牛蒡子苷元抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨牛蒡子苷元(ATG)抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响。方法通过脑内注射Ⅲ型肺炎链球菌建立脑膜炎大鼠模型,并随机分为模型组、ATG低(ATG-L)、中(ATG-M)、高(ATG-H)剂量组以及ATG-H+重组高迁移率组蛋白B1(rHMGB1)组,另取正常大鼠为对照组,10只/组。治疗结束后,对各组大鼠进行神经系统评分;分离大鼠脑组织,检测其病理变化、含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及神经元细胞凋亡,同时检测HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05);ATG-L组、ATG-M组、ATG-H组小鼠神经系统评分均较模型组显著增加(均P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TUNEL荧光染色阳性细胞数量、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65均较对照组显著下降(均P<0.05);ATG-H+rHMGB1组较ATG-H组神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05)。结论ATG可抑制肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

黄芪多糖对大鼠缺氧/复氧诱导的心肌细胞自噬及凋亡抑制作用的机制探讨

目的：探究黄芪多糖（APS）通过调控高迁移率族蛋白1/Toll样受体4/核转录因子-κB(HMGB1/TLR4/NF-κB)信号通路对大鼠缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞自噬及凋亡的抑制作用。方法：建立H9C2心肌细胞H/R损伤模型并分为4组：对照组、H/R组、APS组和HMGB1抑制剂组。CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力;酶联免疫吸附试验检测细胞肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6含量;透射电镜观察细胞自噬小体的形成;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（AnnexinV-FITC/PI）双染法检测细胞凋亡;实时定量PCR检测细胞HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测细胞HMGB1、TLR4、NF-κB p65、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、P62、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(MAP1LC3,缩写为LC3)-Ⅱ蛋白表达水平。结果：与对照组相比,H/R组细胞增殖能力明显减弱,凋亡及自噬水平明显增加,细胞内可见大量自...     

红花黄素对脊髓损伤大鼠的保护作用

目的探究红花黄素(SY)对脊髓损伤(SCI)的保护作用及其作用机制。方法将SCI模型大鼠分为模型(Model)组、重组高迁移率组蛋白(HMG)B1处理组(HMGB1组,8μg/kg)、SY干预组(SY组,40 mg/kg)、HMGB1+SY组(8μg/kg HMGB1+40 mg/kg SY),另设假手术(Control组),各组均12只,各组连续给药28 d。行为学运动(BBB)评分法评定运动行为;获取脊髓组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理形态学变化;免疫印迹法(WB)检测脊髓组织中HMG B1、Toll样受体(TLR)4、核转录因子(NF)-κB蛋白表达;制备脊髓组织匀浆液,采用酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHP)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;Tunel染色观察脊髓组织中神经元细胞凋亡情况;Western印迹法检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Cleaved-caspase3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与Control组相比,Model组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Model组相比,HMGB1组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);SY组、HMGB1+SY组与Model组及HMGB1组比较BBB评分显著升高,SOD、GSHP、CAT水平显著升高,MDA水平显著降低,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低,脊髓组织神经细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论 SY可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,缓解SCI后氧化应激水平,减低脊髓组织神经元细胞凋亡,缓解脊髓组织、运动功能损伤。     

蓝萼甲素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对克雷伯菌肺炎大鼠炎性损伤的影响北大核心CSCD

目的研究蓝萼甲素(GLA)对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF-κB)信号通路的调节作用,探讨其减轻克雷伯菌肺炎大鼠炎性损伤的作用机制。方法将SD大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(M组)、GLA低剂量组(10 mg/kg组)、GLA中剂量组(20 mg/kg组)、GLA高剂量组(40 mg/kg组)和左氧氟沙星组(10 mg/kg),每组10只。通过将克雷伯菌注入气管建立大鼠肺炎模型。造模成功第2 d开始给药,连续7 d。将小鼠处死,取左肺组织称重,计算干重/湿重;HE、TUNEL染色观察肺组织病理变化及细胞凋亡情况;ELISA检测血清中白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western blot检测肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果与NC组相比,M组小鼠肺组织出现肺泡塌陷、肺泡壁厚度增加等病理现象,W/D值、肺细胞凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量及HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均显著上升(均P<0.05);与M组相比,GLA低、中、高剂量组和左氧氟沙星组肺组织损伤减轻,W/D值、肺细胞凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平,IL-6、TNF-α、IL-1β含量及HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均显著下降(均P<0.05)。结论GLA可减轻机体炎性损伤,改善克雷伯菌感染引发的肺炎病情,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

