电针对干眼症兔角膜TNF-α、IL-6、MHC-Ⅱ调节作用的研究

目的通过观察电针对干眼症兔角膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和组织相容性复合体-Ⅱ(MHC-Ⅱ)表达的影响,探讨电针治疗干眼症的作用机制。方法24只雄性新西兰兔随机分为正常组、模型组、电针组和西药组,每组6只。正常组不造模、不干预。模型组仅给予0.1%苯扎氯铵滴眼造模,造模成功后不予任何干预处理。电针组造模后给予电针干预,取穴为双侧攒竹、太阳、丝竹空和风池,攒竹和太阳连接电针。西药组造模后给予聚乙二醇滴眼液治疗。实验结束后检测泪液分泌量和泪膜破裂时间,应用免疫组化法检测角膜组织TNF-α、IL-6和MHC-Ⅱ蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组兔泪液分泌量降低,泪膜破裂时间缩短(P<0.01);与模型组比较,电针组兔泪液分泌量增多、泪膜破裂时间延长(P<0.01),西药组泪液分泌量无明显变化(P>0.05)、泪膜破裂时间延长(P<0.01)。与正常组比较,模型组兔角膜组织TNF-α、IL-6和MHC-Ⅱ蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,电针组、西药组兔角膜组织TNF-α、IL-6和MHC-Ⅱ蛋白表达均减少(P<0.05)。结论电针可以改善实验性干眼症兔泪液分泌量和泪膜破裂时间,下调角膜组织TNF-α、IL-6和MHC-Ⅱ的表达。     

密蒙花提取物对去势导致干眼症白兔泪腺细胞凋亡的影响

目的观察密蒙花提取物对去势导致的干眼症兔基础泪液分泌量、泪膜稳定性和凋亡相关基因蛋白Fas、FasL表达的影响,探讨密蒙花提取物抗性激素水平失调导致的干眼症的作用机制。方法将60只日本大耳白兔(雌雄各半)随机分为雄、雌兔空白组(A1、A2),雄、雌兔模型组(B1、B2),雄、雌兔1倍剂量密蒙花提取物治疗组(C1、C2),雄、雌兔2倍剂量密蒙花提取物治疗组(D1、D2),雄、雌兔染料木黄酮治疗组(E1、E2),每组6只。对B、C、D、E组行去势术建立动物模型,对C、D、E组分别以密蒙花提取物1倍剂量和2倍剂量以及染料木黄酮连续灌胃1月。对全部实验兔行SchirmerI试验、测量泪膜破裂时间,用免疫组织化学的方法对兔泪腺组织中凋亡相关基因蛋白Fas、FasL进行检测。结果C、D、E组SchirmerI试验测量值明显高于B组(P<0.01)、泪膜破裂时间明显长于B组(P<0.01),泪腺导管及腺泡上皮细胞中,Fas、FasL阳性表达的细胞数均明显低于B组(P<0.01)。以上检测结果C、D组优于E组(P<0.05)。结论密蒙花提取物中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制性激素水平降低后兔干眼症的发生。其作用机制可能与黄酮类物质为植物雌激素的一种有关,可调节体内性激素水平,从而可调节和抑制泪腺细胞凋亡。密蒙花提取物可能成为治疗干眼症的新途径。     

电针足三里对胃黏膜损伤大鼠细胞凋亡及其调控基因Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

目的:观察电针足三里对胃黏膜损伤大鼠的细胞保护作用与细胞凋亡及其调控基因Bcl-2、Fas 蛋白表达的关系。方法:将40只大鼠随机分为足三里组、非穴组、模型组和空白组,每组10只。用无水乙醇 灌胃,造成胃黏膜损伤模型。检测各组大鼠胃黏膜细胞凋亡指数、胃黏膜细胞Bcl-2、Fas蛋白表达水平。结 果:细胞凋亡指数模型组与空白比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。足三里组与模型组比较,差异有非 常显著性意义(P<0.01),细胞凋亡指数显著降低;足三里组与非穴组比较,差异有显著性意义(P<0.05); 足三里组与空白组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。Bcl-2基因蛋白阳性表达:模型组与足三里组、空白 组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。Fas基因蛋白阳性表达:非穴组、模型组与足三里组、空白组比 较,差异有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:电针足三里对胃黏膜损伤后的细胞保护作 用可能的机理是由于降低胃黏膜细胞凋亡,促进了Bal-2基因蛋白表达,抑制了Fas基因蛋白表达,并具有腧 穴相对特异性。     

