HPLC法测定熊果酸含量，可作为白花蛇舌草及其制剂质量控制的依据。1仪器与试药1．1仪器：岛津LC－9A液相色谱仪；SPD－6AV型紫外检测器；C－R4A色谱数据处理机；CQ－250型超声波清洗器。1．2试药：熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为742－8902）；试剂均为色谱纯和分析纯；重蒸水。2方法与结果2.1色谱条件：色谱柱为Nova－PakC18，4μm，3．9mm（id）×15cm；流动相为乙腈-磷酸二氢钠（0.02mol／L，用磷…     

菟丝子水煎液对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响

目的 观察菟丝子对大鼠肝细胞色素P450酶系统中CYP1A2,2D6以及3A4 3种亚型活性的影响.方法 对照组和实验组大鼠分别经口给予生理盐水和菟丝子水煎液2周,差速离心分离肝微粒体,HPLC法分别测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4探针药物的代谢率;通过Western blot测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4蛋白的相对含量.结果 ①实验组探针药物非那西丁代谢率高于对照组(P＜0.05),Western blot分析显示实验组CYP1A2蛋白表达略高于对照组;②实验组探针药物右美沙芬的代谢率明显高于对照组(P＜0.05),CYP2D6蛋白表达亦明显高手对照组;③两组间探针药物咪哒唑仑代谢率及CYP3A4蛋白表达无明显差异.结论 中药菟丝子水煎液可诱导大鼠肝微粒体中的CYP2D6和CYP1A2,而对CYP3A4无影响.     

银杏叶提取物诱导大鼠肝脏细胞色素P450酶蛋白的表达

[目的]研究银杏叶提取物对大鼠肝脏细胞色素P450酶CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1蛋白表达的影响.[方法]银杏叶提取物10mg/kg和100mg/kg两个剂量,大鼠经灌胃处理10 d后,取出肝脏,称重,制备肝微粒体,以未经处理者为对照组,测定CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达.[结果]CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达在给药后比对照组显著升高,且存在明显的剂量依赖性.[结论]银杏叶提取物能显著诱导大鼠CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达水平,故有可能影响与之同时服用的药物的疗效.     

雷诺嗪对大鼠肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响

目的 研究雷诺嗪对大鼠肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量的影响.方法 将大鼠分成空白对照组和雷诺嗪组各8只,雷诺嗪组连续给予雷诺嗪为50 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药7 d后,测定大鼠的肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量,氨基比林-N-脱甲基酶、红霉素脱甲基转移酶和7-乙氧基-3-异吩噁唑酮脱烃酶的活性.结果 雷诺嗪灌胃7 d后,大鼠肝重、肝微粒体蛋白含量与对照组比较差异无显著性;雷诺嗪组肝微粒体细胞色素P450含量与对照组比较明显减少(P＜0.01).雷诺嗪对大鼠肝微粒体中红霉素脱甲基酶和7-乙氧基-3-异吩噁唑酮脱烃酶的活性基本无影响,对氨基比林-N-脱甲基酶有明显的抑制作用(P＜0.05).结论 雷诺嗪可能引起肝药酶对某些药物代谢的改变.     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒

目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(hu-man liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制。方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型。用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用。用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响。应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kid-ney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响。结果:HLM中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率最高;2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90%以上;2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24%±2.13%。在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P0.05)。结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用。     

肝微粒体制备与细胞色素P450含量测定

对肝匀浆经一次高速离心制成的Ｓ－９部分和聚乙二醇凝集两次高速离心制成的微粒体组分进行了细胞色素Ｐ４５０含量测定，结果显示Ｓ－９部分蛋白质含量，细胞色素Ｐ４５０总量的明显高于微粒体组分，但细胞色素Ｐ４５０比含低于微粒体组合。     

白花蛇舌草提取物对白血病HL-60细胞的抑制作用

目的：探讨白花蛇舌草提取物对HL-60细胞的抑制作用及其机制。方法：采用四氮唑蓝（M1Tr）抑制试验检测白花蛇舌草提取物对HL-60细胞的抑制作用。结果：白花蛇舌草提取物对HL-60细胞有明显的抑制作用,并且呈剂量一时间依赖关系。结论：白花蛇舌草提取物可能是通过直接影响肿瘤细胞的能量代谢,从而抑制HL-60细胞生长。     

