缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

作者研究了在缺氧条件下脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达及缩血管活性物质内皮素、舒血管活性物质NO和NO抑制剂LNNA对VEGF基因表达的影响。体外培养人脐静脉血管内皮细胞经缺氧及血管活性物质处理、Northern杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等观察VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果显示 :缺氧 6h内皮细胞可见VEGF表达 ,ET可促进VEGFmRNA的表达 ,NO可明显抑制VEGFmRNA的表达 ,NO抑制剂LNNA也影响VEGFmRNA的表达。ELISA检测VEGF蛋白水平分别为 6h组 ( 8.2± 1 .1 ) μg/L ,ET +6h组 ( 9.3 7± 1 .…     

精氨酸加压素对血管内皮细胞分泌VEGF的影响

为观察精氨酸加压素(AVP)对血管内皮细胞 (VEC)分泌血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的影响 ,以培养的人大网膜VEC为模型 ,检测不同浓度AVP作用下VEGF浓度及蛋白激酶C(PKC)活性。结果显示 ,1× 10 -91× 10 -7mol/LAVP作用 6h后 ,VEGF浓度及PKC活性较对照组明显升高 (P<0 0 1)。提示AVP呈浓度依赖性地刺激VEC分泌VEGF ,PKC可能介导了AVP刺激VEC分泌VEGF的作用。     

低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素-6表达的影响

实验研究了低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细介素 6 (IL -6 )表达的影响。低氧处理与肺微血管内皮细胞复合培养的鼠肺动脉平滑肌细胞 ,采用RT -PCR方法检测常氧组、低氧 2h、6h、1 2h组的表达水平 ,并测定细胞培养上清液IL -6的活性。结果为低氧复合培养 2h组肺动脉平滑肌细胞中IL -6mRNA表达水平升高 ,在低氧 6h组达最高 ,代氧 1 2h组有所降低 ,但与常氧组比较有明显差别。低氧复合培养 2h组肺动脉平滑肌细胞上清中IL -6的活性明显升高 ,6h组细胞上清中IL -6的活性水平最高 ,1 2h组的活性降低 ,2 4h组的水平低于 2h组。IL -6活性…     

次声对大鼠血管内皮细胞功能的影响

目的 :观察 8Hz、130dB的次声对大鼠血管内皮细胞功能的影响。方法 :用 8Hz、131dB的次声连续作用大鼠 1,7,14 ,2 1,2 8d ,每天 2h ,测定大鼠血浆ET 1、NO的含量变化及VEGF表达的改变。结果 :大鼠血浆ET 1含量在暴露期间均明显升高 ,7d时升高最多 ,14d时升高最少 ,2 1,2 8d时较 14d时有所升高 ;次声暴露 1,7d ,大鼠血浆NO含量降低 (P <0 .0 1) ,14d时最低 ,至 2 1,2 8d时恢复正常 (P >0 .0 5 ) ;在次声暴露期 ,VEGF表达增强 (P <0 .0 1)。结论 :次声可引起大鼠血浆ET 1、NO含量变化及血管内皮VEGF表达改变 ,致使血管内皮功能改变 ,这些变化和次声暴露时间及声压有关     