电针对失坐骨神经大鼠腓肠肌细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的:观察电针疗法对失坐骨神经大鼠腓肠肌细胞凋亡及相关蛋白的影响,探讨电针对失坐骨神经骨骼肌萎缩的延缓效应及其可能机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组21只。采用切断坐骨神经法制备腓肠肌萎缩大鼠模型。电针组电针患侧"足三里""承山"穴,每日1次,每次10min,各组分别在术后7、14、21d取材。TUNEL法检测腓肠肌细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达,RT-PCR法检测腓肠肌Caspase-3mRNA表达。结果:模型组各时点细胞凋亡指数均高于假手术组(P0.05),电针组的细胞凋亡指数显著低于模型组(P0.05)。模型组各时点腓肠肌Bcl-2蛋白表达较假手术组显著降低(P0.05),Bax、Cyt-C以及Caspase-3蛋白表达均明显升高(P0.05)。术后14、21d,电针组与模型组比较,Bcl-2蛋白表达显著升高(P0.05),Bax、Cyt-C及Caspase-3蛋白表达则明显降低(P0.05)。各组大鼠腓肠肌的Caspase-3mRNA表达与蛋白表达结果基本一致。结论:电针能够促进腓肠肌Bcl-2的表达并抑制Bax、Cyt-C和Caspase-3的表达,从而抑制肌细胞的凋亡,这可能是电针延缓失神经性骨骼肌萎缩的机制之一。     

密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和FasL的影响

目的观察密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和Fas L的影响,探讨密蒙花颗粒剂对去势雄兔干眼症模型的疗效。方法将密蒙花原药材制备成颗粒剂。将30只健康成年新西兰长耳白兔(雄性),随机分为空白组(A组),模型组(B组),密蒙花颗粒剂组(C组),安慰剂组(D组),睾酮组(E组)5组,每组6只。除A组外其余4组实验用兔行双侧睾丸及附睾切除术。除A、B组外,从术后第3日开始C组予密蒙花颗粒剂,按100 mg/kg灌胃,3次/日;D组予生理盐水20 m L灌胃,3次/日;E组按2 mg/kg在大腿肌肉处注射丙酸睾酮注射液,每3日注射1次。各组实验用兔,分别于术前和术后第4周各进行1次SchirmerⅠ试验(SchirmerⅠtest,SⅠT)和泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)测定。用药观察4周后采用空气栓塞法处死各组兔子,摘取双眼泪腺组织,采用免疫组化法对泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和Fas L的表达进行检测,并观察泪腺组织结构形态图。结果 (1)SⅠT及BUT结果:与本组术前及术后A组比较,B、D组SⅠT及BUT均明显下降(P0.01);与B、D组术后比较,C、E组SⅠT及BUT升高,且差异均有统计学意义(P0.01)。(2)Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达:与A组比较,B、D组Bax、Fas、Fas L表达均明显增多,Bcl-2表达明显减少(P0.01);与B、D组比较,C、E组Bax、Fas、Fas L表达均明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.01)。(3)Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达观察结果:A组:泪腺结构清晰,未见Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达;B组:泪腺结构模糊,Bax、Fas、Fas L均大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒,Bcl-2仅少量表达;C组:泪腺结构清晰,散见Bax、Fas、Fas L表达,Bcl-2大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒;D组:泪腺结构模糊,Bax、Fas、Fas L均大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒,Bcl-2仅少量表达;E组:泪腺结构清晰,散见Bax、Fas、Fas L表达,Bcl-2未见表达。结论密蒙花颗粒剂具有与雄激素相似的抑制泪腺细胞凋亡因子Bax、Fas和Fas L表达,同时上调Bcl-2的作用,能抑制雄激素缺乏所致兔泪腺细胞的凋亡,维持泪腺基础分泌量,但其作用弱于雄激素。     