HMGB1 siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制。方法将体外培养的人胃黏膜上皮GES-1细胞随机分为对照组(正常培养)、A/R组(缺氧复氧培养)、A/R+si NC组(转染Control siRNA后,缺氧复氧培养)和A/R+si HMGB1组(转染HMGB1 siRNA后,缺氧复氧培养),MTT法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中HMGB1、NF-κB p65和IκB-α、Bcl-2和Bax蛋白表达,ELISA法检测LDH含量。结果 A/R处理能够引起GES-1细胞存活率降低,细胞凋亡率和LDH含量升高,Bcl-2和IκB-α蛋白表达下降,HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达上调;HMGB1siRNA则能够抑制A/R的作用,升高GES-1细胞存活率,降低细胞凋亡率和LDH含量,上调Bcl-2和IκB-α蛋白表达,下调HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达。结论缺氧复氧可引起胃黏膜上皮GES-1细胞中HMGB1表达升高,下调HMGB1表达可明显抑制缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

右美托咪定联合Tol样受体4抑制剂对缺氧复氧心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制

目的探讨右美托咪定(DEX)联合Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对缺氧复氧(H/R)心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制。方法心肌细胞H9C2分为对照(Con)组、H/R组(H/R损伤)、DEX组(1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤)、TAK-242组(30μmol/L TAK-242,再行H/R损伤)和DEX+TAK-242组(30μmol/L TAK-242及1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤处理)。各组细胞复氧培养6 h后,采用MTT法、流式细胞仪、试剂盒、酶联免疫吸附法检测细胞增殖、凋亡、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)、TLR4和核因子B p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果五组细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平、IL-1β、TNF-α含量比较差异均有统计学意义(F=316.938、330.004、839.933、169.750、378.365、476.535、298.527、99.219、293.498,P<0.05)。与Con组相比,H/R组细胞的凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平、细胞上清液中IL-1β和TNF-α含量均明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(均P<0.05)。与H/R组相比,DEX组、TAK-242组和DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax蛋白、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白、IL-1β、TNF-α的表达水平均明显降低,Bcl-2蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。与DEX组、TAK-242组相比,DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达、IL-1β、TNF-α表达水平更低,Bcl-2蛋白的表达更高(均P<0.05)。结论DEX和TAK-242联合可协同抑制H/R引起的心肌细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与协同抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

SIRT1/TLR4/NF-κB在丹参素治疗大鼠心肌梗死的保护作用

目的 探讨SIRT1/TLR4/NF-κB在丹参素治疗大鼠心肌梗死的保护作用。方法 构建SD大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为:对照组,模型组、丹参素组(2 mg/kg)三组,每组15只。HE染色法观察心肌组织病理学改变;TTC双染法测定心肌梗死面积;免疫组织化学法检测SIRT1表达;采用Western blot法检测SIRT1、TLR4、NF-κB、Bcl-2、Caspase3蛋白的表达;ELISA法检测心肌组织IL-6和TNF-α表达。结果 丹参素组大鼠心肌凋亡数量、心肌梗死面积比模型组显著降低(P0.05)。丹参素组SIRT1表达平均光密度显著升高(P0.05)。丹参素组TLR4、NF-κB、Caspase3蛋白表达明显下降,SIRT1、Bcl-2蛋白含量表达比模型组显著上升(P0.05);丹参素组心肌组织IL-6和TNF-α表达显著下降(P0.05)。结论 丹参素可通过促进SIRT1表达,抑制TLR4/NF-κB信号通路来改善大鼠心肌梗死,对心肌起到营养和保护的作用。     

