天龙喘咳灵对转化生长因子-β1诱导的气道α-平滑肌肌动蛋白的影响及信号转导机制

目的观察中药天龙喘咳灵对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的气道上皮下成纤维细胞(HPBFs)α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其可能的信号转导机制。方法2005—2006年,在广州市红十字会医院呼吸科于原代培养的HPBFs中,分别加入天龙喘咳灵合剂、天龙喘咳灵主要组分(淡附子、青天葵和法夏)的单味药预孵育2h,再加入TGF-β1(10μg/L)共孵育;刺激10min和30min,分别提取细胞总蛋白,Western免疫印迹方法检测磷酸化p38MAPK、ERK1/2和smad2的蛋白表达;刺激20h和72h,提取细胞总RNA及蛋白,检测α-SMA蛋白及mRNA的表达。结果天龙喘咳灵组和淡附子组α-SMA蛋白和mRNA的表达均较单纯TGF-β1刺激组减少(P<0·05),天龙喘咳灵组对α-SMA蛋白和mRNA表达量的抑制程度高于淡附子组;天龙喘咳灵组和淡附子组磷酸化ERK1/2的表达明显低于单纯TGF-β1刺激组,而青天葵和法夏两组与单纯TGF-β1组相似。各药物处理组对TGF-β1诱导的磷酸化p38和smad2的表达无明显影响。结论天龙喘咳灵抑制HPBFs的α-SMA表达,可能是通过降低TGF-β1诱导的ERK1/2磷酸化水平实现的,并且其中的组分淡附子可能起主要作用。     

HMGB1/RAGE信号通路调控铜绿假单胞菌感染的支气管扩张症调节性T细胞免疫功能的作用机制研究

目的 探讨HMGB1/RAGE信号通路对体外Treg细胞增殖和炎性调节在支气管扩张症中的作用。方法 分离培养人外周血Treg细胞，分别将si-HMGB1、si-RAG1、si-con转染至支气管扩张症患者外周血提取的Treg细胞，分别记作si-HMGB1组、si-RAG1组、si-con组，同时将人外周血Treg细胞进行炎性诱导。RT-qPCR与Western blotting分别检测HMGB1 mRNA、RAGE mRNA及蛋白表达量及ELISA检测各组血清中IL-10、TGF-β炎性因子含量；免疫荧光观察RAGE、HMGB1在Treg细胞的表达情况；流式细胞术分析各组细胞的增殖情况。结果 与正常对照组相比，在支气管扩张症组外周血Treg细胞HMGB1 mRNA、RAGE mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-con组相比，si-HMGB1组、si-RAGE组人外周血Treg细胞增殖数量显著增多(P<0.05);相较于si-con组，si-HMGB1组、si-RAGE组人外周血Treg细胞血清中IL-10、TGF-β炎性因子含量增加(P<0.05)...     

高糖对大鼠腹膜间皮细胞HMGB-1/RAGE信号通路表达的影响

目的探讨在体外高糖对大鼠腹膜间皮细胞(PMC)高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)、糖基化终产物受体(RAGE)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法胰蛋白酶消化法用于PMC的原代培养和传代,经鉴定第三代细胞用于实验并随机分组:正常对照组;不同浓度葡萄糖组(1.5%、2.5%、4.25%);不同时间组:2.5%LPS作用于PMC 24、36、48 h。用RT-PCR法检测RAGE mRNA的表达,Western印迹法检测RAGE蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养上清液中HMGB-1和TGF-β1的蛋白表达。结果 1高浓度葡萄糖能显著上调PMC RAGE mRNA和蛋白的表达(P0.05),且呈时间浓度依赖,RAGE表达增加;2高浓度葡萄糖刺激PMC HMGB-1、TGF-β1蛋白表达显著高于正常对照组(P0.05),且随刺激时间延长,均表达增加,与RAGE表达趋势一致;3HMGB-1及其配体RAGE可能参与诱导PMC TGF-β1的表达。结论 HMGB-1/RAGE信号通路参与了高糖所致腹膜损伤的病理生理过程,并可能通过上调TGF-β1参与腹膜纤维化的发生。     