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50 mg/(kg·d),连续给药7 d,每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化。分析柱Diamonsil C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min。CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1%甲酸)(A)-水(0.1%甲酸)(B),0~5 min: 18%A,5~10 min: 18%~60%A,10~15 min: 60%A,检测波长为247 nm;CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02%甲酸)(B),0~11 min: 40%~60%A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0~10 min: 37%~75%A,检测波长为287 nm。结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD<6％(n=5),提取回收率83.2%～97.5%。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),可能存在诱导作用;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4 代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用。     

氢溴酸槟榔碱对人肝CYP450 酶的体外影响

目的 采用液质联用法结合特异性探针技术,研究氢溴酸槟榔碱（AH）对人肝微粒体（HLM） 中细胞色素P450（CYP450）亚型酶的体外影响。方法 将CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B6 的探针 底物分别在0 ～ 160μmol/L AH 的HLM 中温孵,高效液相法测定CYP1A2、2E1、3A4、2C9 的酶活性;高 效液相色谱- 串联质谱仪测定CYP2D6、2B6 的酶活性。结果 AH 对HLM 中CYP2D6、2B6、2E1、2C9 的酶活性有轻微抑制作用,且随AH 浓度的升高而增强。当AH 为160μmol/L 时,对CYP2D6、2B6、2E1、 2C9 酶活性的抑制率分别为36.2%、38.3%、35.0% 和35.4%。结论 槟榔嗜好者使用CYP1A2、2E1、3A4、 2C9、2D6、2B6 6 个CYP450 酶的底物药物时,其代谢相互作用的风险仍不可忽视。     

肝细胞色素P450 2E1在大鼠非酒精性脂肪肝发生中的作用

目的研究大鼠非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达变化及其在脂质过氧化反应中的作用.方法Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饮食诱导脂肪肝组,用免疫组织化学和Western blot方法测定肝细胞色素P450 2E1表达变化,酶学测定丙二醛含量.结果脂肪肝大鼠丙二醛含量较正常对照组增高,以高脂饮食8、12周为甚(P＜0.05),肝细胞色素P450 2E1表达亦明显增强(P＜0.01).结论肝细胞色素P450 2E1表达变化与脂肪肝引起的肝脏损害以及脂质过氧化反应程度密切相关.     

Genetic polymorphisms of CYP2D6 in Chinese mainland

目的：检测中国人群CYP2D6序列的差异性。方法：在223个中国大陆人中,使用四引物聚合酶链反应,等位基因特异性扩增聚合酶链反应和多重长聚合酶链反应方法检测CYP2D6等位基因2、3、4、5、6、8、10和14.结果：在中国人群中,频率最高的弱代谢（PM）等位基因是CYP2D6^*5(7.2%),其次是仅存在于东方人中的CYP2D6^*14(2.0%),再次为CYP2D6^*4(0.2%),未发现CYP2D6^*3、6和^*8等位基因。与白种人相比,中国大陆人群中分布频率最高的等位基因是CYP2D6^*10(51.6%)。结论：在中国大陆人群中,PM等位基因CYP2D6^*和CYP2D614的频率比其它东方人高,但CYP2D6^*10的频率比其它东方人低。     

中国汉族人CYP2J2基因外显子8等位基因多态性研究

目的：探讨中国汉族人CYP2J2基因外显子8等位基因是否存在基因多态性改变及其与原发性高血压的关系。方法：采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段分析。随机对150例汉族健康体检者及150例汉族原发性高血压患者进行CYP2J2基因外显子8位点进行多态性分析。结果：300例均为野生型，未发现杂合子或纯合子。结论：未发现中国汉族人CYP2J2基因外显子8等位基因突变，中国汉族人高血压可能与CYP2J2基因外显子8等位基因突变导致的氨基酸改变引起的AA代谢异常无关。     