益气活血方对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡影响的研究

目的观察益气活血方对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-Associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase 3,C-caspase 3)表达情况的影响,探讨益气活血方影响心肌细胞凋亡的作用机制。方法结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死大鼠模型,并随机分为模型组、益气活血组、培哚普利组,假手术组(即对照组,只穿线不结扎),每组大鼠10只。术后第二天开始灌胃给药,以28天作为观察时间点。小动物超声检测各组大鼠心脏结构和功能的变化,HE染色观察心肌组织病理形态变化,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡指数,Western blot技术检测心肌梗死边缘区Bax、Bcl-2、C-caspase 3蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(left venteicular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular shortening fraction,LVFS)均显著降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic dimension,LVESD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)均升高(P<0.01);两用药组LVEF、LVFS相较于模型组均显著升高(P<0.01),LVESD、LVEDD均降低(P<0.01)。与假手术组相比,模型组心肌细胞凋亡指数明显上升(P<0.01);与模型组比较,益气活血组与培哚普利组大鼠心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.01)。Western blot结果显示,模型组大鼠Bax、C-caspase 3表达与假手术组相比均有明显升高(P<0.01),Bcl-2表达及Bcl-2/Bax相较于假手术组有所降低(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组大鼠Bax蛋白表达有所下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达与Bcl-2/Bax显著升高(P<0.05,P<0.01),C-caspase 3蛋白表达有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05);相较于模型组,培哚普利组大鼠Bax表达降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比值上升(P<0.05),Bcl-2呈升高趋势,C-caspase 3有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气活血方能够提高心肌梗死大鼠心功能,下调促凋亡蛋白Bax的表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值,从而减轻心肌凋亡损伤以保护心脏。     

鬼针草对2 种兔干眼模型泪液分泌、泪膜质量及泪腺中致炎因子和凋亡相关因子表达的影响

目的观察鬼针草对2种干眼兔模型（阿托品点眼和去势）泪液分泌、泪膜稳定性及泪腺中致炎因子IL-1、TNF—α,凋亡相关因子Fas、Bcl-2蛋白表达的影响。方法成年新西兰白兔28只。分为阿托品滴眼剂干眼模型组14只（鬼针草治疗组11只22只眼,空白对照组3只6只眼）和去势雄兔干眼模型组14只（鬼针草治疗组11只22只眼,空白对照组3只6只眼）。鬼针草治疗前和治疗后2周测量泪液分泌量和泪膜破裂时间,取其泪腺标本行免疫组织化学染色检测IL一1、TNF—α、Fas和Bcl-2的表达。结果鬼针草能明显提高2种干眼兔的泪膜稳定性（P〈0．05）。阿托品滴眼剂干眼模型兔鬼针草治疗组泪腺腺泡上皮细胞中Fas和IL—1蛋白阳性表达量较空白对照组明显减少（P〈0．05）;去势干眼模型兔鬼针草治疗组和对照组泪腺腺泡上皮细胞中Fas、Bcl-2、IL-1及TNF—α表达比较,差异无统计学意义（乃0．05）。结论鬼针草能够改善阿托品滴眼剂干眼兔（泪液分泌不足型干眼）和去势干眼兔（雄激素缺乏干眼）的泪膜稳定性,并能够抑制阿托品滴眼剂干眼兔泪腺组织的凋亡和炎性反应。对其泪腺组织具有保护作用。     

维医沙疗对兔膝骨关节炎关节软骨中Caspse-3、Bcl-2、Bax及凋亡蛋白表达的影响

目的研究维医沙疗对兔膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨中半胱氨酸蛋白酶(cysteine as-partate-specific proteinase-3,Caspse-3)、B细胞白血病-淋巴瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2)、B细胞白血病淋巴瘤-2相关蛋白基因(Bcl-2-associated X protein gene,Bax)及凋亡蛋白表达的影响,为维医沙疗治疗OA提供理论依据。方法新西兰兔22只,右后肢石膏固定的方法建立OA动物模型,其中2只原始模型标本作为对照。其余20只随机分成自由活动组、沙疗组各10只,并将自由活动组健侧作为正常对照组(正常组),沙疗组埋沙治疗20天。免疫组化SP法检测Caspase-3、bcl-2、bax在兔膝关节软骨细胞中的表达。原位末端标记(terminal deoxynucleotidy transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测OA软骨细胞凋亡情况。结果活动组及沙疗组阳性细胞个数及光密度(optical density,OD)的表达,Caspase-3、Bax、TUNEL蛋白表达均高于正常组(P<0.01),且沙疗组明显低于活动组(P<0.01);活动组及沙疗组Bcl-2的表达之阳性细胞个数及OD值均低于正常组(P<0.01),沙疗组阳性细胞个数明显高于活动组(P<0.01)。结论维医沙疗能抑制兔OA凋亡细胞Caspase-3、Bax/Bcl-2、TUNEL的表达,可能是维医沙疗的部分抗炎作用机制。     