气道上皮损伤后支气管上皮-肌纤维母细胞转分化及转化生长因子β1的调节作用

目的 观察支气管上皮细胞损伤后,细胞表型、超微结构、内皮素1(endothelin-1,ET-1)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的动态变化以及TGF-β1 对支气管上皮-肌纤维母细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调节.方法 以多聚左旋精氨酸(PA)诱导支气管上皮16HBE-14o细胞损伤,观察损伤后细胞培养液ET-1、TOF-β1及乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞表型及超微结构的动态改变,ET-1对上皮细胞TGF-β1 分泌的调节以及TGF-β1 对EMT的促进作用.结果 PA造成16HBE-14o损伤,损伤后LDH、ET-1、TGF-β1 释放增多.上皮修复过程中,一过性出现少量肌动蛋白阳性的细长梭形细胞,胞浆内同时可见肌微丝及丰富的粗面内质网,梭形细胞周围可见新分泌的胶原纤维,发生EMT.50 μg/L TGF-β1 能促进损伤上皮细胞的EMT,TGF-β1中和抗体能完全阻断EMT.ET-1能刺激上皮细胞分泌TGF-β1,且为ET-1 A受体阻断剂-bq123完全阻断.结论 支气管上皮细胞损伤后ET-1、TGF-β1 表达上调,出现上皮-间充质转分化.TGF-β1 能通过自分泌、旁分泌作用促进EMT.ET-1可能通过上调上皮细胞TGF-β1 的表达参与EMT的调节.气道上皮损伤后上皮细胞的活化、EMT可能在支气管哮喘气道重塑中发挥重要作用.     

TGF-β1诱导人胎肺成纤维细胞分泌血管内皮生长因子以及布地奈德的调控作用

目的 应用转化生长因子(TGF-β1)刺激人胎肺成纤维细胞(HFL-1)检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并观察布地奈德(Budesonide)对HFL-1分泌VEGF的干预作用.方法 采用体外培养细胞法,实验组加入不同浓度TGF-β1刺激,孵育72 h后收集细胞培养上清液,经EIA法检测VEGF含量;同时在0.5 ng/ml TGF-β1刺激下,观察应用不同浓度布地奈德对VEGF的调控.结果 低浓度TGF-β1上调VEGF的表达,但与对照组比较无显著性差异;随着TGF-β1刺激浓度加大,VEGF含量也逐渐增加,当TGF-β1浓度为0.5 ng/ml时,VEGF相对含量与空白对照组相比具有明显差异(P<0.01).10-7 mol/L布地奈德不仅能明显阻断内源性VEGF的表达,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),还可明显下调TGF-β1诱导的VEGF分泌增加效应,与相同浓度单独TGF-β1刺激组比较,VEGF含量明显下降,二者比较具有统计学意义(P<0.01).结论 TGF-β1能够诱导HFL-1增殖及VEGF分泌增加,具有浓度依赖效应.提示TGF-β1诱导VEGF分泌增加可能是纤维化形成的重要原因之一;抑制VEGF生成及血管新生可能是布地奈德发挥抗纤维化作用的重要分子机制.     

高迁移率族蛋白1及其受体对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞因子水平的影响

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)及其受体对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及细胞因子水平的影响。方法体外传代培养大鼠MSC,以25.0、50.0及100.0μg/L HMGB1分别作用细胞24 h、48 h、72 h后,MTT检测MSC的增殖情况。25.0、50.0及100.0μg/L HMGB1作用MSC 48 h后,ELISA测定细胞培养液中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)水平,Western blot检测MSC中HMGB1的晚期糖基化终产物受体(RAGE)和Toll样受体4(TLR4)的表达情况。确定HMGB1对MSC作用的最佳药物浓度后,siRNA分别抑制RAGE受体和TLR4受体,观察HMGB1对MSC增殖及分泌细胞因子水平的影响。结果 25.0μg/L HMGB1作用MSC 24 h、48 h、72 h后均能有效促细胞增殖(P0.05);25.0、50.0μg/L HMGB1作用细胞48 h后,细胞释放VEGF、b FGF明显增多,RAGE及TLR4表达也增高(P0.05)。特异siRNA转染靶向干扰MSC中TLR4的表达后,促细胞增殖及分泌VEGF、b FGF作用受到抑制(P0.05),而siRNA干扰RAGE表达对HMGB1的细胞效应无明显影响。结论 HMGB1可通过结合其受体TLR4促进MSC增殖以及VEGF、b FGF分泌。     

芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响

目的 探讨芍药苷（paeoniflorin,PAE）对血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）刺激小鼠腹腔巨噬细胞（PMs）产生转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。 方法 研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24 h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10 mg/L SEA 5 ml,培养12 h,再分别加入不同浓度的PAE（0、7.5、15、30、60及120 mg/L）,继续培养12 h和24 h。RT-PCR与蛋白质印迹（Western blotting）分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。 结果 10 mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1（235.86±3.43 ng/L）,PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1 mRNA的表达（r=-0.827,P＜0.01）和TGF-β1蛋白的表达（r=-0.952,P＜0.01）。结论 PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。     

转化生长因子β1在吸烟诱发地鼠慢性支气管炎与肺气肿肺组织中的表达

目的探讨吸烟时转化生长因子β1 (TGF-β1) 在吸烟引起的慢性支气管炎与肺气肿中的作用.方法建立吸烟时引起的慢性支气管炎与肺气肿的动物模型,20只雄性叙利亚金黄地鼠分为正常组和吸烟组,每组各10只;体外培养支气管上皮细胞并经香烟烟雾提取物(CSE)刺激.观察肺内和支气管上皮细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达情况.结果吸烟组于3个月时出现慢性支气管炎和肺气肿的病理改变,免疫组化结果显示,吸烟组TGF-β1的阳性强度(2.75±0.23)与正常组(0.84±0.39)比较差异有显著性(P=0.001).两组的TGF-β1 mRNA吸光度分别为1.28和0.98.支气管上皮在CSE刺激后,细胞形态发生明显变化,TGF-β1的表达增强,与单纯培养组比较差异有显著性(2.67±0.16 vs 0.85±0.54,P=0.001).结论烟雾刺激造成气道上皮的损伤,产生大量的TGF-β1,该变化可能是吸烟引起慢性支气管炎和肺气肿的机制之一.     

miR-200c改善转化生长因子－β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化的机制

目的探讨miR-200c是否通过调节自噬缓解转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化。方法不同浓度(0、5、10、15、20、30 ng/ml)TGF-β1刺激HK2细胞48 h后倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8检测细胞增殖情况。选择致HK2细胞增殖最快的TGF-β1浓度(c)进行转染实验:细胞转染40 nmol/L无意义序列RNA(NC组);细胞转染40 nmol/L无意义序列RNA后c浓度TGF-β1处理细胞48 h(NC+T组);细胞转染40 nmol/L miR-200c mimics(M组);细胞转染40 nmol/L miR-200c mimics后c浓度TGF-β1处理细胞48 h(M+T组)。qRT-PCR检测miR-200c转染效率。Western blotting检测4组细胞Smad通路蛋白Smad2和Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cad)表达量,以及自噬相关蛋白LC3(包括LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值)和P62。结果 10 ng/ml的TGF-β1刺激HK2细胞48 h后增殖最快,镜下细胞形态由正常的卵圆形铺路石状变为长梭形,纤维化形态最明显。qRT-PCR显示M组miR-200c表达量是NC组(212.42±12.25)倍(t=24.41,P=0.000),说明转染有效。Western blotting结果显示,与NC组比较,NC+T组加入10 ng/ml TGF-β1的HK2细胞Smad2、Smad3和α-SMA表达量增加,E-cad蛋白表达量降低(P0.05)。与NC+T组比较,M+T组Smad2、Smad3和α-SMA表达量减少,E-cad表达量增加(P0.05),提示miR-200c表达增加抑制了纤维化。进一步发现,M组较NC组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平增加,P62表达水平降低,提示自噬活性增加;M+T组较NC+T组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平增加,P62表达水平降低,提示miR-200c表达升高缓解了纤维化程度。结论 miR-200c可能通过激活细胞自噬缓解TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化。     

KIM-1在TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用

目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1 siRNA,给予TGF-β1刺激后,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mR-NA和蛋白水平。Western印迹法检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)、1型胶原酶(Col1)、3型胶原酶(Col3)的表达。结果对照组+TGF-β1细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中KIM-1表达水平显著低于对照组+TGF-β1,差异具有统计学意义(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,α-SMA表达水平降低,纤维化因子CTGF、Col1、Col3的表达也降低,与对照组+TGF-β1比较差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论敲低KIM-1可以减少TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达,抑制肾小管上皮细胞EMT。     