葡萄糖对内皮细胞蛋白激酶C活性、通透性及粘附性的影响

目的　研究不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞的蛋白激酶C(PKC)活性、通透性及粘附性的影响。方法　用[γ32 P]ATP参入外源性底物的方法测定人脐静脉内皮细胞(HUVECs )PKC活性;用51 Cr标记的静止血小板与HUVECs保温,测定内皮细胞的粘附性;用HUVECs对白蛋白的体外通透性实验测定内皮细胞的通透性。结果　2 0mmol L的高浓度葡萄糖可最大程度活化HUVECs的PKC ,膜PKC活性为( 2 874±0 0 4 6 )mmol·mg- 1 ·min- 1 ,明显高于浆PKC活性[( 1 2 15±0 0 19)mmol·mg- 1 ·min- 1 ,P <0 0 1];HUVECs在2 0mmol L高浓度葡萄糖作用下的最大粘附率为( 6 2 84±3 2 4 ) % ,对白蛋白的最大通透率为( 0 32±0 0 0 2 )ng ml,明显高于对照组(P <0 0 1) ;HUVECs的PKC总活性与HUVECs的通透性及粘附率的相关系数r分别为0 84 6、0 734(P均<0 0 5 )。PKC抑制剂CalphostinC能抑制高浓度( 2 0mmol L)葡萄糖对HUVECs的PKC活化,并使HUVECs的通透性及粘附率明显下降。结论　高浓度葡萄糖( 2 0mmol L)可活化血管内皮细胞的PKC ,进而增加其通透性及粘附性;而PKC抑制剂能对其明显阻抑     

分化抑制因子1对创伤组织新生血管化的促进作用观察

目的 探讨分化抑制因子1(Id1)对创伤组织新生血管化的促进作用及其机制.方法 经基因鉴定的SD大鼠16只,随机分为非创伤组(即正常对照组,n=4)和创伤组(包括Id1基因敲除组、Id1诱导表达组和Id1正常表达组,n=4).采用MTT法测定Id1对血管内皮细胞Eahy026增殖的影响,实时定量RT-PCR、蛋白免疫印迹技术检测创伤1、24、48、72h后创伤组织中新生血管化标志物血管内皮细胞生长因子(VEGF)、CD105、内皮素-1(ET-1)等的mRNA和蛋白表达变化,并用报告基因技术检测Id1对VEGF、CD105、ET-1基因表达的调控作用.结果 血管内皮细胞模型实验显示转染Id1siRNA后,血管内皮细胞Eahy926增殖明显受到抑制,以72h时最显著(P<0.01);而转染pcDNAId1后,细胞增殖于48h时即增强(P<0.05),以72h时最显著(P<0.01).创伤组Id1基因敲除大鼠VEGF、CD105的mRNA及蛋白表达均受到抑制(P<0.05),且伤后各时间点表达水平无明显变化.Id1诱导表达组24h后大鼠Id1、VEGF、CD105表达均明显增强(P<0.05),于72h达高峰(P<0.01),而ET-1 mRNA水平在伤后24h升高,48h达高峰(P<0.05),72h下降.报告基因检测结果显示,Id1敲除后VEGF、CD105荧光素酶活性明显受到抑制(P<0.05),而Id1基因诱导表达后VEGF、CD105活性明显增强(P<0.01),但Id1对ET-1的表达无明显影响.结论 Id1能有效促进血管内皮细胞Eahy926增殖,调节血管内皮细胞、创伤组织中VEGF、CD105以及ET-1的表达,在组织细胞新生血管化中起重要作用.     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺内肺动脉中尾加压素Ⅱ的变化

为了研究尾加压素Ⅱ (ｕⅡ )在慢性低氧性肺动脉高压及肺血管结构重构形成中的变化 ,作者在大鼠慢性低氧性肺动脉高压模型上 ,采用免疫组化技术对慢性低氧性肺动脉高压大鼠不同节段肺内动脉ｕⅡ蛋白表达进行交位及半交量分析。结果显示 :低氧 1周和 2周组大鼠肺动脉平均压 (ｍＰＡＰ)、右心室肥厚指标Ｒ/(Ｌ +Ｓ)、肺动脉相对中膜面积 (ＲＭＡ)和相对中膜厚度 (ＲＭＴ)均明显高于对照组 (Ｐ <0 .0 0 1 )。低氧 2周组大鼠各节段肺内动脉内皮细胞中ｕⅡ表达较对照组分别下降 2 7.75 %、3 2 .5 0 %、3 9.63 % (Ｐ <0 .0 1 )。相关分析显示 :与…     