活血胶囊对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨活血胶囊干预对动脉粥样硬化兔主动脉平滑肌细胞凋亡及凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法通过高脂饮食建立实验性动脉粥样硬化兔动物模型,采用TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡,SP免疫组化法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,活血胶囊低、高剂量组均能降低兔主动脉平滑肌细胞凋亡的凋亡指数(P<0.05,P<0.01),降低Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并呈现一定的量效关系(P<0.05)。结论活血胶囊可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少平滑肌细胞凋亡,从而抑制动脉粥样硬化斑块的形成。     

润目灵颗粒对水液缺乏性干眼兔泪腺形态学及细胞凋亡的影响

目的探讨润目灵颗粒治疗水液缺乏性干眼的作用机制。方法用1%硫酸阿托品滴眼液滴眼制备兔水液缺乏性干眼模型,给予润目灵颗粒治疗14 d。对全部实验兔行Schirmer I试验,测定泪膜破裂时间,观察角膜染色,光、电镜观察其泪腺形态学的变化,免疫组化法对泪腺组织中凋亡相关基因蛋白进行检测。结果与模型组比较,Schirmer I试验检测显示,润目灵组泪液量明显增加(P0.01),泪膜破裂时间明显延长(P0.05,P0.01),角膜染色分值明显减小(P0.01),泪腺导管及腺泡上皮细胞中凋亡相关因子(factor-related apoptosis,Fas)及其配体(Fas ligand,Fas L)阳性表达的细胞数明显减少(P0.05),泪腺细胞的形态学损伤明显减轻。结论润目灵颗粒可能通过抑制水液缺乏性干眼兔泪腺组织的细胞凋亡及腺体萎缩,达增加泪液分泌、维持泪膜稳定的作用。     

Influence of electroacupuncture on histomorphology of lacrimal glands and ocular surface in experimental dry eye syndrome

Objective

To observe the influence of electroacupuncture (EA) on histomorphologies of lacrimal glands, cornea and conjunctiva in experimental dry eye syndrome, and to explore the repair effects of EA on lacrimal glands and ocular surface damage.

Methods

Twenty-four healthy male New Zealand rabbits were randomly divided into a normal group, a model group, an EA group and a medication group, 6 rabbits in each group. Experimental dry eye syndrome models were prepared in rabbits by using 0.1% benzalkonium chloride for eye drops. Tear secretion volume, break-up time of tear film (BUT) and corneal fluorescein staining score were observed before and after the treatment. Periodic acid Schiff (PAS) staining method was used to observe the changes of conjunctival goblet cells in rabbits. After hematoxylin eosin (HE) staining, morphological changes of rabbit cornea, conjunctiva and lacrimal gland tissues were observed under light microscope.

Results

Compared with the normal group, tear secretion volume and BUT were significantly reduced (both P<0.01), while the corneal fluorescein staining score was significantly increased (P<0.01) in the model group. Compared with the model group, tear secretion volume and BUT were significantly increased, while the corneal fluorescein staining score was significantly decreased in the EA group and the medication group (all P<0.01). Compared with the normal group, the number of conjunctival goblet cells in the model group was significantly reduced; compared with the model group, the numbers of conjunctival goblet cells were all relatively higher in the EA group and the medication group. Pathological lesions of cornea, conjunctiva and lacrimal glands all showed improvement by HE staining in the EA group and the medication group after the intervention.

Conclusion

EA can improve tear secretion and tear film stability of rabbit dry eye syndrome, and repair the pathologic lesions of conjunctival goblet cells, corneal epithelia, cornea, conjunctiva and lacrimal glands.