NADPH氧化酶4对心脏纤维母细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:探讨NADPH氧化酶4(NOX4)在小鼠心脏纤维母细胞转化为心肌纤维母细胞中的作用及其可能机制。方法:分离并培养原代C57BL/6小鼠心脏纤维母细胞,分为空白对照组、TGF-β1组(10μg/L TGFβ-1作用24 h)、TGFβ-1+DPI组(10μmol/L DPI预处理2 h后,TGFβ-1作用24 h)和TGFβ-1+siRNA组(NOX4siRNA预处理6 h后,TGFβ-1作用24 h)。α平滑肌肌动蛋白(SMα-actin)和NOX4的mRNA含量采用Real-time PCR检测。SMα-actin蛋白水平采用western blotting检测。H2O2含量采用Amplex Red法检测。结果:NOX4 siRNA能显著抑制细胞NOX4 mRNA的表达。TGFβ-1组细胞内NOX4、SMα-actin mRNA表达、SMα-actin蛋白含量和H2O2水平均高于空白对照组;而DPI和siRNA则明显抑制了TGF-β1诱导的NOX4和SMα-actin表达上调,同时减少了H2O2的产生。结论:NOX4及其催化的ROS部分介导了TGFβ-1诱导的心脏纤维母细胞向心肌纤维母细胞的分化。     

2型糖尿病合并结肠癌老年患者肿瘤组织中晚期糖基化终产物受体及转化生长因子-β1的表达及临床意义

目的探讨2型糖尿病合并结肠癌老年患者肿瘤组织中晚期糖基化终产物受体(RAGE)及转化生长因子(TGF)-β1的表达及临床意义。方法 120例结肠肿瘤老年患者,分为糖尿病合并结肠癌组、结肠癌组及结肠腺瘤组,每组40例。采用免疫组化法检测结肠病理组织标本中RAGE及TGF-β1表达水平,并对患者至少随访2年,分析RAGE及TGF-β1表达与临床参数的相关性及对生存期的影响。结果 RAGE及TGF-β1表达在三组中差异具有统计学意义(P0.05),糖尿病合并结肠癌组RAGE及TGF-β1阳性率与结肠癌组及结肠腺瘤组相比差异均具有统计学意义(P0.05)。RAGE及TGF-β1的表达在80例结肠癌组织标本中存在正相关关系(r=0.341,P=0.002)。RAGE、TGF-β1表达与结肠癌分化程度低,淋巴结转移阳性,临床分期(Duke分期)C期以上,细胞免疫功能低下(外周血T细胞总数及CD4~+T细胞减少),患者发生远处转移及生存期较短有关(P0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明RAGE及TGF-β1表达阳性率越高,患者中位生存期越短(P0.05)。结论 RAGE及TGF-β1在结肠癌组织中的表达与患糖尿病有关,且能够促进结肠癌的发生、发展及转移,可能是治疗结肠癌的重要靶点。     

细胞间黏附分子-1在红霉素抗炎机制中的作用

目的 从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制.方法 体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),将细胞随机分为8组,先加入EM干预,后加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激.分组如下:①空白对照组;②TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;③EM(0.3 μg/ml,24 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;④EM(3 μg/ml,24 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑤EM(30 μg/ml,24 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑥EM(0.3 μg/ml,48 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑦EM(3 μg/ml,48 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑧EM(30 μg/ml,48 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h).然后收集各组细胞分别提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1) mRNA的表达.因ICAM-1 RT-PCR产物分子大小约为700 bp,与原设计产物分子大小490 bp不相符,进一步作基因克隆测序了解基因之间是否具有同源性.结果 ICAM-1的RT-PCR产物即为目的 基因:ICAM-1基因.TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE)后,细胞ICAM-1mRNA表达增高.先加入不同浓度及作用时间的EM,后加入TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE),各组细胞ICAM-1mRNA表达均降低,且提示有浓度与时间依赖性.结论 TNF-α能激活人支气管上皮细胞使其ICAM-1基因表达增高,促进炎症的发生发展.EM能抑制人支气管上皮细胞ICAM-1基因表达,可能是EM的抗炎作用机制之一.     