常压模拟高住低练对大鼠心肌血管内皮生长因子基因表达的影响

目的 :探讨常压下不同低氧 ( 1 4 5 %、1 2 6%氧含量 )模拟高住低练对心肌血管内皮生长因子mRNA表达的影响 ,为运动与低氧适应提供理论依据。方法 :用RT -PCR技术检测大鼠心肌VEGFmRNA水平。结果 :常压下不同低氧模拟高住低练对大鼠心肌VEGFmRNA表达作用结果不同 ,常压下 1 4 5 %氧含量 (相当于海拔 3 0 0 0m)模拟高住低练能稳定VEGF的上调 ,而在常压下1 2 6%氧含量 (相当于海拔 40 0 0m)模拟高住低练时VEGFmRNA基因表达量却减少。结论 :只有选择在适宜的氧含量 (海拔高度 )进行高住和安排好运动训练持续时间 (低练 )才能有效地提高大鼠心肌VEGFmRNA的表达水平     

siRNA沉默EPAS1基因对低氧条件下大鼠PASMCs增殖的影响

目的 探讨应用siRNA技术沉默EPAS1 (HIF-2α)基因表达对低氧条件下培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响.方法 原代培养大鼠PASMCs共采用免疫荧光法进行鉴定.构建特异性EPAS1 siRNA脂质体,转染PASMCs,从3个干扰靶点中选取效果最好的靶点进行干扰;在常氧(37℃、5％CO2、20％O2)和低氧(37℃、5％CO2、2％O2)条件下分别培养24、48、72h,采用Western blotting检测PASMCs中EPAS1、VEGF蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况.结果 成功分离培养原代大鼠PASMCs并经免疫荧光鉴定证实.将特异性的EPAS1 siRNA脂质体转染到PASMCs,选择干扰效果最好的靶点2进行干扰.与常氧条件比较,低氧条件下PASMCs中VEGF蛋白的表达及细胞增殖水平均明显升高;沉默EPAS1后,无论低氧还是常氧条件下,PASMCs中VEGF蛋白的表达及细胞增殖水平均明显降低.结论 EPAS1基因参与了低氧条件下大鼠PASMCs增殖的调控,其调节可能是通过VEGF介导完成的.     

巨噬细胞对血管内皮细胞周期和VEGF受体、HOXB2 mRNA表达的影响

目的　研究巨噬细胞调节内皮细胞参与血管生成的机制。方法　将人脐静脉血管内皮细胞系 (ECV 30 4 )细胞接种培养 ,待细胞 6 0 %融合时 ,以刀豆蛋白A(ConA)作为人巨噬细胞系U937的激活剂 ,将细胞分为 4组进行培养 ,即单纯ECV 30 4培养组 (对照组 ) ,ConA与ECV 30 4共培养组 ,U937与ECV 30 4共培养组 ,ConA、U937与ECV 30 4共培养组。于共培养 4 8h后在倒置显微镜下观察细胞形态学的变化 ;用流式细胞仪检测细胞周期的变化 ;用RT PCR技术检测内皮细胞VEGF受体KDR和同源盒 (homeobox)HOXB2mRNA表达水平的变化。结果　ConA刺激的U937细胞使内皮细胞间隙变大 ,细胞出现明显的类似神经元样的突起 ,形态不一 ,且S期明显增加(P <0 0 1) ,并使内皮细胞VEGF受体KDR和HOXB2mRNA的表达水平明显上调 (P <0 0 1)。结论　ConA活化的巨噬细胞通过影响内皮细胞的形态、细胞周期、KDR及HOXB2mRNA的表达来促进内皮细胞的增殖和迁移 ,从而调节血管的生成     