苯并(a)芘对小鼠肺组织细胞色素P450 1A表达的影响

目的研究苯并（a）芘（BaP）作用下小鼠肺组织细胞色素P450 1A（CYP1A）的表达和肺组织病理形态学改变。方法昆明种雄性小鼠56只，随机分为2组（28只／组），BaP染毒组（4个亚组，7只／亚组），分别以0、0．32、1．58、7．89mg／kg体重腹腔注射BaP，每周染毒4d，持续7周；预热染毒组（4个亚组，7只／亚组），每次实验前39℃，预热2h，再用染毒组相同的剂量和时间至染毒结束。其中0mg／kg体重BaP为植物油溶剂；采用Western blot法检测小鼠肺组织CYP1A表达水平，光镜观察肺组织病理学变化。结果0．32mg／kg体重BaP染毒时，小鼠肺组织CYP1A表达增加，BaP剂量继续增加，CYP1A表达反而降低；预热应激组CYP1A表达有相同的变化趋势，但比相同剂量的BaP染毒组表达水平高；BaP染毒后小鼠肺组织有炎性增生的表现。结论低剂量BaP染毒诱导小鼠肺组织CYP1A表达增加，高剂量BaP染毒则抑制CYP1A表达。     

孕期和哺乳期暴露壬基酚对仔鼠肝脏细胞色素P450 2E1 mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨孕期和哺乳期暴露壬基酚(NP)对仔鼠肝脏细胞色素P450 2E1 (CYP2E1) mRNA和蛋白表达的影响.方法 将孕鼠分为低、中、高剂量染毒组(分别给予50、100、200 mg·kg-1·d-1 NP染毒)和对照组,孕鼠受孕第6天到仔鼠出生21 d灌胃染毒NP.仔鼠出生90 d后处死,检测血清肝功能指标及血脂水平,观察肝脏病理学变化,测定肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,检测CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平.结果 与时照组比较,各染毒组仔鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及AST/ALT比值均升高(P＜0.05),且随染毒剂量的增加呈上升趋势;血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均较对照组升高(P＜0.05).对照组仔鼠肝组织结构正常,低剂量染毒组仔鼠肝脏肝窦轻度扩张,中剂量染毒组仔鼠肝脏有轻度炎性细胞灶性浸润,高剂量染毒组仔鼠肝脏有大量脂滴存在.各染毒组仔鼠肝组织SOD、GSH-PX活性明显低于对照组(P＜0.05),MDA水平明显高于对照组(P＜0.05).中、高剂量染毒组与对照组比较CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P＜0.05).结论 孕期和哺乳期暴露NP,可致仔鼠肝脏脂质代谢紊乱及炎性损伤,可能与肝脏CYP2E1表达上调有关.     

茅台酒对大鼠肝组织中CYP2E1基因及蛋白质表达的影响

目的：探讨茅台酒对大鼠肝组织中细胞色素P4502El（CYP2E1）基因及蛋白质表达的影响。方法：40只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、茅台酒组、乙醇组,各组大鼠分别予蒸馏水、茅台酒和乙醇灌胃,每天1次,每周6次,连续12周。末次灌胃12h后处死大鼠,肝组织切片行HE染色观测病理改变,并检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）与丙二醛（MDA）含量,RT—PCR、免疫组织化学法和WesternBlot检测大鼠肝组织中CYP2E1mRNA及蛋白质表达。结果：茅台酒组及乙醇组大鼠肝组织切片HE染色均可见不同程度肝细胞脂肪变性及炎性细胞浸润,但茅台酒组的病理改变程度明显低于乙醇组,差异有统计学意义（P〈0．05）;茅台酒组大鼠肝组织匀浆中SOD、GSH—P。比空白对照组和乙醇组高,差异有统计学意义（P〈0．01）,与乙醇组比,茅台酒组大鼠肝组织匀浆中MDA显著较低（P〈0．01）;茅台酒组与空白对照组比较,大鼠肝组织中CYP2E1mRNA及蛋白质表达差异无统计学意义（P〉0．05）,茅台酒组与乙醇组比较＋大鼠肝组织CYP2E1mRNA及蛋白质表达显著较低（P〈0．01）。结论：饮用一定量的茅台酒12周后可致大鼠酒精性脂肪肝,但比饮用相同剂量单纯乙醇程度较轻,可能与茅台酒所含的非酒精性物质抑制了CYP2E1表达,对抗氧化应激有关。