     

垂盆草醇提物抑制HepG2细胞STAT-3信号通路诱导细胞凋亡的研究

目的:研究垂盆草醇提物对STAT-3信号通路的影响,及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测垂盆草醇提物对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术分析结合FITC-Annexin V/PI双标记检测对肝癌细胞凋亡的影响,免疫印迹试验检测细胞凋亡Caspase-3,Caspase-9,PARP,P-STAT-3(Tyr705),STAT-3,Bcl-2,Mcl-1相关蛋白表达水平。结果:垂盆草醇提物可明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,且抑制作用呈剂量依赖效应。垂盆草醇提物作用后,抑制STAT-3信号转导通路,下调Mcl-1和Bcl-2的表达,引起凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-9的降解/活化及PARP的降解,并呈剂量依赖效应。结论:垂盆草醇提物通过抑制STAT-3信号转导通路和Mcl-1和Bcl-2的表达,进而抑制HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡。     

电针对2型糖尿病认知障碍模型大鼠学习记忆能力的影响

目的:观察电针对2型糖尿病认知障碍大鼠大脑皮质Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白及基因表达的影响,探讨电针改善其学习记忆的作用机制.方法:将100只Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字表法分为正常组10只和造模组90只.造模组大鼠以高脂高糖饲料喂养1个月后,采用小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立2型糖尿病大鼠模型.将造模成功的50只大鼠通过Morris水迷宫实验(MWM)筛选出认知障碍大鼠20只,按照血糖值与MWM数据随机分为模型组和电针组,每组10只.电针组大鼠针刺足三里、内庭及胰俞,其中足三里和内庭加电针刺激,每日治疗1次,每次20 min.每周治疗6 d,连续治疗4周.模型组与正常组大鼠只固定不治疗.治疗4周后,测定大鼠随机血糖值;MWM测定大鼠学习与记忆能力;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)法检测凋亡细胞;Western blot(WB)及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测大脑皮质Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白及基因的表达.结果:造模后,电针组和模型组大鼠随机血糖值和MWM逃避潜伏期明显增高,MWM通过平台次数减少,与正常组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而模型组与电针组之间差异无统计学意义(均P>0.05).治疗4周后,与正常组相比,模型组随机血糖值及MWM逃避潜伏期明显升高(均P<0.05),MWM穿越原平台次数明显减少(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白及基因表达明显升高(均P<0.001);Bcl-2蛋白及基因表达明显降低(均P<0.001),神经细胞的凋亡数显著增加(P<0.001);与模型组比较,电针组随机血糖值明显降低(P<0.05),MWM逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),MWM穿越原平台次数明显增多(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白及基因表达明显降低(均P<0.001);Bcl-2蛋白及基因表达明显升高(均P<0.001),神经细胞的凋亡数明显减低(P<0.001).结论:电针可以改善大鼠2型糖尿病造成的学习记忆能力损伤,其作用机制可能是通过抗细胞凋亡作用完成.     

芪贝复元饮对甲减大鼠心肌细胞凋亡及Fas FasL和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察芪贝复元饮对甲减大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3表达的影响。方法:采用Kolaja法制备大鼠甲状腺功能减退模型。健康wistar大鼠120只随机分成4组:正常对照组、模型组、芪贝复元饮组、L-T4组。光镜和电镜观察心肌形态学和超微结构变化,TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化检测凋亡相关基因蛋白Fas,FasL,Caspase-3的表达。结果:与正常组相比,模型组心肌细胞凋亡指数及Fas,FasL,Caspase-3的表达均达高峰,治疗后芪贝复元饮组和L-T4组显著降低,且芪贝复元饮组的疗效优于L-T4组(P0.05)。结论:甲状腺功能减退引起Fas,FasL及Caspase-3蛋白的表达升高,心肌细胞凋亡增多。芪贝复元饮能减少促凋亡基因Fas、FasL和Caspase-3蛋白的表达,降低心肌细胞凋亡率。     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法:将围绝经期大鼠随机分为针刺组、药物组和围绝经期组,分别进行针刺治疗、更年安药物治疗和空白对照,并与青年大鼠作对照。测定各组大鼠的卵巢颗粒细胞凋亡,检测卵巢颗粒细胞Bcl-2、Fas蛋白表达。结果:与青年大鼠比较,围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡显著增加(P<0·01),Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0·01),Fas蛋白表达明显升高(P<0·01)。针刺治疗后围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡减少(P<0·05),Bcl-2蛋白表达提高(P<0·05),Fas蛋白表达明显降低(P<0·01);更年安药物治疗后,卵巢颗粒细胞凋亡亦有降低但图像分析结果无统计学意义(P>0·05),Bcl-2蛋白表达提高(P<0·05),Fas蛋白表达明显降低(P<0·01)。结论:针刺能够抑制围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,上调卵巢颗粒细胞Bcl-2蛋白表达、下调Fas蛋白表达。     