缺氧时肺动脉内皮细胞分泌血管舒缩因子的变化

目的　探讨肺动脉内皮细胞在缺氧性肺动脉高压和肺水肿发生机制中的作用。　方法　利用离体培养的猪肺动脉内皮细胞 (PAEC)为实验模型 ,通过放免分析方法检测了缺氧过程中PAEC分泌到培养液中的收缩因子内皮素 (ET- 1)及舒张因子前列环素 (PGI2 )的变化。　结果　在缺氧过程中 ,PAEC分泌 ET- 1的水平与对照组比较均明显增加 (P<0 .0 5 ) ;PAEC分泌 PGI2 的水平在缺氧开始 (12 h)时出现一过性的增加 ,但随缺氧时间的延长 (2 4h) ,PGI2 含量明显降低 (P<0 .0 5 )。　结论　缺氧过程中 PAEC分泌功能的变化可能导致肺血管收缩 ,形成缺氧性肺动脉高压 ,以及血管完整性的破坏和通透性的增加 ,形成缺氧性肺水肿。     

递增负荷低氧训练对大鼠股外肌eNOS、HO-1、VEGF mRNA表达的影响

目的:探讨递增负荷低氧训练对调节大鼠骨骼肌血管生长和舒张相关基因(eNOS、HO-1、VEGF)的影响。方法:80只雄性SD大鼠适应性训练后分为常氧安静组,常氧训练组,常氧递增训练Ⅰ、Ⅱ组,低氧安静组,低氧训练组,低氧递增训练Ⅰ、Ⅱ组,共8组;所有训练组进行4周水平跑台训练,常氧训练组(35m/min)和低氧训练组(30m/min)采用恒定负荷,1h/d,5d/w,持续4周;4个递增训练组采用递增负荷,1h/d,5d/w,持续4周。低氧组每天在低氧环境(氧浓度13.6%,模拟海拔约3500米)中生活。采用荧光定量PCR测定股外肌eNOS、HO-1、VEGF mRNA表达。结果:(1)低氧训练组骨骼肌eNOS mRNA表达较常氧安静、常氧训练和低氧安静组显著下降(P<0.05),常氧递增训练Ⅱ组较常氧训练组显著上升(P<0.01),低氧递增训练Ⅱ组较低氧训练、低氧递增训练Ⅰ组均显著下降(P<0.05)。(2)常氧训练、低氧训练组骨骼肌HO-1 mRNA表达较常氧安静和低氧安静组均显著下降(P<0.05),常氧递增训练I组较常氧训练组显著上升(P<0.05),低氧递增训练Ⅱ组较低氧训练和低氧递增训练Ⅰ组显著性下降。(3)常氧训练、低氧训练组骨骼肌VEGF mRNA表达较常氧安静组显著上升(P<0.01),低氧递增训练Ⅱ组较常氧递增训练Ⅱ、低氧训练、低氧递增训练Ⅰ组均显著降低。结论:(1)低氧环境长期训练抑制股外肌eNOS mRNA表达;一定强度常氧递增训练促进其表达,低氧递增负荷训练则抑制其表达。(2)4周常氧和低氧训练均抑制股外肌HO-1 mRNA表达;低氧和常氧递增负荷对HO-1的影响与对eNOS一致。(3)常氧训练和低氧训练可促进股外肌VEGF mRNA表达,低氧环境下增加训练负荷抑制其表达。     

低氧预处理脐带间充质干细胞的旁分泌对成骨细胞功能的影响

目的：研究低氧预处理人脐带间充质干细胞（ umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSC）旁分泌作用对人成骨细胞（ MG－63）增殖、迁移及成骨的影响。方法分别于低氧及常氧条件下培养UCMSC,获取两种UCMSC条件培养基。实验分为3组：低氧培养基组、常氧培养基组、DMEM对照组,分别用3种不同的培养基常温培养MG－63。于培养1、3、5 d后用四氮唑盐（ mosmann tetrazoline colorimetry, MTT）比色法检测细胞增殖情况,记录各组的光密度值进行统计学分析;用划痕法检测细胞在不同培养条件下的迁移能力;于培养21 d后进行茜素红染色检测各组成骨钙结节的形成。酶联免疫吸附法（ ELISA）检测低氧及常氧条件培养基中血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor,VEGF）的含量。结果 MTT法检测结果表明,低氧及常氧培养基组的MG－63细胞在培养1、3、5 d后的增殖能力均大于DMEM对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）,且低氧组大于常氧组,差异有统计学意义（P＜0．05）;划痕法结果为此两组细胞迁移能力大于DMEM对照组,且低氧组细胞迁移能力大于常氧组;钙结节染色结果显示低氧组成骨钙结节形成最多,常氧组次之,DMEM对照组最少。 ELISA法检测低氧组VEGF含量高于常氧组,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论低氧预处理UCMSC可增强其旁分泌功能,促进成骨细胞MG－63的增殖、迁移及成骨。     