大蒜素通过AKT/NF-κB通路诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索大蒜素通过丝苏氨酸激酶/核转录因子-κB(AKT/NF-κB)通路对大肠癌细胞凋亡的影响。方法将大肠癌Lovo细胞分为对照组、大蒜素低、中、高剂量组(大蒜素,20 mg/L、40 mg/L和80 mg/L)和阳性对照组(顺铂,10μmol/L)。MTT法检测大蒜素对大肠癌细胞的半抑制浓度(IC50),检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡; Western blot检测Akt/NF-κB信号通路、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、BCL2相关X蛋白(Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)的表达;将培养细胞分为sh-NC组(空白质粒)、sh-Akt组(质粒转染)、大蒜素组+sh-NC组(终浓度为20 mg/L)、大蒜素组+sh-Akt组(终浓度为20 mg/L),检测转染后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白NF-κB p65、p-NF-κB p65、cleaved Caspase-3的表达。结果大蒜素对大肠癌细胞的抑制作用呈药物浓度依赖性,IC50为(40. 27±1. 23)mg/L;与对照组相比,大蒜素低、中、高剂量组和阳性对照组的细胞抑制率和凋亡率均明显升高(P 0. 05),有丝分裂S期细胞和G2/M期细胞所占比例明显增加(P 0. 05),Ki-67、PCNA、Bcl-2/Bax、p-Akt/Akt和p-NF-κB p65/NF-κB p65的表达明显下降(P 0. 05),cleaved Caspase-3的表达明显升高(P 0. 05),且随着大蒜素剂量的增加,其作用逐渐增强(P 0. 05);与sh-NC组相比,sh-Akt组和大蒜素+sh-NC组细胞抑制率和凋亡率明显升高(P 0. 05),p-NF-κB p65/NF-κB p65表达明显下降(P 0. 05),cleaved Caspase-3表达明显升高(P 0. 05);与sh-Akt组相比,大蒜素+sh-Akt组细胞抑制率和凋亡率明显升高(P 0. 05),p-NF-κB p65/NF-κB p65表达明显下降(P 0. 05),cleaved Caspase-3表达明显升高(P 0. 05)。结论大蒜素可能通过抑制Akt/NF-кB信号通路,抑制大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

积雪草苷通过下调TLR9/MyD88/NF-κB p65减轻大鼠脑动脉瘤壁的炎症反应和瘤体大小

目的研究积雪草苷调控Toll样受体9(TLR9)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB p65(NF-κB p65)对脑动脉瘤(CA)大鼠动脉瘤壁炎症反应的影响。方法建立CA大鼠模型,随机分为模型组、积雪草苷(50 mg/kg)组、CpG-ODN(TLR9激活剂,4 mg/kg)组、积雪草苷(50 mg/kg)+CpG-ODN(4 mg/kg)组,每组12只,另取12只大鼠设为假手术组。分组处理后,检测大鼠脑血管壁厚度和动脉瘤体积,苏木精-伊红(HE)染色检测脑血管组织形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠脑血管组织和血清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测大鼠脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠血管壁明显变厚,脑动脉血管隆起,呈瘤样改变等CA症状,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平明显升高(P0.05)。与模型组相比,积雪草苷组大鼠CA症状变轻,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平降低(P0.05);而CpG-ODN组大鼠CA症状加重,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平升高(P0.05)。使用积雪草苷和CpG-ODN联合处理,较积雪草苷组大鼠CA症状加重,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平升高(P0.05)。结论积雪草苷可通过下调TLR9/MyD88/NF-κB p65通路蛋白表达减轻CA大鼠脑动脉血管组织的炎症,减小瘤体。     