二氧化硅对人肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的探讨二氧化硅（SiO2）参与矽肺纤维化形成的机制。方法收集矽肺患者肺泡灌洗液中的巨噬细胞（AM）,在体外以SiO2（50μg/ml）和不加血清的DMEM培养2、6、12、18、24、36 h,应用免疫细胞化学法检测AM中转化生长因子-β1（TGF-β1）水平;然后取培养18 h的AM上清与人肺成纤维细胞（FB）共同孵育6、12、18、24、36、48 h,同法检测FB中TGF-β1水平。结果经SiO2刺激的矽肺患者AM中TGF-β1表达增加（P〈0.05）;AM上清也可使FB中TGF-β1表达上调,经SiO2刺激的AM上清作用更明显（P〈0.01）。结论SiO2可促进矽肺纤维化形成,其机制可能为上调AM和FB中TGF-β表达。     

Prx-1基因沉默对 TGF-β1诱导肺成纤维细胞增殖、ROS 水平、p-AKT 蛋白表达的影响

目的观察硫氧还原蛋白过氧化物酶1(Prx-1)基因沉默对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺成纤维细胞增殖、活性氧簇(ROS)水平及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达的影响。方法体外培养肺成纤维细胞MRC-5,并分为对照组、TGF-β1组、阴性转染组和实验组。阴性转染组和实验组分别通过脂质体Lipofectamine2000转染阴性对照siRNA及设计好的3个Prx-1 siRNA(Prx-1 siRNA-209、Prx-1 siRNA-289、Prx-1 siRNA-453),培养48 h,real-time PCR法检测Prx-1 mRNA,选取转染Prx-1 siRNA-453的细胞用于后续实验。除对照组外,其余三组给予TGF-β1(5μg/L)刺激。TGF-β1刺激24 h后,MTT实验观察细胞增殖情况,2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)实验检测ROS水平;TGF-β1刺激45min后,Western blotting法检测p-AKT蛋白。结果对照组、TGF-β1组、阴性转染组、实验组OD值分别为0.56±0.07、0.81±0.10、0.88±0.18、1.16±0.18,ROS水平分别为2 922±291、4 348±484、4 660±375、5 415±436;实验组细胞增殖情况及ROS水平与其余三组相比,P均<0.01;TGF-β1组、阴性转染组与对照组相比,P均<0.01。对照组、TGF-β1组、阴性转染组、实验组细胞中p-AKT蛋白相对表达量分别为0.45±0.05、0.60±0.07、0.57±0.07、0.77±0.09;实验组与其余三组相比,P均<0.01;TGF-β1组与对照组相比,P<0.01。结论Prx-1基因沉默可增强TGF-β1对肺成纤维细胞的增殖诱导作用,上调细胞内ROS水平和p-AKT蛋白表达。     

转化生长因子-β1对大鼠脑膜间皮细胞结缔组织因子表达的影响

目的 观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠软脑膜间皮细胞（RLMCs）结缔组织生长因子（ CTCF）表达的影响.方法 体外培养RLMCs,并将其分为4组：（1）0组（正常对照组）：用无血清培养基（FSM）培养细胞;（2）1组：用含TGF-β11 ng/ml培养细胞;（3）2组：用含TGF-β1 2 ng/ml培养细胞;（4）3组：用含TGF-β14 ng/ml培养细胞;各组分别在TCF-β1刺激6、12及24 b后,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定CTCF mRNA水平;蛋白免疫印迹（Westem blot）测定CTCF蛋白表达.数据以平均值±标准差（-χ±s）表示,各个浓度点组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）,两两比较采用最小显著法（LSD）检验,以P〈0.05有统计学意义.结果 在6、12及24 h分别以TCF-β1 1ng/mL、2 ng/mL、4 ng/mL处理,CTGF mRNA表达水平与对照组比较,差异有显著性（F6h=46.549、F12h= 287.098、F24h=109.202,P均〈0.001）,呈剂量依赖性,以TGF-β1处理12 h组CTGF mRNA表达差异明显.western blotting：正常对照组RLMCs细胞和不同浓度的TGF-β1刺激后均表达CTGF蛋白,在TGF-β1刺激6、12及24 h后,各组均随着浓度的增加而增加,差异有显著性（F6h= 52.988、F12h= 95.331、F24h=157.107,P均〈0.001）,呈剂量依赖性,以TGF-β1处理6h组CTGF蛋白表达差异明显.结论 TGF-β1能诱导RLMCs中CTGF通路激活.TGF-β1刺激RLMCs中CTGF mRNA和蛋白的表达,而且随浓度增加而显著.CTGF可能作为神经系统疾病中抑制脑膜纤维化的靶点而进一步研究.     

高糖对心肌细胞转化生长因子β1分泌的影响及缬沙坦的干预作用

目的观察高糖对心肌细胞分泌心肌组织转化生长因子(TGF-β1)的影响和缬沙坦的干预作用.方法在乳鼠心肌细胞培养液中加入高糖和不同浓度缬沙坦,用ELISA法检测培养液中TGF-β1的含量.结果高糖刺激TGF-β1分泌增加,加入缬沙坦后含量减少.结论高糖可能通过血管紧张素Ⅱ-1型受体刺激心肌细胞TGF-β1分泌增加,缬沙坦可拮抗此作用.     