益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞分泌功能的影响

目的研究益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞分泌功能的影响。方法建立人肺动脉内皮细胞低氧高二氧化碳模型;制备益肺活血复方不同给药剂量（生药10、20、40 g.kg-1）的含药血清及生理氯化钠溶液血清;在细胞培养液中共同孵育12 h后,利用免疫组织化学法测定细胞内低氧诱导因子-1ɑ（HIF-1ɑ）的表达,放射免疫分析法测定各组细胞上清液中内皮素-1（ET-1）的浓度,逆转录多聚酶链反应法测定ET-1mRNA的表达水平。结果低氧高二氧化碳条件下,人肺动脉内皮细胞ET-1的分泌、HIF-1ɑ蛋白和ET-1mRNA的表达明显增强（P〈0.05）;而中、高浓度益肺活血复方能够抑制人肺动脉内皮细胞合成分泌HIF-1ɑ、ET-1mRNA及ET-1（P〈0.05）。结论低氧高二氧化碳导致人肺动脉内皮细胞功能障碍,而中、高浓度的益肺活血复方可减少人肺动脉内皮细胞ET-1的分泌和ET-1mRNA、HIF-1α蛋白的表达,从而减轻人肺动脉内皮细胞功能紊乱的程度,益肺活血复方可能成为治疗低氧高二氧化碳性肺动脉高压的有效药物。     

Sp1在低氧肝癌细胞血管内皮生长因子转录调控中的作用

目的 探讨转录因子Sp1在低氧肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)转录调控中的作用.方法 实时定量PCR和免疫印迹法检测低氧肝癌HepG2细胞中Sp1和VEGF的表达,并应用Sp1特异性抑制剂普卡霉素(光神霉素A,plicamycin,mithramycin A)及Sp1-小干扰RNA(siRNA)干预上述实验检测VEGF mRNA的表达变化.结果 低氧条件下肝癌HepG2细胞Sp1 mRNA、蛋白及VEGF mRNA的表达均呈时间依赖性明显增加,普卡霉素呈剂量依赖性抑制低氧诱导VEGF mRNA的表达.Sp1-siRNA转染HepG2细胞后,VEGF mRNA表达亦明显下降.结论 低氧条件下,HepG2细胞Sp1蛋白及VEGF mRNA表达均明显增加.Sp1信号通路参与低氧诱导VEGF的转录调控.     

槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

大豆异黄酮对围绝经期大鼠卵巢VEGF和NOS亚型mRNA表达的影响

目的 观察大豆异黄酮(SI)对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(VEGF)及一氧化氮合酶亚型eNOS、iNOS mRNA表达的影响.方法 12月龄雌性Wistar大鼠42只,随机分为模型组,低(50mg/kg)、中(158 mg/kg)、高(500mg/kg)剂量SI组及尼尔雌醇(NI)组,另取3月龄大鼠10只作为青年组,灌胃给药8周.RT-PCR检测卵巢VEGF和NOS mRNA的表达;比色法检测血清和卵巢总NOS的活性.结果 围绝经期大鼠卵巢VEGF表达明显高于青年组(P＜0.01),eNOS、iNOS表达及血清、卵巢总NOS活性均较低(P＜0.01).经SI处理后,VEGF表达均明显下降,NOS表达及活性明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 大豆异黄酮下调衰老卵巢VEGF mRNA表达,提高eNOS、iNOS表达及活性,可能是其改善围绝经期卵巢功能的机制之一.