Faecalibacterium prausnitzii对实验性结肠炎中TLR4/NF-κB信号通路的影响

背景:Faecalibacterium prausnitzii(Fp)是一种肠道共生菌,其数量减少是炎症性肠病(IBD)患者肠道菌群紊乱的重要特征之一。既往研究显示Fp上清液在实验性结肠炎中具有明显的抗炎效应。目的:探讨Fp上清液在实验性结肠炎中的抗炎效应是否与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。方法:24只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、结肠炎模型组和Fp上清治疗组。通过予小鼠连续5 d饮用3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立急性结肠炎模型,观察小鼠体质量和结肠组织病理学变化,分别以real-time PCR和免疫组化法检测结肠组织TLR4 mRNA和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)表达,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)水平。结果:与正常对照组相比,结肠炎模型组小鼠体质量明显下降,结肠缩短,结肠组织病理学评分、TLR4 mRNA和p-NF-κB p65表达以及血清TNF-α、IL-6、COX-2水平均显著升高(P0.05)。Fp上清治疗组上述指标均较结肠炎模型组显著改善(P0.05),其中血清炎症因子水平与正常对照组相比无明显差异(P0.05)。结论:Fp上清液通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活及其下游炎症因子表达,在实验性结肠炎中发挥抗炎效应。     

阿托伐他汀对HMGB1诱导血管内皮细胞激活的影响

目的探讨阿托伐他汀能否抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导的血管内皮细胞激活,阐明其潜在的分子机制。方法体外培养大鼠胸主动脉内皮细胞,分别用不同浓度的阿托伐他汀、HMGB1、TLR4特异性抑制剂CLI-095预处理内皮细胞,荧光定量分析中性粒细胞与内皮细胞的黏附活力;实时定量RT-PCR与Western blot分别检测TLR4、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E-选择素mRNA和蛋白的表达水平;电泳迁移率实验(EMSA)测定核因子κB(NF-κB)p65的DNA结合活性。结果阿托伐他汀(0.1～10μmol/L)呈剂量依赖性地抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化。阿托伐他汀预处理能明显下调HMGB1诱导的TLR4 mRNA和蛋白表达水平(P均0.05);阿托伐他汀、CLI-095均能有效抑制HMGB1诱导的NF-κB p65的DNA结合活性以及ICAM-1和E选择素的表达水平(P均0.05)。结论阿托伐他汀可通过调节黏附分子(ICAM-1和E-选择素)的表达而显著抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化效应,其机制可能与它抑制TLR4的表达及NF-κB激活有关。     

RhoA/ROCK通路在缺氧复氧诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用机制

目的 探讨Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路在缺氧复氧(H/R)诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用及其机制。方法 将体外培养的AC16细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(构建H/R模型)、H/R＋NC-siRNA组(转染NC-siRNA后构建H/R模型)和H/R＋RhoA-siRNA组(转染RhoA-siRNA后构建H/R模型),采用MTT法检测AC16细胞存活率,流式细胞术检测AC16细胞凋亡率,比色法检测AC16细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性和Caspase-3活性,ELISA检测AC16细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,试剂盒检测AC16细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量PCR检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、核因子κB(NF-κB)p65及IkB激酶(IKK)的mRNA表达水平,Western blot检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65及IKK的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,H/R组细胞存活率、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);H/R＋NC-siRNA组和H/R组之间上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与H/R＋NC-siRNA组比较,H/R＋RhoA-siRNA组细胞存活率、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)。结论 靶向抑制RhoA/ROCK通路可通过降低炎症反应、氧化应激和细胞凋亡减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。     