大黄酸抑制TGF—β1诱导的肾小管上皮细胞肥大及细胞外基质产生

目的观察大黄酸对TGF-β1诱导的近端肾小管上皮细胞细胞肥大及细胞外基质(ECM)的影响。方法在体外以TGF-β1（2μg／L）刺激LLC-PK1细胞,诱导细胞肥大和ECM合成增加。与此同时,以不同浓度的大黄酸处理细胞,检测细胞体积,蛋白质含量以及3H-亮氨酸掺入以观察细胞肥大的变化;检测细胞孵育24h后上清的纤维连接蛋白(FN)含量,3H-脯氨酸掺入以及细胞胶原Ⅳ及FNmRNA的表达以观察大黄酸对ECM的影响。结果TGF-β1（2μg／L）刺激可以导致LLC-PK1细胞出现细胞肥大,表现为细胞体积,细胞内蛋白量及3H-亮氨酸掺入量明显增加。大黄酸处理后细胞体积及细胞内蛋白量明显降低。TGF-β1也明显增加LLC-PK1细胞3H-脯氨酸掺入量、培养上清中FN含量、以及细胞内胶原Ⅳ和FNmRNA的表达。大黄酸则抑制上述ECM合成的增加,明显降低细胞内胶原Ⅳ,FNmRNA表达水平。结论大黄酸可以逆转TGF-β1诱导的近端肾小管上皮细胞肥大,抑制TGF-β1刺激的ECM合成。这可能是大黄酸预防或改善糖尿病肾脏病变,延缓糖尿病肾病进展的作用机制之一。     

心钠素对大鼠肝星状细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对大鼠肝星状细胞(HSC T6)活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 待HSC T6细胞贴壁后,在细胞培养瓶中加入ANP 10μmol/L培养1h,采用免疫荧光法、利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4和pSmad2/3蛋白细胞内转位.将HSC T6细胞分成空白未活化组、空白活化组、ANP1 μmoL/L组、ANP 10 μmol/L组,继续培养1h,分别提取细胞质蛋白及核蛋白,以Western blotting法检测Smad4蛋白表达水平变化.ANP作用24 h,收集细胞培养液,以ELISA法检测Ⅰ型胶原、MMP-13分泌量.结果 空白未活化组、ANP 10 μmol/L组Smad4、pSmad2/3在胞质内表达,空白活化组在核内表达;ANP1、10 μmol/L组细胞质内Smad4蛋白表达量较空白活化组增多(P均＜0.05),并随ANP浓度的增大表达增强(P＜0.05),而细胞核内Smad4蛋白表达量变化趋势与细胞质蛋白相反(P均＜0.05).ANP作用HSC T6 24 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原的分泌量较空白对照组减少(P＜0.05),MMP-13分泌量无明显变化.结论 ANP可在一定程度上阻断大鼠HSC T6细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的传导,减少了Ⅰ型胶原的分泌量,起到了抗肝纤维化的作用.     

尿毒症患者不同分子质量血清对肾小管上皮细胞TGF-β1的表达及其意义

目的探讨尿毒症患者血清对人肾小管上皮细胞株(HK-2)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达和蛋白分泌的影响.方法收集广东医学院附属医院2002-02～2003-03在无菌条件下的40份尿毒症病人血清和20名正常人血清,应用超滤离心装置将尿毒症患者血清分离成分子质量>10 000 u,5 000～10 000 u,<5 000 u 3个组分.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HK-2细胞培养上清液TGF-β1蛋白分泌量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TGF-β1 mRNA表达.结果不同浓度尿毒血清组TGF-β1基因表达和蛋白分泌量均较正常对照组增高,以10%尿毒血清组最高;分子质量>10 000 u的组分TGF-β1基因表达和蛋白分泌量最高,分子质量5 000～10 000 u的组分TGF-β1基因表达轻度增高;分子质量<5 000 u的组分TGF-β1基因表达和蛋白分泌与正常对照组相比差异无显著性.结论尿毒症毒素通过影响HK-2细胞TGF-β1基因表达和蛋白分泌从而在人肾小管-间质纤维化中起重要作用,而以分子质量大于10 000 u的尿毒症毒素起主要作用.