电针对缺血性学习记忆障碍大鼠氧自由基及凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察电针对脑缺血大鼠学习记忆障碍的影响,从氧自由基与细胞凋亡的角度探讨电针治疗该病的机制。方法:用Morris水迷宫实验筛选学习记忆良好的健康雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、药物组、电针组,每组15只。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备缺血性学习记忆障碍模型。造模成功后第7天进行干预。电针组采用"智三针"通电治疗,每日1次,每次30min,共3周。药物组给予安理申灌胃,剂量为0.03mg/kg,每日1次,共3周。在不同时间点用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;TUNEL法检测海马区细胞凋亡;免疫组化法检测海马区Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达的情况;化学比色法测量血清及海马超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与假手术组比较,造模后模型组大鼠学习记忆能力明显降低(P0.01);治疗14d时,两治疗组大鼠的学习记忆能力较模型组明显升高(P0.01);治疗21d时,电针组大鼠学习记忆能力提高的程度优于药物组(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠海马凋亡细胞数目明显增多(P0.01),两治疗组较模型组明显减少(P0.01)。与假手术组比较,模型组Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高(P0.01);两治疗组Bcl-2蛋白表达较模型组升高(P0.01),且电针组Bcl-2蛋白表达较药物组升高明显(P0.01),两治疗组Bax和Caspase-3蛋白表达较模型组降低(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠血清及海马组织SOD、GSH-Px活性明显降低(P0.01),MDA含量明显升高(P0.01);两治疗组与模型组比较,SOD、GSH-Px活性明显升高(P0.01),MDA含量明显降低(P0.01);电针组血清中3项指标及海马GSH-Px活性的改善程度较药物组明显(P0.01,P0.05)。结论:电针"智三针"可降低缺血性学习记忆障碍大鼠血清及海马内氧自由基含量,进而抑制细胞凋亡,改善学习记忆能力。     

调心安神针法预处理对缺血再灌注性心律失常兔心肌细胞凋亡的影响

目的:研究调心安神针法预处理对于缺血再灌注性心律失常(RA)兔心肌细胞凋亡的影响。方法:采用结扎/松解兔左冠状动脉前降支的方法制作RA模型兔。40只健康家兔随机分为假手术组、模型组、针刺组、胺碘酮组,针刺组施以调心安神针刺法(取穴:灵台、神道、双侧内关、百会)。实验完毕后取兔缺血区中央部位心内膜心肌,免疫组织化学染色技术及计算机图像处理系统分析Bcl-2、Bax的表达水平,Western印迹法检测活性Caspase-3的表达水平。结果:针刺组、胺碘酮组Bcl-2的表达均较模型组明显升高(P<0.01),Bax、活性Caspase-3的表达均较模型组降低(P<0.01),胺碘酮组Bcl-2、活性Caspase-3的表达较针刺组变化更为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:调心安神针法预处理对RA模型兔心肌细胞的凋亡有抑制作用。     

桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究＊

目的 探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护机制。方法 35只雄性SPF级SD大鼠，随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、桔梗皂苷D给药组和地塞米松组，每组7只。除假手术组和桔梗皂苷D对照组外，其余各组采用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型。造模24 h后，牺牲大鼠并称体重及两肺重量，计算肺指数；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数（Apoptosis Index，AI）；透射电镜下观察大鼠肺组织超微结构的改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3），多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）蛋白及活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3），Cleaved PARP1的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠肺指数显著升高（P < 0.01），肺组织细胞凋亡指数（AI）显著升高（P < 0.01），肺组织Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著下调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著升高（P < 0.01）；透射电镜下可见到凋亡小体，影响并改变了肺组织细胞超微结构；与模型组比较，桔梗皂苷D给药组及地塞米松组肺指数明显降低（P < 0.01），肺组织AI明显降低（P < 0.01），肺组织中Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著上调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著降低（P < 0.01）；透射电镜下，桔梗皂苷D给药组和地塞米松组肺组织细胞超微结构状态较好。结论 桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用，其作用机制与抑制Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路，减轻肺组织细胞凋亡密切相关。