银杏酮酯对心肌细胞Toll样受体4/核转录因子κB及血管紧张素原、血管紧张素Ⅱ1型受体的抑制作用

目的观察银杏酮酯50(GBE50)对脂多糖激活的心肌细胞 Toll 样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号及血管紧张素原(ATG)、血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT_1R)表达的影响,探讨 GBE50防治左室重构的作用机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞(NRVM),分4组:1)对照组:DMEM 培养基中不加任何干预因素;2)脂多糖组:DMEM 培养基中加入脂多糖1 mg/L;3)脂多糖+GBE50组:预先加入 GBE50 80 mg/L,1 h 后加入脂多糖1 mg/L;4)脂多糖+咖啡酸苯乙酯组:预先加入咖啡酸苯乙酯20 mg/L30 min 后加入脂多糖1mg/L。干预24 h 后免疫细胞化学方法观察 NF-κB p65核易位情况;RT-PCR 检测 TLR4、ATG 及 AT_1R、心肌肌球蛋白重链β-MHC mRNA 的表达情况,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量。结果 LPS 刺激下 NRVM TLR4 mR-NA 明显升高(P<0.01),NF-κB p65核易位增多(P<0.01),ATG 和 AT_1R、心肌肌球蛋白重链β-MHC mRNA表达以及细胞蛋白含量明显增高(P<0.01)...     

肝X受体激动剂T0901317对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎性因子释放的影响及其机制

目的 观察肝X受体激动剂T0901317对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子释放的影响,并探讨其机制.方法 160 nmol/L佛波酯孵育THP-1巨噬细胞24h后分为四组:对照组、脂多糖组、T0901317组和脂多糖+T0901317组,酶联免疫吸附法检测培养液中炎症因子含量.LipofectarnineTM2000转染ATP结合盒转运子A1(ABCAl) siRNA,定量PCR检测细胞ABCA1、ABCG1和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达,Western blot检测ABCA1、ABCG1、TLR4和核因子κB (NF-κB) p65的蛋白表达.结果 T0901317抑制脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)释放,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和ABCG1表达;转染ABCA1 siRNA后,ABCA1的蛋白表达明显下降,T0901317对炎症因子的抑制作用明显减弱;T0901317下调TLR4和核内NF-κB的表达.结论 T0901317抑制脂多糖诱导的炎症反应,可能与其促进膜转运体ABCA1表达,抑制膜受体TLR4和转录因子NF-κB的表达有关.     

硫辛酸调节Toll样受体4途径对帕金森病细胞模型的保护作用和机制

目的 探究硫辛酸调节Toll样受体4(TLR4)/NF-κB/白细胞介素1β(IL-1β)途径对帕金森病细胞模型的保护作用和机制.方法 将PC12细胞分为对照组、脂多糖组、联合组(脂多糖+硫辛酸).检测各组细胞活力、细胞凋亡率、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达以及培养液中IL-1β水平.结果 各组细胞活力、细胞...     

Toll样受体4和核因子-κB信号通路在溶血磷脂酸致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路在溶血磷脂酸(LPA)致动脉粥样硬化中的作用。方法以不同浓度LPA(0¹0μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(010μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(0⁸h),荧光定量RT-PCR法测定TLR4mRNA表达,Western blot检测TLR4蛋白、细胞核NF-κB p65表达变化,ELISA法测定细胞因子TNF-α,随后在LPA 1μmol/L条件下,TLR4单抗干预THP-1细胞,观察其对LPA诱导的细胞核NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平的影响。结果当LPA 1μmol/L时,TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达较0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L LPA明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPA 1μmol/L处理THP-1细胞4h时,THP-1细胞TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达水平明显高于0、1、2、8h(P<0.01)。与TLR4单抗干预前比较,TLR4干预后LPA诱导的THP-1细胞NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LPA可显著上调THP-1细胞TLR4表达及促进NF-κB的活化,LPA致动脉粥样硬化作用可能部分是由TLR4/NF-κB信号途径介导的。     

TLR4/NF-κB信号通路介导肥胖症患者血清的致炎作用

目的探讨肥胖症患者血清对THP-1单核细胞分泌炎症因子的作用及探讨TLR4/NF-κB信号通路在肥胖症患者血清促炎症作用中的贡献。方法分别用15例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱(血脂紊乱、高血压、高血糖)患者血清孵育THP-1单核细胞株48 h后以及用TLR4单克隆抗体阻断TLR4/NF-κB信号通路后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力。免疫印迹法检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;用RT-Q-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的水平。结果与正常对照组比较,单纯性肥胖和肥胖症伴代谢紊乱患者血清干预后,THP-1细胞TLR4、NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力显著升高(P0.05);THP-1细胞TLR4、NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4mRNA表达水平以及分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,且当TLR4/NF-κB信号通路被阻断后,分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力降低。结论单纯性肥胖及肥胖症伴不同代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导THP-1细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化,TLR4/NF-κB信号通路在肥胖症患者血清促THP-1分泌炎症因子的作用中起重要作用。     

PCKS9通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性

目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是否通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)途径调节单核-内皮细胞黏附性。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVECs,real-time PCR与Western blot法检测PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白孵育或PCSK9 siRNA转染HUVECs,检测TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白与TLR4抑制剂瑞沙托维(TAK-242)或NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)共同孵育HUVECs,检测NF-κB p65与COX-2的mRNA和蛋白表达;COX-2抑制剂(NS398)与人重组PCSK9蛋白先后处理HUVECs后,加入THP-1单核细胞检测单核-内皮细胞黏附性。结果 ox-LDL上调HUVECs的PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);人重组PCSK9蛋白在ox-LDL基础上上调TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);PCSK9 siRNA转染可抑制ox-LDL对TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);TAK-242抑制人重组PCSK9蛋白对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);PDTC抑制人重组PCSK9蛋白对NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);NS398可抑制人重组PCSK9蛋白的促单核-内皮细胞黏附作用(P均0.05)。结论 PCSK9可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性。     

右美托咪定对结肠癌细胞p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨右美托咪定(Dex)对结肠癌细胞增殖、凋亡及p38有丝分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将人结肠癌细胞Caco2随机分为对照组(常规培养)、Dex低剂量组(1μmol/L Dex培养液)、Dex高剂量组(3μmol/L Dex培养液)、激活剂组(5μg/m L p38MAPK/NF-κB信号激活剂LPS)、Dex高剂量+激活剂组(3μmol/L Dex培养液与5μg/m L LPS)。CCK-8法测定Caco2细胞增殖率,流式细胞仪检测Caco2细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法测定Caco2细胞中增殖相关蛋白(p53、ki-67),凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及p38MAPK/NF-κB通路蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,Dex低、高剂量组Caco2细胞凋亡率、Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2均显著升高(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2水平显著降低(P<0.05),激活剂组Caco2凋亡率、Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2均显著降低(P<0...     

美洲大蠊提取物对慢性萎缩性胃炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨美洲大蠊提取物对慢性萎缩性胃炎大鼠的疗效及对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响.方法将60只清洁级SD大鼠随机分为6组:正常对照组,模型组,维酶素组以及美洲大蠊提取物组(低、中、高剂量组),通过N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍法干预制造慢性萎缩性胃炎大鼠模型.通过光镜下观察大鼠胃黏膜组织病理学改变,酶联免疫吸附测定法检测血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β的含量,Western blot法检测胃黏膜组织TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD 88)、NF-κB p65蛋白的表达.结果模型组大鼠胃黏膜腺体萎缩,腺体腔扩张,数量减少、排列紊乱,间质可见淋巴细胞等炎症浸润,提示造模成功.药物干预后,各组大鼠胃黏膜较模型组均有不同程度改善,其中以美洲大蠊提取物高剂量组改善最为明显;造模后,模型组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平及胃黏膜组织中TLR4、MyD 88、NF-κB p65蛋白表达较空白对照组明显升高(P0.01),药物干预后,各组TNF-α、IL-6、IL-1β水平及胃黏膜组织中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达较模型组降低,其中维酶素组、美洲大蠊提取物低剂量组与模型组比较,差异均具有统计学意义(P0.05),美洲大蠊提取物中剂量组、美洲大蠊提取物高剂量组与模型组比较,差异均具有显著统计学意义(P0.01).结论美洲大蠊提取物能够显著改善萎缩性胃炎大鼠模型胃黏膜组织形态,降低血清炎性因子,其作用机制是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达实现的.